透明质酸对小鼠卵丘细胞外基质的影响

目的 观察透明质酸(HA)对小鼠卵丘细胞外基质的影响。方法 取3～4周龄的雌鼠(含野生型和bikunin基因敲除小鼠)诱导排卵，取卵丘-卵母细胞复合体(COC)，镜下计数诱导排卵后卵母细胞。免疫荧光双重染色后观察HA及血清来源的HA相关蛋白(SHAP)在卵丘细胞外基质的分布。结果 SHAP-HA复合体缺失引起卵丘细胞外基质的变化，并影响到随后的排卵。结论 SHAP-HA参与卵丘细胞外基质的构建．细胞外基质的受损引起卵母细胞功能的破坏。     

促性腺激素对小鼠卵巢多功能蛋白聚糖表达的影响

目的观察促性腺激素对野生型和bikurtin基因敲除小鼠多功能蛋白聚糖(PG-M)表达的影响。方法应用免疫组织化学法检测激素处理后PG—M在野生型和bikunin基因敲除小鼠中的表达。结果PG-M阳性表达分布于排卵前卵丘颗粒细胞层，给予促性腺激素后，其表达增强。bikunin基因敲除小鼠的PG-M阳性表达较野生型弱，但在激素调节诱导排卵后，PG-M仍分布在卵丘细胞表面。结论PG-M是卵泡发育中一种基质成分。促性腺激素增强排卵中PG—M表达。     

小鼠卵丘-卵母细胞复合体CD44和间α胰蛋白酶抑制剂的表达

目的探讨CD44和间α胰蛋白酶抑制剂（ITI）在小鼠卵丘-卵母细胞复合体的表达及两者的相关性.方法应用激光扫描共聚焦显微镜和免疫荧光双重染色技术观察小鼠卵丘-卵母细胞复合体中CD44和ITI的分布.结果ITI在小鼠卵丘细胞外基质之间呈阳性表达,CD44存在于卵丘细胞膜表面.结论CD44和ITI的阳性表达可能在卵丘-卵母细胞复合体成熟中起重要作用.     

CDK13基因对缺氧性脑损伤小鼠细胞凋亡的影响

目的 研究CDK13 基因对缺氧性脑损伤小鼠细胞凋亡的影响。方法 将野生型和CDK13 基因敲除型小鼠分别分为野生型假手术组（SWT）、野生型模型组（MWT）、基因敲除假手术组（SKO）及基因敲除模型组（MKO）。采用PCR 反应法检测CDK13 基因表达、TTC 染色法检测脑梗死程度、免疫组化法检测脑组织中活化型半胱天冬酶-3（CC3）表达、TUNEL 法检测细胞凋亡情况,四组小鼠进行相关指标比较。结果 野生型模型组（MWT）小鼠脑组织梗死程度较基因敲除模型组（MKO）小鼠明显减轻（P＜0.05）,且脑组织凋亡阳性细胞数明显减少,凋亡指数降低,凋亡蛋白CC3 表达减少（P＜0.05）。结论 敲除CDK13 基因具有加剧小鼠缺氧性脑损伤的作用。     

卵母细胞体外成熟评价标准的改良研究

目的探讨改良式人未成熟卵母细胞评分标准的可行性和颗粒细胞指标的合理性及其对卵子发育潜能的影响。方法体外培养卵丘-卵母细胞复合体,按改良式人未成熟卵母细胞评分标准,将未成熟卵母细胞分为优质卵和非优质卵,对成熟卵母细胞进行受精,并对胚胎进行评价;用琼脂糖凝胶电泳检测两类卵的颗粒细胞凋亡。结果优质卵的成熟率、卵裂率和优质胚胎率都优于非优质卵,优质卵成熟数和优质胚胎数与非优质卵比较差异有统计学意义（P<0.01）;非优质卵其卵丘细胞DNA凝胶电泳后形成明显DNA 梯带,凋亡程度高于优质卵的卵丘细胞。 结论改良式人未成熟卵母细胞评分标准在临床上具有可行性。     

Fkbp38基因缺失导致小鼠早发性卵巢功能不全：基于激活mTOR通路并诱导细胞凋亡

目的 探讨他克莫司结合蛋白38（Fkbp38）在卵泡发育中的作用及其缺失导致早发性卵巢功能不全（POI）的机制。方法 采用Cre-loxp系统构建卵母细胞特异性敲除Fkbp38转基因小鼠,并应用PCR鉴定小鼠基因型,然后在蛋白水平上验证Fkbp38在卵母细胞中的敲除效果。通过HE染色在显微镜下计数敲除小鼠与同窝对照小鼠卵巢原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡及窦卵泡数量分析卵母细胞缺失Fkbp38基因对小鼠卵泡发育的影响。通过繁殖实验及ELISA实验检测小鼠繁殖能力及血清性激素水平,明确卵母细胞敲除Fkbp38基因对卵巢功能的影响。TUNEL法检测敲除小鼠与同窝对照小鼠卵巢颗粒细胞凋亡情况。检测雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路下游靶蛋白磷酸化核糖体S6（PS6）活性验证Fkbp38基因对mTOR信号通路的影响。IF检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）及Bcl2-Associated X（BAX）表达明确Fkbp38基因敲除对卵母细胞发育的影响。结果 卵母细胞特异性敲除Fkbp38转基因小鼠模型构建成功。敲除小鼠较对照小鼠表现出生育力下降,性激素水平紊乱,卵巢内原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡数均显著减少（P<0.05）,引起POI样改变。卵母细胞特异性敲除Fkbp38基因后,mTOR信号通路激活,颗粒细胞凋亡增加,卵母细胞内BAX蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱,BAX/Bcl-2蛋白比值显著升高（P<0.05）。结论 Fkbp38在卵泡发育中发挥重要作用,其缺失致POI发生的机制可能是通过激活mTOR信号通路诱导细胞凋亡而引起的。     

人卵母细胞成熟过程中卵丘细胞与卵母细胞关系的研究进展

人卵母细胞和卵丘细胞（cumulus cell, CC）之间存在双向通讯,在卵泡内,卵母细胞的发育高度依赖于与卵丘细胞的联系。卵母细胞通过分泌有效的生长因子（oocyte-secreted factors, OSFs）介导卵丘细胞分化,卵丘细胞则通过缝隙连接传递信号并在卵泡发育的后期阶段支持卵母细胞的生长,进一步促进卵母细胞成熟和受精。本文将综述人卵母细胞成熟中卵丘细胞与卵母细胞之间的重要关系及有关作用机制,为提高体外成熟（IVM）技术中卵母细胞的质量提供新的帮助。     

酪氨酸激酶配体EphrinB2调控小鼠脑外伤后胶质瘢痕形成相关研究

研究背景：胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein, GFAP）表达增高是星形胶质细胞对中枢神经系统外伤后的自发反应,是胶质细胞活化、增殖以及胶质瘢痕形成的重要原因。该过程的调控机制目前并不完全清楚。本研究旨在探讨ephrinB2对小鼠脑外伤胶质瘢痕形成的影响。 研究方法：利用Loxp/Cre基因敲除系统,培养在中枢神经系统星形细胞中不表达ephrinB2的条件性基因敲除小鼠（KO）,基因敲除的结果采用DNA-PCR技术以及大脑切片后免疫组织化学ephrinB2/GFAP共染色方法证明。随机选取基因敲除小鼠及野生型小鼠各12只,制备改良的控制性皮层撞击小鼠闭合性颅脑损伤模型,利用尼氏染色、GFAP免疫荧光强度测量,比较损伤后28天,基因敲除小鼠与野生型小鼠脑萎缩程度以及GFAP表达程度的不同。 研究结果：本研究成功建立了在胶质细胞中特异性敲除ephrinB2的转基因小鼠种系。该基因敲除小鼠在中枢神经系统星形胶质细胞中特异性不表达ephrinB2。 通过组织病例学研究发现创伤后28天时,基因敲除小鼠和野生型小鼠均呈现不同程度的脑损伤和脑萎缩。损伤灶局部出现胶质瘢痕形成以及神经元丢失。免疫组化染色后的组织学形态分析发现,ephrinB2基因敲除小鼠损伤侧大脑半球及海马的萎缩程度均显著低于野生型小鼠（p<0.05）。基因敲除小鼠损伤侧的GFAP免疫荧光强度亦显著低于野生型小鼠（p<0.05）。 研究结论：在小鼠胶质细胞特异性敲除ephrinB2基因后,脑损伤后大脑半球GFAP免疫荧光强度以及半球和海马萎缩程度均显著降低。提示酪氨酸激酶配体ephrinB2在小鼠脑创伤修复中是促使胶质瘢痕形成的因素之一。     

ether-a-go-go相关基因通道在胰岛β-细胞中的作用

目的 探究ether-a-go-go相关基因（ether-a-go-go related gene,ERG）通道在胰岛β-细胞中的作用。方法 提取野生型（wild type,WT）与ERG基因敲除型（knockout,KO）小鼠胰岛β-细胞,利用全细胞膜片钳技术记录钾离子电流与动作电位,分析敲除ERG基因后钾电流与动作电位的变化。对两组小鼠进行腹腔注射葡萄糖耐量实验,分析基因敲除后小鼠糖耐量的变化,探究ERG基因是否对体内血糖浓度有影响。结果 在两组小鼠胰岛β-细胞中记录到的钾离子电流均呈现内向整流趋势,KO组钾离子电流明显减小,动作电位时程明显延长。动物实验中,KO组小鼠糖刺激2 h后血糖浓度较WT组显著降低。结论 ERG通道电流是胰岛β-细胞中钾离子电流的重要组成部分,可显著影响动作电位时程,进而影响体内血糖浓度。     

ICR小鼠卵母细胞通过旁分泌机制促进排卵关键过程

目的:利用国内医学研究常用ICR品系小鼠,在构建用于研究卵母细胞-卵丘细胞交互作用培养模型的基础上,研究卵母细胞及其产生的旁分泌因子生长分化因子9(GDF9)和骨形态发生蛋白15(BMP15)对排卵过程中的关键事件——卵丘扩展的调控作用?方法:通过显微手术制备摘除卵母细胞后的卵丘细胞复合体(OOX),并通过与卵母细胞共培养或GDF9和BMP15 处理研究卵母细胞及其特异释放的旁分泌因子对表皮生长因子(EGF)诱导卵丘扩展过程的调控?结果:成功构建了ICR小鼠OOX培养模型,发现卵母细胞及其释放的旁分泌因子GDF9和BMP15为EGF诱导卵丘扩展所必需?结论:ICR小鼠卵母细胞通过旁分泌机制促进排卵关键过程?     

Nicastrin在阿尔茨海默病转基因小鼠脑内星形胶质细胞中的表达

目的观测阿尔茨海默病（AD）中Nicastrin（NCT）和β-淀粉样蛋白（Aβ）在脑内星形胶质细胞中的表达情况,探讨星形胶质细胞在AD中的病变机制。方法应用荧光免疫组织化学法对5×FAD转基因小鼠海马区染色后,激光共聚焦扫描显微镜观察Nicastrin、A0和星形胶质细胞三者位置关系,半定量分析星形胶质细胞、Nicastrin和Aβ的表达变化。结果（1）野生型小鼠的海马区中未见Nicastrin和Aβ聚积,突变型小鼠海马的第一亚区（CA1）、第三亚区（CA8）、齿状回（DG）中可见Nicastrin和Aβ共定位于星形胶质细胞。（2）荧光半定量结果显示,Nicastrin、AG和星形胶质细胞在突变型小鼠的CA1、CA8、DG区的荧光强度均大于野生型小鼠的相应脑区（P〈0．05）。（3）体视学计数结果显示,突变型小鼠海马的Aβ、Nicastrin和GFAP的阳性共定位数多于野生型小鼠海马的各相应脑区（P〈0．05）。结论Nicastrin在AD转基因小鼠脑内的星形胶质细胞中表达增多。导致星形胶质细胞损伤的Aβ可能由表达于其中的β-淀粉样前体蛋白切割而成,而非摄取自神经元。     

Localization of cystathionine β synthase in mice ovaries and its expression profile during follicular development

Background In vitro fertilization (IVF) researches have suggested that cystathionine β synthase (CBS) is involved in oocyte development. However, little is known about the regional and cellular expression patterns of CBS in the ovary. The purpose of this study was to analyze the localization of CBS in mice ovaries and to investigate the expression profile during follicular development. Methods We used in situ hybridization and immunohistochemical analysis to determine CBS expression in the ovaries of female Balb/c mice. Then the follicles were collected from F1 (C57BL×Balb/c) mice and cultured in vitro. With the method of semi-quantitative RT-PCR, we also investigated the expression profile of CBS during follicular development. Results CBS was absent in the oocytes, although it was ubiquitously expressed in the ovary with the strongest expression in follicular cells at all stages. In late antral follicles, CBS expression was markedly higher in granulosa cells located close to the antrum and in cumulus cells around the oocyte. The semi-quantitative RT-PCR showed that CBS mRNA was detected in follicles at all stages in vitro. In cumulus-oocyte complexes superovulated, CBS expression also increased rapidly. Conclusions CBS was located mainly in the follicular cells in the ovaries. The level of CBS expression is high in follicles during folliculogenesis in mice. Differences in the CBS expression profile between oocyte and follicular cells suggest a role for CBS as a mediator in interactions between oocyte and granulosa cells.     

卵泡液中神经营养因子4及卵丘细胞TrkB受体与卵子发育潜能的关系

探索人卵泡液中神经营养因子4（NT-4）及卵丘颗粒细胞中TrkB受体的表达与卵子发育潜能的关系。     

β-细辛醚通过PKA/CREB信号通路对快速老化痴呆小鼠脑组织凋亡机制的影响

目的研究β-细辛醚对快速老化痴呆小鼠大脑组织蛋白激酶A(PKA)、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的影响。方法选取健康昆明小鼠10只作为对照组,30只快速老化小鼠被随机分为模型组(10只)、实验组(10只)、治疗组(10只)。对照组采用生理盐水灌胃,2 mL/次;实验组采用β-细辛醚混浊液灌胃,2 mL/次;治疗组采用脑复康水溶液5 mg/mL灌胃,2 mL/次;模型组采用生理盐水灌胃,2 mL/次。所有小鼠均每天灌胃1次,持续3周。3周后进行小鼠行为学测试,检测脑组织PKA、CREB酶改变及光镜和电镜下神经元细胞形态变化。结果实验组和治疗组与模型组相比,潜伏期明显缩短、在原平台停留时间延长,PKA、CREB活性与模型组比较均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。光镜下观察实验组海马神经元损伤较轻,大部分细胞核清楚完整,电镜下核周隙清晰,细胞器清晰,神经纤维较丰富。结论β-细辛醚能提高快速老化痴呆小鼠知识记忆能力,影响PKA/CREB传导路径和突触结构,减少快速老化痴呆小鼠大脑组织神经元损伤,对快速老化痴呆小鼠有明显治疗作用。     

血脂水平与华支睾吸虫致病性的初步研究

目的比较高血脂小鼠和正常血脂小鼠感染华支睾吸虫后的肝脏病理变化及炎症因子水平,以研究血脂水平对华支睾吸虫致病性的影响。方法通过向BALB/c小鼠投食高脂饲料建立高血脂小鼠模型,用相同囊蚴数感染高血脂小鼠和正常血脂小鼠,比较感染1个月后小鼠相关病理指标。通过Masson染色(Masson′s trichrome staining)判断肝胆纤维化程度,使用免疫组化和实时荧光定量PCR(qPCR)检测肝脏α-平滑肌蛋白(α-SMA)定位情况和转录水平,用流式细胞术检测小鼠脾细胞在刀豆素(ConA)刺激48 h培养上清中细胞因子表达水平。结果与正常血脂感染组小鼠相比,高血脂感染组小鼠出现较显著的肝胆管扩张、肝实质及汇管区出现大量的胶原纤维增生、小胆管增生等病变。高血脂感染组α-SMA转录水平升高,并在肝脏组织汇管区及增生的纤维间隔内表达。高脂感染组脾细胞培养上清中白介素6(IL-6)和IL-10表达水平比正常血脂小鼠高(P0.05),高脂感染组IFN-γ水平比高脂未感染组低(P0.05)。结论高血脂可能使华支睾吸虫感染所致的肝脏胶原纤维增生、胆管扩张更明显,血脂水平高低还可影响华支睾吸虫感染后宿主的免疫应答。     

受精早期观察第二极体对胚胎发育及IVF-ET结局的影响

目的:探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗中早期观察第二极体判断受精的方法对胚胎发育及IVF-ET结局的影响。方法:回顾性研究郑州大学人民医院2010年全年行IVF长方案治疗的患者606例,根据病史判断受精障碍风险将其分为两组。A组:受精后4 h拆除颗粒细胞判断早期受精。B组:受精后17～18 h观察受精。分别比较两组年龄、获卵数、卵子成熟率、正常受精率、可利用胚胎率(可利用胚胎数/2PN卵裂数)、胚胎种植率、临床妊娠率及早期流产率。结果:两组可利用胚胎率差异具有统计学意义(P<0.05),其它各项统计指标均未见明显差异(P>0.05)。结论:受精障碍高风险患者在4 h拆除颗粒细胞观察第二极体有降低可利用胚胎率的风险,不建议所有IVF患者使用。     

卵丘细胞线粒体移植对年老小鼠早期胚胎发育的影响

目的探讨线粒体对早期胚胎发育的影响。方法采用昆明小鼠为动物模型,以其卵丘颗粒细胞、卵母细胞、受精卵为试验材料,提取年老小鼠卵丘细胞线粒体,将其注入年老小鼠卵母细胞和体内冲出的受精卵中。结果与结论通过卵丘细胞线粒体移植,给卵子补充了一定量的线粒体,可以部分弥补卵母细胞因变异引起的功能不足。为第2次减数分裂、受精卵和胚胎发育提供足够的能量,明显改善了胚胎的质量。