βIVS—Ⅱ—1 G→A复合三联α基因所致的韩国人中间型β地中？…

目的 研究中间型β地中海贫血的分子机制,为中间型β地中海贫血的基因诊断提供科学依据。方法 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交和双链ＤＮＡ循环测序等技术,对在韩国首次发现的中间型β地中海贫血家系的α和β珠蛋白基因进行分析。结果 基因分析表明,该家系属典型的中间型β地中海贫血,它的分子病因是β珠蛋白基因的第２内含子５‘端的第１个碱基Ｇ→Ａ（ＩＶＳ－Ⅱ－１Ｇ→Ａ）突变和三联α珠蛋白基因     

遗传病基因诊断的基本质量控制

迄今能进行基因诊断的遗传病已逾百种。在临床上 ,遗传病基因诊断的范围主要包括 :直接针对遗传病患者的临床诊断 ;对遗传病家系中的易患个体进行症状前诊断与携带者检出 ;对遗传病家系中的患病高风险胎儿的产前诊断。在国外 ,针对部分常见遗传病已有一些比较规范的基因诊断程序[1,2 ],而我国虽然遗传病的基因诊断工作已开展近 2 0年 ,但受检测技术的局限性、从业人员缺乏必要的培训及实验室管理水平低下等因素的影响 ,严重制约了检测质量的持续提高 ,因此健全与发展遗传病基因诊断的基本质量控制规范具有相当重要的意义。此外 ,由于遗传病…     

急性髓细胞白血病M2b型AML1基因重排的研究

应用ＤＮＡ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交法，检测３３例Ｍ２ｂ，２７例其它亚型急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）患者，发现８１．８％的Ｍ２ｂ患者，包括４例型正常的Ｍ２ｂ有ＡＭＬ１基因重排。本研究结果表明ＡＭＬ１基因重排检测可作为Ｍ２ｂ基因诊断及疗效监测的手段之一。     

因子VIII基因倒位的检测与血友病甲的分子诊断

应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交技术，分析了３６个无亲缘关系的血友病甲家系共９８名成员的凝血因子ＶＩＩＩ基因倒位。１２个（３３．３％）家系显示内含子２２倒位，其中１０个为远端倒位，２个为近端倒位。此１２例皆为重型患，占全部２３例重型患的５２．２％，证实ＦＶＩＩＩ基因基因倒位是中国人重型血友病甲的重要的分子缺陷。ＦＶＩＩＩ基因倒位分析既可以揭示血友病甲患的分子缺陷，又可以直接用于血友病甲的分子诊断     

因子Ⅷ基因倒位的检测与血友病甲的分子诊断

应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交技术，分析了３６个无亲缘关系的血友病甲家系共９８名成员的凝血因子ＶＩＩＩ（ＦＶＩＩＩ）基因倒位。１２个（３３．３％）家系显示内含子２２倒位，其中１０个为远端倒位，２个为近端倒位。此１２例皆为重型患者，占全部２３例重型患者的５２．２％，证实ＦＶＩＩＩ基因倒位是中国人重型血友病甲最重要的分子缺陷。ＦＶＩＩＩ基因倒位分析既可以揭示血友病甲患者的分子缺陷，又可以直接用于血友病甲的分子诊断。     

急性髓细胞白血病M2bETO基因重排的研究

应用ＤＮＡＳｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交法，检测了２３例Ｍ＿（２ｂ）、４例Ｍ＿（２ａ）、１例Ｍ＿（４ａ）和１例Ｍ＿６的ＥＴＯ基因重排。发现至少７４％的Ｍ＿（２ｂ）患者，包括１５例有ｔ（８；２１）异常和２例核型正常的Ｍ＿（２ｂ）有ＥＴＯ基因重排。研究结果表明检测ＥＴＯ基因重排可作为Ｍ＿（２ｂ）基因诊断及疗效监测的手段之一。     

p~（53）cDNA探针制备及Southern印迹杂交分析的应用

ｐ￣（５３）ｃＤＮＡ探针制备及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交分析的应用资晓林，钱荆，俞顺章，张幼辰ｐ￣（５３）基因是一种抑癌基因，已在多种肿瘤组织中发现其缺失和突变￣［１］。目前研究ｐ￣（５３）基因缺失的方法多采用同位素标记探针的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交方...     

一个同时具有β和α珠蛋白基因异常家系的分子诊断

为对一个同时具有β和α珠蛋白基因变异家系中的成员进行分子诊断，应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交、多重等位基因特异ＰＣＲ（ＭＡＳ－ＰＣＲ）和双链ＤＮＡ循环测序法等基因分析技术。结果表明：具有中间型β地中海贫血表现型的先证者的基因型为βＩＶＳ－Ⅱ－６５４（Ｃ→Ｔ）杂合子复合αααａｎｔｉ４．２／αα；其父亲为典型的βＩＶＳ－Ⅱ－６５４（Ｃ→Ｔ）杂合子；而母亲的α珠蛋白基因型为αααａｎｔｉ４．２／α－３．７。肽链体外生物合成速率测定结果提示先证者的β珠蛋白肽链的合成速率明显降低（α／β＝２．６３），表明α珠蛋白基因组织的三体型与β地中海贫血杂合子复合存在是导致中间型β地中海贫血的重要分子基础。     

基因芯片用于检测缺失型α地中海贫血

地中海贫血 (珠蛋白生成障碍性贫血 ,地贫 )是我国长江以南发病率最高、危害最大的一种遗传病。我国南方地区常见的 3种缺失型α地贫分别是由 -α3 .7、-α4.2 和 - - ＳＥＡ基因的缺失引起的。传统的缺失型α地贫基因分析检测方法主要是用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、聚合酶链反应 (ＰＣＲ)法。但由于α地贫珠蛋白基因缺失型的不同所需试剂及反应条件也不同 ,须分别进行检测 ,给临床筛查及快速诊断带来不便 ;同时 ,全套检测的累加费用较高 ,给患者造成了一定的经济负担。近年来基因芯片技术的发展给疾病的基因诊断提供了广阔的应用前景。我们运…     

１ 个脆性 Ｘ 综合征家系的 ＦＭＲ１ 基因 ＣＧＧ 重复及甲基 化状态分析

摘要：目的 应用 ＰＣＲ 微流控芯片毛细管电泳联合 ＭＳ ＭＬＰＡ 技术对 １ 个脆性 Ｘ 综合征家系进行 ＣＧＧ 重复序列和甲基化状 态分析，探讨 ＦＭＲ１ 基因甲基化程度和临床表型的关系。方法 应用 ＰＣＲ 微流控芯片毛细管电泳法对该家系 ２２ 个成员进行 ＦＭＲ１ 基因 ＣＧＧ 重复数检测，采用甲基化特异性多重连接依赖探针扩增（ＭＳ ＭＬＰＡ）技术检测 ＦＭＲ１ 基因启动子区域 ＣｐＧ 岛 的甲基化情况，并用 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 印迹杂交技术对全突变患者进行验证。结果 ２２ 个家系成员中检出前突变携带者 ８ 例，全突变 女性携带者 １ 例，脆性 Ｘ 综合征男性患者 ４ 例。ＭＳ ＭＬＰＡ 分析发现女性正常型和前突变携带者的甲基化比值分别为 ０．２５ ～ ０．４８（中位数 ０．３３）和 ０．３３～ ０．４６（中位数 ０．３８），两组间差异无统计学意义（ｔ ＝ ０．０９５，Ｐ＞０．０５），１ 例女性全突变携带者甲基化比 值为 ０．５２，高于正常型和前突变携带者，４ 例男性全突变患者甲基化比值均＞０．６４，中度智力障碍组和重度智力障碍组之间甲 基化比值差异无统计学意义（ｔ ＝ ０．５８，Ｐ＞０．０５）。结论 ＣＧＧ 重复数检测和甲基化分析可为脆性 Ｘ 综合征家系成员提供准确 全面的分子诊断；男性患者临床表型和甲基化程度相关。     

甲型血友病基因携带者检出及产前诊断研究

目的探讨甲型血友病(hemophilia A,HA)型血友病基因携带者检出及产前诊断的准确性和诊断率。方法 12个HA家系66名成员和2名胎儿,采集外周血或脐血,采用FⅧ基因第13内含子的(CA)n重复多态性、第18内含子内Bcl-1位点和第22内含子内Xba-1位点的多态性连锁分析进行间接基因诊断和产前基因诊断。结果 12个HA家系筛查成功率为100%,12个HA家系中41名女性成员,其中27例确定为HA致病基因携带者,14名排除携带状态;对其中2个家系的2名胎儿进行产前诊断,1例诊断为血友病基因携带者,1例诊断为血友病患儿,建议终止妊娠。结论联合采用上述3个多态位点可对HA家系作出快速、准确的基因诊断和产前基因诊断。     

免疫球蛋白基因重排分析在淋巴瘤诊断中的初步应用研究

用免疫球蛋白重链Ｊ区（ＪＨ），Ｋ轻链及λ轻链Ｃ区（ＣＫ，Ｃλ２）基因探针及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交技术，对２２例非何杰金氏淋巴瘤进行分析。结果显示１３例尿Ｂ细胞淋巴瘤均出现重链基因重排，其中１０例有Ｋ或λ轻链基因重排；３例Ｔ细胞淋巴瘤中，１例出现重链，１例出现Ｋ轻链基因重排。１例分类未明淋巴瘤出现重链基因重排。５例未作免疫表型分析的淋巴瘤中有４例出一现重链，３例出现Ｋ轻链，１例出现λ轻链基因重排。     

STR连锁分析在Wilson病基因诊断中的应用

本文选择与Ｗｉｌｓｏｎ病致病基因紧密连锁的３个ＳＴＲ序列Ｄ１３Ｓ２２８、Ｄ１３Ｓ３０１、Ｄ１３Ｓ１３７为遗传标记，用扩增片段长度多态性（Ａｍｐ－ＦＬＰ）方法对中国人群的多态性进行了检测，发现具有高度多态性，多态信息量（ＰＩＣ）分别为０．６０、０．７８、０．７９，联合这３个ＳＴＲ序列对２个ＷＤ家系进行单体型连锁分析，确定了家系各成员的基因型。表明ＳＴＲ连锁分析可对ＷＤ家系进行症状前及产前基因诊断。     

连锁分析在X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良诊断中价值

目的探讨微卫星连锁分析方法对X-N锁迟发性脊椎骨骺发育不良（X—linked spondyloepiphyseal dysplasia tarda,SEDL）家系症状前患者实施间接基因诊断的可行性。方法应用聚合酶链反应、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染色技术检测微卫星DXS16的片段长度多态性,通过连锁分析对4个SEDL家系中11例年幼待诊对象进行SEDL症状前患者或携带者的诊断。结果11例中2例为症状前患者,3例女性为致病基因携带者,其余6例基本排除SEDL症状前患者或致病基因携带者。结论微卫星连锁分析方法对SEDL症状前患者有较高诊断价值。     

单基因遗传病基因诊断技术研究进展

单基因遗传病(简称单基因病)种类、分型繁多,常规诊断难以确诊,而基因诊断技术在遗传病特别是单基因病的确诊、分型等方面都发挥着不可或缺的作用.近一、二十年来,基因诊断技术进展迅猛,各种检测方法层出不穷.本文重点围绕基因诊断技术的最新进展进行综述,以期对临床诊断和预防工作提供一些有益的启示.     

多重连接探针扩增技术对1个假肥大型中国汉族肌营养不良症家系的遗传学研究

目的拟通过多重连接探针扩增技术(MLPA)对1个假肥大型进行性肌营养不良(DMD)家系进行检测以明确DMD的诊断,结合患者临床表现进行分析并对MLPA技术用于DMD临床诊断进行探讨。方法收集1个DMD患者家系,该家系共12人,男性患者2例。分离外周血并提取DNA,用MLPA的方法对其进行基因诊断。结果先证者符合DMD诊断。基因检测提示先证者和其弟弟携带抗肌萎缩蛋白基因缺失突变DMD(Exon3-11)。先证者母亲为致病基因携带者。结论通过MLPA检查技术明确了一个中国汉族DMD家系的致病基因,MLPA技术能够用于DMD疾病的诊断。     

10个DMD/BMD家系的基因诊断及其中3个家系的产前基因诊断分析

目的：对杜氏／贝氏肌营养不良症（DMD／BMD）家系进行基因诊断和产前基因诊断。方法：抽提DMD家系成员外周血及胎儿羊水或脐静脉血全基因组DNA，采用PCR技术和聚丙稀酰胺凝胶银染法对DMD／BMD基因3端及基因内的45、50内含子的（CA）n短串联重复序列（STR）多态性进行连锁分析。 结果：结果显示，7个家系可提供遗传连锁诊断信息，完成了其中3个家系的产前基因诊断并出生了一例健康的男性婴儿；3个家系不能提供遗传连锁诊断信息。可诊断率达70％。 结论：STR多态连锁分析适用于常见缺失突变检测未发现缺失的DMD／BMD患者，是一种快速、有效、准确、易于普及的基因诊断方法，能有效地提高DMD／BMD家系基因诊断和产前基因诊断的可诊断率。     

Amp—FLP连锁分析法应用于Wilson病的产前基因诊断

为探索对Ｗｉｌｓｏｎ病产前基因诊断的方法，应用１３号染色体上３个ＳＴＲ位点的扩增片段长度多态性（Ａｍｐ－ＦＬＰ）为遗传标记，对３个ＷＤ家系进行产前诊断，结果２个胎儿为致病基因携带者，１个胎儿患者，表明以这３个多态位点为遗传标记，能快速、简便、准确地对该病进行产前诊断。     

聚合酶链反应用于进行性脊髓性肌萎缩的诊断

目的了解儿童期发作的进行性脊髓性肌萎缩（ＳＭＡ）患者的运动神经元存活基因（ＳＭＮ）的缺失，探讨聚合酶链反应限制性片段长度多态性（ＰＣＲＲＦＬＰ）技术用于检测ＳＭＡ疾病的诊断价值。方法应用ＰＣＲＲＦＬＰ技术对１０例拟诊为ＳＭＡ患者、６个家系的２０例非ＳＭＡ成员及３０例正常人的ＳＭＮ基因外显子７和８进行了检测。结果１０例ＳＭＡ可疑患者中９例（９０％）有ＳＭＮ基因缺失，其中仅外显子７或８缺失各为１例。家系其他成员及对照组均无ＳＭＮ端粒基因缺失。结论用ＰＣＲＲＦＬＰ法对高度可疑ＳＭＡ的病例进行诊断，具有较高敏感性和特异性，简便易行     

基因诊断方法的研究与进展

基因诊断是利用分子遗传学技术在DNA或RNA水平上对某一基因进行突变分析，从而对特定疾病进行诊断。摹因诊断凶其直接诊断性、高特异性、灵敏性、早期诊断性弥补了表型诊断的不足而被广泛应用。基因诊断也被应用于组织工程的相关领域，如干细胞移植及器官移植的供受体配型，皮肤组织工程等研究中。本文主要从核酸分子杂交、聚合酶链反应及相关技术、DNA序列测定、DNA芯片、连锁分析等方面对基因诊断方法研究进展进行了综述，分析其各自的优缺点，并在此基础上提出了对基因诊断方法研究前景的展颦。相信随着分子生物学和分子遗传学的弋速发展必将极大的促进基囡诊断技术的进步。以基因诊断为基础的殛因治疗也将成为人类治疗自身疾病的主流技术。