光动力疗法对宫颈癌细胞株Hela细胞增殖凋亡及表达情况研究

目的探究光动力疗法对宫颈癌细胞株Hela增殖凋亡及其表达情况。方法采用噻唑蓝法分别检测光动力治疗宫颈腺癌Hela敏感细胞株和紫杉醇耐药株的杀伤效果,培养人宫颈腺癌Hela细胞株和Hela耐药细胞株,采用RT-PCR技术检测细胞株中耐药基因的表达情况并进行组间对比,免疫组化和WesternBlot技术检测人宫颈腺癌Hela细胞株和Hela耐药细胞株表达情况,采用光动力疗法杀伤两种宫颈癌细胞株,比较治疗效果。结果5-ALA的浓度为0mmol/L时,对细胞株Hela的增值情况无显影响(P=0.106);当不加激光照射且5-ALA的浓度<3mmol/L时,对细胞株Hela的浓度无影响(P=0.562);5-ALA浓度>3mmol/L对Hela细胞株的抑制率与药物的浓度成正相关关系,与对照组相比,差异有统计学意义(P=0.013)。对于同一激光能量组而言,当5-氨基-4-酮戊酸盐酸盐浓度在0.1~3mmol/L时,对细胞株增殖的抑制率随着药物浓度的增加而增加,且各浓度组之间的差异有统计学意义(P=0.035),当5-氨基-4-酮戊酸盐酸盐浓度在3~6mmol/L时,差异无统计学意义(P=0.148)。当5-氨基-4-酮戊酸盐酸盐浓度相同时,随着激光能量在1.0~15.0J/cm之间的增加,抑制率也逐渐提高,且两者差异有统计学意义(P=0.027)。但在15.0~25.0J/cm时,抑制率的上升程度不明显,差异无统计学意义(P=0.501),与对照组相比,Hela细胞株只进行激光照射或者只进行5-ALA得到的细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、继发坏死率与总凋亡率差异均无统计学意义(P=0.631)。在5-ALA浓度升高的同时,Hela细胞总凋亡率、晚期凋亡率与继发性坏死率均明显升高且差异有统计学意义(P=0.009)。结论光动力疗法可以显著抑制宫颈癌细胞株Hela细胞的增殖,且可以加速该细胞株的凋亡。     

奈达铂对宫颈癌Hela及Siha细胞的作用

目的:比较奈达铂(NDP)体外对人宫颈腺癌细胞Hela细胞及鳞癌细胞Siha的抑制作用并探讨其作用机制。方法:以2.5～40μg/ml NDP分别作用于Hela及Siha细胞24 h,48 h,72 h,MTT法检测抑制率,计算半数抑制浓度(IC50);利用流式细胞术(FCM)观察细胞凋亡率及周期变化;半定量PCR法分析基因半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3,Caspase 9)及基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达变化。结果:NDP对宫颈癌Hela细胞及Siha细胞均有抑制作用,呈时间-剂量依赖性,NDP对Hela细胞的抑制率大于Siha细胞;FCM显示,随时间、浓度增加,Hela及Siha细胞凋亡率增加,相同浓度和作用时间下,Hela细胞的凋亡率大于Siha细胞(P<0.05),S期细胞的比例增加,G0/G1期比例减少,G2/M期比例变化不明显;与对照组相比,Caspase 3,Caspase 9表达增加,MMP-2表达减少。结论:NDP可抑制宫颈腺癌细胞Hela及鳞癌细胞Si-ha的增殖,NDP体外对Hela细胞的抑制作用更强。NDP的作用机制与诱导细胞凋亡、细胞周期阻滞、上调Caspase3和Caspase9的表达有关;下调MMP-2的表达可能有利于降低宫颈癌细胞的侵袭力。     

宫颈癌组织中角质细胞生长因子受体的表达以及对宫颈癌Hela细胞增殖、迁移能力的影响

目的 探讨宫颈癌组织中角质细胞生长因子受体(KGFR)的表达以及对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭能力的影响。 方法 选取2017年1月－2018年4月郑州中心医院保存的宫颈癌组织标本52例(宫颈癌组),同时选取正常宫颈组40例作为对照组,采用免疫组化染色法检测KGFR表达;选取宫颈癌Hela细胞株,随机分为对照组、空白shRNA组和KGFR-shRNA组,其中空白shRNA组转染空白慢病毒载体,KGFR-shRNA组转染沉默KGFR表达的慢病毒载体,采用RT-PCR和Western blot检测Hela细胞KGFR mRNA和蛋白表达,CCK-8检测Hela细胞增殖情况,Transwell细胞迁移实验检测Hela细胞迁移能力。 结果 宫颈癌组KGFR阳性表达率为76.92%,明显高于对照组(χ²=54.438,P＜0.05);宫颈癌TNM分期Ⅲ期患者KGFR阳性表达率为100.00%,明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者(χ²_校正=5.183,P＜0.05);宫颈癌中低分化患者KGFR阳性表达率为91.89%,明显高于高分化患者(χ²_校正=13.399,P＜0.05);KGFR-shRNA组的KGFR mRNA和蛋白相对表达量分别为(0.354±0.065)和(0.603±0.122),明显低于对照组和空白shRNA组(P＜0.05);KGFR-shRNA组培养24、48、72 h细胞OD值明显低于对照组和空白shRNA组(P＜0.05);KGFR-shRNA组穿膜细胞数分别为(53.11±7.49)个,明显低于空白shRNA组和对照组(P＜0.05)。 结论 宫颈癌组织中KGFR表达上调,与患者临床病理特征有一定关系;KGFR表达沉默可抑制宫颈癌Hela细胞的增殖和迁移能力。     

儿黄散对Hela细胞病理形态学变化的影响

目的 探讨中药复方儿黄散对体外培养的人宫颈癌HeLa细胞形态学变化的影响.方法 体外培养人宫颈癌Hela细胞,采用HE染色法及透射电镜观察细胞凋亡的形态变化特点.结果 中药复方儿黄散(2.5mg/mL)能够抑制HeLa细胞增殖,随时间的增长,抑制效果明显,裂解细胞率最高为71%;观察细胞核脂滴明显增多,线粒体膜性结构破损、脊融合,细胞器内出现髓样小体.结论 中药复方儿黄散在体外对宫颈癌Hela细胞具有生长抑制作用,诱导其凋亡,使细胞形态发生明显的改变并具有时间的依赖性.     

ODDD调节HSV-TK/GCV对乏氧环境宫颈癌Hela细胞特异杀伤作用的研究

目的:构建一种由氧依赖降解结构域(oxygen dependent degradation domain,ODDD)调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)基因表达的真核表达载体,观察ODDD能否使HSV-TK/GCV(gancyclo-vir)系统对乏氧环境中的宫颈癌Hela细胞有特异杀伤作用。方法:RT-PCR从Hela细胞中钓取ODDD片段,将PCR产物克隆入荧光报告载体pEGFP-C1,获得质粒pEGFP-ODDD;PCR扩增HSV-TK基因,将其克隆到pEGFP-ODDD和pEGFP-C1的下游,获得重组质粒pEGFP-ODDD-TK及pEGFP-TK。荧光报告载体pEGFP-ODDD转染Hela细胞,24h后应用流式细胞术检测在乏氧(O2浓度为1%)和常氧(O2浓度为21%)环境下细胞中EGFP表达强度。将具有相同转染效率的pEGFP-ODDD-TK和pEGFP-TK的Hela细胞分别予以GCV处理,5天后用MTT法检测GCV对培养细胞的杀伤效果。结果:ODDD序列和HSV-TK序列与预期一致;含有ODDD片段荧光报告载体的Hela细胞在正常氧浓度下EGFP的表达量为11.96%,低于缺氧条件下39.92%;在乏氧环境下,转染pEGFP-ODDD-TK的Hela细胞对GCV的敏感性高于正常氧含量组(P<0.0),而转染pEGFP-TK的Hela细胞在常氧和乏氧环境下对GCV的敏感性差异无统计学意义(P>0.05)。结论:成功地构建了含有ODDD序列调控的HSV-TK真核表达载体,ODDD能特异发挥HSV-TK/GCV系统对乏氧环境Hela细胞的杀伤作用。     

小蘗碱诱导人宫颈癌Hela细胞株凋亡的作用

目的:探讨中药黄连素对子宫颈癌Hela细胞株的增殖抑制和诱导凋亡的作用。方法:以不同浓度的黄连素(10、20、40、80μmol/L),分12、24、48、72h四个时间点处理Hela细胞,光镜观察细胞形态变化;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率;用透射电子显微镜及琼脂糖凝胶电泳检测凋亡发生情况。结果:黄连素可抑制Hela细胞增殖,作用呈明显的时效和量效关系,差异有统计学意义(P<0.01);黄连素可诱导Hela细胞凋亡,透射电子显微镜下可见凋亡细胞;琼脂糖凝胶电泳出现细胞凋亡典型的DNA"梯状"条带。结论:黄连素体外对Hela细胞具有增殖抑制作用和促进凋亡作用。     

脉冲电场对宫颈癌Hela细胞黏附和侵袭能力影响的实验研究

目的:探讨脉冲电场对肿瘤细胞黏附侵袭能力的影响及其可能的作用机制.方法:分别将场强为0 V/cm、500 V/cm、1 000 V/cm和1 500 V/cm的脉冲电场作用于宫颈癌Hela细胞,采用基质胶黏附实验观察脉冲电场对Hela细胞黏附能力的影响;采用Transwell小室实验观察脉冲电场对Hela细胞侵袭能力的影响;采用免疫荧光法检测脉冲电场作用后Hela细胞中MMP-2、TIMP-2的表达情况.结果:经脉冲电场作用后,Hela细胞黏附能力下降,侵袭能力受到抑制,MMP-2的表达水平下调,TIMP-2的表达水平上调.结论:脉冲电场能抑制Hela细胞的黏附和侵袭能力,这种抑制作用可能与其下调MMP-2的表达水平和上调TIMP-2的表达水平有关.     

华蟾素联合丝裂霉素诱导人宫颈癌细胞株Hela细胞发生凋亡的实验研究

目的 探讨抗癌药物华蟾素与丝裂霉素的联合作用诱导Hela细胞发生凋亡的机制.方法 体外培养人宫颈癌Hela细胞,以不同浓度的华蟾素与丝裂霉素刺激Hela细胞,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞的增殖,凝胶电泳检测细胞DNA片段化,FITC-Annexin V检测细胞凋亡的发生,RT-PCR检测TNF-α的表达.结果 经药物作用后的细胞在倒置显微镜下观察,6 h后开始出现明显的凋亡现象;电泳结果呈200 bp大小的典型梯状带;FITC-Annexin V检测到凋亡早期细胞膜呈强绿色荧光,12 h后胞核逐渐被碘化丙啶染成红色,24 h后大部分细胞被染成红色;RT-PCR产物大小为299 bp.结论 华蟾素和丝裂霉素能使细胞生长受到明显的抑制,能诱导Hela细胞发生凋亡,能诱导DNA片段化和TNF-α的表达.     

FGFR4在宫颈癌细胞中的表达及临床意义

目的 通过体外实验研究FGFR4在宫颈癌细胞中的表达及其影响宫颈癌发生发展的作用机制。方法 应用实时定量PCR和蛋白质免疫印迹实验检测宫颈癌细胞中FGFR4的mRNA及蛋白表达水平;运用流式细胞术检测FGFR4对宫颈癌细胞周期的影响;CCK-8实验验证FGFR4对宫颈癌细胞增殖的影响;应用Transwell小室实验检测FGFR4对宫颈癌细胞侵袭迁移能力的影响;采用siRNA技术沉默FGFR4基因后观察细胞的耐药性变化,并进行分析。结果 体外实验结果表明,FGFR4在宫颈癌Hela细胞中表达升高(t=20.870,P<0.05),沉默FGFR4基因,宫颈癌Hela细胞生长增殖率降低(t=-13.830,P<0.05),凋亡细胞数增多(t=8.740,P<0.05),NF-κB信号通路蛋白NF-κB p65的表达水平明显降低(t=-5.443,P<0.05),迁移侵袭能力下降(t=-6.421,P<0.05);与单纯顺铂(DDP)组相比,FGFR4-siRNA+DDP组细胞凋亡数显著增加(t=10.220,P<0.05)。结论 FGFR4可能通过促进Hela细胞增殖、侵袭迁移、增强其对顺铂的耐药性以及抗细胞凋亡等途径参与宫颈癌的发生发展。     

本犀草素对宫颈癌HeIa细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用的实验研究

目的探讨木犀草素对宫颈癌Hela细胞的增殖及诱导凋亡的影响。方法将宫颈癌细胞株传代培养至对数生长期,分组加入不同浓度的本犀草素,并设置空白对照组。用MTT比色法观察木犀草素对体外培养的宫颈癌细胞生长的抑制作用,在光学显微镜下观察不同浓度的本犀草素对宫颈癌细胞的凋亡作用并计算凋亡率。结果MTT比色法测定显示,本犀草素作用于宫颈癌Hela细胞后可以抑制其增殖及诱导凋亡,且呈剂量依赖性。结论木犀草素能抑制体外培养的宫颈癌Hela细胞的增殖并诱导其凋亡。     

枸杞多糖对人宫颈癌细胞生长及细胞凋亡影响

目的观察枸杞多糖对体外培养的人宫颈癌Hela细胞生长及其细胞凋亡的影响。方法不同剂量的枸杞多糖作用于体外培养的宫颈癌Hela细胞，用苔盼蓝染色、四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法及流式细胞仪检测人宫颈癌Hela细胞存活率、抑制率及细胞凋亡等指标。结果枸杞多糖可明显抑制人宫颈癌Hela细胞的生长，抑制率司达96．85％，并呈剂量效应关系，细胞凋亡率可达36．8％。结论枸杞多糖对人宫颈癌Hela细胞生长具有抑制作用，其抑制机制可能是通过影响人宫颈癌细胞的生长周期和诱导其凋亡而实现。     

家蝇幼虫血淋巴纯化蛋白对Hela肿瘤细胞抑制作用的形态学观察

目的 研究家蝇幼虫血淋巴纯化蛋白(anticancer protein from Musca domestica larva hemolymph,MAC-1)对体外培养的人官颈癌Hela细胞抑制作用引起的形态学改变.方法 应用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法、光学显微镜、HE和吖啶橙(AO)染色、透射电镜(SEM)的方法检测MAC-1对体外培养的人宫颈癌Hela细胞的抑制作用及形态学改变.结果 MAC-1对人宫颈癌Hela细胞株的增殖抑制作用呈剂量依赖性,同时呈时间依赖性.MAC-1 12.5 μg/ml作用12h后在倒置显微镜、HE及AO染色和透射电镜均观察到典型细胞凋亡形态变化.结论 MAC-1对人宫颈癌Hela细胞株具有抑制增殖及诱导凋亡作用.     

大蒜素对子宫颈癌Hela细胞增殖的影响

目的:探讨大蒜素对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法:不同浓度的大蒜素作用于体外培养的Hela细胞,倒置显微镜下观察Hela细胞的形态学变化;采用MTT法检测大蒜素对Hela细胞增殖抑制能力,采用流式细胞术分析大蒜素对Hela细胞凋亡的影响。结果:MTT显示大蒜素能抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性;流式细胞术测定结果显示50μg/ml浓度的大蒜素可明显诱导Hela细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期。结论:大蒜素对人宫颈癌Hela细胞的生长有抑制作用,其抑制作用与诱导Hela细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。     

Caveolin-1过表达抑制宫颈鳞癌Hela细胞的体外生长研究

Objective To investigate the effects of caveolin-1 overexpressing on the growth of cervical squamous cell cancer Hela cell line. Methods Eukaryotic expression vector of human caveolin-1 gene was introduced into Hela cells by Lipofectamine. The clones stably overexpressed caveolin-1 were identiffed by RT-PCR, immunofluorescence cell staining techniques and Westernblotting. Cells proliferation viabihty was tested by MTT assay, and flow cytometry was used to assay the cell cycle and apoptosis, and the relative phosphorylation level of extracellular regulated protein kinases (Erk1/2) were detected by Westernblotting. Results The clones stably overexpressed caveolin-1 were obtained. Compared with the parental Hela cells, the tranfected cells exhibited a slower rate of growth. FAGS analysis results revealed that overexpression of caveolin-1 resulted in the cell cycle arrest in the G0/G1 [ ( 68. 04 ± 2. 57 ) % vs ( 53.41 ±1.01)%] phase and increased the apoptotic cell fraction[ (19. 18 ±2.20)% vs (5.63 ±0.55)%, P <0. 05 ]. Western blotting results showed that overexpression of caveolin-1 reduced the phosphorylation of Erk1/2(0.28 ±0.05 vs 0.81 ±0.07, P <0.05). Conclusions Overexpression of caveolin-1 suppressed the growth of Hela cells and induced apoptosis, down-regulation of Erk1/2 phosphorylation might be involved in its mechanism.     

顺铂诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡及其对细胞周期影响的研究

目的:观察顺铂对人宫颈癌Hela细胞凋亡及细胞周期的影响,以揭示顺铂治疗宫颈癌的机理。方法:运用体外细胞培养技术,以不同浓度的顺铂作用于培养的人Hela细胞72 h,用流式细胞仪分析其凋亡率及细胞周期。结果:顺铂能以浓度依赖的方式诱导Hela细胞凋亡,并呈现出G0/G1期阻滞作用。结论:顺铂能诱导Hela细胞凋亡并改变其细胞周期分布,阻滞Hela细胞于G0/G1期,这可能是顺铂抗宫颈癌作用的重要机制之一。     

Caveolin-1过表达抑制宫颈鳞癌Hela细胞的体外生长研究

目的 探讨转染caveolin-1基因对宫颈鳞状细胞癌Hela细胞株体外生长的影响.方法 用脂质体法把caveolin-1真核表达质粒导入Hela细胞内,筛选出稳定高表达caveolin-1的细胞克隆,并用RT-PCR、细胞免疫荧光和免疫印迹法鉴定.MMT法检测细胞的生长能力,流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡情况,免疫印迹法检测细胞外信号调节激酶（extracellular regulated protein kinases,Erk）1/2的磷酸化水平.结果 转染caveolin-1基因后,成功筛选得到稳定高表达caveolin-1的Hela细胞克隆,与未转染对照组相比,转染后的Hela细胞生长速度明显减慢（P〈0.05）,更多的细胞阻滞在G0/G1期[（68.04±2.57）%vs（53.41±1.01）%],凋亡细胞比例增高[（19.18±2.20）%vs（5.63±0.55）%,P〈0.05],Erk1/2相对磷酸化水平明显下降（0.28±0.05 vs 0.81±0.07,P〈0.05）.结论 caveolin-1基因能够抑制宫颈鳞癌Hela细胞株的生长、促进细胞凋亡;Erk1/2磷酸化水平下降可能在其抑癌机制中发挥重要作用.     

稳定表达GRIM-19的Hela细胞株的建立及其对STAT3的抑制作用

目的:建立Grim-19基因稳定表达的人子宫颈癌Hela细胞株,探讨Grim-19及其对下游基因STAT3表达的影响。方法:将构建好的质粒采用脂质体法转染人子宫颈癌Hela细胞株,经G418筛选,得到稳定表达Grim-19的Hela细胞株,并分别通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western-blot)检测Grim-19及其下游基因STAT3的表达。结果:成功建立了高表达GRIM-19的Hela/Grim-19细胞株,并在mRNA与蛋白水平上均发现Grim-19在转染细胞中的高表达和其下游基因STAT3表达的明显下调。结论:上调子宫颈癌Hela细胞Grim-19的表达对STAT3的表达有抑制作用。     

共轭亚油酸对人胃腺癌细胞的抑制作用

采用体外细胞培养方法，研究共轭亚油酸（ＣＬＡ）对人胃腺癌细胞（ＳＧＣ－７９０１）生长的影响。ＣＬＡ的剂量分别为２５、５０、１００和２００μｍ ｏｌ／Ｌ，以乙醇为溶剂对照。结果表明：ＣＬＡ 能抑制ＳＧＣ－７９０１细胞的增殖、细胞核分裂、集落形成和细胞ＤＮＡ的合成，并诱导ＳＧＣ－７９０１细胞的分化     

姜黄素对宫颈癌细胞系体外增殖的影响及机制研究

目的 探讨姜黄素对宫颈癌细胞系SiHa细胞体外增殖的影响及其对细胞周期的作用.方法 10～60μmol/L姜黄素分别处理SiHa细胞后,苔盼蓝染色和四甲基偶氮唑蓝法检测癌细胞的生长活性,流式细胞仪分析细胞周期各时相的变化.结果 不同浓度的姜黄素对宫颈癌细胞系SiHa细胞的增殖均有抑制作用,并呈剂量依赖性.药物处理后的细胞G1期的比例增加,S期减少,G2/M期细胞比例相对增多.与对照组比较,不同浓度姜黄素(10、20、40、60μmol/L)处理后,G2/M期比例分别为8.7%±2.1%、10.4%±1.3%、10.9%±2.2%、11.8%±1.4%.结论 姜黄素能抑制宫颈癌细胞的体外增殖,其机制可能与细胞周期阻滞有关.