缝隙连接蛋白Cx32与Cx43在癫痫发病中的作用

目的:探讨缝隙连接蛋白(Cx)与癫痫之间的关系.方法:采用免疫组织化学方法测定氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠癫痫发作后不同时间不同脑区Cx32与Cx43免疫阳性表达情况.结果:与对照组比较,致痫组大鼠海马区与皮层区Cx32和Cx43免疫阳性表达在癫痫发作1h后开始增强(Cx32免疫阳性细胞数分别为海马区16.62±4.51和皮层区14.85±3.30,均P＜0.05;Cx43免疫阳性细胞数分别为海马区18.26±4.03和皮层区18.65±4.51,均P＜0.01),24 h达到高峰(Cx32免疫阳性细胞数分别为海马区46.53±9.47和皮层区28.25±8.69,均P＜0.01;Cx43免疫阳性细胞数分别为海马区39.77±7.79和皮层区26.50±6.56,均P＜0.01),此后逐步下降.但至14 d Cx32海马区与皮层区免疫阳性细胞数分别为22.45±6.56和15.92±3.16,仍高于对照组(均P＜0.05),而Cx43在14 d的表达则有所不同:海马区免疫阳性细胞数17.54±3.77仍高于对照组(P＜0.01);皮层区表达则降至正常水平.致痫24 h时海马区Cx32和Cx43免疫阳性表达均明显高于同一时限的皮层区(均P＜0.05).结论:Cx32和Cx43参与了癫痫的发生与发展过程,反映了脑组织中神经元、星形胶质细胞之间的缝隙连接与癫痫发病机制密切相关.     

缝隙连接蛋白43在癫痫持续状态过程中的表达变化

[目的]观察缝隙连接蛋白43(Cx43)在大鼠癫痫持续状态过程中的表达变化及Cx43阻断剂对大鼠痫性发作的作用.[方法]健康雄性大鼠18只随机分为三组,每只6只,分别为Cx43组、Cx43阻断组(干预组)、空白对照组.观察各组大鼠行为学、脑电图(EEG)变化并应用免疫组化方法检测海马Cx43的表达.[结果]致痫后Cx43组大鼠出现典型癫痫持续状态,持续4~6 h,EEG上记录到癫痫波,注药后4 h注药侧海马Cx43表达显著增加(P<0.05);干预组EEG放电次数较Cx43组显著减少(P<0.05);注药后4 h注药侧海马Cx43表达明显低于Cx43组(P<0.05).[结论]缝隙连接蛋白Cx43参与癫痫持续状态过程,Cx43阻断剂可能通过影响神经胶质细胞缝隙连接的形成进而影响癫痫的发生、发展过程.     

难治性颞叶癫痫病灶中Cx32与Cx43表达的研究

目的分析难治性癫痫患者脑组织中缝隙连接蛋白32（Cx32）、连接蛋白43（Cx43）表达,探讨缝隙连接在癫痫发生发展中的作用。方法对30例难治性癫痫患者（癫痫灶组）进行皮质电图监测下手术切除痫灶,采用免疫组化染色法（二步法）检测癫痫灶及10例周边脑组织（周边脑组织组）Cx32、Cx43表达,并进行统计学分析。结果癫痫灶组及周边脑组织组Cx43、Cx32均有表达,Cx43在癫痫灶组中表达明显增多（U=4．066,P〈0．001）;而癫痫灶组及周边脑组织组中Cx32的表达比较差别无统计学意义（U=1．866,P〉0．05）。结论缝隙连接在癫痫发生、发展中有重要作用,长期癫痫发作可造成神经元凋亡。     

甘珀酸对癫痫大鼠脑组织缝隙连接蛋白43表达的干预及其意义

目的 探讨癫痫大鼠脑组织缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)表达及缝隙连接阻断剂甘珀酸(carbenoxolone,CBX)对其表达的影响.方法 健康SD大鼠64只,随机分为正常对照组、致痫组、致痫+生理盐水组(致痫+NS组)和致痫+CBX干预组(致痫+CBX组).采用免疫组化染色方法和实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应方法分别测定氯化锂-匹罗卡品癫痫模型大鼠脑组织Cx43免疫阳性细胞数及Cx43mRNA表达水平,并观察腹腔注射CBX对Cx43表达的影响.结果 与正常对照组比较,致痫大鼠脑组织Cx43免疫阳性细胞数及其mRNA表达差异倍数在致痫1 h开始明显增多,并持续至7 d(P＜0.05).大鼠注射CBX后Cx43免疫阳性细胞数及其mRNA表达差异倍数均明显低于同一时间点致痫组和致痫+NS组(P＜0.05),海马区Cx43免疫阳性细胞数及其mRNA表达差异倍数在注射CBX 7 d后降至正常水平,而皮层区Cx43免疫阳性细胞数及其mRNA表达差异倍数在注射CBX 3 d后降至正常水平.结论 星形胶质细胞Cx43参与了癫痫发作和发展过程.CBX减少致痫大鼠脑组织Cx43表达,具有较明确的抗癫痫作用.     

缝隙连接蛋白CX43在炎性镜像痛大鼠脊髓背角的表达

目的:探讨缝隙连接蛋白Cx43在炎性镜像痛大鼠脊髓背角的表达.方法:(1)行为学研究:鞘内置管成功的雄性SD大鼠24只,随机分为3组(n=8).CFA模型组:于大鼠左后肢踝关节外侧皮下注射完全弗氏佐剂(CFA)50μl建立关节炎性痛模型,鞘内注射NS 10μl;CBX处理组:皮下注射CFA 50μa,鞘内注射缝隙连接阻滞剂甘珀酸(CBX)100μg(10μl);NS对照组:皮下注射NS50μl,鞘内注射NS 10μl.分别于CFA致炎前1d(基础值)和致炎后0.5h、1d、3d、5d、7d、10d、14d每次鞘内注射后2h测定双侧的热缩足反射潜伏期(PWTL).(2)形态学研究:雄性SD大鼠20只,随机分为4组(n=5):NS生理盐水组、C1d组、C3d组和C7d组.分别在CFA致炎后相应时间点取腰段脊髓行Cx43免疫组织化学染色分析,测定双侧脊髓背角积分光密度值.结果:(1)单侧踝关节外侧皮下注射CFA可以在致炎后2h～7d诱导出双侧的热痛觉过敏,呈现明显的镜像痛和域外痛现象(P＜0.01或0.05),鞘内注射CBX可以在炎性痛的不同阶段逆转上述改变.(2)单侧CFA致炎后,大鼠脊髓双侧Cx43的表达与对照组相比均显著增加(P＜0.01或0.05),主要集中于Ⅰ～Ⅱ层和Ⅹ层,其时程变化与行为学变化基本一致.结论:大鼠单侧CFA致炎诱导的关节炎性痛模型,具有显著的镜像痛特征.脊髓双侧背角Cx43表达增加,鞘内应用缝隙连接阻滞剂可以逆转镜像痛现象,提示脊髓缝隙连接可能在疼痛中枢敏感化中起重要作用.     

缝隙连接蛋白43在阿尔茨海默病中的研究进展

星型胶质细胞的功能异常与多种神经退行性疾病的发生发展关系密切,缝隙连接的异常是其中重要的机制之一。缝隙连接主要是由缝隙连接蛋白（connexin,Cx）构成,是相邻细胞间代谢和离子耦合以及电传递的主要结构。Cx43和Cx30是在脑中含量最多的Cx亚型,其中又以Cx43为主。Cx43在脑中含量或分布与阿尔兹海默病的发生发展关系密切。本文就以Cx43与阿尔兹海默病的关系进行综述。     

连接蛋白43和胶质纤维酸性蛋白在甘珀酸预处理的戊四氮致痫大鼠前脑中的表达变化

目的：研究大鼠在脑室埋管注射甘珀酸预处理后戊四氮导致癫痫发作时前脑内星形胶质细胞和连接蛋白43的形态学反应及其相互关系。方法：实验于2003-10／2004-06在解放军第四军医大学神经科学研究所进行。取24只大鼠分为生理盐水组、甘珀酸组、戊四氮组、甘珀酸 戊四氮组，应用免疫荧光组织化学双重标记显示胶质纤维酸性蛋白和连接蛋白43蛋白在前脑的表达及其相互关系。结果：甘珀酸 戊四氮组的大鼠癫痫发作的行为表现比戊四氮组显著加重，星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白的表达也比戊四氮组明显升高，值得注意的是甘珀酸组的星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白的表达比生理盐水组明显升高。连接蛋白43在戊四氮引起的癫痫大鼠的大脑皮质、海马和杏仁核内增加，而甘珀酸预处理后的癫痫模型中连接蛋白43进一步增强。在连接蛋白43与胶质纤维酸性蛋白双标的切片上发现，阳性的星形胶质细胞双标，在甘珀酸预处理后的癫痫模型中胶质纤维酸性蛋白阳性的星形胶质细胞显著增加的同时连接蛋白43也明显增加。结论：在整体动物甘珀酸预处理可以导致癫痫发作增强，这可能与星形胶质细胞增生及其连接蛋白43表达升高有关。     

心室纤颤时心肌缝隙连接蛋白Cx43的变化

目的 观察心室纤颤(室颤)发生后缝隙连接蛋白Cx43的表达以及缝隙连接改造剂ZP123对Cx43表达的影响.方法 按照随机数字表法将30只家猪分为假手术组、模型组和ZP123干预组,每组10只.以80 V电压持续刺激动物5 s诱发室颤;致颤前15 min ZP123组给予ZP123 1μg/kg静脉推注+ZP12310μg·kg-1·h-1微量泵泵入;模型组泵入生理盐水50 ml;假手术组动物不致颤也不补液.室颤持续8 min后开胸取左心室游离壁心肌,用免疫荧光结合激光共聚焦显微镜技术检测Cx43的分布及水平,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)定量检测Cx43蛋白表达.结果 假手术组Cx43荧光信号强,分布均匀;模型组Cx43荧光信号弱,呈不均一分布;ZP123干预组Cx43荧光信号增强,不均一分布减轻.与假手术组比较,模型组心室肌组织Cx43荧光信号面积百分比、积分吸光度(A)值及蛋白表达均明显下降[面积百分比:(0.64±0.36)%比(1.27±0.19)%,积分A值:15 201±2 613比30 634±4 975,Cx43蛋白表达:0.72±0.08比0.97±0.07,均P＜0.05];与模型组比较,ZP123干预组Cx43表达[面积百分比(0.96±0.16)%,积分A值22 100±4 404,Cx43蛋白表达0.82±0.04]均明显升高(均P＜0.05).结论 室颤发生时心肌组织Cx43表达减少;应用ZP123可减少或逆转Cx43的降解.     

连接蛋白43和胶质纤维酸性蛋白在甘珀酸预处理的戊四氮致痫大鼠前脑中的表达变化

目的:研究大鼠在脑室埋管注射甘珀酸预处理后戊四氮导致癫痫发作时前脑内星形胶质细胞和连接蛋白43的形态学反应及其相互关系。方法:实验于2003-10/2004-06在解放军第四军医大学神经科学研究所进行。取24只大鼠分为生理盐水组、甘珀酸组、戊四氮组、甘珀酸+戊四氮组,应用免疫荧光组织化学双重标记显示胶质纤维酸性蛋白和连接蛋白43蛋白在前脑的表达及其相互关系。结果:甘珀酸+戊四氮组的大鼠癫痫发作的行为表现比戊四氮组显著加重,星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白的表达也比戊四氮组明显升高,值得注意的是甘珀酸组的星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白的表达比生理盐水组明显升高。连接蛋白43在戊四氮引起的癫痫大鼠的大脑皮质、海马和杏仁核内增加,而甘珀酸预处理后的癫痫模型中连接蛋白43进一步增强。在连接蛋白43与胶质纤维酸性蛋白双标的切片上发现,阳性的星形胶质细胞双标,在甘珀酸预处理后的癫痫模型中胶质纤维酸性蛋白阳性的星形胶质细胞显著增加的同时连接蛋白43也明显增加。结论:在整体动物甘珀酸预处理可以导致癫痫发作增强,这可能与星形胶质细胞增生及其连接蛋白43表达升高有关。     

缝隙连接蛋白43在人食管胃连接部的表达及意义

目的 探讨缝隙连接蛋白43(Cx43)在人食管胃连接部的表达水平及临床意义.方法 选取高位食管中段癌患者8例,在行根治性食管癌切除食管胃吻合术时切除食管胃连接部,分离出食管下括约肌的套索纤维和钩状纤维,以及部分下段食管环行肌和胃底环行肌,应用Western blot法检测Cx43在各环行平滑肌中的表达水平.结果 下段食管环行肌和胃底环行肌之间Cx43的表达水平没有差异(153.77±13.54与139.34±16.54,P>0.05),套索纤维和钩状纤维平滑肌细胞之间Cx43表达量也没有差异(259.01±16.70与303.32±22.02,P>0.05);但套索纤维和钩状纤维平滑肌细胞Cx43的表达水平高于下段食管和胃底环行肌的表达水平(P<0.05).结论 人食管下括约肌的套索纤维、钩状纤维以及下段食管和胃底环行肌中Cx43的表达水平不同.     

抗抑郁药对海马星形胶质细胞缝隙连接蛋白表达和通道功能的影响

目的 探讨3种不同机制抗抑郁药对海马星形胶质细胞缝隙连接蛋白和通道功能的影响。方法 CCK-8实验检测不同机制抗抑郁药对海马星形胶质细胞的细胞毒性,采用蛋白免疫印迹法和细胞接种荧光示踪法测定3种不同机制抗抑郁药对由缝隙连接蛋白43（Cx43）组成的通道功能和Cx43蛋白表达的影响。结果 CCK-8实验显示,25.00 µmol/L氟西汀、0.10 µmol/L阿米替林和0.20 nmol/L文拉法辛对海马星形胶质细胞无细胞毒性（P均> 0.05）; 25.00 µmol/L氟西汀、0.10 µmol/L阿米替林和0.20 nmol/L文拉法辛能抑制海马星形胶质细胞缝隙连接的荧光传递功能（P均< 0.05）,但3种抗抑郁药均不影响海马星形胶质细胞Cx43蛋白的表达（P均> 0.05）。结论 抗抑郁药能够显著降低海马星形胶质细胞Cx43组成的通道功能。     

美托洛尔对心力衰竭大鼠连接蛋白43表达及分布模式影响的研究

目的 观察不同剂量美托洛尔(Meto)对心力衰竭大鼠心肌连接蛋白43 (Cx43)表达及分布的影响,探讨其心脏保护机制.方法 SD大鼠100只随机(随机数字法)分为5组,每组20只:(1)假手术组(sham组);(2)心力衰竭模型组(HF组);(3) Meto治疗小剂量组[Meto A组,1.25mg/(k·d)];(4) Meto治疗中剂量组[Meto B组,5 mg/ (kg· d)]; (5)Meto治疗大剂量组[Meto C,20mg/ (kg·d)].缩窄大鼠腹主动脉建立心衰模型,术后第4周开始给药至第8周,术后第8周取材免疫组化观察大鼠心肌Cx43表达量及分布模式,Western blot检测心肌总Cx43 (T-Cx43)、磷酸化Cx43 (P-Cx43)表达水平.结果 (1) HF组大鼠与Sham组比较,心脏T-Cx43分布紊乱明显,Cx43mRNA表达及P-Cx43、T-Cx43蛋白表达显著增加;MetoC组虽较Meto A、MetoB组进一步显著改善HF大鼠心脏T-Cx43分布紊乱情况,但显著抑制HF大鼠心脏T-Cx43表达(P＜0.01);Meto A、MetoB组未显著抑制HF大鼠心脏T-Cx43蛋白的表达.(2)HF组大鼠中P-Cx43表达量显著高于sham组(P＜0.叭),随Meto治疗剂量的逐级增加各治疗组P-Cx43表达量较HF组逐级降低(MetoAvs.HF,P＜0.05;MetoBvs.HF,P＜0.01;MetoCvs.HF,P＜0.01),且Meto治疗组各组间比较差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 Meto可通过抑制心肌Cx43磷酸化及改善其分布紊乱而发挥心脏保护作用.     

不同运动量游泳运动对大鼠左心室心肌闰盘结构和间隙连接蛋白43的影响

目的:探讨不同运动量游泳运动对大鼠左心室心肌闰盘结构和间隙连接蛋白43(Cx43)的影响,以期为运动对心肌的生理和病理变化研究提供参考资料。方法:SD大鼠分为不同运动量运动组和力竭运动组,前者进行12周的低、中和高运动量游泳运动,后者进行1次力竭游泳运动。运动后取左心室心肌组织进行常规透射电镜样品制备和Cx43免疫组化染色,电镜观察左心室心肌闰盘结构变化,光镜和图像分析方法对Cx43的分布和含量改变进行研究。结果:安静对照组大鼠左心室心肌细胞闰盘结构清晰,由粘着连接、桥粒和间隙连接组成,呈阶梯状排列,Cx43主要分布在闰盘处。低和中运动量大鼠闰盘结构、Cx43分布和含量与安静对照组差异不大。高运动量大鼠闰盘连接间隙明显增宽,Cx43在心肌细胞侧对侧连接增加,含量明显降低。力竭运动大鼠闰盘结构紊乱,局部断裂或折迭;力竭后即刻Cx43含量与安静对照组差异不明显,随着力竭运动后时间的延长,Cx43含量显著降低。结论:高运动量和力竭运动可以导致左心室心肌闰盘结构破坏,Cx43降解和分布模式改变。     

肌内皮缝隙连接对失血性休克大鼠血管收缩反应的影响

目的 研究肌内皮缝隙连接（MEGJ）对失血性休克大鼠内皮依赖性和非依赖性血管收缩反应的影响。方法 56只SD大鼠按随机数字表法分为去甲肾上腺素（NE）组和杨梅黄酮组；NE组分为正常对照以及休克0、0．5、1和2h5个亚组；杨梅黄酮组分为正常对照以及休克0、0．5、1、2、3和4h7个亚组。各组取其肠系膜上动脉（SMA）制成血管环，分别测量在18α-甘草次酸（18α-GA）作用前后血管环对NE和杨梅黄酮反应性的变化。结果 SMA血管环对NE的反应性表现为：休克0h和0．5h组明显高于正常对照组和其他休克时间点组，休克1h和2h组明显低于正常对照组和休克0h和0．5h组；18α-GA对NE诱导的SMA血管环收缩反应性无明显影响。SMA血管环对杨梅黄酮的反应主要表现为：休克0、0．5、1和2h组明显高于正常对照组，于休克2h达最高点；休克3h和4h组明显低于正常对照组，运用18α-GA阻断MEGJ后，各组血管环的收缩反应性较18α-GA作用前明显下降，其中以休克1、2和3h组下降幅度明显大于其他组。结论 失血性休克后早期，内皮依赖和非依赖性的血管收缩反应均有不同程度代偿性增加，休克1h和2h表现为非内皮依赖性血管收缩反应下降，休克3h和4h表现为内皮依赖性血管收缩反应明显降低；MEGJ在休克后内皮依赖性血管收缩反应的变化中起重要调节作用。     

侧脑室注射甘珀酸对扩散性抑制的影响

目的:探讨缝隙连接蛋白阻断剂甘珀酸(CBX)对扩散性抑制(SD)的影响。方法:SD大鼠30只,随机分为对照组、假手术组和CBX干预组各10只,后两者用高浓度KCl诱导大鼠皮质SD波,假手术组不给予CBX干预,CBX干预组给予5 ug/uL的CBX进行干预,用MS4000U生物信号采集分析系统对波幅、时程进行计算分析。结果:与假手术组比较,CBX干预组所记录到SD波波幅明显减小(P<0.05),SD波的阳性率降低(P<0.05),但SD波的时程无差异。结论:CBX对高浓度KCl诱导的皮质SD波有明显的抑制作用,提示缝隙连接在SD的发生发展过程中具有重要作用。     

运动负荷对去卵巢大鼠关节软骨细胞Cx43蛋白表达影响的初步研究

目的探讨运动负荷对去卵巢大鼠关节软骨细胞中间隙连接蛋白Connexin43(Cx43)蛋白表达的影响。方法3月龄Sparague-Dawley(SD)大鼠30只,均分为(1)A组(卵巢切除组):行双侧卵巢切除术(n=10);(2)B组(卵巢切除+立即运动组):双侧卵巢切除术后第2周起至第21周,大鼠在小动物跑步台上运动(20m/min×60min/d×6d/周×20周)(n=10);(3)C组(卵巢切除+延迟运动组):双侧卵巢摘除后第14周起至第21周,大鼠在小动物跑步台上运动(20m/min×60min/d×6d/周×8周)(n=10)。各组大鼠均于术后21周末取材膝关节胫骨端,进行Cx43免疫组织化学染色观察,结合图象分析系统及分析软件,观察和分析关节软骨细胞中Cx43蛋白表达及阳性面积百分比(%)。结果Cx43阳性表达定位于相邻软骨细胞的胞浆和/或胞膜上。A组中关节软骨出现退变,软骨细胞数目减少,Cx43阳性表达主要分布于同源软骨细胞群中。B组关节软骨基质较丰厚,软骨细胞数量多,分布清晰,浅层较幼稚的软骨细胞及其深层的同源软骨细胞群中均可见Cx43蛋白阳性表达,尤以关节软骨负重区为典型。C组关节软骨退行性变、基质菲薄、创伤、溃疡,软骨下骨外露、硬化,关节软骨细胞明显减少、退变、形态不规则、分布紊乱,主要残存于关节周缘非负重区,部分尚存的软骨细胞中表达Cx43。A、B、C3组Cx43阳     

匹罗卡品癫痫模型及戊四唑点燃模型的行为学、组织学对比研究

匹罗卡品癫痫持续状态(SE)模型及戊四唑点燃模型均是临床常用的癫痫动物模型,两种模型有不同特点,采用不同的模型可能会有不同的试验结果。神经元丢失及苔藓纤维出芽是癫痫产生过程中较常见的组织病理学变化,目前少见对癫痫产生过程中的续贯性研究报告。本研究同步观察两种模型     

食管鳞癌间隙连接蛋白Cx32和Cx43的检测及意义

摘要：目的：检测间隙连接蛋白（connexin,Cx）32和43在食管鳞癌的表达,探讨其在食管鳞癌发生、发展中的作用及临床意义。 方法：用免疫组织化学技术（Elivision法）检测78例食管鳞癌组织和22例癌旁食管鳞状上皮组织中Cx32和Cx43的表达情况。 结果：癌旁食管鳞状上皮中Cx32和Cx43主要表达于细胞膜,阳性表达率均显著高于癌组织。Cx32和Cx43在食管鳞癌细胞膜表达与组织的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期均有一定相关性,而与性别、年龄和病变部位无关。 结论：Cx32和Cx43的表达随着食管鳞癌病理分级的增高而降低,其异常表达可能是食管鳞癌发生、发展的重要因素之一。