蛋白激酶CK2ɑ特异性siRNA增强喉癌细胞Hep-2对顺铂敏感性的研究

目的 探讨RNA干扰技术抑制蛋白激酶CK2ɑ表达后,喉癌细胞Hep-2对顺铂敏感性的变化. 方法 构建蛋白激酶CK2ɑ特异性siRNA表达质粒psiRNA-hH1neo-CK2ɑ和非特异性表达质粒psiRNA-hH1neo-cont,脂质体转染法转染Hep-2细胞.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot技术检测转染后Hep-2细胞蛋白激酶CK2ɑ mRNA和蛋白表达.设立正常对照组、顺铂(5μg/ml)组、psiRNA-hH1neo-CK2ɑ组和psiRNA-hH1neo-CK2ɑ+顺铂(5μg/ml)组,应用MTT法检测转染后Hep-2细胞对顺铂敏感性的变化. 结果 psiRNA-hH1neo-CK2ɑ特异性地抑制了Hep-2细胞中蛋白激酶CK2ɑmRNA和蛋白的表达(P＜0.05).顺铂组(5μg/ml)及psiRNA-hH1neo-CK2ɑ组Hep-2细胞的增殖能力分别为正常对照组的(55.32±4.68)%和(49.68±5.33)%(P＜0.05),但均高于二者联合组(26.12±5.51)%(P＜0.05),转染psiRNA-hH1neo-CK2ɑ后,Hep-2细胞对顺铂敏感性增加了2.12倍. 结论 RNA干扰技术抑制蛋白激酶CK2ɑ表达能增加喉癌细胞Hep-2对顺铂的敏感性.     

CIP2A与c-myc在喉癌组织中的表达及临床意义

目的探讨蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(CIP2A)和c-myc在喉癌组织中的表达水平并分析二者间的相关性。方法采用免疫组化SP法检测40例喉癌标本(包括10例对应癌旁正常组织),20例喉乳头状瘤和15例喉黏膜白斑中CIP2A的表达,检测40例喉癌标中c-myc的表达,结合病理资料进行分析。结果 CIP2A在喉癌组织中的表达明显高于喉粘膜白斑、喉乳头状瘤及癌旁正常组织(P0.05),且与肿瘤的T分级、临床分期、组织分化程度及淋巴结转移有关(P0.05)。c-myc在喉鳞癌组织的表达明显高于癌旁正常组织(P0.01)。Spearman等级相关分析显示,CIP2A与c-myc在喉鳞癌组织中的表达呈正相关(r=0.409,P0.05)。结论 CIP2A与c-myc具有协同作用,共同参与喉癌的发生发展过程,CIP2A蛋白可能是喉癌靶向治疗的一个新靶点。     

蛋白激酶CK2a特异性siRNA增强喉癌细胞Hep-2对顺铂敏感性的研究

目的探讨RNA干扰技术抑制蛋白激酶CK2α表达后,喉癌细胞Hep-2对顺铂敏感性的变化。方法构建蛋白激酶CK2α特异性siRNA表达质粒psiRNA—hH1neo—CK2α和非特异性表达质粒psiRNA—hH1neo—cont,脂质体转染法转染Hep-2细胞。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）、Western blot技术检测转染后Hep-2细胞蛋白激酶CK2α mRNA和蛋白表达。设立正常对照组、顺铂（5μg/ml）组、psiRNA—hH1neo—CK2α组和psiRNA—hH1neo—CK2α＋顺铂（5μg/ml）组,应用MTT法检测转染后Hep-2细胞对顺铂敏感性的变化。结果psiRNA—hH1neo—CK2α特异性地抑制了Hep-2细胞中蛋白激酶CK2α mRNA和蛋白的表达（P〈0．05）。顺铂组（5μg/ml）及psiRNA—hH1neo—CK2α组Hep-2细胞的增殖能力分别为正常对照组的（55．32±4．68）％和（49．68±5．33）％（P〈0．05）,但均高于二者联合组（26．12±5．51）％（P〈0．05）,转染psiRNA—hH1neo—CK2α后,Hep-2细胞对顺铂敏感性增加了2．12倍。结论RNA干扰技术抑制蛋白激酶CK2α表达能增加喉癌细胞Hep-2对顺铂的敏感性。     

Pirh2 shRNA增强肺腺癌细胞A549对顺铂敏感性的研究

目的 观察短发夹状RNA沉默泛素连接酶pirh2(P53 induced RING-H2 protein)基因表达后,肺腺癌细胞A549对顺铂敏感性及肺耐药蛋白(lung resistance-related protein, LRP)表达的变化.方法 构建靶向pirh2基因的短发夹状RNA(psiRNA-Pirh2)及阴性对照RNA(psiRNA-Con),并转染A549细胞,实时定量PCR和免疫印迹法检测A549细胞中pirh2基因和蛋白的表达变化.设立顺铂组(5 μg/ml)、psiRNA-Pirh2转染组和顺铂(5 μg/ml) psiRNA-Pirh2组,CCK-8法检测A549细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,免疫印迹法检测肺耐药蛋白的表达,以正常A549细胞为对照.结果 psiRNA-Pirh2特异性抑制了A549细胞pirh2 mRNA和蛋白质的表达(均P＜0.05).顺铂及psiRNA-Pirh2组A549细胞增殖能力分别为正常对照组的(46.82± 6.14)%和(37.45±6.83)%,均P＜0.05,但均高于二者联合组[(28.24±6.49)%],且联合组细胞凋亡率最高,达(19.8±5.1)%,S期细胞最少,为(15.5±1.6)%(P＜0.05).顺铂处理组A549细胞LRP表达较正常对照组增强(P＜0.05),但联用psiRNA-Pirh2后,LRP蛋白水平有所下降(P＜0.05).结论 靶向pirh2的shRNA可特异性降低A549细胞中pirh2的表达,抑制A549细胞增殖,使其阻滞在G2/M期,诱导凋亡,下调肺耐药蛋白的表达并增强其对顺铂的化疗敏感性.     

低氧条件下人参皂苷Rg3对人喉鳞癌细胞分泌性VEGF的影响

目的探讨低氧条件下人参皂苷Rg3对人喉鳞癌Hep-2细胞分泌性血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法实验于2017年1月1—31日于河北医科大学第一医院耳鼻喉实验室进行。体外低氧培养人喉鳞癌Hep-2细胞及人血管内皮细胞,将Hep-2细胞分为Ⅰ组(对照组)、Ⅱ组(Rg3组)、Ⅲ组(顺铂组);人血管内皮细胞分为Ia组(Rg3组)、Ib组(顺铂组)、Ⅱ组(Rg3上清组)、Ⅲ组(顺铂上清组);相应条件下培养上述细胞48 h后用于实验。取Ⅱ、Ⅲ组Hep-2细胞上清液分别作用于相应组人血管内皮细胞。免疫组织化学检测Hep-2细胞内低氧诱导因子1α(HIF)、VEGF蛋白的表达,ELISA检测Hep-2细胞上清中HIF、VEGF的表达量。Mtt法检测各组人血管内皮细胞的生长抑制率。结果VEGF表达可见于细胞浆及细胞核,其中Ⅰ组VEGF(+++)的表达量高于Ⅱ组(++)及Ⅲ组(++)(χ~2=4.275,P=0.039)。Ⅰ组Hep-2细胞上清液中VEGF的量明显高于Ⅱ、Ⅲ组(F=15.627,P=0.023);3组间HIF-1α比较差异无统计学意义(F=3.258,P=0.361);Ⅱ组内皮细胞抑制率(13.24±0.73)明显高于Ⅲ组(8.56±0.25)(t=11.843,P=0.001),Ia组(18.67±1.27)和Ib组(19.12±0.35)比较差异无统计学意义(t=0.745,P=0.229)。结论低氧条件下人参皂苷Rg3抑制人喉鳞癌新生血管生成的作用强于传统化疗药物顺铂,其作用至少是通过以下两方面实现的:(1)抑制Hep-2细胞内VEGF蛋白的表达;(2)降低分泌性VEGF促内皮细胞增殖作用。     

靶向人喉癌HEP2细胞Trop2基因的siRNA构建及鉴定

目的构建能高效干扰Trop2基因的si RNA,转染人喉癌HEP2细胞,并初步鉴定其干扰效果。方法以人Trop2基因为靶基因,设计合成3条针对不同作用位点的si RNA干扰序列,用脂质体法将各小干扰序列瞬时转染人喉癌HEP2细胞,同时设立阴性对照、空白对照,分别命名为W组(未转染组)、NC组(阴性对照组)、T1组(S1序列组)、T2组(S2序列组)及T3组(S3序列组),每组各5例。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,计算转染效率。转染24 h后,收集稳定后细胞,采用实时荧光定量PCR法检测各干扰序列对Trop2基因表达的抑制效果。结果荧光显微镜下观察,见HEP2细胞表达绿色荧光蛋白,证实si RNA已转入细胞,转染率达90%。RT-PCR法结果显示,与未转染组、阴性对照组相比,转染si RNA的人喉癌HEP2细胞中Trop2表达均受到抑制,与T2、T3组相比,T1组对Trop2 m RNA的抑制作用最明显,差异有统计学意义(0.470±0.063 vs 0.749±0.024,0.824±0.027,P<0.05)。结论成功构建并筛选出了能高效、特异沉默人喉癌HEP2细胞Trop2基因的si RNA序列,为进一步研究Trop2基因在喉癌中的作用机制及其基因治疗奠定了基础。     

水飞蓟宾联合顺铂诱导人肺腺癌细胞A549凋亡及机制

目的探讨水飞蓟宾联合顺铂对人肺癌细胞A549的杀伤效应及机制。方法将人肺癌细胞A549分别用水飞蓟宾、顺铂及两者联合干预后,采用MTT法检测不同干预方案对A549细胞的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞Bcl-2与Bax的表达;利用小RNA抑制Bax的表达后,观察水飞蓟宾联合顺铂对A549细胞凋亡的诱导作用。结果水飞蓟宾联合顺铂对A549细胞增殖的抑制率(69.9±6.8)%,凋亡率(53.5±4.2)%;水飞蓟宾对A549细胞增殖的抑制率(6.9±0.7)%,凋亡率(7.9±1.5)%;顺铂分别为(13.3±2.9)%和(16.8±2.2)%。水飞蓟宾联合顺铂治疗A549细胞的增殖抑制率和凋亡率均优于单用水飞蓟宾和顺铂治疗组(P0.05)。水飞蓟宾联合顺铂诱导A549细胞凋亡依赖于细胞内Bcl-2/Bax的比值,当转染Bax si RNA后,水飞蓟宾联合顺铂对A549的凋亡诱导率为(27.6±3.0)%,未转染Bax si RNA则两者联合治疗A549凋亡诱导率为(50.6±4.7)%,差异有统计学意义(P0.05)。结论水飞蓟宾联合顺铂通过降低Bcl-2/Bax比例诱导人肺癌细胞发生凋亡。     

SHIP2对喉癌Hep-2细胞生物学行为的影响及对放疗增敏的机制

目的:探究抑制SHIP2对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和侵袭、迁移的影响;探究X射线处理喉癌Hep-2细胞后细胞增殖、凋亡和周期的变化及SHIP2的表达情况;探究靶向抑制SHIP2基因联合放射治疗对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和周期的影响及对放疗增敏的可能机制。方法:(1)应用小分子干扰RNA技术抑制喉癌Hep-2细胞SHIP2的表达,实验分为5组:空白对照组(Control)、阴性对照组(Negative)、干扰组1(siRNA1)、干扰组2(siRNA2)、干扰组3(siRNA3)],RT-qPCR、Western Blot检测转染24 h后干扰效果;(2)取对数生长期的喉癌Hep-2细胞,分别给予0,4 Gy X射线(SSD=100 cm)处理,CCK-8检测细胞增殖活力,AnnexinPI-FITC/PI双染检测细胞凋亡,PI单染检测细胞周期,RT-qPCR、Western Blot检测SHIP2 mRNA和蛋白的相对表达量;(3)取对数生长期的喉癌Hep-2细胞,实验分4组(空白对照组Control、单纯放射组4 Gy、干扰组siRNA-SHIP2、联合处理组siRNASHIP2+4 Gy)。Western Blot检测SHIP2、pSHIP2、pAKT、caspase-3、P21和P27蛋白的相对表达量。结果:(1)转染24 h后干扰组2 siRNA2下调作用最显著,较空白对照组SHIP2 mRNA下调达60. 1%(P<0. 05)、SHIP2蛋白下调达57. 8%(P<0. 05);与空白对照组对比,siRNA2抑制SHIP2表达后喉癌Hep-2细胞增殖活力、侵袭和迁移能力降低,凋亡增加(P<0. 05)。(2)与0 Gy组比较,放射组各组细胞增殖活力降低,凋亡和G2期阻滞增加(P<0. 05);4Gy射线处理后SHIP2 mRNA、SHIP2和pSHIP2蛋白的相对表达量较空白对照组降低(P<0. 05)。(3)与空白对照组、siRNA-SHIP2组和4 Gy组比较,联合处理组细胞增殖活力降低,凋亡和G2期阻滞增加(P<0. 05),SHIP2和pSHIP2、pAKT的相对表达量降低(P<0. 05),caspase-3、P21和P27蛋白的相对表达量升高(P<0. 05)。结论:靶向抑制SHIP2可与放射治疗协同抑制喉鳞癌Hep-2细胞的增殖活力,促进细胞凋亡和细胞周期G2期阻滞,从而发挥放射增敏的作用。其可能机制是靶向抑制SHIP2表达通过下调PI3K/Akt信号通路活性,进而解除对下游促凋亡因子caspase3和周期阻滞因子P21和P27的抑制作用,与放射线协同增强对喉癌Hep-2细胞的杀伤作用,从而发挥放疗增敏作用。     

小分子干扰RNA沉默果蝇zeste基因增强子同源物2对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)沉默果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响。方法培养宫颈癌Hela细胞,收集对数生长期Hela细胞继续培养,待贴壁细胞长满底部面积80%～90%时进行转染。将Hela细胞随机分为空白对照组、control siRNA组和EZH2 siRNA组,空白对照组Hela细胞不作处理,control siRNA组Hela细胞转染control siRNA,EZH2 siRNA组Hela细胞转染EZH2 siRNA。收集3组转染后Hela细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测Hela细胞中EZH2 mRNA表达,Western blot法检测Hela细胞中EZH2蛋白表达,流式细胞术检测Hela细胞的细胞周期。收集3组转染后Hela细胞,分别加入不同质量浓度(0. 0、12. 5、25. 0、50. 0、100. 0、200. 0 g·L~(-1))的顺铂,48 h后采用四甲基偶氮唑蓝法检测Hela细胞在顺铂作用下的体外存活率。结果 Control siRNA和EZH2 siRNA可高效转染Hela细胞,转染率均达90%以上。空白对照组、control siRNA组和EZH2 siRNA组Hela细胞中EZH2 mRNA相对表达量分别为396. 7±88. 4、389. 2±70. 6和98. 5±20. 3,EZH2 siRNA组Hela细胞中EZH2 mRNA相对表达量显著低于空白对照组和control siRNA组(t=2. 057、2. 015,P <0. 01),空白对照组与control siRNA组Hela细胞中EZH2 mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(t=1. 476,P> 0. 05)。空白对照组、control siRNA组和EZH2 siRNA组Hela细胞中EZH2蛋白相对表达量分别为509. 4±110. 7、497. 5±80. 4和120. 4±31. 3,EZH2 siRNA组Hela细胞中EZH2蛋白相对表达量显著低于空白对照组和control siRNA组(t=2. 682、2. 597,P <0. 01),空白对照组与control siRNA组Hela细胞中EZH2蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(t=1. 943,P> 0. 05)。EZH2 siRNA组G_0/G_1期细胞比例显著高于空白对照组和control siRNA组(t=2. 893、3. 087,P <0. 05),EZH2 siRNA组S期、G_2/M期细胞比例显著低于空白对照组和control siRNA组(EZH2 siRNA组与空白对照组比较:t=2. 526、5. 462,P <0. 05; EZH2 siRNA组与control siRNA组比较:t=2. 498、5. 417,P <0. 05),空白对照组与control siRNA组G_0/G_1期、S期及G_2/M期细胞比例比较差异均无统计学意义(t=0. 926、1. 017、0. 947,P> 0. 05)。不同质量浓度顺铂作用48 h后,同一质量浓度下EZH2 siRNA组Hela细胞的存活率明显低于空白对照组及control siRNA组(P <0. 05),且随着顺铂浓度的增加,3组Hela细胞的存活率均呈逐渐下降趋势。结论沉默EZH2表达可提高宫颈癌Hela细胞对顺铂的敏感性,而阻滞细胞周期可能是其主要作用机制之一。     

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体与放、化疗联合应用诱导喉癌Hep-2细胞凋亡途径研究

 目的 探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（TRAIL）诱导喉癌Hep-2细胞凋亡的敏感性及其与放、化疗联用时的凋亡途径。方法 采用CCK-8法检测TRAIL、顺铂、紫杉醇作用下Hep-2细胞生长抑制率;流式细胞仪检测Hep-2细胞凋亡率;Western blot法检测Hep-2细胞内caspase蛋白表达变化。结果 Hep-2细胞对TRAIL诱导的凋亡不敏感,24 h IC₅₀为596. 92 μg/L;顺铂、紫杉醇、放射线与TRAIL联合应用时Hep-2细胞凋亡率显著高于单药应用（P＜0.05）;caspase-9抑制剂Z-LETD-FMK使TRAIL、顺铂、紫杉醇对Hep-2细胞的生长抑制率显著下降（P＜0.05）;联合用药组caspase-8,caspase-9表达量均有显著升高（P＜0.05）。结论 人喉癌Hep-2细胞对TRAIL诱导的细胞凋亡不敏感,TRAIL通过内源性途径诱导Hep-2细胞凋亡;活化后的caspase-9、caspase-3通过环状反馈作用激活caspase-8,增强了Hep-2细胞对TRAIL的敏感性,是联合用药对Hep-2细胞发挥协同效应的机制之一。     

C-Met基因转染对喉癌细胞生长的影响

目的 初步探讨C-Met基因对喉癌细胞生长的影响.方法设实验组和对照组.实验组以携带C-MetcDNA的重组腺病毒载体Ad-C-Met转染喉癌Hep2细胞,对照组以空腺病毒载体转染喉癌Hep2细胞.转染后,观察两组喉癌Hep2细胞培养12d后的克隆形成率,培养第1、3、5、7天的存活细胞数和培养第7天的细胞周期.结果实验组细胞生长速率高于对照组(P＜0.05);实验组克隆形成率(31±5)%高于对照组的(15±3)%(t=12.321,P＜0.01);实验组G0/G1期细胞比例0.67±0.16,低于对照组的0.79±0.11(t=4.836,P＜0.05);S期细胞比例0.19±0.02,高于对照组的0.06±0.01(t=15.357,P＜0.01).结论 C-Met参与了喉癌细胞内的TGF-β信号通路,可以阻断TGF-β对喉癌细胞的生长抑制作用.     

Clear cell chondrosarcoma--a report of 2 cases

Clear cell chondrosarcoma is a form of chondrosarcoma that was first described by Unni in 1976. It is essentially a low-grade chondrosarcoma with many similar clinical, radiological and histological features as the more common chondrosarcomas. However, the distinguishing feature of this variant is in the presence of the characteristic clear cells histologically. We relate two such cases of clear cell chondrosarcoma in Singapore. A short discussion covering the incidence/prevalence of this tumour, its common presenting clinical, radiological and histological features follows. We also review the available world literature, highlight the salient and differentiating aspects of this particular tumour, and touch on its management and eventual prognosis.     

Bcl-2基因在口腔上皮癌多药耐药细胞的表达

[目的]通过检测Bcl-2基因在口腔上皮癌敏感细胞株（KB）与多药耐药细胞株（KBV）的表达差异,探讨Bcl-2基因在口腔上皮癌细胞多药耐药性发生中的作用。[方法]体外培养口腔上皮癌多药耐药株及敏感株,通过RT-PCR法及免疫荧光法检测Bcl-2基因在KB及KBV细胞中转录及翻译水平的差异,通过MTT法及流式细胞检测技术检测KB及KBV细胞对长春新碱（VCR）敏感度的差异。[结果]免疫荧光图像显示Bcl-2蛋白在KB细胞中弱表达,而在KBV细胞中强表达;RT-PCR检测结果显示,KB细胞Bcl-2/β-actin比值是25.0%,KBV组Bcl-2/β-actin比值为36.1%,两组细胞间差异具有统计学意义（P〈0.01）;MTT法检测结果显示KBV组细胞对长春新碱的耐药性为KB组的16.5倍,流式细胞仪检测结果显示KB细胞凋亡率达（98.8±1.2）%;KBV细胞凋亡率达（23.5±2.1）%,两组间差异具有统计学意义（P〈0.01）。[结论]Bcl-2基因与口腔上皮癌耐药性的发生密切相关。     

AAV介导的BATF2/SARI过表达抑制肝癌细胞HepG2增殖

目的探讨腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的BATF2/SARI过表达对肝癌细胞HepG2细胞活力的影响及其分子机制。方法通过分子克隆技术构建AAV介导的BATF2/SARI过表达载体,用包装纯化后的AAV-BATF2感染HepG2细胞,MTT检测其对细胞活力的作用,荧光素酶分析其对NFκB转录活性的影响。结果重组AAV-BATF2载体构建成功,AAV-BATF2感染的HepG2细胞生长活力受到明显抑制,NFκB转录活性明显下调。结论重组AAV-BATF2病毒感染人肝癌细胞HepG2可抑制肿瘤细胞增殖,其对NFκB转录活性的抑制可能是其发挥作用的机制之一。     

人参皂苷Rb2透过Caco-2单细胞层的吸收特征研究

目的测定人参皂苷Rb2透过Caco-2单细胞层的浓度,研究其吸收特征。方法采用液相色谱-质谱联用（LC-MS-MS）法,测定人参皂苷Rb2浓度并计算其表观渗透系数（Papp）。结果人参皂苷Rb2从基顶侧至基底侧的表观渗透系数Papp（AP-BL）为3.27&#215;10^-7cm&#183;s^-1,从底侧至顶侧Papp（BL-AP）为3.16&#215;10^-6cm&#183;s^-1,Papp（BL-AP）/Papp（AP-BL）比值为9.63。结论本研究阐明了人参皂苷Rb2在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征,这在国内尚属首次报道。     

奥沙利铂对肝癌细胞HepG2细胞周期的影响

目的:探讨奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)对人肝癌细胞株HepG2周期的影响及其相关机制,为其应用于原发性肝细胞癌临床治疗提供理论依据。方法:MTT方法检测L-OHP对肝癌细胞HepG2生长的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测L-OHP诱导HepG2细胞周期阻滞的作用;RTPCR和Western blot方法观察L-OHP对细胞周期调节因子CyclinD1、CDK2、CDK4及p16、p21、p53表达的影响。结果:MTT结果显示L-OHP对HepG2细胞增殖抑制率随药物浓度增加及作用时间延长有升高趋势,呈时间剂量依赖性。L-OHP能够诱导HepG2细胞周期阻滞于S期,并可下调CDK4和CyclinD1蛋白的表达,上调p21,p53蛋白的表达,CDK2和p16表达无明显变化。结论:L-OHP可能通过影响CDK4、CyclinD1及p21的活性使HepG2细胞阻滞在S期,从而抑制肝癌细胞HepG2的增殖。     

丁酸钠对Hep-2细胞生长、凋亡及细胞周期的影响

目的:观察丁酸钠(SB)对人喉癌Hep-2细胞的生长抑制作用,探讨其对细胞凋亡及细胞周期的影响.方法:以MTT法检测0.625～10.000 mmol/L SB对Hep-2细胞生长的抑制作用;以TUNEL法检测1.250～5.000 mmol/L SB作用24 h、48 h、72 h后的细胞凋亡情况;以琼脂糖凝胶电泳法检测2.500 mmol/L SB作用24 h、48 h、72 h后的细胞DNA片段;应用流式细胞仪分析1.250 mmol/L、2.500 mmol/L、5.000 mmol/L SB作用24 h后细胞凋亡率和细胞周期变化;采用免疫组织化学SP法检测2.500 mmol/L SB作用24 h、48 h、72 h后细胞抗凋亡蛋白Survivin表达的变化.结果:SB对Hep-2细胞的生长抑制作用具有时间和剂量关系(不同时间组、不同剂量组间比较,P均＜0.01);细胞凋亡指数随SB剂量升高、作用时间延长而增加(P均＜0.01);琼脂糖凝胶电泳可见特征性的凋亡细胞DNA梯状条带;流式细胞术显示细胞凋亡率随SB剂量升高而增加(P＜0.01),细胞周期阻滞于G0/G1期;2.500 mmol/L SB作用72 h,Survivin表达阳性细胞的光密度值由作用前的0.164±0.009下降至0.045±0.006(P＜0.01).结论:SB能有效抑制 Hep-2细胞的生长,其机制可能与抑制细胞Survivin蛋白表达进而诱导细胞凋亡以及参与细胞周期调控有关.     

IL-24增强细胞因子诱导的杀伤细胞对HepG2的细胞毒活性

目的 寻求增强CIK细胞毒活性的有效方法,以满足临床过继免疫治疗的需要.方法 从健康人外周血中提取出单个核细胞,第1天加入IFN-γ,第2天加入IL-1、CD3mAb、IL-2诱导CIK细胞;另一组与IL-1、CD3mAb、IL-2同时加入IL-24.细胞计数法测定细胞的增殖,MTT法测定细胞杀伤活性,比较两者有无差别.透射电镜下观察CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤和肿瘤细胞的改变.结果 未加IL-24培养组增殖率高于加IL-24培养组,两者比较有明显差异(P＜0.05).加IL-24培养组细胞各个效靶比杀伤活性均达到90%以上,明显高于其它各组.透射电镜下可见加IL-24培养组凋亡和坏死的肿瘤细胞比未加IL-24培养组明显增多.结论 CIK细胞诱导过程中加入IL-24能明显增强它的杀伤活性.     

放疗对人肝癌HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:探讨放疗对人肝癌HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响。方法:采用6MV-X射线照射细胞,提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳,观察细胞发生凋亡的情况,并采用免疫组织化学染色观察人肝癌细胞株中Bax和Bcl-2蛋白的表达。同时观察细胞周期改变情况。结果:照射后48h,2Gy、4Gy和6Gy出现明显DNA降解("梯形结构"),但对照组及8Gy和10Gy无"梯形结构"出现。Bax和Bcl-2蛋白的表达在时间和剂量之间存在交互作用(F=1.733,P=0.042;F=1.700,P=0.048)。4Gy照射剂量作用细胞48h后,HepG2细胞中Bax表达显著上调,而Bcl-2表达明显降低。4GyX线照射后培养6h,即可观察到G2/M期、S期阻滞,G2/M期阻滞峰值为正常的56倍,在6~48h阻滞"崩溃",细胞被释放,再度进入细胞周期或死亡。结论:6MV-X射线照射HepG2细胞,可诱使其产生凋亡,其机制可能通过促进Bax蛋白表达和抑制Bcl-2蛋白的表达来诱导肝癌细胞凋亡。4Gy照射引起的G2期阻滞释放可能与凋亡水平上调有关。