高效液相色谱测定牛奶中黄曲霉毒素M1

黄曲霉毒素 (ａｆｌａｔｏｘｉｎ ,ＡＦＴ)是一类由真菌产生的二次毒性代谢产物 ,现已证实有数十种存在形式。由于黄曲霉毒素具有致癌、致畸及致基因突变等危害[1] ,尤其随着近年来国际贸易中非关税壁垒的广泛使用 ,世界各国包括我国在内纷纷制订了食品及牛奶中黄曲霉毒素的卫生限量标准加以控制 ,其中最低限量达 0 .0 5 μｇ/ｋｇ[2 ] 。黄曲霉毒素在牛奶及奶制品中 ,通常以Ｍ1的形式存在 ,ＡＦＴＭ1是ＡＦＴＢ1在生物体内的羟化产物 ,世界卫生组织 (ＷＨＯ)将ＡＦＴＭ1列为ⅡＢ类可疑致癌物。由于儿童和老人是牛奶消费的重要人群 ,因此加…     

免疫亲和柱-高效液相荧光检测牛奶和奶粉中的黄曲霉毒素M1

目的建立一种快速测定牛奶和奶粉中黄曲霉毒素M1(AFM1)的方法。方法样品经离心、过免疫亲和柱,以乙腈水为流动相,测定牛奶和奶粉中AFM1,荧光检测器定量。结果该法浓度在1⁵0μg/L范围内吸收度呈良好线性关系,相关系数为0.999 97;回收率牛奶为90.2%,奶粉为86.7%;最低检出限牛奶0.000 4μg/L、奶粉0.004μg/kg。结论该法快速、简便、准确、可靠,简化了现有国标法中的操作步骤,适合于牛奶和奶粉中AFM1的定量分析。     

液相色谱串联质谱测定面包中的甜蜜素

目的为精确检测面包中甜蜜素的含量。方法利用液相色谱串联质谱仪建立合适的质谱条件为,MRM负离子模式扫描,定量离子对为178.2/79.8,去簇电压在140V,碰撞能量为30V;液相色谱条件为,当选择inertsustain C18(2.1×100mm,3μm)的色谱柱,0.2m L/min的流速时,流动相为vo L 60%甲醇+vo L 40%的0.1%乙酸水。结果液相色谱串联质谱法检测标准曲线具有良好的线性关系,相关系数达到R2=0.999 7,加标回收率在96.987 6%~101.274 5%之间,与气相色谱法对比实验发现,比气相色谱法精密度更高,重复性更好,加标回收率更高,灵敏度增加,可以避免以后检测过程中因为仪器灵敏度的原因造成的假阴性。结论该处理方法简单,快速、高效、精确,适用于面包中甜蜜素的检测。     

固相萃取-高效液相色谱法测定乳制品中的黄曲霉毒素M1

目的建立一种简单方便的提取乳制品中黄曲霉毒素M1（AFM1）的方法。方法试样经过沉淀蛋白质、除去脂肪后,提取上清液过滤,经免疫亲和柱固相萃取后,用高效液相色谱仪测定AFM1。结果方法线性范围为0.1～1.0μg/L,回归方程y=9454.8x-628.2,相关系数r=0.99996,方法精密度（RSD）4.02%～5.71%,回收率为71.0%～80.5%,检出限0.003μg/kg。结论该法提取样品简单方便,检测速度快,回收率高,精密度良好。     

抗黄曲霉毒素M1的单克隆抗体细胞株的建立

本研究建立了抗黄曲霉素素ＡＦＭ１的单克隆抗体细胞株,用ＡＦＭ１－肟＝朱血清白蛋白（ＡＦＭ１－ｏｘｉｍｅ－ＢＳＡ）ＷＪＭ ＢＵ ＴＲ ＱＫＵＭ本研究建立     

农产品中黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2的超高效液相色谱-质谱联用检测分析

目的应用超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS/MS)技术,建立农产品中黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2的定量检测方法,并对市场中的农产品进行检测分析。方法样品粉碎后,经乙腈-水(84∶16,V/V)提取,不经免疫亲和柱净化,氮吹浓缩定容后过0.22μm滤膜。滤液经Agilent Poroshell120ec-C_(18)反向色谱柱分离,以0.1%甲酸水-甲醇作为流动相梯度洗脱分离4种黄曲霉毒素。质谱采用电喷雾离子化源(ESI),正离子模式扫描。结果 4种黄曲霉毒素在各自的定量范围内均呈良好的线性关系(r0.990),检出限为0.015μg/kg~0.095μg/kg(S/N=3),方法回收率为85.0%~90.6%,相对标准偏差为0.29%~7.20%。结论该方法简化了前处理操作,具有简便、快速、经济、灵敏、准确等优点,适用于多种农产品中黄曲霉毒素的检测。     

免疫亲和-荧光光度法快速测定乳脂及其制品中的黄曲霉毒素M1

本文研究应用荧光光度法测定高乳脂乳和乳制品中的黄曲霉毒素M1,方法 检测限为0．1μg／kg,相对标准偏差低于5％,回收率88％～93％。方法 简便快速、灵敏准确,能够满足进出口乳及乳制品中黄曲霉毒素M1的测定。     

乳与乳制品中黄曲霉毒素M1研究进展

黄曲霉毒素M1（Aflatoxin M1，AFM1）是动物摄入黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1）后在体内经羟基化形成的代谢产物。1963年Alleroft首先发现，直到1965年才命名为AFM1，它是一种强致癌物质，毒性仅次于AFB1，急性毒性与AFB1相似，WHO将其列为ⅡB类致癌物。AFM1主要存在于动物的乳、肾脏、肝脏、蛋、肉和尿中，其中以乳中最为常见。通常当动物摄入了AFB1污染的食物后，排出AFM1的量为AFB1摄入量的1％～3％。牛奶经过巴氏杀菌后，AFM1几乎不被破坏。本就当前乳与乳制品中AFM1的毒性、检测方法以及控制措施作一综述。     

抗黄曲霉毒素M1抗体制备及检测方法建立

目的制备针对黄曲霉毒素M1的单克隆抗体并建立针对黄曲霉毒素M1的间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法。方法利用B细胞杂交瘤技术。建立能分泌抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，制备抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体，建立间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法。结果研制出1株能特异性分泌抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为2F2。该单克隆抗体的Ig亚类为IgG1，亲和常数为2．8×10^-11mol／L。该抗体与黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2和黄曲霉毒素M2等结构类似物有微弱的交叉反应，具有较高的特异性。在此基础上建立了间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法。该方法的最低检出浓度为0．07ng／ml。校正曲线的线性范围为0．02～2ng／ml，线性方程y=-0．4364x＋0．2693（R^2=0．9949）。方法的加标回收率为72．5％～131．3％。结论制备了具有高特异性和亲和力的抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体，并建立了快速、灵敏的针对黄曲霉毒素M1的酶联免疫吸附试验检测方法。     

黄曲霉毒素M1的危害、污染现状及检测方法进展

本文针对黄曲霉毒素M1 的理化特性、危害、产生及防治进行了总结 ,详细介绍了黄曲霉毒素M1 的四类检测方法 ,并进行了比较 ,同时展望了检测方法的发展方向     

液相色谱-串联质谱法测定奶粉和液态奶中三聚氰酸

目的:建立奶粉和液态奶中三聚氰酸的液相色谱-串联质谱检测方法(LC-MS/MS)。方法:样品加水混匀后加乙腈超声波提取,经固相萃取柱净化,采用亲水作用色谱柱分离,在电喷雾负电离多反应监测模式下进行定性和内标法定量。结果:本法线性范围为0μg/kg～500μg/kg,定量限为200μg/kg,3个添加水平的平均回收率在92.1%～104.3%,精密度(RSD%)为3.22%～7.61%。结论:该法简便、快速、准确,适于奶粉和液态奶中三聚氰酸的检测。     

高效液相色谱法检测乳及乳制品中羟脯氨酸

目的:建立高效液相色谱法检测乳及乳制品中羟脯氨酸的方法。方法:乳制品中的胶原蛋白经过酸水解后生成包括羟脯氨酸在内的氨基酸混合物,用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯(AQC)试剂衍生后测定羟脯氨酸,以缓冲液-乙腈水溶液为流动相,经过C18柱分离,紫外248 nm检测,以顺式-L-羟脯氨酸为内标定量分析。结果:在2μg/ml～30μg/ml范围内呈良好线性关系,40μg/g、100μg/g和300μg/g三个水平添加平均回收率99.7%～120.5%,精密度RSD<5%,方法定量限为4μg/ml(液态奶),方法检测限为2.0μg/ml(液态奶)和10μg/ml(奶粉,乳酪)。结论:方法灵敏度高,准确度好,实用性强,可用于乳及乳制品中羟脯氨酸的检测。     

鲜乳及乳粉中L-羟脯氨酸的柱前衍生高效液相色谱测定法

目的建立柱前衍生反相高效液相色谱测定鲜乳及乳粉中L-羟脯氨酸方法。方法样品经酸水解,采用异硫氰酸苯酯(PITC)与水解液中的L-羟脯氨酸衍生,以C18柱分离,紫外检测器254 nm波长下检测。结果在2～10 mg/L范围内,L-羟脯氨酸质量浓度与峰面积具有良好的线性关系,样品加标平均回收率为95.0%～100.3%,方法精密度为0.4%～4.0%。鲜乳的检出限为2.0 mg/kg,乳粉的检出限为14 mg/kg。结论该方法易于操作、稳定、准确,适用于鲜乳及乳粉中L-羟脯氨酸检测。     

乳粉中维生素C的高效液相色谱法测定

目的:建立高效液相色谱法测定乳粉中维生素C的含量的分析方法。方法:样品用3%偏磷酸溶液提取,正己烷脱脂净化,用高效液相色谱仪(C18柱)分析,流动相为0.05 mol/L磷酸二氢钾(pH=2.5),流速1.0 ml/min,二极管阵列检测器紫外检测波长为240 nm,维生素C以光谱图和保留时间定性,外标法峰面积定量。结果:乳粉样品在5 mg/kg～100 mg/kg添加水平范围内,回收率在84.6%～108%之间,相对标准偏差3.96%～7.81%,方法的定量限为5 mg/kg。结论:该法实用、准确,适用于乳粉中维生素C检测。     

液相色谱-串联质谱法测定鸡肉中氯霉素残留

目的:建立鸡肉中氯霉素残留量检测的高效液相色谱-串联质谱法。方法:液相色谱条件:采用krom asil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相:甲醇+水(50+50),流速:0.8 m l/m in,柱温35℃,进样量10μl。质谱条件:电喷雾离子源,负离子模式,MRM模式扫描,以氘代氯霉素为内标定量。结果:氯霉素在0.05 ng/m l~2.0 ng/m l范围内线性关系良好(r=0.9999),方法检出限为0.1μg/kg,0.1μg/kg、0.2μg/kg、1.0μg/kg三个添加浓度检测结果平均回收率为90%~108%,批内RSD均小于10%(n=3)。结论:本操作简单,灵敏度高,可用于鸡肉中氯霉素残留的测定。     

大鼠血浆中阿托品的LC-M/SMS测定

目的:建立LC-MS/MS法测定大鼠血浆中的阿托品。方法:血浆样品经乙腈沉淀蛋白提取。采用C18色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸(60:40,v/v)为流动相,氯氮平为内标,采用电喷雾电离源(ESI),选择正离子多离子反应监测(MRM),质核比(m/z)为290.0→123.9(阿托品)和m/z 327.1→269.9(氯氮平)。结果:阿托品在5~1000 ng/ml浓度范围内线性关系良好。方法回收率大于97%,提取回收率大于85%,日内和日间RSD小于8%。结论:方法简便、快速、准确,可满足临床药动学研究的要求。     

基于超高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱联用法的牛奶质量控制和掺假鉴别

目的 建立基于超高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱联用结合模式识别分析法对牛奶进行质量控制和掺假物质鉴别。方法 样品经高速离心除脂肪,乙腈除蛋白后,取上清,经ACQUITY UPLCTM BEH C18柱分离,Q-TOF MS/MS检测,PCA和PLS-DA对所获数据进行分类分析。结果 牛奶和掺入不同物质的掺假牛奶在BPC图谱和PCA与PLS-DA得分图上可以有很好的区分,能准确筛检出差异物质或掺假物质。结论 UPLC/Q-TOF-MS/MS结合模式识别分析法可用于牛奶的质量控制和掺假鉴别。     

牛奶与奶粉中硫氰酸根的离子色谱法测定法中不同淋洗液体系测定的结果

目的比较碳酸盐体系和氢氧根体系离子色谱法测定牛奶与奶粉中硫氰酸根的方法参数。方法样品用乙腈沉淀蛋白,取上清稀释后,过OnGuard RP柱（2．5cc）去除脂肪,经离子色谱柱分离,电导检测器检测,以保留时间定性,外标法定量。结果碳酸盐体系离子色谱法检出限牛奶为0．25ms／ks,奶粉为1．0mg／ks,RSD％小于3．0％,回收率为80．O％-110．0％;氢氧根体系离子色谱法检出限牛奶为0．1mg／kg,奶粉为0．4mg／kg,RSD％小于2．0％,回收率为90．0％-108．8％。结论2种淋洗液体系离子色谱法均可作为牛奶和奶粉中硫氰酸根的检测方法,但氢氧根体系离子色谱法可得到更低的检出限。     

乳粉中蛋白质测定条件的改进

目的对乳粉中蛋白质测定条件进行改进,以便于实验的操作和控制。方法参照中华人民共和国国家标准《食品中蛋白质的测定》（GB／T5009．5—2003）对《婴幼儿配方食品和乳粉蛋白质的测定》（GB／T5413．1—1997）中的试样前处理和消化液的蒸馏2个重要步骤用同一乳粉进行蛋白质含量的测定比对。结果测定条件改进前后所测同一乳粉中蛋白质含量结果无差异性。结论改进后的测定条件在乳粉中蛋白质测定时容易操作和控制,不易导致测定实验失败。     

LC-M/SMS法测定人血清中西布曲明的浓度及其临床应用

目的:利用高效液相色谱-质谱联用仪(LC-MS/MS)建立血清中西布曲明的快速定性定量分析方法,为临床中毒患者的快速诊治提供依据。方法:选用Sh im-pack XR-ODS色谱柱,以乙腈-10 mmol.L-1醋酸铵为流动相,采用等度洗脱进行分离,流速:0.3 m l.m in-1;柱温:40℃;进样量:10μl。样品用乙腈进行蛋白沉淀后进样,选用3200型质谱仪的多重反应监测(MRM)扫描方式进行检测。结果:西布曲明的线性范围为0.1 ng.m l-1~1000 ng.m l-1,定量下限和最低检测限分别为0.5 ng.m l-1和0.05 ng.m l-1。日内精密度RSD为3.6%,日间精密度RSD为4.0%。结论:本研究所建立的方法快速、灵敏,重复性好,适用于西布曲明中毒患者血液标本的快速定性定量检测。