多烯磷脂酰胆碱与奥沙利铂协同抗胃癌细胞增殖的研究

目的 探讨多烯磷脂酰胆碱联合奥沙利铂对胃癌细胞增殖的影响。方法 采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测多烯磷脂酰胆碱、奥沙利铂及两药联合对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;流式细胞术检测各组细胞周期分布及凋亡情况;Western blotting检测各组凋亡相关蛋白细胞色素c、Bcl-2、Bax、caspase-9、caspase-3和细胞周期调控蛋白细胞因子D1、细胞因子E的表达水平。结果 奥沙利铂显著抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,且呈剂量和时间依赖性（P＜0.05）;多烯磷脂酰胆碱促进胃癌SGC-7901细胞增殖,其作用呈剂量依赖性（P＜0.05）;两药联合表现为协同作用,与奥沙利铂单药组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。奥沙利铂使胃癌细胞增殖停滞在G0／G1期,并具有诱导胃癌细胞凋亡的作用;多烯磷脂酰胆碱可增强奥沙利铂诱导细胞凋亡及细胞周期停滞的作用,但这两种增强作用均与多烯磷脂酰胆碱的浓度无关（P＞0.05）。Western blotting检测结果显示,多烯磷脂酰胆碱联合奥沙利铂上调细胞色素c的水平并激活其下游蛋白Bcl-2、Bax、caspase-9、caspase-3,下调细胞因子D1、细胞因子E的表达水平。结论 多烯磷脂酰胆碱与奥沙利铂可抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖和诱导细胞凋亡,将细胞阻滞于G0／G1期,两药联合可能会产生协同抗肿瘤的作用。     

β-榄香烯增强奥沙利铂抑制人胃癌细胞的增殖及其机制

目的：探讨β-榄香烯联合奥沙利铂对人胃癌SGC7901细胞增殖的影响,并进一步探讨其机制。方法：MTT法检测细胞的药物敏感性,流式细胞术PI染色检测细胞凋亡,Western Blot检测蛋白表达,应用SPSS（13.0软件包）进行统计学分析。结果：奥沙利铂以剂量依赖的方式抑制SGC7901细胞增殖,24h的IC50为（28.29±3.67）mg/L;低毒剂量（5μg/ml）的β-榄香烯联合奥沙利铂组细胞IC50明显降低至（14.04±0.71）mg/L,且明显增强了奥沙利铂诱导的细胞凋亡（P〈0.05）;进一步检测了β-榄香烯作用后GST-π蛋白的表达情况,结果显示β-榄香烯以剂量依赖的方式下调GST-π蛋白表达。结论：β-榄香烯增强奥沙利铂抑制人胃癌细胞的细胞毒作用,其机制可能与降低GST-π蛋白的表达有关。     

奥沙利铂联合热疗抑制人大肠癌细胞LOVO体外增殖作用的研究

目的探讨奥沙利铂联合热疗体外抑制人大肠癌细胞增殖的效果，以确定联合方案是否具有协同效应。方法使用MTT法测定单独或联合应用奥沙利铂与热疗对人大肠癌LOVO细胞体外增殖的抑制作用，使用流式细胞仪检测不同方案对LOVO细胞凋亡率的影响。根据Veleriote法判断热化疗联合的作用效果；透射电镜观察细胞形态。结果与奥沙利铂化疗或单纯热疗相比，奥沙利铂与43℃热疗联合后对LOVO细胞增殖有显著的抑制作用（P〈0．01），24h时流式细胞仪检测LOVO细胞的凋亡情况发现，热疗组、化疗组和热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著升高（P〈0．01）。结论奥沙利铂与热疗联合对LOVO细胞的增殖抑制具有明显的协同作用，这可能与细胞凋亡的增多有关。     

地西他滨联合柔红霉素对HL-60细胞株凋亡作用的探讨

目的观察小剂量地西他滨（DAC）单用或联合柔红霉素（DNR）对白血病细胞株HL-60的凋亡作用及对抑癌基因PTENmRNA表达的影响。方法以不同浓度的DAC、DNR单药及联合处理HL．60细胞株,应用四甲基偶氮唑蓝（M1Tr）法、流式细胞术检测不同时相药物对细胞的凋亡作用;采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）技术检测不同浓度组中HL-60细胞PTENmRNA表达。结果DAC、DNR单药对HL-60细胞的生长抑制作用呈剂量、时间依赖性,联合用药组的抑制作用则更为明显[72h抑制率为（80．23±1．71）％,P〈0．001];5．0μmol／LDAC联合1．0μmol／LDNR作用72h细胞凋亡率最高,抑制作用均较DAC和DNR单药组明显（F=30．199,P〈0．001）;不同浓度DAC与DNR联用后,细胞PTENmRNA表达量增加,呈浓度依赖性,明显高于对照组及DNR单药组（F=578．218,P〈0．001）。结论DAC能显著抑制HL-60细胞的增殖并诱导其凋亡,与DNR联合对HL-60细胞增殖抑制作用有协同效应,其机制可能与DAC的去甲基化作用使PTENmRNA的表达量增加有关。     

SKI-Ⅱ联合顺铂对人胃癌裸鼠移植瘤抑制作用及其机制探讨

目的：研究鞘氨醇激酶-1（sphingosine kinase-1,SphKl）在胃癌裸鼠移植瘤血管生成中的作用及其作用机制。方法：建立人胃癌SGC7901裸鼠移植瘤模型后,将荷瘤小鼠随机分为4组,分别予以腹腔注射生理盐水、SKI-Ⅱ、顺铂和SKI-Ⅱ联合顺铂干预治疗,1次／周,共3周。每隔3d测1次肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率;蛋白质印迹法法检测瘤体中SphKl和VEGF的表达;免疫组化方法检测瘤体SphKl、VEGF和CD34的表达情况及计算瘤体内瘤体微血管密度（mierovessel densitv,MVD）。结果：与生理盐水组相比,3组治疗组均有抑制肿瘤生长作用,SKI-Ⅱ组和顺铂组抑瘤率分别为（48．694-1．39）％和（75．24±1．19）％;其中以SKI-1I联合顺铂组抑瘤作用最为明显,抑瘤率达（90．25±1．53）％,各组抑瘤率之间差异有统计学意义,F=1865,P〈0．001。免疫组化结果示,SKI- Ⅱ和SKI—Ⅱ联合顺铂组SphKl蛋白表达分别为（45．62±7．54）％和（20．50±5．96）％,VEGF蛋白表达分别为（45．38±7．82）％和（22．25±4．74）％,瘤体内的MVD为15．12±1．55和9．384-1．92,与对照组差异有统计学意义,P〈0．001。单用顺铂对SphKl表达（82．50±5．95）％）、VEGF的表达（83．25±4．40）％及瘤体内MVD（24．50±5．42）的影响差异无统计学意义,P〉0．05。Pearson相关分析显示,瘤体组织SphKl与VEGF的表达呈正相关,r=0．968,P〈0．001;瘤体组织MVD计数与VEGF表达呈正相关,r=0．862,P〈O．001。蛋白质印迹法检测结果示,SKI-Ⅱ及SKl-Ⅱ联合顺铂组可显著下调SphKl和VEGF的表达,P〈0．001,单用顺铂对SphKl和VEGF的表达差异无统计学意义,P值分别为0．083和0．165。结论：下调SphKl的表达后,可减少VEGF合成与分泌,并抑制肿瘤血管生成,可能是抑制裸鼠胃癌移植瘤生长的途径之一。     

多烯磷脂酰胆碱在裸鼠模型中逆转胃癌细胞奥沙利铂耐药的作用及机制研究

目的 探讨多烯磷脂酰胆碱(PPC)在裸鼠模型中对人胃腺癌耐奥沙利铂细胞株(SGC-7901/L-OHP)的逆转耐药的作用及其机制。方法 用继发性耐药细胞株SGC-7901/L-OHP建立裸鼠皮下移植瘤模型,并随机分为4组,空白对照组、多烯磷脂酰胆碱(PPC)组、奥沙利铂(L-OHP)组及奥沙利铂联合多烯磷脂酰胆碱(L-OHP+PPC)组,连续给药14天。21天后处死裸鼠,剥离肿瘤组织,记录肿瘤体积和抑瘤率,对切除的肿瘤组织分别提取肿瘤组织的RNA和蛋白,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot检测TLR4、Nanog及ABCF2表达水平。结果 加药处理后,与空白对照组相比,L-OHP组及L-OHP+PPC组移植瘤细胞的增殖均受到抑制(P＜0.001),两药联合有交互作用(P=0.008);L-OHP+PPC组的体积抑瘤率高于空白对照组(P＜0.001)及L-OHP组(P＜0.001)。L-OHP+PPC组TLR4/Nanog/ABCF2的mRNA表达较空白对照组低,差异有统计学意义(TLR4:P＜0.001;Nanog:P＜0.001;ABCF2:P＜0.001);L-OHP+PPC组TLR4/Nanog/ABCF2的mRNA表达较L-OHP组低,差异有统计学意义(TLR4:P＜0.001;Nanog:P＜0.001;ABCF2:P＜0.001)。两药联合对TLR4/Nanog/ABCF2的mRNA表达均有交互作用,差异有统计学意义(TLR4:P＜0.001;Nanog:P＜0.001;ABCF2:P＜0.001)。L-OHP+PPC组TLR4/Nanog/ABCF2的蛋白表达较空白对照组低,差异有统计学意义(TLR4:P=0.006;Nanog:P=0.017;ABCF2:P=0.014);L-OHP+PPC组TLR4/Nanog/ABCF2的蛋白表达较L-OHP组低,差异有统计学意义(TLR4:P＜0.001;Nanog:P＜0.001;ABCF2:P＜0.001)。两药联合对TLR4/Nanog/ABCF2的蛋白表达均有交互作用,差异有统计学意义(TLR4:P=0.014;Nanog:P=0.01;ABCF2:P=0.015)。结论 多烯磷脂酰胆碱在裸鼠模型中对人胃癌耐奥沙利铂细胞株(SGC-7901/L-OHP)有逆转耐药的作用,可能通过影响TLR4、Nanog、ABCF2表达逆转人胃癌耐药细胞的耐药作用。     

Ad-hTERTp-单纯疱疹病毒胸苷激酶／丙氧鸟苷系统联合奥沙利铂对人类肝癌细胞的影响

目的研究腺病毒介导的Ad—hTERTp一单纯疱疹病毒胸苷激酶／丙氧鸟苷（Ad-hTERTp—HSV—TK／GCV）自杀基因系统联合奥沙利铂对人类肝癌细胞HepG2的体外杀伤作用。方法将带有hTERT启动子驱动HSV—TK基因的重组复制缺陷型腺病毒Ad-hTERTp-HSV-TK作为载体。感染复数（MOI）为100转染HepG2细胞,观察不同浓度的Ad-hTERTp—HSV-TK／GCV、奥沙利铂及二者联合对HepG2细胞生长的影响。用锥虫蓝活细胞拒染法、四甲基偶氮唑盐比色（MTF）法检测各干预组肝癌细胞生长的抑制率。结果3组HepG2细胞的生长均不同程度被抑制,且随药物浓度的增加抑制作用显著增强。Ad—hTERTp—HSV。TK／GCV联合奥沙利铂组抑制率最高（86．63％）,与Ad—hTERTp—HSV．TK／GCV组抑制率（72．12％）及奥沙利铂组抑制率（59．41％）相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论Ad—hTRTq：Tp—HSV—TK／GCV联合奥沙利铂可显著增强对HepG2细胞的杀伤作用,增加靶向性的同时可以降低药物浓度,对临床用药有指导意义。     

Wnt／β-catenin信号转导通路与肺腺癌顺铂耐药作用机制研究

目的：探讨Wnt／β-catenin信号转导通路在肺腺癌顺铂耐药中的分子作用机制。方法：体外常规培养人肺腺癌A549细胞和其顺铂耐药A549／DDP细胞,取对数生长期的细胞用于实验。采用MTT法检测A549和A549／DDP细胞对顺铂的IC50;采用AnnexinV／PI法和Hoechst33342染色法检测顺铂处理后2种细胞的凋亡率;采用蛋白质印迹法检测2种细胞中β-catenin和Survivin的表达;采用siRNA干扰沉默pcatenin的表达,检测A549／DDP细胞的Ic5。值、细胞凋亡率及β-catenin和Survivin的表达。结果：顺铂对A549／DDP细胞的IC50值为（28．984±1．404）μmol／L高于A549细胞的（5．888±0．338）umol／L,t=27．696,P〈0．001;20umol／L顺铂诱导A549／DDP细胞凋亡率为（21．75±0．96）％,显著低于A549细胞的（39．38±0．88）％,t=23．474,P〈0．001。A549／DDP细胞中β-catenin蛋白的表达为1．890±0．060,显著高于A549细胞的1．063±0．035,t=20．595,P〈0．001;在A549／DDP细胞中Survivin蛋白表达量为1．107士0．061,明显高于A549细胞的0．503±0．025,t=15．814,P〈0．001。RNAi技术沉默β-catenin蛋白耐药性（14．615±0．939）gmol／L,显著低于未沉默β-cateninA549／DDP细胞的（28．984±1．404）μmol／L,t=14．732,P〈0．001;RNAi技术沉默pcatenin蛋白细胞凋亡率为（37．57±0．64）％,显著高于未沉默β-cateninA549／DDP细胞的（21．75±0．96）％,t=23．699,P〈0．001;RNAi技术沉默伊catenin蛋白下游靶基因Survivin蛋白的表达为0．527±0．065,显著低于A549／DDP组的1．027±0．025和瞬时转染阴性对照siRNA组的1．033±0．040,F=116．944,P〈0．001。结论：抑制Wnt／β-catenin信号转导通路的活性可以降低A549／DDP细胞对顺铂的耐药性。     

131I-EGF显像对肺癌荷瘤裸鼠化疗疗效的评价

目的探讨131I-EGF动态显像技术对肺癌倚瘤裸鼠化疗疗效的评价。方法将肺癌细胞株A549种植到BALB／cA—nil裸鼠体内,待移植瘤长至直径0．8～1．2cm时,随机分为4组：空白对照组、实验组（紫杉醇组、顺铂组和联合化疗组）。空白对照组腹腔注射0．1ml生理盐水;紫杉醇组腹腔注射紫杉醇5mg／kg;顺铂组腹腔注射ill@34rag／kg;联合化疗组腹腔注射紫杉醇5mg／kg和顺铂4mg／kg。裸鼠化疗后分别丁即刻和第7、14、21及28犬注射131I-EGF0．5h后开始显像,勾画感兴趣区（ROI）,计算肿瘤／健侧对应部位放射性（T／NT）比值,并测量肿瘤体积。第28天完成显像后,处死裸鼠,测量肿瘤／血液及肿瘤／肌肉放射性比值,计算抑瘤率和131I-EGF的生物学分布。结果肿瘤组织吸收131I-EGF较多,肿瘤／肌肉放射性比值对照组为5．65,高于联合化疗组（1．55,t=9．829,P〈0．01）、紫杉醇组（1．14,t=12．636,P〈0．01）和顺铂组（0．99,t=12．313,P〈0．01）。肿瘤／血液放射性比值对照组为3．15,高于联合化疗组（0．76,t=3．384,P〈0．05）、紫杉醇组（1．22,t=2．826,P〈0．05）和顺铂组（1．22,t=2．713,P〈0．05）。131I-EGF可使肿瘤组织清晰显像,联合化疗组肿瘤体积401．9mm3,与对照组（1134．2mm3）差异有统计学意义（t=9．393,P〈0．01）;紫杉醇组肿瘤体积634．73mm3（t=7．140,P〈0．01）,顺铂组肿瘤体积700．7mm3（t=6．820,P〈O．01）,这2组与对照组差异有统计学意义。各化疗组与对照组间T／NT比值差异有统计学意义（F=1011．251,P〈0．01）。结论化疗效果好的肿瘤,131I-EGF显像示肿瘤体积较小,瘤体内放射性分布较少;而化疗效果差的肿瘤体积逐渐增大,瘤体内放射性分布较多。131I-EGF显像可用于指导倚瘤裸鼠的化疗。     

PRDX1抑制蛋白酶体抑制剂诱导人甲状腺癌细胞凋亡机制探讨

目的：初步探讨过氧化还原蛋白1（peroxirodoxin1,PRDX1）抑制蛋白酶体抑制剂诱导人甲状腺癌细胞凋亡的机制。方法：选取人甲状腺癌细胞,设立随机序列核酸siRNA、siASK1、siPRDX1和siASK1＋siPRDX1组,分别用培养液、lactacystin和MG132培养细胞;用蛋白印迹法检测PRDX1、ASK1、p38、JNK1／2、p-ASK1、p-P38和p-JNK1／2在各组甲状腺癌细胞中的表达;用微小RNA干扰技术转染细胞;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：MG132处理组中,p-ASK1是对照组的1．5倍（F=214．14,P〈0．001）,其下游效应子p-p38和p-JNK1／2分别为对照组的1．34（F=216．75,P〈0．001）和1．94倍（F=1601．68,P〈0．001）;siASK1下调MG132介导的p-ASK1为随机序列组的0．58倍（F=1136．82,P〈O．001）,p-p38为随机序列组的0．73倍（F=507．00,P〈0．001）,p-JNK1／2为随机序列组的0．51倍（F=6087．48,P〈0．001）。甲状腺癌细胞凋亡率降低为34．25％,显著低于于随机序列组的51.98％,F=18．39,P=0．013。MG132处理组中,siPRDX1组甲状腺癌细胞凋亡率为68．99％显著高于随机序列组的49．58％和siPRDX1＋siASK1联合组的41．28％,而siASK1组的甲状腺癌细胞凋亡率为31．85％,显著低于上述两组,组间差异有统计学意义,F=30-13,P〈0．001。结论：PRDX1通过负向调节ASK1活性及ASK1-p38和ASK1-JNK通路,抑制ASK1介导的细胞凋亡进而消减MG132对甲状腺癌细胞毒性效应。     

雷帕霉素联合紫杉醇对SGC-7901增殖影响的研究

目的：研究雷帕霉素联合紫杉醇对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。方法：MTT法检测经雷帕霉素、紫杉醇和雷帕霉素＋紫杉醇作用后人胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测缺氧诱导因子-la（hypoxia-inducible{actor-1alpha,HIF-1α）及血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）蛋白表达,两因素析因设计方差分析法进行统计分析。结果：雷帕霉素、紫杉醇及雷帕霉素联合紫杉醇处理SGC-7901细胞后细胞增殖抑制率分别为（25．43±1．98）％、（27．28±3．34）％和（53．64±1．99）％,雷帕霉素或紫杉醇单独作用均可抑制细胞增殖,联合作用对细胞增殖抑制率影响极显著,F-57．471,P〈0．001;两药联合指数〉1．15,雷帕霉素和紫杉醇具有协同作用。雷帕霉素、紫杉醇及雷帕霉素联合紫杉醇处理SGC-7901细胞后细胞凋亡率分别为（16．25±1．86）％、（21．80±3．12）％和（38．60±3．78）％,雷帕霉素或紫杉醇单独作用均可诱导细胞凋亡,两药联用细胞凋亡率显著增加,P=O．0163;雷帕霉素和紫杉醇具有协同诱导SGC-7901细胞凋亡作用。紫杉醇处理细胞后,HIF-1α及VEGF蛋白相对表达量分别为0．598±0．089和0．4204±0．091,VEGF蛋白表达下降,P=0．001;而HIF_1a蛋白表达无明显变化,P=0．434。雷帕霉素处理细胞后,HIF-1d及VEGF蛋白相对表达量分别为0．416±0．034和0．376土0．022,表达均显著下降,P值分别为0．016和0．001;而两药联合处理细胞后,HIF-1α及VEGF蛋白相对表达分别为0．209±0．027和0．156±0．015,均显著降低,F值分别为18．322和25．525,P值均为0．001。2种药物对SGC-7901细胞HIF-1aTYcVEGF蛋白表达抑制起到了显著的协同作用。结论：雷帕霉素联合紫杉醇可显著抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,诱导凋亡,2种药物具有协同抗肿瘤作用。     

甲基莲心碱对长春新碱抑制人胃癌细胞增殖作用的影响

目的：观察甲基莲心碱（Nef）在体外对长春新碱抑制人胃癌细胞增殖及诱导人胃癌细胞凋亡的影响。方法：采用MTT比色法、软琼脂克隆形成法检测药物的细胞毒性作用,并用流式细胞术、AO/EB荧光双染色法测定Nef对长春新碱诱导人胃癌细胞凋亡的影响。结果：2.5、5、10μmol/LNef能增强长春新碱对人胃癌细胞（SGC7901）增殖的抑制作用;10μmol/LNef能增强长春新碱（0.1、0.5、2、4μg/ml）诱导SGC7901细胞凋亡。结论：甲基莲心碱能增强长春新碱抑制人胃癌细胞增殖及诱导人胃癌细胞凋亡,为一种低毒高效的化疗增敏剂。     

白藜芦醇逆转胃癌细胞对阿帕替尼耐药性的实验研究

目的 探讨白藜芦醇（RES）在胃癌细胞对阿帕替尼耐药性中的影响及可能机制。方法 体外培养胃癌SGC7901细胞和SGC7901／AR耐药细胞,MTT法和划痕实验检测单药不同浓度阿帕替尼或联合RES对SGC7901和SGC7901／AR细胞增殖和迁移的影响,分别计算SGC7901和SGC7901／AR细胞耐药指数、RES的逆转倍数（RF）和相对逆转率（RRR）。采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测上述处理细胞株中miR-122、p-VEGFR2、p-Akt mRNA表达。结果 阿帕替尼显著抑制SGC7901细胞的增殖和迁移能力,并呈浓度依赖性（P＜0.05）,但对SGC7901／AR细胞无影响,耐药指数为15.57;阿帕替尼联合50.0 μmol／L RES可显著抑制SGC7901和SGC7901／AR细胞的增殖和迁移能力,并呈浓度依赖性（P＜0.05）,耐药指数为2.13,RES的逆转倍数为7.91倍,相对逆转率为93.4％。未经处理SGC7901细胞中miR-122、p-VEGFR和p-Akt mRNA表达水平分别为0.74±0.11、0.76±0.13和0.67±0.09,显著高于SGC7901／AR细胞（P＜0.05）;经10 μmol／L阿帕替尼作用后,SGC7901细胞中p-VEGFR2和p-Akt mRNA表达水平显著下降（P＜0.05）。经10 μmol／L阿帕替尼+50.0 μmol／L RES处理后,SGC7901和SGC7901／AR细胞中miR-122表达显著升高（P＜0.05）,而p-VEGFR2和p-AktmRNA表达水平显著降低（P＜0.05）。结论 RES能逆转胃癌细胞株对阿帕替尼的耐药性,其机制可能通过上调miR-122并抑制VEGFR2和Akt磷酸化水平来实现。     

甲基莲心碱对耐长春新碱人胃癌细胞多药耐药性逆转机制的初步研究

目的探讨新的钙阻断剂甲基莲心碱(Nef)对耐长春新碱人胃癌细胞多药耐药性(MDR)的逆转作用及其机制。方法采用MTT比色法,检测药物的细胞毒作用;应用免疫细胞化学SP法及流式细胞术,检测Nef对人胃癌细胞Bcl-2蛋白表达的影响。结果 10μmol/L Nef对SGC7901及SGC7901/VCR无显著细胞毒作用;2.5、5、10μmol/L Nef能使VCR对SGC7901/VCR细胞的IC50从2.32μg/ml依次下降至0.340、0.128、0.053μg/ml,逆转倍数分别为6.8、18.1、43.8。当Nef浓度为10μmol/L时,逆转SGC7901/VCR多药耐药活性较VRP高(P<0.01);SGC7901/VCR细胞中Bcl-2蛋白表达水平较SGC7901细胞高,经Nef处理后,SGC7901/VCR细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显下降,表明Nef能下调SGC7901/VCR细胞中Bcl-2蛋白表达水平。结论甲基莲心碱在体外能逆转耐长春新碱人胃癌细胞(SGC7901/VCR)的多药耐药性,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达水平有关。     

MicroRNA let - 7f 对胃癌细胞株 SGC7901 / ADR 耐药性的影响

目的：通过检测胃癌细胞株SGC7901及其阿霉素耐药细胞株SGC7901/ADR中microRNA let-7f的表达差异,探讨let-7f表达与胃癌细胞对ADR耐药的关系.方法：通过实时荧光定量PCR比较SGC7901/ADR与SGC7901两种细胞中 let-7f表达水平的差异;MTT法检测SGC7901,SGC7901/ADR及转染let-7f mimic后SGC7901/ADR的药物敏感性;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western Blot检测凋亡相关分子Bcl-2和Caspase-3蛋白表达情况.结果：qRT-PCR结果显示,let-7f在SGC7901/ADR细胞中的表达较在SGC7901中的表达显著降低（ P＜0.05）.MTT法结果显示SGC7901与SGC7901/ADR两种细胞阿霉素的半数抑制浓度（IC50）分别为（0.95 ±0.08）g/L和（5.40 ±0.28）g/L.SGC7901/ADR细胞转染let-7f mimic后,let-7f表达显著上调,并且对阿霉素的IC50明显降低（ P＜0.05）.凋亡检测结果显示,转染let-7f mimic后,SGC7901/ADR细胞凋亡率明显增加（ P＜0.05）.Western Blot结果表明相较于转染let-7f negative control（NC）组,转染let-7f mimic组cleaved-Caspase-3表达显著降低（P＜0.05）,而两组中的Bcl-2表达水平无差异.结论：let-7f在胃癌阿霉素耐药细胞株SGC7901/ADR中的表达显著降低,逆转let-7f表达可增加其对阿霉素敏感性,并诱导其凋亡.     

小剂量顺铂联合5-氟尿嘧啶对胃癌细胞增殖抑制及其机制的研究

目的：探讨小剂量顺铂（DDP）、5-氟尿嘧啶（5-FU）在体外联合用药对SGC-7901胃癌细胞及胃癌耐药细胞株SGC-7901／5-FU细胞增殖及其相关基因表达的影响。方法：采用MTT法观察在小剂量DDP、5-Fu联合用药前后SGC-7901与SGC-7901／5-FU存活率的差异,同时应用免疫组化方法检测SGC-7901与SGC-7901／5-FU中p53、Fas／FasL基因的表达情况。结果：DDP与5-FU均有抑制肿瘤细胞增殖作用,且有浓度相关性;尤以DDP联合5-FU后对细胞存活率的影响明显高于两种药物的单独使用（P〈0．01）,小剂量DDP联合应用5-FU时效果最明显,但对SGC-7901／5-FU细胞增殖抑制作用明显小于SHC-7901;小剂量联合DDP＋5-FU,p53、FasL基因表达的阳性率显著高于单纯的5-FU组或DDP组（P〈0．01）,而Fas基因表达则相反。结论：小剂量DDP联合5-FU对胃癌细胞具有明显抑制作用,对耐药株也有-定抑制作用,但效果弱于非耐药株。p53、Fas／FasL基因对胃癌细胞的增殖活性有重要作用,在小剂量DDP联合5-FU比各单药应用组基因的改变更明显（P〈0．01）。     

Midkine shRNA对胃癌SGC7901细胞增殖与凋亡的影响

目的：研究shRNA干扰midkine对胃肿瘤细胞SGC7901生物学特性的影响。方法：构建midkine基因的特异性小RNA干扰质粒,采用脂质体2000转染SGC7901细胞,检测细胞的增殖和克隆形成能力以及细胞凋亡情况。结果：与对照组相比,转染重质粒后1—5天,SGC7901细胞增殖明显受到抑制（P〈0．01）,细胞形成克隆数明显降低（P〈0．01）,并且有明显的亚二倍体峰出现（P〈0．05）。结论：针对midkine基因的特异性小RNA干扰质粒在体外能有效抑制人胃癌细胞SGC7901 midkine表达,细胞增殖及克隆形成能力减弱,细胞凋亡增加,为midkine基因靶向治疗提供一定的实验依据。     

全氟辛酸对HK-2 细胞的毒性及对α-酮戊二酸盐受体1 表达的影响

目的： 研究全氟辛酸(perfluorooctanoic acid, PFOA)对HK-2细胞的毒性,及其对α-酮戊二酸盐受体1(oxoglutarate receptor 1,OXGR1)表达的影响。方法：采用MTT法检测不同浓度(0、0.1、1、10、100、1 000 μmol/L)PFOA对HK-2细胞增殖的影响。RT-PCR法检测0、100、300 μmol/L PFOA对HK-2细胞中OXGR1、琥珀酸盐受体1(succinate receptor 1,SUCNR1)、缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)mRNA表达的影响。当PFOA为300或0 μmol/L时,采用MTT法检测不同浓度(0、1、10、100、1 000、10 000 μmol/L) OXGR1配基α-酮戊二酸钠(α-ketoglutarate sodium, AKG)对HK-2细胞增殖的影响。流式细胞术检测300 μmol/L PFOA和100 μmol/L AKG共同作用HK-2细胞48 h后细胞的凋亡情况。结果：在培养24 h条件下,PFOA达1 000 μmol/L时可表现出毒性作用(P<0.01)。在培养48或72 h条件下,PFOA≥100 μmol/L时表现出毒性作用(P<0.01)。RT-PCR结果显示,PFOA可上调HK-2细胞中OXGR1 mRNA表达(P<0.01),但对SUCNR1及HIF-1α mRNA表达无明显影响(P>0.05)。MTT及流式细胞术检测结果显示,AKG与PFOA可协同作用抑制HK-2细胞增殖(P<0.01)并诱导细胞凋亡(P<0.05)。 结论：PFOA对HK-2细胞具有增殖抑制作用,并可上调细胞OXGR1 mRNA表达;PFOA可诱发HK-2细胞凋亡;AKG可与PFOA产生协同作用,该协同作用可能与OXGR1有关。     

蟾蜍灵诱导人胃癌SGC7901细胞自噬与凋亡的研究

目的：探讨自噬在蟾蜍灵（bufalin）诱导人胃癌SGC7901细胞死亡中的作用.方法：不同浓度的bu-falin处理人胃癌SGC7901细胞,采用MTT法检测bufalin对SGC7901细胞增殖的抑制作用.透射电镜观察给药后SGC7901细胞的自噬现象;流式细胞术检测细胞凋亡.Western blot检测自噬标志LC3蛋白表达.结果：Bufalin对胃癌SGC7901细胞生长有显著的抑制作用,且此作用呈明显的时间-剂量依赖性.Bufalin给药后可诱导SGC7901细胞发生自噬;并且在bufalin给药前用氯喹阻断自噬明显提高了bufalin对SGC7901的细胞毒性（P＜0.05）.结论：Bufalin能明显抑制SGC7901细胞的生长,并且诱导其发生保护性自噬.Bufalin和自噬抑制剂的联合应用可能为胃癌治疗提供新的策略.