GITR抗体介导增强NK细胞杀伤活性的实验研究

目的探讨糖皮质激素诱导的TNF受体家族相关受体（glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor family related receptor．GITR）抗体通过调节Treg细胞和NK细胞的功能对L615白血病细胞增殖的影响．了解NK细胞对白血病细胞的杀伤活性。方法通过不同的给药方式将L615白血病小鼠设立为4个实验组．提取实验分组后的小鼠脾脏中NK细胞作为效应细胞．以L615白血病细胞作为靶细胞．在体外观察了NK细胞的杀伤活性变化情况．并运用RT-PCR进一步观察了体现NK细胞杀伤活性的几个相关指标的变化。结果GITR抗体可以明显增强小鼠脾脏中NK细胞的杀伤活性．表现为同NK细胞活性密切相关的3个指标穿孔素（Perforin）、γ干扰素（IFN-γ）、Fas的表达量明显增加。结论GITR抗体能够通过Treg细胞的调节增强NK细胞的杀伤活性,进而有效的抑制L615自血病细胞。     

脑啡肽对小鼠NK细胞杀伤活性的增强作用

自然杀伤细胞(NK细胞)是体内细胞免疫功能的组成部份,在某些肿瘤和病原微生物感染中,起到免疫监视的作用。NK细胞能识别多种抗原,并有直接杀伤靶细胞的能力。因而NK细胞的杀伤作用与肿瘤的发生,发展,转移及预后均有直接关系。 阿片肽作为神经介质,它们是否参与调节NK细胞的杀伤功能,是近年来人们感兴趣的研究问题,有研究者提到亮氨酸脑啡呔(leucine enkephalin,LENK)和甲硫氨酸脑啡呔(methionine enkephalin,     

GITR抗体对L615白血病抑制作用的实验研究

目的探讨糖皮质激素诱导型TNF受体（glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor．GITR）抗体对L615白血病（T淋巴细胞来源白血病）的抑制效应及其作用机制。方法以L615小鼠建立白血病模型．分3个实验组和1个阴性对照组,观察实验小鼠生存状态及时间,检测外周血白细胞计数及分类,外周血和骨髓中白血病细胞形态变化．肝脾指数．肝脾组织病理改变。结果GITR抗体使用组能延长L615白血病小鼠的生存时间．可引起骨髓中白血病细胞发生凋亡、坏死．肝脾指数降低。结论通过免疫调节机制GITR抗体能够有效地抑制L615白血病细胞的增殖．进而抑制白血病的发展。     

GITR抗体对L615白血病抑制作用的实验研究

目的 探讨糖皮质激素诱发型TNF受体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor,GITR)的抗体对抗小鼠L615白血病(T淋巴细胞来源白血病)的效果和作用机制.方法 以L615小鼠建立白血病模型,分3组实验组以及阴性对照组,观察实验小鼠生存状态及时间、外周血白细胞计数及分类、外周血和骨髓中白血病细胞形态变化、肝脾指数、肝脾组织病理改变.结果 GITR抗体可以延长L615白血病小鼠的生存时间,可引起骨髓中白血病细胞发生凋亡、坏死、肝脾指数降低、肝脾组织被白血病细胞浸润,提示GITR抗体能够降低和缓解白血病细胞所致的小鼠外周血白细胞的升高和浸润,以及肝脾的肿大.结论 通过免疫调节机制GITR抗体能够有效地抑制L615白血病细胞的增殖,进而抑制白血病的发展.     

小金丹对荷瘤小鼠NK细胞杀伤活性的影响

小金丹出自清·王洪绪《外科证治全生集》,由麝香、白胶香、木鳖子、草乌、乳香、没药、当归、地龙、五灵脂、墨香等组成,具有解毒消肿、活血止痛的功效,传统上多用于瘰疬、阴疮等的治疗。目前临床上除广泛用于治疗胸腹腔炎性包块和脓肿、肿瘤型肺门淋巴结结核、顽固性坐骨神经痛、甲状腺瘤、急性颌下腺炎、瘀血型慢性肝炎、带状疱疹、前列腺肥大排尿困难、聚合型痤疮等多种疾病以外,也广泛用于肿瘤的治疗。1材料方法1.1实验动物:ICR清洁级小鼠(20±2)g,购自福建医科大学动物中心,合格证号:SGXK(闽)2004-0002。动物饲养在福建省医学科学…     

肿瘤细胞不同程度表达HLA-G对NK细胞杀伤活性影响研究

目的 探讨肿瘤细胞不同程度表达HLA-G对NK细胞杀伤活性的影响.方法 基因克隆建立稳定表达HLA-G抗原的肿瘤细胞株,以及通过基于CD107a标记的流式细胞术检测肿瘤细胞表达HLA-G前后对NK细胞杀伤功能的影响.结果HLA-G抗原在细胞表面获得不同程度的表达且能显著抑制NK对肿瘤细胞的杀伤活性(P＜0.05).HLA-G特异性抗体87G阻断或其受体KIR2DL4特异性抗体#33阻断后,均能明显恢复NK细胞对转染HLA-G肿瘤细胞的杀伤功能.结论 肿瘤细胞HLA-G表达量不同,均能抑制NK细胞的杀伤活性,提示HLA-G分子表达在恶性肿瘤细胞的免疫逃逸中起重要作用.     

NK细胞体外培养及对HepG2细胞的杀伤活性研究

目的:研究NK细胞的体外培养及对HepG2的杀伤活性。方法:采集外周血,肝素抗凝,分离单个核细胞(PMBC),用NK细胞培养基(补加IL-2200U/ml)培养12d,用流式细胞仪检测其表面标志及细胞毒颗粒表达水平,并按效靶比5∶1、10∶1、20∶1加入HepG2细胞,比较其杀伤活性。结果:培养12d的NK细胞CD3~-CD56~+阳性率(73.6±11.3)%与培养前的阳性率(14.2±5.1)%相比有显著性差异(P<0.001),其穿孔素、颗粒酶B、CD107a的表达水平分别为(75.5±10.9)%、(62.2±8.9)%、(63.9±10.5)%。在5∶1～20∶1效靶比范围内,随着效靶比增加,NK对HEPG2细胞杀伤活性增强(P<0.05)。结论:NK细胞对肿瘤细胞具有杀伤活性,随着效靶比增加,杀伤活性增强。     

黄芩苷对小鼠NK细胞杀伤活性的作用

目的探讨黄芩苷对小鼠NK细胞杀伤活性的影响，为黄芩苷在抗肿瘤方面的应用提供理论依据。方法使用乳酸脱氢酶释放法，测定黄芩煎剂、黄芩苷注射液对小鼠NK细胞杀伤活性的影响，进而探讨黄芩苷抗肿瘤活性及其机制。结果黄芩煎剂（4.5g/kg），黄芩苷注射液（6mg／kg）能明显提高小鼠NK细胞的杀伤活性（P〈0.05），且具有剂量差异性。结论黄芩苷具有体内抗肿瘤活性，其机制与促进小鼠NK细胞杀伤活性有关。     

NK／LAK细胞对人口腔癌耐细胞药株杀伤活性的观察

OBJECTIVE: To understand the relation between cytotoxic activity of immunologic effector cells and multidrug resistance of the tumor cells. METHODS: Continuous observation of the morphological changes and MTT colorimetry were employed to evaluate the cytotoxic activity of lymphokine-activated killer (LAK) cells and natural killer (NK) cells against multidrug-resistant (MDR) human oral carcinoma cell line-KBV200 (before and after reversal of MDR) and parental drug-sensitive cell line KB. The morphologic changes of LAK cells and the 3 target cell lines were observed continuously under inverted microscope 3 h after co-culture of LAK cells with one of three target cell lines respectively. The lysis rates of three tumor cell lines in response to co-culture with LAK or NK cells were determined using MTT colorimetry. RESULTS: In comparison with the parental drug-sensitive cell line KB, both KBV200 and its reserved cell line by verapamil (KBVV) showed earlier adherence and greater number of cells lysed by LAK. In MTT colorimetry assay, the cytotoxicity of both LAK and NK cells against the 3 cell lines was associated with the effector-to-target (E/T) cell ratio; the lysis rates of KBV200 and reversed KBV200 cells by verapamil in response to LAK and NK cells were higher than that of KB cells (P<0.05), but KBV200 and KBVV did not significantly differ (P>0.05). At the same E/T ratio, LAK cells possessed stronger cytotoxicity than NK cells against all the tumor cell lines (P<0.05). CONCLUSIONS: Immunologic effector cells possess strong cytotoxic activity against multidrug-resistant cell line KBV200. Modulation of MDR does not decrease the cytotoxic activity of the immunologic effector cells. The results of this study suggest that adoptive cell immunotherapy with immunologic effector cells may be of value in controlling the progress of MDR tumors.     

FOXP3和GITR在口腔扁平苔藓中的表达及意义

目的 研究FOXF3、GITR在口腔扁平苔藓(OLP)组织中的表达及其意义.方法 采用免疫组化方法检测30例OLP组织和15例口腔正常黏膜(NOM)组织中FOXP3、GITR的表达.结果 NOM组FOXP3和GITR均阴性表达;OLP组FOXP3和GITR表达分别较NOM增加(P相似文献   

CpGODN对哮喘小鼠肺组织GITR/GITRL表达的影响

目的 观察CpGODN干预对哮喘小鼠肺组织GITR及GITRL表达的影响.方法 48只SPF级雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组(简称对照组),哮喘模型组(简称模型组),地塞米松治疗组,CpGODN治疗组.以卵清白蛋白(OVA)致敏和激发建立小鼠哮喘模型.观察肺组织病理;对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞分类及计数;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化检测肺组织中GITR、GITRL的表达.结果 BALF中嗜酸性粒细胞平均((x)±s,下同)计数:CpGODN组为(2.76±0.25)×107/L,地塞米松组为(1.05±1.72)×107/L,均低于模型组的(12.09±2.62)×107/L,差异有统计学意义(P＜0.01),CpGODN组与地塞米松组比较差异无统计学意义(P＞0.05).RT-PCR、免疫组化结果:CpGODN组与地塞米松组GITR、GITRL表达高于模型组,差异有统计学意义(P均＜0.05),CpGODN组GITRL mRNA、GITR蛋白表达高于地塞米松组,差异有统计学意义(P＜0.05).相关分析:肺组织GITR与GITRL表达呈正相关(P＜0.01,n=40).结论 CpGODN能改善哮喘小鼠气道炎症,显著增强哮喘小鼠模型中GITR及GITRL在肺组织中的表达.     

先兆子痫患者母、脐血NK细胞增殖能力及杀伤功能测定

目的:测定先兆子痫患者母、脐血NK细胞增殖能力及杀伤功能,探讨先兆子痫的病因。方法:采用MTT法和51Cr释放法分别对先兆子痫患者(n=18)和正常晚孕妇女(n=18)的母血、脐血NK细胞进行细胞增殖能力和杀伤功能测定,同时测量NK细胞含量,并以NK-92细胞作为阳性对照。结果:先兆子痫患者和正常晚孕妇女脐血NK细胞数均高于母血(P<0.05);先兆子痫患者NK细胞增殖能力高于正常晚孕组(P<0.05);2组中脐血NK细胞增殖能力高于母血(P<0.05);先兆子痫患者NK细胞杀伤能力高于正常晚孕组(P<0.05)。结论:先兆子痫患者体内NK细胞数量及功能均表现增强状态,且脐血明显高于母血,从而在妊娠过程中影响母胎免疫耐受。     

NK细胞培养及杀伤前列腺癌细胞效率的研究

目的 建立一种高效的NK细胞体外扩增培养方法;通过检测NK细胞杀伤3种前列腺癌(PCa)细胞株的效率,鉴定其用于后期治疗PCa的可行性,为应用NK细胞过继回输治疗PCa的研究奠定基础。方法 通过细胞因子对外周血单个核细胞(PBMCs)的诱导扩增,培养出NK细胞并用流式细胞术检测NK细胞所占比例以及扩增倍数;通过CCK8法检测NK细胞杀伤3种PCa细胞株PC3、LNCaP、DU145的效率及效靶比。结果 NK细胞诱导扩增成功,PBMCs诱导扩增后,NK细胞由最初的（10.97±3.28）%,扩增到占比（83.20±8.54）%以上,细胞总数扩增倍数为（251.66±19.05）倍,NK细胞扩增倍数为（1 940.17±402.22）倍。NK细胞对3种靶细胞的杀伤率差异极显著（P＜0.01）;NK细胞对LNCaP的杀伤效率大于对DU145的杀伤效率;对于PC3没有杀伤作用,反而促进其生长。NK细胞对PCa细胞株的最高杀伤效率分别为LNCaP（92.03±9.95）％、DU145（72.40±8.30）％、PC3（26.69±10.56）％。结论 采用细胞因子诱导扩增PBMCs的方法能够获得纯度较高、数量足够的NK细胞,为NK细胞的临床应用奠定基础;NK细胞对3种PCa细胞系的杀伤率差异极显著,为后续进行深入研究探索原因及作用机制提供了方向     

姜黄煎剂对小鼠NK细胞杀伤活性的调节作用

目的　研究姜黄对免疫低下小鼠NK细胞杀伤活性的调节作用。方法　制备荷S180移植肿瘤模型和环磷酰胺制备免疫低下模型 ,用阳性对照药云芝肝泰和姜黄煎剂灌胃进行免疫治疗。采用LDH释放法检测小鼠NK细胞杀伤活性。结果　不同浓度姜黄煎剂治疗荷瘤小鼠后 ,其NK活性分别为 2 3.5 3%± 4 .15 %和 2 0 .6 6 %± 4 .32 % ,接近于阳性对照组的 2 3.98%± 4 .0 2 % ,显著高于荷瘤对照组的 16 .32 %± 5 .1%。高浓度姜黄煎剂治疗免疫低下小鼠后 ,其NK活性为 2 5 .0 9%± 6 .4 3% ,接近阳性对照组的 2 5 .94 %± 4 .89% ,显著高于免疫低下对照组17.6 0 %± 6 .6 1% ,并均达到正常小鼠水平。结论　姜黄具有提高免疫低下小鼠NK活性的免疫调节作用     

细胞因子预处理对体外扩增NK 细胞活性的影响

目的 采集健康志愿者和肿瘤患者的外周血单个核细胞（PBMCs）进行自然杀伤细胞（NK）的 扩增培养,培养过程中白细胞介素IL-2、IL-12、IL-15、IL-18 以不同组合及不同方式添加,探究体外培养 NK 细胞的细胞因子最佳组合和添加方式。方法 根据细胞因子组合及添加方式的不同,将NK 培养分为3 组。 A 组：IL-2+IL-15 组,B 组：IL-2+IL-12+IL-15+IL-18 组,C 组：IL-12+IL-15+IL-18 预处理/IL-2 组。 培养过程中第7 天和第14 天分别取样统计各组细胞因子培养后的细胞数量,并使用流式细胞仪检测NK 细胞 表面分子表达;将NK 细胞与K562 细胞共培养,然后ELISA 测定NK 细胞的IFNγ 释放量,CSFE/7-AAD 法 检测NK 细胞的杀伤活性。结果 3 组不同的培养方式所得细胞的扩增倍数差异无统计学意义,随着培养时间的 增加,NK细胞的比例也逐渐上升,3组间NK细胞比例差异无统计学意义（P >0.05）。NK细胞表面CD25（IL-2Rα） 的表达情况比较,差异有统计学意义（P <0.05）,C 组的阳性率高于A 和B 组。IFN-γ 的释放量和NK 细胞的 体外杀伤活性一致,均为C 组高于A 和B 组。对肿瘤患者的NK 细胞,C 组的细胞因子添加方式也能很好的进 行扩增（CD3-CD56+ 细胞比例大于50%）。结论 C 组中的细胞因子预处理方式能够高效扩增NK 细胞,与A 或B 组联合添加的方式比较,该方式能显著激活NK 细胞的杀伤活性。