吉非替尼治疗前后肺腺癌患者血清蛋白质谱的变化

背景与目的 表皮细胞生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)治疗晚期NSCLC患者最终都会出现耐药.本研究目的 是检测耐药前后血清蛋白质谱的变化,探索可能用于预测TKI治疗后出现耐药的血清预测因子.方法 收集9例晚期NSCLC患者接受吉非替尼(gefitinib)治疗前后自身配对的血清样本20份,即入组口服吉非替尼前及临床评价为疾病进展前两周所采集的外周血血清.所有的患者对吉非替尼的最佳总疗效评价为疾病稳定或部分缓解.所有样本用弱阳离子微珠进行预分离后.在Bruker AutoflTM基质辅助激光解析离子化-时间飞行质谱仪(MALDI-TOF-MS)上进行血清蛋白质谱检测.以ClinProTools(Version:2.1)软件进行数据采集分析.结果 自身配对分析发现有7个血清蛋白质表达水平在肺癌患者耐药前后的血清中有统计学差异.该7个血清蛋白质谱峰为3 242.09、8 690.36、2 952.64、3 224.04、1 450.51、1 887.8及3 935.73(m/z).有3个血清蛋白(3 242.09、2 952.64及3 224.04)在耐药血清中下调,其余4个血清蛋白(8 690.36、1450.51、1 887.8及3 935.73)则出现上调.结论 特定的血清差异蛋白可能与吉非替尼治疗有效患者在治疗过程中出现耐药相关.这些差异蛋白的特性及其与吉非替尼治疗耐药的分子机制有待进一步研究.     

飞行时间质谱技术在乳腺癌诊断中的应用

 目的 采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术检测乳腺癌患者血清蛋白质指纹图谱，分析健康人与乳腺癌患者以及乳腺癌患者手术前后特异性标志蛋白变化，探讨血清蛋白质指纹图谱在乳腺癌疗效评价及复发监测中的临床意义。方法 用SELDI-TOF-MS技术检测30例乳腺癌患者（术前和术后第7天）及20名健康人的血清蛋白质指纹图谱，筛选乳腺癌特异性蛋白标志物，结合支持向量机软件建立诊断模型。比较乳腺癌手术前后特异性蛋白的变化。结果 与健康人血清蛋白质谱相比，术前乳腺癌血清中有3个差异蛋白，质荷比为2043、3938的标志分子低表达，质荷比为 5639的标志分子高表达。术后质荷比为2043、3938的标志分子稳定上调，质荷比为 5639的标志分子稳定下调，差异具有统计学意义。以筛选3个特异性蛋白质峰的数据构建的诊断模型经交叉验证，灵敏性和特异性均为100 %。结论 SELDI-TOF-MS检测血清蛋白质组学图谱在乳腺癌的早期诊断、术后病情转归及监测复发等方面具有一定的临床指导意义     

Her-2阳性与Her-2阴性人乳腺癌组织蛋白质组的差异表达

摘 要：［目的］ 通过蛋白质组学方法探讨Her-2阳性与Her-2阴性人乳腺癌组织蛋白质组的差异表达。［方法］ 采用顺序抽提的方法将细胞总蛋白分级为水溶性和疏水性两个组分,并应用双向电泳方法对其进行分离,以获取蛋白质的表达谱;通过软件分析,找出表达量存在显著差异的蛋白质点;再应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱与生物信息学相结合的方法对差异表达蛋白点进行分析鉴定。［结果］ 双向电泳图谱分析表明对水溶性蛋白质和疏水性蛋白都取得了很好的分离,并成功鉴定出7个差异表达蛋白,其中4个下调,3个上调。［结论］ 乳腺癌的发生发展与蛋白的表达改变有关,这些蛋白质参与信号传导、浸润转移及能量代谢等多个方面。     

胰腺癌胰液蛋白质组学分析

目的:利用比较蛋白质组学方法鏊定胰腺癌早期诊断的蛋白标志.方法:采用双向电泳(2-DE)分离比较9个胰腺导管腺癌患者和9个非胰腺癌患者的胰液蛋白质表达谱,用肤质量指纹图谱(PMF)为基础的基质辅助激光解析离子化飞行时间串联质谱(MALDF-TO-F-MS/MS)对差异蛋白进行鉴定.采用蛋白质印迹方法进一步验证蛋白质MMP-9和DJ-1在胰液中的表迭.结果:2-DE显示共24个蛋白质点出现>2.0倍的表达差异,上调14个,下调10个.蛋白质印迹检测显示在胰腺癌胰液中高表达MMP-9和DJ-1蛋白.结论:MMP-9和DJ-1可能成为通过内镜下逆行胰胆管造影术(ERCP)筛查胰腺癌高危患者及早期诊断胰腺癌的潜在的胰液肿瘤标志.     

TMT定量蛋白组学方法筛选乳腺癌腋窝淋巴结转移患者血清差异蛋白

目的:分析有腋窝淋巴结转移和无腋窝淋巴结转移的乳腺浸润性导管癌患者血清中的差异蛋白,筛选与乳腺癌转移相关的生物标志物和治疗靶点.方法:本研究采用定量蛋白质组学串联质谱标签(tandem mass tag,TMT)标记技术分别对14例有腋窝淋巴结转移及14例无腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者血清蛋白进行检测,并对蛋白质进行定量分析,筛选出发生显著变化的差异蛋白,再搜索Uniprot数据库和用Proteome Discoverer软件分析,进一步进行生物信息学分析.结果:有腋窝淋巴结转移组中共筛选出差异蛋白119个,其中6个表达上调,113个表达下调.基因本体(gene ontology,GO)注释分析和功能聚类分析表明,这些差异蛋白质主要定位于细胞外区,与肿瘤的生物合成、细胞增殖、血管生成相关.Western boltting和qRT-PCR验证了K1C19(下调0.11倍)和PSME2(上调2.02倍)的表达.结论:TMT定量蛋白组学方法能有效筛选有腋窝淋巴结转移的和无腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者血清中的差异蛋白.其中,K1C19和PSME2是值得进一步研究的乳腺癌淋巴结转移的候选血清标志物.     

应用MALDI-TOF-MS筛选紫杉醇耐药乳腺癌组织蛋白标志物

目的:应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）系统分析紫杉醇耐药MMTV-PyMT乳腺癌小鼠组织蛋白差异谱,筛选具有潜在诊断意义的组织蛋白标志物。方法:取8只雌性MMTV-PyMT转基因小鼠,10周龄时给予紫杉醇（10 mg/kg）治疗,每周给药2次,给药4周后处死。测量肿瘤体积,分别取肿瘤体积较小和较大的4只小鼠作为紫杉醇药物敏感组和非敏感组（耐药组）。采用免疫组织化学法（IHC）检测两组肿瘤组织增殖相关因子表达情况,细胞凋亡检测法（TUNEL）检测两组肿瘤中细胞凋亡情况,苏木精-伊红（HE）染色法观察两组肿瘤组织细胞损伤程度,蛋白质印迹法（Western blot）检测两组肿瘤组织凋亡相关蛋白的表达。采用MALDI-TOF-MS系统对两组组织中的蛋白或多肽表达谱进行检测,运用ClinProTools分析软件进行分析,筛选出12个差异分子峰,建立诊断预测模型。结果:相对于紫杉醇敏感乳腺癌组织,紫杉醇耐药组乳腺癌组织细胞增殖数目明显增加,细胞凋亡明显减少。耐药组凋亡蛋白BAX和Cleaved Caspase-3表达明显减少,肿瘤细胞无明显损伤。紫杉醇敏感与耐药乳腺癌组织,共筛选出12个差异明显的分子峰值,其中耐药组有9个上调,有3个下调,筛选出5个差异最大的分子峰建立紫杉醇耐药预测模型。结论:应用MALDI-TOF-MS系统可检测乳腺癌紫杉醇敏感组与耐药组肿瘤组织蛋白差异,筛选的差异组织蛋白可能成为诊断紫杉醇耐药乳腺癌的分子标志物。     

前列腺癌PC-3多西紫杉醇耐药细胞株的蛋白组学分析

  目的  比较前列腺癌PC-3细胞株对多西紫杉醇(docetaxel)耐药前后的蛋白质差异性表达, 了解前列腺癌PC-3细胞株耐药性产生机制。  方法  利用逐渐加量的方式培养前列腺癌PC-3多西紫杉醇耐药细胞株, 利用双向荧光差异凝胶电泳(DIGE)定量筛选PC-3细胞敏感株与耐药株的差异蛋白, 并用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF/TOF-MS)对差异位点蛋白进行成分鉴定。  结果  利用DIGE结合MALDI-TOF/TOF-MS质谱技术分析, PC-3细胞耐药株较敏感株成功分离出49种差异表达蛋白质, 29种表达上调, 20种表达下调。其中ATP synthase、Galectin-1等参与肿瘤血管的生成, Calreticulin、CathepsinD、Coflin-1蛋白参与肿瘤的转移; 78 kDa glucose-regulated protein(GRP78)、Microtubule-associated protein-6等参与肿瘤的耐药性调节。  结论  人前列腺癌PC-3细胞株多西紫杉醇耐药前后存在蛋白质的差异性表达, 为进一步发现前列腺癌转移及耐药性的分子机制以及晚期激素非依赖性前列腺癌的靶向药物治疗提供实验依据。      

采用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术筛选乳腺癌新辅助化疗敏感蛋白谱

目的应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF MS）技术检测乳腺癌新辅助化疗前后癌组织内蛋白质谱的变化,筛选乳腺癌新辅助化疗敏感性相关蛋白质。方法 60份样本来自2009年3月至2010年8月山东省千佛山医院乳腺外科收治的30例乳腺癌患者CEF新辅助化疗前后的乳腺癌组织。化疗前,行粗针穿刺获得乳腺癌组织;化疗后,在乳腺癌根治术中取样。应用SELDI-TOF MS技术检测乳腺癌组织的蛋白质谱,所得数据采用Biomarker wizard 3.0.2软件分析,得到差异蛋白谱,再采用SPSS17.0软件对数据进行Shapiro-Wilk正态性检验和配对设计t检验。根据差异蛋白质的质荷比,在SWISS-PROT数据库中检索与差异蛋白质相匹配的存在于乳腺组织或乳腺癌组织中的蛋白质。结果通过比较患者新辅助化疗前后的蛋白峰值,筛选出8个蛋白峰有差异的蛋白质,其质荷比（m/z）分别为5825.9、8949.5、11053.5、11652.0、17898.9、22250.6、26055.5、38546.6,化疗后这8个蛋白峰均高于化疗前（11.0±5.0比8.2±4.9、10.7±4.5比6.3±3.4、22.3±9.9比15.3±9.9、28.0±10.2比21.4±9.3、9.5±4.6比5.4±3.4、1.1±1.0比0.6±0.5、2.0±0.7比1.5±0.7及2.7±2.2比1.5±1.2,P值均〈0.05）。结论应用SELDI-TOF MS技术可以筛选出与乳腺癌新辅助化疗敏感性相关的蛋白质谱。     

乳腺癌新辅助化疗中MCM7和C—erbB-2的表达及其临床意义

目的：探讨乳腺癌新辅助化疗前后MCM7和C—erbB-2蛋白的表达状况,分析其与化疗疗效的关系。方法：采用免疫组化法检测55例乳腺癌新辅助化疗前后标本中MCM7和C—erbB-2的表达。结果：新辅助化疗有效率为76．4％。化疗前MCM7蛋白阳性表达显著高于化疗后（P〈0．01）,而化疗前后C—erbB-2蛋白阳性表达差异无显著性（P〉0．05）。化疗有效组（42例）MCM7蛋白阳性表达显著高于无效组（13例）（P〈0．01）,而化疗有效组C—erbB-2蛋白阳性表达显著低于无效组（P〈0．01）。结论：ET方案新辅助化疗有较好的疗效,可能通过抑制MCM7蛋白表达来阻止乳腺癌细胞的增殖。MCM7高表达,C—erbB-2阴性者化疗更为敏感,二者可作为临床指导乳腺癌化疗并预测化疗敏感性的分子生物学指标。     

应用iTRAQ多重化学标记串联质谱技术筛选晚期卵巢浆液性腺癌组织中卡铂耐药相关蛋白

目的 利用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ) 技术筛选晚期卵巢癌组织中卡铂耐药相关差异表达蛋白,为临床个体化治疗奠定实验基础。方法 收集Ⅲ期低分化卵巢浆液性腺癌标本并通过ATP-TCA药敏试验检测卡铂敏感度。取卡铂敏感和耐药标本各15例, iTRAQ试剂标记,被标记的肽段进行高效液相色谱（HPLC）分离及质谱检测（MS）。结果 共鉴定出iTRAQ标记定量信息有755个显著差异表达的蛋白。卡铂耐药组与卡铂敏感组相比,上调1.2倍以上的蛋白429个;下调0.83倍以下的蛋白326个。上调蛋白中有osteopontin（OPN）、clusterin（CLU）、5'-nucleotidase（CD73）和tissue inhititor of metalloproteinases 1（TIMP1）等18个蛋白与肿瘤恶性行为及化疗耐药相关。结论 应用iTRAQ技术能筛选出多种与晚期卵巢癌卡铂耐药相关的差异表达蛋白,该技术对于肿瘤组织蛋白质组学的研究有很好的应用前景。     

Effects of neoadjuvant chemotherapy on MDR1 and MRP gene expression in primary breast cancer

Objective: To investigate the effects of neoadjuvant chemotherapy on the expression of drug resistance genes, multidrug resistance-1 (MDR1) and multidrug resistance-associated protein (MRP), in patients with primary breast cancer. Methods: MDR1 and MRP expression were detected by semi-quantitative RT-PCR in 20 patients with primary breast cancer, before and after chemotherapy. Results: Before chemotherapy, MDR1 and MRP expression can be detected in 15 cases (75%) and 18 cases (90%) respectively. After chemotherapy, expression of MDR1 is not significantly different from that before chemotherapy, but expression of MRP is significantly different from that before chemotherapy. Conclusion: Expression of drug resistance gene MRP, but not MDR1, is enhanced in patients with primary breast cancer submitted to neoadjuvant chemotherapy.     

ER、PR、p53和Bcl-2的表达变化在乳腺癌新辅助化疗中的意义

目的：回顾性探讨乳腺癌组织中ER、PR、p53及Bcl-2表达变化在新辅助化疗（neoadjuvant chemo-therapy,NAC）中的意义,指导乳腺癌化疗的选择及判断预后。方法：术前采用空心针穿刺活检予以病理确诊并行ER、PR、p53及Bcl-2测定。化疗采用CEF方案[氟尿嘧啶（flurouracil,5-FU）500mg/m2,表柔比星（epirubicin,EPI）75mg/m2,环磷酰胺（cyclophosphamide,CTX）500mg/m2],经3个疗程化疗,再行乳腺癌改良根治术或保乳手术,免疫组化SP法检测98例Ⅱ/Ⅲ期乳腺癌病例在疗前后乳腺癌组织中ER、PR、p53及Bcl-2的表达,比较化疗前后上述各指标阳性表达率的变化。结果：98例Ⅱ/Ⅲ期乳腺癌患者经3个周期新辅助化疗后,70例（71.4%）获得临床部分缓解。化疗前后ER、PR阳性表达率均无显著变化（P〉0.05）;p53及Bcl-2化疗前后表达阳性率显著变化（P〈0.05）,化疗有效组中p53蛋白阳性表达率显著下降（P〈0.05）而Bcl-2阳性表达率显著上升（P〈0.05）。结论：ER、PR表达在新辅助化疗前后无显著差异,新辅助化疗可能通过抑制p53的表达来抑制乳腺癌的增殖并通过上调Bcl-2表达来调整肿瘤细胞分化。     

彩色多普勒超声评价乳腺癌新辅助化疗疗效的研究

目的：分析与新辅助化疗疗效相关的乳腺癌癌肿的声像图指标变化,与病理学检查结果进行比较,探讨彩色多普勒超声在乳腺癌新辅助化疗疗效评价上的应用价值。方法：利用彩色多普勒超声对接受新辅助化疗的43例乳腺癌患者的乳腺癌病灶变化进行观察,应用RECIST标准对乳腺癌新辅助化疗疗效进行评价,总结与新辅助化疗疗效相关的声像图指标。结果：本组43个病例通过临床触诊对新辅助化疗疗效进行评价,与病理学疗效评价符合率34.89%,敏感度59.09%;彩色多普勒超声检查评价乳腺癌病灶变化与病理学评价的符合率72.09%,敏感度86.36%,在病理判定有效组,新辅助化疗前后病灶内血流分级类型及RI值变化均具有显著性差异（P〈0.05）。在病理判定无变化组,新辅助化疗前后病灶内血流分级类型及RI值变化均不具有显著性差异（P〉0.05）。结论：彩色多普勒超声检查结合乳腺癌病灶的二维图像及血流信息,能对乳腺癌新辅助化疗后的疗效做出客观评价,具有一定的临床应用价值。     

血清HER2-ECD水平在乳腺癌新辅助化疗中的应用价值分析

背景与目的：人类表皮生长因子受体-2（human epidermal growth factor receptor-2,HER2）是一种原癌基因所表达的蛋白,HER2阳性往往预示着肿瘤进展快、容易发生淋巴结或血道转移,对新辅助化疗不敏感,预后不佳。本研究通过对乳腺癌患者血清HER2胞外段（extracellular domain,ECD）水平与患者临床新辅助化疗的反应性的比较,来评估血清HER2-ECD在新辅助化疗评估中的价值。方法：收集507例乳腺癌患者的治疗前血清样本,利用χ2检验比较血清HER2-ECD与患者年龄、分期、组织雌激素受体、孕激素受体、Ki-67及HER2的关系,对其中48例HER2表达阳性的行新辅助化疗的乳腺癌患者予以随访,单因素分析治疗前后血清HER2-ECD水平变化与新辅助化疗疗效之间的关系。结果：通过对507例患者血清HER2-ECD和临床病理特征的比较发现,在年龄>50岁、Ⅲ~Ⅳ期、组织雌激素受体（-）、孕激素受体（-）、Ki-67>20%及HER2（+）的患者中血清HER2-ECD阳性率较高。对48例组织HER2阳性的患者随访发现,血清HER2-ECD在治疗2个周期后即出现大幅下降,从18.10 ng/mL（13.20~28.95 ng/mL）降低到11.20 ng/mL（9.80~12.75 ng/mL）（P<0.01）。对48例患者进行疗效评估发现,新辅助化疗2个周期后血清HER2-ECD阴性的患者其客观缓解率（94.7%,36/38）显著高于治疗后血清HER2-ECD阳性的患者（60.0%,6/10）（P<0.05）。结论：乳腺癌患者血清HER2-ECD升高与其年龄、分期、组织雌激素受体、孕激素受体及Ki-67相关,且新辅助化疗2个周期后的血清HER2-ECD水平对新辅助化疗的疗效有一定的评估作用。     

乳腺癌新辅助化疗前后血清CA15—3水平变化及其与疗效的关系

目的：探讨局部进展期乳腺癌新辅助化疗前后血清CA15—3水平变化及其与疗效的关系。方法：2002年-2006年应用CEF（环磷酰胺＋表阿霉素＋氟尿嘧啶）方案对96例Ⅱb—Ⅲ期乳腺癌患者进行新辅助化疗。28天为1个周期，新辅助化疗2个周期后评价疗效。于治疗前1天及治疗2周期后采外周静脉血5ml，用电化学发光免疫法检测血清CA15—3水平。结果：新辅助化疗总有效率为47．9％（46／96），其中38例（39．6％）降低了临床分期，完全缓解7例，部分缓解39例，无疾病进展者。96例乳腺癌患者化疗前CA15—3阳性率为64．6％（62／96）。CA15—3阳性组和阴性组总有效率分别为45．2％（28／62）、52．9％（18／34），无显著性差异（P〉0．05）。化疗前血清CA15—3水平为45．8±6．3；化疗后为32．5±6．8，较化疗前显著下降（P〈0．05）。其中临床完全缓解和部分缓解患者血清CA15—3水平化疗后较化疗前均有一定程度下降（P〈0．05）；而病情稳定患者血清CA15—3水平较化疗前无显著下降（P〉0．05）。结论：新辅助化疗前后血清CA15—3水平变化与临床疗效有一定的相关性，动态监测血清CA15—3可预测疗效。     

乳腺癌新辅助化疗疗效及与激素受体相关性的临床观察

目的：了解乳腺癌新辅助化疗疗效、化疗对激素受体的影响及疗效与激素受体的相关性。方法：应用Elivision法测定53例乳腺癌化疗前后ER、PR的表达并比较差异;评估化疗后病理反应情况;分析ER、PR表达与化疗后病理完全缓解率（pathologic complete response,PCR）的相关性。结果：53例乳腺癌化疗后,病理缓解率为77.4%,病理完全缓解率为5.7%。ER、PR化疗前后表达发生完全相反的改变的分别是9（18%）、11（22%）例,差异无统计学意义。ER或PR的表达与化疗后的PCR率无相关性。结论：乳腺癌新辅助化疗后少数病例能达到PCR,且其不影响ER、PR的表达。ER或PR的表达不能预见化疗后的PCR率。     

卵巢癌患者血清中IGF1、IGF1R及AKT表达、血清CA125半衰期与耐药的关系

目的：检测IGF信号通路关键蛋白IGF1、IGF1R及AKT在顺铂耐药卵巢癌患者血清中的表达,检测血清CA125的动态变化,探讨与卵巢癌耐药患者预后的关系。方法：利用ATP-TCA法对40例卵巢癌标本进行药敏试验,其中16例对顺铂耐药,24例对顺铂敏感,ELISA法分别检测顺铂耐药和敏感组患者血清中IGF1、IGF1R及AKT的表达。采用微粒子捕捉免疫发光技术（MEIA）测定40例卵巢上皮癌患者治疗前、手术前及手术后7-14天、每疗程化疗后血清中CA125浓度,计算CA125半衰期,探讨与预后的关系。结果：IGF1、IGF1R及AKT在卵巢癌顺铂耐药组的表达显著高于敏感组（P值均为0.0001）,顺铂耐药患者CA125半衰期与敏感组患者相比有统计学意义。结论：IGF信号通路关键蛋白IGF1、IGF1R及AKT可能参与卵巢癌顺铂耐药,CA125半衰期联合IGF1、IGF1R及AKT检测可早期预测卵巢癌化疗耐药。     

乳腺癌患者中肿瘤异常糖链蛋白的表达情况及与新辅助化疗疗效的关系

目的探讨乳腺癌患者中肿瘤异常糖链蛋白(TAP)的表达情况及与新辅助化疗疗效的关系。方法选择80例行新辅助化疗的乳腺癌患者和80例乳腺良性肿瘤患者,分别作为观察组和对照组。检测并比较两组患者的血清TAP水平,分析化疗前不同临床特征乳腺癌患者的TAP水平以及不同临床疗效乳腺癌患者化疗前后的TAP水平。结果观察组患者化疗前的TAP水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.01)。化疗前,临床分期为Ⅲ期、有淋巴结转移乳腺癌患者的TAP水平分别明显高于临床分期为Ⅱ期、无淋巴结转移的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。化疗后部分缓解(PR)患者的TAP水平低于化疗前,疾病进展(PD)患者的TAP水平高于化疗前,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。化疗后,PR患者的TAP水平低于疾病稳定(SD)和PD患者,SD患者的TAP水平低于PD患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论乳腺癌患者的血清TAP水平较高,TAP水平可能与患者的临床特征有关,且可能在预测化疗疗效方面具有一定的价值。