靶向HOXA9基因RNAi慢病毒载体增加人急性单核细胞白血病U937细胞的药物敏感性

目的:探讨慢病毒载体介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)沉默同源盒A9(homeobox A9,HOXA9)基因对人急性单核细胞白血病U937细胞药物敏感性的影响。方法:应用蛋白质印迹法从4条针对HOXA9基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体中筛选出1条敲减效率最高的包装成慢病毒HOXA9/GV118RNAi-LV#2。实验分成未感染对照组(control,CON)、阴性对照组(negative control,NC)及敲减组(knock down,KD)。HOXA9/GV118RNAi-LV#2感染U937细胞后,应用实时荧光定量PCR法检测HOXA9 mRNA的沉默效率,蛋白质印迹法检测HOXA9蛋白的表达,MTT法和FCM检测病毒感染前后U937细胞对长春新碱(vincristine,VCR)和柔红霉素(daunorubicin,DNR)的敏感性及细胞凋亡率变化,RT-PCR法检测DNR作用后各组细胞中MDR-1mRNA的表达。结果:KD组细胞中HOXA9mRNA的沉默效率在55%以上,HOXA9蛋白的表达量明显减少。VCR及DNR作用KD组细胞的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)值明显降低(P<0.01),药物敏感性明显增强;VCR和DNR作用后,KD组细胞的凋亡率明显增加(P<0.01);DNR作用后,KD组U937细胞中MDR-1mRNA的表达水平明显下调(P<0.01)。结论:靶向HOXA9基因的RNAi慢病毒可稳定沉默HOXA9基因的表达,在一定程度上提高U937细胞对化疗药物的敏感性。     

RNA干扰联合长春新碱对U937细胞体内外生长的影响

目的 从体外和体内两个方面探讨慢病毒载体介导小发卡shRNA(short harpin RNA,shRNA)靶向沉默同源盒A10(homeoboxA10,HOXA10)基因联合长春新碱（Vincristine,VCR）对U937细胞增殖和凋亡的影响。方法 将U937细胞分为干扰（KD）组、阴性对照（NC）组、空白对照（BC）组,经Western blot方法测定对HOXA10基因的沉默作用;MTT法检测各组细胞的IC50;流式细胞术（Flow cytometry,FCM）检测各组细胞的凋亡率;通过流式细胞仪分选出干扰组和阴性对照组绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein,GFP）阳性的细胞,建立裸鼠AML皮下移植瘤模型（细胞活力>90%）,计算干扰组的抑瘤率。结果 流式细胞仪测得慢病毒对U937细胞的感染率>90%,干扰组HOXA10的蛋白水平为较BC组下降89.78%。下调HOXA10的表达水平可降低VCR对U937细胞的半数抑制浓度（half-inhibitory concentration,IC₅₀）,提高VCR诱导的U937细胞凋亡率,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。体内实验：干扰组肿瘤组织增长受到抑制。结论 慢病毒载体介导的RNA干扰下调HOXA10的表达水平可在体外和体内增强U937细胞对VCR的敏感度。     

RNA干扰HOXA9基因对人类急性单核细胞白血病U937细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA（siRNA）沉默HOXA9基因对人类急性单核细胞白血病U937细胞株增殖、凋亡的影响。方法设计合成针对HOXA9的特异性siRNA寡核苷酸链,应用阳离子脂质体介导瞬时转染U937细胞。实验分为3组：实验组（脂质体转染靶向HOXA9的siRNA）、阴性对照组（脂质体转染阴性对照siRNA）和细胞对照组（仅加等量细胞及培养液）。利用反转录．聚合酶链反应法、Western blot法分别检测各组细胞HOXA9 mRNA、蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果转染靶向HOXA9的siRNA后,实验组、阴性对照组、细胞对照组mRNA相对表达水平分别为、（22.980±0．548）％、（82．371±1．517）％、（8d．637±2．252）％（P〈0．05）,蛋白相对表达水平分别为（50．377±2．773）％、（102．275±3．898）％、（107．510±3．905）％（P〈0．05）;siRNA转染后实验组U937细胞增殖明显受抑制且细胞凋亡率显著增高,24、48、72h增殖抑制率分别为（41．909±4．333）％、（54．470±3．756）％、（65．835±1．024）％,凋亡率为（26．800±2．081）％,与细胞对照组、阴性对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论靶向HOXA9的siRNA可有效沉默U937细胞HOXA9基因表达,明显抑制细胞的增殖并促进细胞凋亡,为临床白血病HOXA9基因靶向治疗提供了实验依据。     

Med19基因沉默对p53野生型和突变型乳腺癌细胞紫杉醇化疗疗效的影响

目的：探讨下调中介体（mediator,Med）19表达是否增加紫杉醇(pacliatxel, PTX)对p53野生型和突变型乳腺癌细胞化疗的疗效。方法：构建Med19RNA干扰（RNAi）慢病毒,分别感染p53野生型的乳腺癌细胞MCF-7和p53突变型的乳腺癌细胞MDA-MB-231,两种细胞均分为Med19基因敲减组（KD组：细胞感染pGcscil-Med19-siRNA-GFP ）、空载体感染组（NC 组：细胞感染pGcscil-Med19-NC-GFP）、对照组（CON组：未感染慢病毒的乳腺癌细胞）,荧光显微镜观察慢病毒感染效率。Western blotting检测Med19基因沉默后各组细胞内P53、磷酸化P53（pP53）、P21蛋白表达水平的变化。紫杉醇分别作用于Med19基因沉默前后的MCF-7和MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率的变化,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率的变化。结果：KD组和NC组细胞的荧光感染效率均大于90%,表明获得了满意的感染效率。与CON组和NC组相比,两种细胞KD组的Med19蛋白表达水平均下降,差异有统计学意义（均P<0.05）。MCF-7细胞KD组P53、pP53、P21蛋白表达上调,差异有统计意义（均P<0.05）。在0.01～50 μg/ml 范围内,紫杉醇抑制两种乳腺癌细胞的生长增殖并呈浓度依赖性（P<0.05）,对KD组的抑制率和细胞凋亡率均高于NC组及CON组,差异有统计学意义（均P<0.05）;但MDA-MB-231细胞各组间抑制率差异无统计学意义（均P>0.05）。10 μg/ml紫杉醇导致两种细胞的KD组和NC组均出现G2/M期阻滞,并且MCF-7细胞KD组G0/G1期细胞较NC组显著增加（P<0.05）。结论：Med19基因沉默增强紫杉醇对p53野生型乳腺癌MCF-7细胞化疗的疗效,其机制可能为增强了p53基因的表达活化,通过其下游基因p21 调节细胞周期、促进细胞凋亡。     

miR-203对Tca8113增殖能力影响观察

目的：探讨miR-203对人舌鳞癌细胞系Tea8113增殖能力的影响。方法：通过慢病毒转染技术构建miR-203过表达的舌鳞癌细胞模型。RT—PCR法检测miR-203过表达慢病毒转染前后miR-203的表达水平；MTT方法检测miR-203过表达（microup组）及阴性对照（NC组）2组细胞的增殖能力，连续检测5d，酶标仪检测A490值，绘制细胞增殖曲线；PI—FACS细胞周期检测miR-203过表达后对DNA合成和细胞周期的影响，取处于对数生长期的细胞，70％乙醇固定〉1h，细胞染色，流式细胞仪检测。结果：成功建立了miR-203过表达舌鳞癌细胞模型。定量PCR结果显示，Tca8113细胞中，microup组miR-203表达丰度是NC组的286．262倍，t=34．879，P=0．001。MTT检测结果表明，与Nc组相比，microup组细胞增殖能力明显降低；检测第4天microup组A490值为0．492±0．011，NC组为0．681±0．009，t=23．463，P〈0．001。PI-FACS细胞周期检测结果显示，microup组DNA合成前期（G1期）细胞所占百分率为（58．98±0．56）％，较NC组的（53．86±O．96）％明显增高，t=-7．989，P=0．001；而DNA合成期（S期）、合成后期（G。期）及有丝分裂期（M期）细胞所占百分率降低。结论：miR-203可能通过将细胞周期阻滞于G1期，从而抑制舌鳞癌细胞系Tca8113的细胞增殖能力。     

VEGF-C基因沉默对裸鼠移植乳腺癌淋巴管和血管生成影响的观察

目的:探讨血管内皮生长因子C(VEGF-C)基因沉默对裸鼠移植乳腺癌淋巴管和血管生成的影响.方法:构建VEGF-C小分子干扰RNA(VEGF-C/SiRNA)慢病毒载体,转染靶细胞MCF-7,Real-time PCR检测VEGF-C敲减效率,将其接种于裸小鼠背部皮下(KD组),并设置MCF-7细胞对照组(CON组)及空载体对照组(NC组),观察裸小鼠的成瘤情况,通过免疫组化检测VEGF-C表达、微血管密度(MVD)及微淋巴管密度(LVD).结果:VEGF-C/SiRNA转染MCF-7细胞后,与对照组相比,VEGF-C表达显著降低,敲减效率为49.2％,P=0.017.接种后各组细胞均能成瘤,KD组6只,NC组7只,CON组8只,成瘤情况差异无统计学意义,P=0.631.HE染色结果显示,KD组可见肿瘤细胞明显减少,出现较多凋亡和坏死细胞.免疫组化检测显示,CON组VEGF-C蛋白表达(+)1只,(++)1只,(+++)4只:NC组表达(++)1只,(+++)5只;KD组表达(+)5只,(++)1只,KD组移植瘤VEGF-C蛋白表达显著低于对照组,P=0.02.肿瘤组织内LVD计数,KD组5.33±1.63,CON组8.50士1.05,NC组8.17±1.83,KD组显著低于NC组和CON组,差异有统计学意义,P=0.005;MVD计数,KD组8.83±1.72,CON组11.02±1.41,NC组11.17±2.48,KD组MVD略低于CON组及NC组,但差异无统计学意义,P=0.097.结论:慢病毒介导的VEGF-C/siRNA可有效敲减VEGF-C表达,显著减少乳腺癌组织的淋巴管生成,但对血管生成无显著影响.     

CXCR4-PI3KⅢ-自噬轴与结肠癌LoVo细胞转移潜能相关性研究

目的：探讨调控CXCR4-PI3KⅢ-自噬轴对结直肠癌LoVo细胞迁移和侵袭能力的影响。方法：实验分为正常LoVo细胞组、介导CXCR4-RNAi慢病毒转染LoVo细胞组（CXCR4-RNAi组）和无意义慢病毒转染LoVo细胞组（NC组）。采用Q-PCR检测P13KBImRNA表达,蛋白质印迹法检测P13KⅢ、LC3Ⅱ及Beclin 1的表达,激光共聚焦显微镜观察绿色荧光颗粒,透射电镜观察自噬溶酶体,Transwell小室评价LoVo细胞迁移与侵袭能力。结果：P13K Ⅲ mRNA表达量正常LoVo细胞纽为1．09±0．11,Nc纽为1．07±0．25,CXCR4-RNAi组为0．86±0．06。P13KⅢ相对表达量CXCR4-RNAi组为0．227±0．023,低于正常LoVo细胞组的0．607±0．012（P〈0．001）和NC组的0．667±0．040（P〈0．001）,正常LoVo细胞组和Nc组差异无统计学意义,P=0．310。LC3—Ⅱ相对表达量CXCR4-RNAi组为0．083±0．012,低于正常LoVo细胞组的0．233±0．015（P〈0．001）和NC组的0．253±0．020（P〈0．001）,正常LoVo细胞组和Nc组差异无统计学意义,P=0．184。Beclin1相对表达量cXCR4-RNAi组为0．207±0．012,低于正常LoVo细胞组的0．440±0．053（P=0．134）和NC组的0．650±0．252,P=0．011。绿色荧光颗粒和自噬溶酶体数量正常LoVo细胞组和NC组明显多于CXCR4-RNAi组。CXCR4-RNAi组迁移实验细胞计数（87．7±9．1）低于正常LoVo细胞组的126．3±4．9（P=0．009）和NC组的115．0±18．7（P=0．035）。CXCR4-RNAi组侵袭实验细胞计数（88．7±10．5）低于正常LoVo细胞组的109．7±4．7（P=0．019）和NC组的107．7±8．1,P=0．029。结论：CXCR4-P13KⅢ-自噬轴可调控结肠癌LoVo细胞自噬状态,影响肿瘤细胞迁移和浸润,可能是恶性肿瘤浸润转移的机制之一。     

构建COX2基因慢病毒载体对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响#br#

目的 构建环氧化酶2（COX2）基因慢病毒表达载体并观察其对非小细胞肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响。方法 针对COX2基因的不同片段设计3对shRNA的寡核苷酸片段并克隆至慢病毒载体GV248中,构建并筛选最佳抑制效率的靶向COX2基因的慢病毒载体COX2 shRNA。选取对数生长期A549细胞进行慢病毒转染,其中靶向COX2基因的shRNA载体转染A549细胞为shRNA组,以空载体质粒转染作为阴性对照组（NC）及不转染质粒的A549细胞为空白对照组（CON）,采用实时荧光定量PCR和Western blotting测定COX2基因和蛋白的表达。分别采用MTT法和流式细胞仪检测干扰COX2表达对A549细胞增殖、凋亡能力的影响。结果 成功构建靶向COX2基因的慢病毒载体;稳定转染A549细胞后,COX2基因表达下降,其中以COX2 shRNA1干扰效率最为显著;shRNA组中shRNA1转染的A549细胞COX2 mRNA水平为0.17±0.06,低于NC组的081±011和CON组的109±0.07,差异有统计学意义（P＜0.05）。shRNA组细胞增殖活性低于NC组和CON组,shRNA组转染5 d的吸光值为0.976±0.016,低于NC组的1.557±0.015和CON组的1880±0034,差异有统计学意义（P＜0.05）。shRNA组细胞凋亡率为（6.28±0.31）％,高于NC组的（3.08±0.05）％和CON组的（3.01±0.31）％,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 成功构建靶向COX2基因的慢病毒表达载体,干扰COX2表达可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖并促进细胞凋亡。     

干扰Wrap53基因调控人骨肉瘤U20S细胞放射敏感性实验研究

目的：探讨干扰Wrap53基因表达对肿瘤细胞放射敏感性的作用及其分子机制。方法：构建针对Wrap53的干扰质粒;脂质体转染法转染至p53野生型（wtp53）的人骨肉瘤U20S细胞;RT-PCR和蛋白质印迹法检测Wrap53和wtp53基因的mRNA和蛋白表达;克隆形成实验测定放射敏感性参数;流式细胞术（flow cytometry,FCM）分析细胞周期变化。结果：Wrap53的特异性shRNA质粒转染U20S细胞后,细胞内Wrap53和wtp53的mRNA和蛋白表达水平均受到明显抑制;Wrap53基因干扰组U20S细胞的D0值为0．44±0．01,明显高于阴性对照组0．37±0．01,P=0．001,Wrap53基因干扰组SF2值为0．72士0．10,高于阴性对照组0．44±0．02,P=0．047;Wrap53干扰细胞在放射后16h（P=0．014）和24h（P=0．011）的Gz／M期阻滞更加明显,显著高于对照组;但Wrap53干扰细胞在放射后出现G,期阻滞减少,以放射后24h最为显著,P=0．001。结论：干扰Wrap53基因表达降低了U20S细胞的放射线敏感性,该作用可能与下调wtp53表达和诱导细胞放射后G2／M期阻滞有关。     

高强度超声对人类乳腺癌细胞内游离钙的影响及对细胞生长的抑制作用

目的探讨高强度超声（HIU）对人类乳腺癌细胞内游离钙浓度的影响及对细胞生长的抑制作用。方法用HIU（50W／cm^2）干预体外培养的人类乳腺癌细胞MCF-7及MDA—MB-231。用钙离子（Ca^2＋）荧光探针检测干预后细胞内Ca^2＋浓度,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测干预后细胞生长抑制率,流式细胞术分析细胞周期分布及凋亡率。结果HIU干预10、20、30S后,细胞内Ca^2＋浓度随干预时间的增加而升高,MCF-7细胞分别为（572±20．1）、（670±18．9）、（815±16．3）nmol／L（F=663．65,P〈0．001）,MDA—MB-231细胞分别为（582±16．3）、（687±19．7）、（843±14．8）nmol／L（F=863．06,P〈0．001）;周期向G0～G1分布,二种细胞G0～G1比例为分别为（60．5±5．5）％、（66．3±7．0）％、（74．5±8．2）％（F=8．17,P=0．002）和（58．5±6．3）％、（66．1±6．3）％、（71．2±7．9）％（F=7．51,P=0．003）;凋亡率逐渐上升,二种细胞凋亡率分别为（7．3±1．7）％、（13．2±3．5）％、（19．3±3．7）％（F=18．73,P〈0．001）和（6．3±1．8）％、（11．4±2．3）％、（16．4±3．3）％（F=19．26,t9〈0．001）;干预后细胞生长抑制率明显增加,二种细胞生长抑制率分别为（9．2±2．2）％、（243±3．9）％、（48．6±5．5）％（F=117．16,P〈0．001）和（9．0±1。7）％、（22．3±3．5）％、（41．6±6．4）％（F=71．25,P〈0．001）。结论HIU干预在一定作用时间内使细胞内Ca^2＋浓度升高,促使细胞周期向G0～G1转化,凋亡率及细胞死亡率明显上升.     

过表达FAF1基因慢病毒构建及对人胃癌细胞凋亡影响

目的：构建过表达FAs相关因子1（fas-associatedfactorl,FAF1）基因的慢病毒载体,探讨其对胃癌细胞凋亡的影响。方法：RT-PCR法扩增FAF1cDNA,亚克隆至GV218质粒中,经酶切及DNA测序鉴定正确以后,把含有FAF1基因的重组质粒与pHelper1．0和pHelper2．0载体质粒转染至293T细胞包装慢病毒。用包装好的慢病毒感染人胃癌细胞HGD27,RealtimePCR和蛋白质印迹法检测转染前后FAF1基因和蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡的改变。结果：FAF1基因扩增产物长度为1996bp,酶切及测序结果鉴定GV218-FAF1质粒构建正确,成功包装的慢病毒滴度为2×10^8TU／mL。HGC-27细胞转染FAF1过表达慢病毒48h后,细胞形态由长梭形变得不规则。过表达FAF1慢病毒转染组FAF1基因mRNA表达水平2．436±0．538,是阴性对照组1．086±0．226的2．24倍,P〈0．001;是空载转染组1．182±0．381的2．06倍,P〈0．001。过表达FAF1慢病毒转染组FAF1蛋白相对表达水平1.515±0．377,显著高于阴性对照组的0,P〈0．001;也显著高于空载转染组的0,P〈0．001。过表达FAF1慢病毒转染组凋亡率（84．66±5．92）％显著高于阴性对照组的（4．60±3．80）％,P〈0．001;也显著高于空载转染组的（7．32±3．82）％,P〈0．001。结论：成功构建并鉴定FAF1基因过表达慢病毒载体,FAF1基因表达上调使胃癌细胞凋亡增加。     

和厚朴酚对人急性白血病细胞株U937细胞增殖及凋亡的影响

 目的 探讨和厚朴酚在体外对人急性白血病细胞株U937细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测和厚朴酚对细胞增殖的影响,Annexin V/PI双染检测细胞凋亡,RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Caspase 3、Caspase 8 和 Caspase 9基因的表达。结果 5 μg/ml的和厚朴酚作用48 h对U937细胞增殖即可表现抑制作用,10 μg/ml的和厚朴酚作用48 h对细胞的增殖抑制率高达50%以上,作用120 h可完全抑制细胞增殖。经10 μg/ml和厚朴酚处理的U937细胞凋亡率达到26.8% (P＜0.01)。10 μg/ml的和厚朴酚处理U937细胞后48 h,Bcl-2基因表达降低（对照组：0.33±0.02,实验组：0.14±0.01,P＜0.01）,Bax基因表达升高（对照组：0.1±0.01,实验组：0.87±0.08,P＜0.01）。Caspase 3（对照组：0.48±0.01,实验组：0.87±0.06,P＜0.01）、Caspase 8（对照组：0.23±0.02,实验组：0.41±0.07,P＜0.01）和Caspase 9（对照组：0.44±0.05,实验组：0.76±0.06,P＜0.01）基因表达均升高。Caspase 3活性为0.325±0.089,较对照组有显著地升高(P＜0.01.结论 和厚朴酚能明显抑制人急性白血病细胞株U937细胞增殖并引起细胞凋亡。其机制在于上调凋亡促进基因Bax的表达,下调凋亡抑制基因Bcl 2的表达,并且内源性和外源性途径均参与了凋亡过程。     

沉默Bmi-1表达对人食管鳞癌细胞生长影响观察

目的：通过RNA干扰（RNAinterference,RNAi）抑制人食管鳞癌细胞Ecal09Bmi-1表达,探讨其对Ecal09细胞生物学特性的影响及可能机制。方法：通过对Bmi-1的小干扰RNA（siRNA）重组腺相关病毒（Bmi-1shRNA）转染Ecal09细胞,以转染空病毒（AAV—Null）的Ecal09细胞作阴性对照组,以未转染Ecal09细胞作空白对照组（PBS）,应用蛋白质印迹法分析,绘制细胞生长曲线、流式细胞检测、裸鼠成瘤实验和免疫组化分析等方法观察RNAi对Bmi-1基因的抑制情况及沉默Bmi1表达在体外及体内对Ecal09细胞增殖、侵袭、致瘤和凋亡的影响。结果：转染Bmi-1shRNA后蛋白质印迹法检测结果显示,Bmi-1shRNA组蛋白条带灰度扫描值为681．74±28．89,明显低于AAV—Null组的964．00±41．73（P=0．001）和空白对照组的1005．51±41．16,P=-0.001;AAV—Null组与空白对照组比较,差异无统计学意义,P=0．007。实验组细胞生长曲线较平缓,细胞生长速度较对照组（P=0．009）和空白对照组（P-0．031）明显降低。Ecal09细胞转染AAV—Bmi-1shRNA后,Bmi-1shRNA组增殖指数（proliferationindex,PI）为0．42±0．13,明显低于AAV-Null组的0．81±0．37（P=0．023）和空白对照组的0．91±0．25（P=0．006）,提示RNAi后细胞增殖活性明显降低。裸鼠成瘤实验提示转染Bmi-1shRNA后肿瘤生长减慢,Bmi-1shRNA组肿瘤质量（1．47±0．35）g明显低于AAV—Null组的（1．83±0．28）g（P=0．028）和空白对照组的（1．96±0．40）g,P=0．004;Bmi-1shRNA组细胞凋亡指数（16．9±5．31）％明显高于AAvlNull组的（9．57±3．84）％和空白对照组的（8．13±3．97）％,差异有统计学意义,P值均为0．001。结论：沉默Bmi-1表达能显著抑制Ecal09细胞生长,减慢肿瘤细胞的增殖,促进凋亡,抑制肿瘤生长。     

miR-122通过靶向RUNX2诱导胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的 探讨微小RNA122（miR-122）对神经胶质瘤细胞凋亡的影响及可能分子机制。方法 采用荧光定量PCR（QPCR）检测人正常星形胶质细胞系HA1800和胶质瘤细胞系U251、U87、SHG44、MO59K中miR-122的表达情况。双荧光素酶报告实验评价miR-122对RUNX2的靶向调控作用。向U251细胞转染miR-122 mimics（miR-122组）和阴性对照NC（NC组），流式细胞术检测细胞凋亡，Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3的表达。向U251细胞同时转染miR-122 mimics和siRUNX2（miR-122+siRUNX2组），流式细胞术检测细胞凋亡。结果 U251、U87、SHG44、MO59K细胞系中miR-122表达水平分别为0.34±0.052、0.65±0.061、0.59±0.071和0.69±0.098，显著低于正常星形胶质细胞系HA1800的1.17±0.173，差异具有统计学意义（P＜0.05）。miR-122可抑制野生型RUNX2 3’UTR报告基因载体的荧光素酶活性，而对突变型RUNX2 3’UTR-MUT的荧光素酶活性无影响。miR-122组U251细胞凋亡率为（23.77±0.83）％，高于NC组的（6.17±0.12）％，差异具有统计学意义（P＜0.05）；低于miR-122+siRUNX2组的（70.85±0.35）％（P＜0.05）。Western blotting检测结果显示，miR-122组RUNX2蛋白表达量为0.57±0.048，低于NC组的1.21±0.19（P＜0.05）。与NC组比较，miR-122组Bax（3.47±0.077）、 cleaved caspase-3（4.38±0.121）表达均明显上调，而Bcl-2（0.39±0.104）明显下调（P＜0.05）。结论 miR-122可以通过靶向RUNX2促进线粒体凋亡通路的激活，促进神经胶质瘤细胞凋亡。     

YC-1抑制人类白血病细胞株 U937、THP-1增殖作用的研究

 【摘要】　目的　探讨YC-1对人类白血病细胞株U937和THP-1增殖、凋亡、周期及Caspase-3、-8、-9蛋白表达的影响。方法　实验分为YC-1组（1.0、3.0、10.0 μmol／L）,以不加YC-1组为对照。四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）法检测细胞增殖;流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡及周期;Western blot检测Caspase-3、-8、-9蛋白表达的变化。结果　1.0、3.0、10.0 μmol／L YC-1以剂量依赖方式抑制U937、THP-1细胞增殖,24 h细胞存活率分别为（76.5±4.4）%、（68.7±6.8）%、（60.9±13.2）%,（94.1±1.4）%、（81.4±2.0）%、（72.7±3.0）%,与对照组的100 %比较差异均有统计学意义（F＝15.870、126.629,均P＜0.01）。U937、THP-1细胞经1.0、3.0、10.0 μmol／L YC-1作用24 h后,凋亡率分别为（40.7±1.0）%、（55.6±2.3）%、（71.8±1.5）%,（34.6±2.0）%、（50.3±3.5）%、（59.6±4.6）%,与对照组的（4.7±1.4）%、（1.8±1.0）%比较差异均有统计学意义（F＝937.229、200.447,均P＜0.01）,但细胞周期无明显变化。经1.0、3.0、10.0 μmol／L YC-1作用24 h后,U937细胞Cleaved Caspase-3、-8蛋白表达上调,Caspase-9无变化,THP-1细胞Cleaved Caspase-3蛋白表达上调,Caspase-8、-9无变化。结论　YC-1能够抑制U937、THP-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,但对周期无影响,其诱导白血病细胞凋亡的机制可能与Caspase蛋白活化有关。     

AEG-1表达下调对脑胶质瘤U373细胞的放射增敏效应

目的:探讨AEG-1基因表达下调对人脑胶质瘤细胞U373放射敏感性的影响。方法:以人MTDH/AEG-1（NM-178812）为靶标设计shRNA序列,慢病毒介导将AEG-1 shRNA转染至胶质瘤U373细胞中。荧光定量PCR及Western blot测定转染前后AEG-1 mRNA及蛋白的表达;克隆形成实验评估AEG-1基因下调后U373细胞放射敏感性;流式细胞术检测AEG-1下调后U373细胞凋亡及细胞周期分布。结果:通过慢病毒介导的shRNA转染,构建了AEG-1表达稳定下调的U373-shAEG-1细胞系,有效抑制了胶质瘤U373细胞中AEG-1的表达(抑制率84%,P<0.05),增加了凋亡细胞的比例（13.07%±0.28%,P<0.05）,并提高细胞周期中S期细胞比例（58.18％,P<0.01）,且AEG-1基因表达下调后U373细胞的D0值 （1.60Gy） 和Dq值 （1.06Gy）均明显低于空白对照组及阴性对照组细胞（P<0.05）。结论:下调AEG-1可以增强人脑胶质瘤U373细胞的放射敏感性,其机制与诱导细胞凋亡及干预细胞周期分布有关。