HSP70的肿瘤免疫作用及其基因表达调节

热休克蛋白70能够与肿瘤特异性抗原多肽结合,形成热休克蛋白70-多肽复合物,它本身没有抗原性,其抗原性由它结合的多肽所决定,而它是作为"分子伴侣"参与肿瘤免疫作用过程.将这一特性加以应用,可能为肿瘤的治疗和消灭开辟新的途径.     

肿瘤HSP70活化的CIK细胞杀瘤作用研究

[目的]比较分析人大肠癌细胞HSP70活化CIK细胞和普通CIK细胞的杀瘤活性,为该类CIK的临床应用提供有重要参考价值的实验依据.[方法]用液相色谱法提纯人大肠癌细胞中的HSP70.取健康人外周血单核细胞,用CD3单克隆抗体、IFN-Υ、IL-1α、IL-2等细胞因子对其诱导、培养获取CIK细胞;运用GM-CSF、IL-4、TNF-α等细胞因子对其诱导、培养获取DCs,HSP70诱导活化DCs,按HSP70活化的DC∶CIK=1∶3混合培养1周.用MTT法进行杀瘤活性试验.[结果]人大肠癌细胞HSP70活化的CIK细胞和普通CIK细胞的杀瘤活性相比较,在效靶比例为10∶1、20∶1、40∶1时,杀伤活性差异均具有统计学意义(P＜0.01).[结论]与普通的CIK细胞相比,肿瘤细胞HSP70活化的CIK细胞具有更强的杀瘤活性.     

HSP70和Survivin在骨肉瘤中的表达及其临床意义

目的 探讨骨肉瘤组织中HSF70和Survivin的表达及其临床意义。方法 应用免疫组化方法检测34例骨肉瘤病人的骨肉瘤组织和15例正常骨组织中HSF70和Survivin的表达情况，综合分析临床病理指标。结果34例骨肉瘤组织中HSF70和Survivin的阳性表达率分别为88．2％和82．4％，而正常骨组织其表达率均为零。HSF70和Survivin在低分化组和短生存组的骨肉瘤中，其阳性表达率明显高于高、中分化组和长生存组骨肉瘤。结论 检测HSF70和Survivin为骨肉瘤恶性程度和预后的评估提供了一定的辅助参考指标。     

反义 HSP70对人乳腺癌细胞的抑瘤效应

目的：观察反义热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70)RNA对人乳腺癌细胞学特性的影响,探讨其抗肿瘤作用。方法：将逆转录病毒真核表达载体介导的反义HSP70重组质粒pX-AHSP70和空载体pLXSN-neo转染至MCF7／Adr人乳腺癌细胞,通过细胞生长曲线和软琼脂集落实验以及裸鼠移植瘤实验观察转染反义HSP70重组质粒细胞的体内外抑瘤作用。结果：建立了稳定表达反义HSP70 RNA的MAp70细胞,与空载体细胞相比,HSP70蛋白的表达下降了48％。细胞群体生长速度明显减慢,软琼脂集落形成率和抑制率分别为6．08％和62．14％,裸鼠皮下接种的平均出瘤时间为15天,最终平均瘤重为108mg,以上参数与空载体细胞相比,均有显著差异。结论：反义HSP70RNA能够有效地抑制HSP70表达,进而抑制乳腺癌细胞的体外增殖和体内移植瘤的形成与发展。     

同种肿瘤来源的HSP70-PC对原位的大鼠膀胱肿瘤的治疗研究

 目的 研究用来自亚高温盆腔区域热疗后原位大鼠膀胱肿瘤的热休克蛋白70-肽复合物（HSP70-PC）对原位大鼠膀胱肿瘤的治疗作用机制。方法 经尿道膀胱灌注MNU制备出大鼠膀胱肿瘤动物模型。将动物随机分为A（肿瘤对照）组、B（HSP70-PC治疗）组、C（肿瘤细胞裂解液治疗）组，每组5只。皮下注射治疗1个月后检测膀胱及肿瘤湿重，肿瘤分期分级，TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数（AI），免疫组化检测肿瘤细胞增殖细胞核抗原指数（PCNA LI）、肿瘤组织中S-100蛋白阳性细胞率及CD8阳性细胞率、膀胱引流区域髂动脉及腹主动脉旁淋巴结中S-100蛋白阳性细胞率、脾脏S-100蛋白阳性细胞率及CD8阳性细胞率，ELISA法检测血清Rat IFN-γ含量。结果 膀胱及肿瘤湿重B组低于A、C组（P＜0.01）。A、C组间差异无显著性意义（P = 0.610）。B组肿瘤分期低于A、C组（P＜0.01）；A、C组间差异无显著性意义（P =1.00）。肿瘤分级各组间差异均无显著性意义（P =1.00）。B组肿瘤细胞AI、膀胱肿瘤组织中CD8阳性细胞率、血清Rat IFN-γ含量均高于A、C组（P＜0.01）；A、C组间差异均无显著性意义（P =0.870，0.597，0.979）。脾脏S-100蛋白阳性细胞率及CD8阳性细胞率由高到低依次为B、C、A组（P＜0.01）。肿瘤细胞PCNA LI、膀胱肿瘤组织中S-100蛋白阳性细胞率、淋巴结中S-100蛋白阳性细胞率三组之间差异均无显著性意义（P =0.808，0.718，0.847）。结论 皮下注射HSP70-PC可以上调原位的膀胱肿瘤大鼠的细胞免疫状态，促进肿瘤凋亡，但对肿瘤细胞增生无影响。     

HSP70复合物抗人肝癌细胞免疫的初步研究

目的 :研究 HSP70复合物抗人肝癌细胞的免疫效应。方法 :用经 42℃热休克处理的 SMMC- 772 1细胞制备裂解液 ,免疫共沉淀法提取 HPS70复合物 ,采用 SDS- PAGE和 Western- blot鉴定蛋白性质及分子量 ;蛋白测定仪进行复合物定量。 MTT法检测 HSP70复合物体外致敏人脾淋巴细胞对 SMMC- 772 1的细胞毒作用。结果 :SDS- PAGE和 Western- blot证实获得相对分子量约为 7× 10 4的 HSP70蛋白 ;体外细胞毒实施显示在不同效靶比时 ,致敏的淋巴细胞对 SMMC- 772 1均具有一定的杀伤效应 ,且这种效应可被 CD4、CD8的单抗部分阻断。结论 :HSP70复合物能在体外诱导针对人肝癌细胞的淋巴细胞毒效应 ,CD4、CD8介导了部分抗瘤作用 ,提示 HSP70可能通过多种免疫途径参与抗瘤效应。HSP70复合物抗人肝癌免疫的初步研究为今后临床肝癌瘤苗的研制和生物治疗奠定了良好的基础     

热休克蛋白70与肿瘤的关系

热休克蛋白（ＨｅａｔＳｈｏｃｋＰｒｏｔｅｉｎ,ＨＳＰ）是由Ｒｉｔｏｓｓａ在１９６２年研究果蝇唾液腺染色体时发现的,将２５℃培养的果蝇幼虫置于３０～３２℃的环境中,发现其巨大的唾液腺染色体上出新的膨突。继后正常蛋白质的合成被抑制,却合成了一组特殊的蛋白质,由于是在热刺激下产生的一组蛋白质,故称其为热休克蛋白（ＨＳＰ）。后来,人们发现除高温外的各种刺激如缺血、缺氧、重金属、病毒感染、恶性变等均可诱导ＨＳＰ的合成,并关闭正常蛋白的合成,故也有人称其为应激蛋白［１～４］。在ＨＳＰ家庭中ＨＳＰ７０是功能最广研究最…     

肺腺癌GLC-82细胞HSP70表达与放化疗敏感性

[目的] 研究人肺腺癌GLC-82细胞中不同HSP70表达水平对该细胞放、化疗敏感性的影响。[方法] 检测GLC-82细胞热处理前后HSP70表达水平的变化，以不同时间点确定为HSP70正常表达组、增强表达组、恢复表达组，分别以化疗、放疗、化疗结合放疗等方法处理，用MTT法测各组细胞存活率，比较HSP70不同表达水平对放化疗敏感性的影响。[结果] GLC-82细胞热休克处理前后HSP70表达水平明显不同，热休克处理后12h细胞HSP70表达最高．48h后达到预热前水平；各组细胞经不同剂量放射线作用后采用单靶多击模型拟和细胞生存曲线，显示HSP70正常表达组和HSP70恢复表达组生存曲线基本重合，增强表达组生存曲线右上移位，肩K增宽；不同化疗药物对HSP70增强表达组的抑制率较其它两组低．差异有统计学意义，虽然放化疗联合能显著提高对同一HSP70表达水平的GLC．82细胞的杀伤效果，但是HSP70增强表达组细胞对放化疗的联合杀伤敏感性较其它组低，差异有统计学意义。[结论] HSP70增强表达可以降低GLC-82细胞对放疗、化疗及放化疗联合作用的敏感性。     

HSP70-肿瘤肽对小鼠肝癌的抗肿瘤免疫效应

目的：观察HSP70肿瘤肽介导的非MHCⅠ限制性抗肿瘤免疫效应。方法：通过主动免疫和继承性免疫保护试验，观察从热休克小鼠肝癌HCaF细胞纯化的HSP70肿瘤肽对HCaF（MHCⅠ类分子表达阴性）的抗肿瘤免疫效果。结果：用源自HCaF细胞的HSP70肿瘤肽主动免疫小鼠，可获得对HCaF细胞攻击的主动免疫保护效果，雌性组明显优于雄性组。转输HSP70肿瘤肽免疫后抗HCaF细胞攻击的小鼠脾细胞，能产生良好的过继性免疫保护效果，可耐受HCaF细胞反复攻击，以1×107个活瘤细胞攻击亦未致瘤。转输HSP70肿瘤肽体外致敏的脾细胞，也能使宿主产生一定的抗HCaF免疫效果。结论：从HCaF细胞纯化的HSP70肿瘤肽可激发宿主产生非MHCⅠ限制性抗肿瘤免疫保护效应，其强度可藉反复攻击而增强，并可通过免疫脾细胞继承性传递。     

HSP70在卵巢癌中的表达与化疗耐药和预后的关系

卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤,5年生存率仅为25％～30％,危害极大。热休克蛋白（heat shock protein,HSP）是机体细胞在受到各种刺激时产生的一类高度保守的蛋白质,分为90、70、27等家族,有报道HSP与肿瘤的发生、发展、肿瘤免疫以及机体对肿瘤治疗药物耐药性的发生和肿瘤预后都有关[1]。我们用免疫组化SP法检测卵巢癌组织中HSP70的表达情况,并探讨它的临床意义。     

热休克蛋白与肿瘤免疫

热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是一类在生物进化中高度保守、广泛存在于原核及真核生物中的蛋白质。近年热休克蛋白在免疫中的作用已成为当前研究的热点之一。已证实其能与肿瘤细胞内多肽分子结合,通过抗原提呈细胞上的受体,将抗原肽传递给细胞毒Ｔ细胞诱导特异性抗肿瘤免疫应答。热休克蛋白肽复合物作为一种疫苗,在生物治疗方面拥有广阔的治疗前景,值得深入研究。     

小鼠肠癌HSP70多肽复合物的纯化及其抗肿瘤免疫效应

目的:应用AKTA-purifier100液相层析系统,建立分离和纯化热休克蛋白70(HSP70)多肽复合物的方法,并观察其抗肿瘤免疫保护效应。方法:采用DE-AE-Sepharose离子交换层析和ADP-Ag-arose亲和层析,从热处理的BALB/c鼠源性结肠癌细胞(CT26)制备裂解液中分离、纯化HSP70多肽复合物,并通过主动免疫保护实验观察其抗肿瘤免疫效应。结果:纯化蛋白经鉴定为相对分子质量70×103左右的HSP70多肽复合物;平均1g湿重肿瘤细胞可获得63.63μgHSP70多肽复合物;HSP70主动免疫的小鼠可抵抗CT26细胞的攻击。结论:用此层析法可分离纯度较高的HSP70,并可诱导明显的抗肿瘤免疫保护效应。     

宫颈癌和宫颈上皮内瘤变组织中热休克蛋白70表达与人乳头瘤病毒感染的关系

目的　为了探讨宫颈癌和宫颈上皮内瘤变 (CIN )组织中热休克蛋白 70 (HSP70 )的表达与人乳头瘤病毒(HPV )感染的关系。方法　用免疫组化和原位PCR技术对 66例宫颈癌和 2 5例CIN组织进行检测。结果　宫颈癌、CIN和正常宫颈组织中HSP70表达率为 80 .3 %、72 .0 %和 2 0 .0 % (P <0 .0 1,P <0 .0 5 )。 5 2例HPVDNA阳性的宫颈癌组织中有 45例 (86.5 % )HSP70表达阳性 ,明显高于HPVDNA阴性组织 (5 7.1% ,P <0 .0 5 )。结论　HSP70与宫颈癌、CIN的发生发展有密切关系 ,HPV可以诱导宫颈癌和CIN细胞中HSP70的高表达。     

人胃癌组织中热休克蛋白70和糖调节蛋白94的表达及其意义

目的：探讨休克蛋白70（HSP70）和糖调节蛋白94（grp94）在人胃癌组织中的表达与临床病理的关系。方法：应用免疫组织化学和病理学图像分析方法研究60例人胃癌组织及其癌旁组织、发生及未发生转移的癌组织中HSP70和grp94的表达。结果：在胃癌组织中HSP70和grp94的表达明显高于癌旁组织（93.3%,81.7%vs36.7%,25.0%,P〈0.01）。HSP70和grp94在低分化和发生转移的胃癌组织中的表达明显高于非转移癌和癌旁组织（90.0%,85.0%;100%,84.6%vs36.7%,25.0%;P〈0.01）。结论：HSP70和grp94在发生转移的低分化胃癌组织和未发生转移的高分化癌组织中表达存在明显不同,可以作为胃癌的诊断或预后指标。     

Exogenously delivered heat shock protein 70 displaces its endogenous analogue and sensitizes cancer cells to lymphocytes-mediated cytotoxicity

Hsp70 chaperone is known to stimulate anti-tumour immunity in a variety of cancer models. Here we demonstrated that the addition of purified recombinant Hsp70 to the culture medium facilitated cancer cell cytolysis by lymphocytes. Importantly, exogenous Hsp70 triggered secretion of the intracellular Hsp70 to a cell surface and extracellular milieu, which played a role in cytolysis because down-regulation of the endogenous Hsp70 reduced both its presence at the cell surface and the lymphocyte-mediated cytolysis. Inhibitors that target both the ATPase and the peptide-binding domains of Hsp70 molecule potently decreased its anti-tumor effect. Using a variety of cell transport markers and inhibitors, we showed that the exchange of exogenous and intracellular Hsp70 is supported by classical and non-classical transport pathways, with a particular role of lipid rafts in the chaperone''s intracellular transport. In conclusion, exogenous Hsp70 can eject endogenous Hsp70, thus exerting anticancer activity.     

Combined inhibition of heat shock proteins 90 and 70 leads to simultaneous degradation of the oncogenic signaling proteins involved in muscle invasive bladder cancer

Heat shock protein 90 (HSP90) plays a critical role in the survival of cancer cells including muscle invasive bladder cancer (MIBC). The addiction of tumor cells to HSP90 has promoted the development of numerous HSP90 inhibitors and their use in clinical trials. This study evaluated the role of inhibiting HSP90 using STA9090 (STA) alone or in combination with the HSP70 inhibitor VER155008 (VER) in several human MIBC cell lines. While both STA and VER inhibited MIBC cell growth and migration and promoted apoptosis, combination therapy was more effective. Therefore, the signaling pathways involved in MIBC were systematically interrogated following STA and/or VER treatments. STA and not VER reduced the expression of proteins in the p53/Rb, PI3K and SWI/SWF pathways. Interestingly, STA was not as effective as VER or combination therapy in degrading proteins involved in the histone modification pathway such as KDM6A (demethylase) and EP300 (acetyltransferase) as predicted by The Cancer Genome Atlas (TCGA) data. This data suggests that dual HSP90 and HSP70 inhibition can simultaneously disrupt the key signaling pathways in MIBC.     

Expression of heat shock protein 70 and c-myc protein in human breast cancer: an immunohistochemical study.

The major heat shock protein, HSP70, protects cells from a variety of stressful stimuli, while c-myc protein allegedly stimulates the expression of HSP70 by transacting on the HSP70 promotor. The present study was aimed at correlating the expression of HSP70 with that of c-myc protein in benign and malignant breast lesions. Indirect immunoperoxidase and immunoblotting techniques using monoclonal antibodies were employed. Fresh frozen sections were prepared from five fibroadenomas and 59 breast carcinomas. Immunohistochemically, both substances were localized in the nuclei and/or cytoplasm of normal and neoplastic epithelial cells. The stromal cells were positive for c-myc protein but negative for HSP70. The expressions of HSP70 and c-myc protein were comparable to each other in the malignant cells from 37 (63%) carcinomas. In 17 (29%) carcinomas, c-myc protein expression predominated over that of HSP70, whereas in five (8%) carcinomas, HSP70 was predominant. Carcinomas with high-grade nuclear atypia often showed negative HSP70 staining, whereas tumors with nuclear HSP70 localization tended to accompany lower-grade nuclear atypia. A similar relation was also observed between c-myc protein expression and nuclear atypia of the tumor. All five fibroadenomas and most of the non-neoplastic epithelial cells adjacent to cancer showed strong reactivities with both substances. Immunoblot analysis for HSP70 revealed a clear, single band in the extract of tumors with strong HSP70 staining, but no, or only faint, bands were seen in the extract of immunohistochemically HSP70-negative carcinomas. The discrepancy between the expressions of each substance in a certain percentage of breast carcinomas may suggest the presence of HSP70 production mechanisms other than the c-myc protein-triggered promotor pathway.     

热休克蛋白70在肝细胞癌中的研究进展

热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)是高度保守的多肽蛋白,作为分子伴侣,在蛋白稳态、细胞凋亡、侵袭、细胞信号转导中发挥重要的作用。研究表明HSP70的表达水平与肿瘤的发生发展及转归有密切联系,其在正常情况下呈低水平表达,而在肿瘤组织中呈高表达。肝细胞癌起病隐匿,相关研究报道HSP70表达水平的高低可以作为早期肝细胞癌诊断和鉴别诊断的敏感性生物学指标,同时影响着肝细胞癌患者的治疗和预后,本文就此做一综述。     

Photodynamic therapy and the role of heat shock protein 70

Photodynamic therapy (PDT) is an effective treatment for superficial epithelial skin cancers and is also being utilised for skin rejuvenation. PDT with porphyrin-derived photosensitisers may be capable of inducing rapid cytochrome c release initiating apoptotic cascade via an activation of different caspases. Hsp70 has been demonstrated to directly bind to the caspase recruitment domain (CARD) of apoptotic-protease activating factor 1 (Apaf-1), thereby preventing the recruitment of oligomerisation of Apaf-1 and association of Apaf-1 with procaspase 9. Further, cytoplasmic Hsp70 rapidly translocates to the cell surface where it stabilises damaged membranes and preserves their integrity depending on the PDT dose. The induced cell surface expression and release of Hsp70 and its relevance for tumor response or skin rejuvenation is not fully understood, but seems to be of interest for monitoring, predicting or optimising treatment regimens. This review aims to summarise the current knowledge on PDT mediated cell signalling.