靶向结缔组织生长因子siRNA对肝纤维化影响研究进展

肝纤维化是肝脏对各种原因所致肝损伤的创伤愈合反映,是组织发生修复反映时细胞外基质(ECM)合成、降解与沉积不平衡而引起的病理过程,肝纤维化的形成涉及多种细胞、细胞因子以及ECM的变化.其中肝星状细胞(HSCs)激活并转化为肌成纤维细胞是肝纤维化发生、发展的核心环节、各种致纤维化因素均把HSCS作为最终靶细胞,促使其转化为肌成纤维细胞而导致肝纤维化的发生.影响肝纤维化形成的因素很多,至今尚未完全阐明.结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)是一种非结构性基质蛋白,能直接介导肝星状细胞(HSCs)的活化、合成及分泌细胞外基质(ECM),该因子的研究为探索肝纤维化的发病机制及新的治疗方案注入了新思想,现就CTGF在肝纤维化中研究讲展作一综述.     

氧化苦参碱防治肝纤维化作用

目的 观察氧化苦参碱的抗肝纤维化作用并探讨其作用机制。方法 用CCl4诱导昆明小鼠建立肝纤维化模型。设正常对照组、模型组、氧化苦参碱预防组和治疗组。实验结束后分别测定丙氨酸氨基转移酶、白蛋白、总胆红素、透明质酸、层粘连蛋白、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原，并作肝组织病理学形态分析及免疫组化染色。结果 氧化苦参碱预防组和治疗组与模型组比较，肝功能、肝纤维化指标、病理学形态分析及免疫组化染色结果差异均有统计学意义（P〈0．05），且预防组与治疗组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 氧化苦参碱通过抑制肝内胶原合成、减少结缔组织生长因子的表达，抑制肝脏细胞外基质异常增生发挥抗肝纤维化作用。     

转化生长因子β1小干扰RNA对肝星状细胞生物学特性的影响

目的 观察转化生长因子β1小干扰RNA（TGFβ1 siRNA）对肝星状细胞增殖、活化、胶原合成的影响.方法 利用脂质体将TGFβ1 siRNA表达质粒转入肝星状细胞中,培养72 h后,收集肝星状细胞和上清液,采用Western blotting和RT-PCR法分别检测细胞TGFβ1和a-SMA蛋白表达、Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达;MTT法检测细胞增殖活性和放射免疫法检测培养上清液中IV型胶原和透明质酸含量.结果 与无关对照siRNA组相比,TGFβ1和a-SMA蛋白表达分别下调（79±5）%和（55±4）%（均P〈0.01）;细胞增殖活性降低（25±4）%（P〈0.01）;Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达分别下调（63±6）%和（57±4）%（均P〈0.01）;培养上清中IV型前胶原和透明质酸含量分别降低（53±8）%和（46±8）%（均P〈0.01）.结论 TGFβ1 siRNA能显著下调TGFβ1的表达,抑制肝星状细胞活化、增殖及细胞外基质的合成和分泌.     

RNA预防血吸虫病肝纤维化临床研究

血吸虫病的主要病理变化是虫卵肉芽肿及其引起的肝纤维化。即使彻底的抗血吸虫治疗 ,肝纤维化可仍然继续发展并导致严重的并发症 〔1〕。目前 ,尚无有效的方法防止血吸虫病肝纤维化的发生。以往研究表明核糖核酸 (RNA)对病毒性肝炎所致的肝纤维化和实验性肝纤维化有阻抑作用 〔2 ,3〕,但尚未见使用 RNA早期阻抑血吸虫病肝纤维化的临床应用报道。全文观察了 6 0例慢性和 6 0例晚期血吸虫病患者 RNA治疗前后血 P P( 型前胶原肽 )、HA(透明质酸 )、 - C( 型胶原 )和 L N(层粘蛋白 )、血浆 TNF- α(肿瘤坏死因子 )等方面的变化 ,报告如…     

小干扰RNA治疗丙型肝炎的研究进展

丙型肝炎是由HCV感染引起的严重危害人类健康的传染性疾病,至今尚无特效的防治方法.小干扰RNA(siRNA)作为一种新型基因治疗分子,在RNA干扰(RNAi)抗病毒的研究背景下,也逐渐应用于抑制HCV感染.目前,在研究siRNA对病毒自身基因组的抑制、对宿主相关基因的沉默、病毒逃逸的应对及与固有免疫的关系等方面,取得了...     

小分子干扰RNA干扰相关基因表达对卵巢癌化疗敏感性影响的研究进展

卵巢癌是女性生殖系统常见3大恶性肿瘤之一,导致的患者病死率居妇科恶性肿瘤首位,严重威胁女性的健康与生命。目前卵巢癌以手术和化疗为主要治疗方法,而肿瘤对化疗药物产生耐药,是导致治疗失败的重要原因之一。因此,研究卵巢癌细胞的耐药性逆转作用,对提高临床治疗效果意义重大。而小分子干扰RNA(siRNA)是由双链RNA在多种酶共同作用下产生的小片段双链RNA,可与同源的靶mRNA互补结合,特异性降解靶mRNA。因此,通过设计针对性的siRNA干扰与肿瘤发生、发展相关的基因,如Id1、STAT3、MDR1、BAF57及CXCR4等表达,可提高卵巢癌细胞对化疗药物的敏感性,为卵巢癌细胞耐药性逆转研究提供初步理论依据。     

AcSDKP对大鼠矽肺纤维化转化生长因子-β1和结缔组织生长因子表达的抑制

目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠肺内转化生长因子(TGF)-β1、结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响.方法 将大鼠随机分为6组.每组10只.对照组大鼠支气管内灌注1.0 ml生理盐水,矽肺模型对照1组4周后处死,矽肺模型对照2组8周后处死;矽肺模型组大鼠予SiO2混悬液50 mg/ml,矽肺模型1组4周后处死,矽肺模型2组8周后处死;抗纤维化治疗组(治疗组):支气管内灌注SiO2混悬液50mg/ml,4周后给予AcSDKP 800 μg/(kg·d),至第8周处死;预防治疗组给予AcSDKP800μg(kg·d)48h后,支气管内灌注SiO2混悬液50mg/ml,8周后处死.HE染色进行形态学观察;采用免疫组织化学法检测TGF-β1与CTGF的蛋白表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TGF-β1与CTGF的mRNA表达.结果 治疗组TGF-β2及CTGF蛋白表达分别为0.244±0.016、0.241±0.017,明显低于矽肺模型1组和矽肺模型2组;治疗组TGF-β1 mRNA及CTGF mRNA表达水平明显低于矽肺模型1组和矽肺模型2组,差异均有统计学意义(P<0.05);预防治疗组TGF-β1和CTGF蛋白表达和mRNA表达水平明显低于矽肺模型2组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 AcSDKP能减轻实验性矽肺纤维化大鼠肺组织中的TGF-β1与CTGF表达水平.     

慢性乙型肝炎和肝硬化患者结缔组织生长因子的肝内表达

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)的肝内表达与肝硬化的关系。方法对93例慢性乙型肝炎和肝硬化患者的肝组织活检样本,采用免疫组化方法进行CTGF肝内表达研究,结合HE染色和网状纤维染色,分析比较慢性乙型肝炎和肝硬化的CTGF肝内表达及表达的细胞定位。结果肝硬化患者CTGF的表达强度明显高于慢性乙型肝炎患者(P<0.01),肝纤维化程度越高,CTGF表达越强烈。CTGF的表达与慢性乙型肝炎的炎性活动程度明显相关(P<0.05)。CTGF的表达主要集中于汇管区和纤维化区,肝星形细胞、成纤维细胞和窦状隙内皮细胞染色常呈阳性。结论CTGF的表达与肝纤维化及肝硬化程度密切相关,肝星形细胞、成纤维细胞和窦状隙内皮细胞是肝内CTGF的重要来源。     

小鼠日本血吸虫病肝纤维化肝脏CTGFmRNA的表达意义

目的 研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)mRNA在日本血吸虫病肝纤维化小鼠肝脏中的表达状况及可能的意义.方法 昆明小鼠感染尾蚴复制小鼠日本血吸虫病肝纤维化模型,模型组分别在6、10、14、18周杀鼠,对照组在6周时予吡喹酮治疗后10、14、18周杀鼠;HE染色观察小鼠肝脏病理改变,RT-PCR检测小鼠肝脏CTGFmRNA表达,免疫组化方法观察各阶段肝脏α-SMA 细胞的表达.结果 模型组10周时形成典型的肝纤维化,肝纤维化不断进展.模型组10周时小鼠肝脏CTGFmRNA表达和α-SMA 细胞表达均达高峰,10周、14周、18周时与对照组相比均有统计学差异(P＜0.05);半定量结果显示CTGFmRNA表达与α-SMA 细胞表达呈直线相关性.结论 CTGFmRNA表达增高与小鼠日本血吸虫病肝纤维化形成有密切关系;CTGF可能通过作用于活化的肝星状细胞来参与小鼠日本血吸虫病肝纤维化的进展.     

抗肝纤维化重组TGF-β1疫苗的研究进展

肝纤维化(hepatic fibrosis)是指肝内的纤维结缔组织异常增生，其实质是胶原和其他细胞外基质(extracellular matrix，ECM)的合成与降解失衡，而转化生长因子β1(transforming growth facter betal，TGF-β1)是调控肝纤维化发生、发展的核心物质。近来，在肝纤维化的治疗上提出重组TGF-β1疫苗，引起广泛关注。本文围绕近年来对TGF-β1在肝纤维化形成中的作用机制的认识，对采用重组TGF-β1疫苗防治肝纤维化的相关探索性研究进行综述。     

CTGF与糖尿病肾病

糖尿病肾病（DN）状态下，高糖环境、血循环机械应力、肾素-血管紧张素-醛固酮系统等多种因素可上调结缔组织生长因子（CTGF）的表达。上调的CTGF可通过自身或联合其他细胞因子促进肾脏细胞有丝分裂、调节细胞周期的限制点、促进细胞外基质合成增加和降解减少，导致细胞外基质沉积，从而导致肾脏肥大、肾小球硬化以及肾小管纤维化，介导DN的发生与发展。CTGF是DN发病中的关键细胞因子。因此，以其为特异性靶标可能给DN的治疗带来新希望。     

夹心ELISA检测血清结缔组织生长因子及其初步临床应用

目的应用抗结缔组织生长因子（CTGF）单克隆抗体和抗CTGF多克隆抗体,建立CTGF免疫分析方法,用其方法检测血清中CTGF含量初步验证其临床应用价值。方法使用抗CTGF的单克隆抗体包被反应板,辣根过氧化物酶标记兔抗人CTGF多克隆抗体（二抗）建立双抗体央心方法,通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的最适工作浓度;以纯化的CTGF抗原为标准品建立标准曲线;以重复性、灵敏性和回收率实验评价ELISA办法。使用该检测系统和进口试剂盒对照,检测其准确性和可比性。利用该系统检测临床有肝纤维化症状的患者血清标本,初步评价其临床应用价值。结果该方法有较高的灵敏度、特异性及稳定性,最低检测限批间和批内变异系数分别为0．98ng／ml、9．8％、4．9％。与进口试剂盒有很强的可比性,两者的相关系数r=0．988。初步临床标本检测证实,肝硬化、慢性肝炎急性肝炎患者的血清CTGF含量明显高于建康对照者（P〈0．01）,肝硬化患者的血清CTGF水平明显高于慢性肝炎和急性肝炎患者（P〈0．01）。结论成功地建立了一种测定血清CTGF的双抗体夹心方法,该反应系统有较高的灵敏度和特异性,和进口试剂盒有很强的可比性,为临床广泛使用打下了基础。     

博莱霉素致大鼠肺纤维化原癌基因c-erbB2和肺表皮生长因子受体的表达

目的 探讨肺纤维化模型大鼠肺组织中原癌基因c-erbB2激活和肺表皮生长因子受体(EGFR)的表达.方法 将54只Wistar大鼠随机分成博莱霉素(BLM)组、EGFR拮抗剂Iressa组和对照组,每组18只.用BLM(5 mg/kg)气管注射制造大鼠肺纤维化模型,对照组气管注入生理盐水O.2～0.3ml;Iressa组造模前1 h灌胃给予Iressa(200 mg/kg),BLM组和对照组用生理盐水10 ml/kg灌胃,每组均灌胃5次/周,分别于第1、14、28天处死大鼠.观察大鼠肺组织病理改变,用免疫组化法检测肺组织原癌基因c-erbB2和EGFR的表达.结果 Iressa组大鼠肺组织可见纤维化并炎性细胞浸润,与BLM 组变化规律相同,肺纤维化程度低于BLM组.第28天Iressa组肺纤维化评分(2.17±0.41)明显低于BLM组(3.50±0.84),差异有统计学意义(P＜0.01).各时间点BLM组和Iressa组c-erbB2和EGFR表达均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).Iressa组的c-erbB2表达与BLM组变化规律一致,均随时间的延长,c-erbB2表达逐渐下降,不同时间的c-erbB2表达比较,差异有统计学意义(P＜0.01).Iressa组的c-erbB2表达与BLM组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).Iressa组于第14、28天时肺组织中EGFR表达水平为0.17±0.02和0.28+0.04,明显低于BLM组(0.27+0.04、0.34±0.02),差异有统计学意义(P＜0.01).Iressa组第28天EGFR表达明显高于第14天,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 c-erbB2和EGFR在大鼠肺泡炎及肺纤维化不同阶段表达增强,c-erbB2和EGFR可能参与了肺纤维化的发生.

Abstract：

Objective To study the expression of the epidermal growth factor receptor( EGFR) and the oncogene c-erbB2 on pulmonary fibrosis induced by bleomycin( BLM) in rats. Methods Fifty-four Wistar rats were randomly divided into three groups, the pulmonary fibrosis group (BLM), Iressa group and the control group. There were 18 rats in each group. Control group were injected with saline 0.2~0.3 ml in trachea.Iressa group and BLM group were injected with BLM intratracheal. After the fibrosis models were build, Iressa group were given orally Iressa(200 mg/kg)l h before modeling in Iressa group, saline were fed 10 ml/kg in BLM group and control group. The three groups were fed 5 times per week; and were sacrificed after treatment on days 1, 14and 28 respectively. The lungs were harvested for histological studies. Results The lung tissue in Iressa group showed fibrosis and inflammatory cell infiltration, the same as shown in the BLM group. The pulmonary fibrosis score was significantly lower than the BLM group on the 28 th day (2.17±0.41 vs 3.50±0.84, P＜0.01). Compared with the control group, c-erbB2 and EGFR were hyperexpressed significantly both in BLM group and Iressa group at all time points (P＜0.01); c-erbB2 expression had no changes between the Iressa group and the BLM (P＞0.05), that were gradually decreased, and was significantly different at each time point (P＜0.01). EGFR expression was increased gradually on the 14th and 28th day (0.17±0.02 and 0.28±0.04)in Iressa group ,that was significantly lower than the BLM group (0.27±0.04 and 0.34±0.02)(P＜0.01). EGFR expression increased significantly on the 28th day than on the 14th day in the Iressa group(P＜0.01). Conclusion The expression of C-erbB2 and EGFR are enhanced in different stages of alveolitis and pulmonary fibrosis, c-erbB2 and EGFR may be participated in different stages of pulmonary fibrosis.     

神经生长因子与肝纤维化的研究进展

肝星形细胞(HSC)活化是肝纤维化形成的关键因素.目前研究显示,神经生长因子(NGF)可能通过抑制肝脏炎症,诱导活化的HSC凋亡,进而减缓肝纤维化的进展,其作用机制可能包括NGF及其低亲和力受体P75的作用.诱导活化HSC凋亡将是治疗和逆转肝纤维化的理想途径.     

产前感染对新生大鼠肺结缔组织生长因子表达的影响

目的 动态观察产前炎症暴露生后大鼠肺结缔组织生长因子(CTGF)表达和肺泡结构变化,探讨CTGF对肺发育的影响机制。方法 Wistar孕大鼠随机分为实验组和对照组,分别于孕19 d和20 d腹腔注射脂多糖(LPS2.5 mg/kg)和等量生理盐水,足月自然分娩后,于日龄1、3、7、14 d两组分别取8只仔鼠,麻醉处死后取肺组织,左肺行HE染色,观察肺组织结构,测量肺泡数量、肺泡间隔厚度、肺泡占组织面积比例,右肺采用Real time PCR和Western blot方法测定肺组织中CTGF mRNA及蛋白表达水平。结果 1)随日龄增加,两组大鼠肺泡数量、肺泡占组织面积比逐渐增加,肺泡间隔变薄。生后1 d、3 d、7 d及14 d,实验组肺泡数量明显少于对照组(P<0.05或<0.01);生后1 d、3 d和7 d,实验组肺泡占组织面积比明显大于对照组(P<0.01);生后1 d及3 d,实验组肺泡间隔厚度明显小于对照组(P=0.000)。2)生后1 d、3 d和7 d实验组CTGFmRNA表达明显高于对照组(P<0.05或<0.01)。3)生后1、3、7、 14 d实验组CTGF蛋白表达均明显强于对照组(P均<0.05)。结论 产前感染导致生后大鼠肺CTGF表达增加与肺结构异常有关。     

百草枯中毒致大鼠肺纤维化模型中肺组织的胎盘生长因子表达

目的观察在百草枯（PQ）致大鼠肺纤维化模型中肺组织胎盘生长因子（PLGF）的变化。方法将42只健康成年雌性SD大鼠随机分为对照组和染毒组，每组21只，分别观察7、14和28d。染毒组于实验开始一次性灌胃染毒PQ（40mg／kg），对照组予以等量的生理盐水。取肺组织行半定量的病理组织学检查、羟脯氨酸测定，并利用半定量逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组化方法测定PLGFmRNA和蛋白表达。结果PQ染毒后大鼠肺泡炎、肺纤维化程度积分明显增高，肺组织羟脯氮酸含量明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈O．01）。7、14、28d时肺组织PLGFmRNA表达分别1．28±0．29、0．80±0．07、0．65±0．13，均高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．01）；免疫组化阳性指数在3个时点分别为2．27±0．34、1．78±0．41、1．25±0．69，明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论PQ中毒大鼠肺组织PLGFmRNA和蛋白水平的表达明显上调。