IL-1β对人牙周膜纤维细胞ALP活性的影响

本实验中作者定量研究了人基因重组型IL—1对人体牙膜纤维细胞活性的影响,目的在于探讨IL-1β在尖周病,牙周病修复过程中的作用。结果显示,该细胞经IL-1β作用后,ALP活性显著低于空白对照组,随IL-1β作用浓度加大,ALP活性降低更力口显著。表明,IL-1β对人牙周膜衔纤维细胞的ALP活性有显著抑制效应,在尖周,牙周病变修复过程中可能具有阻碍硬组织钙化的作用。     

大鼠肝/骨/肾型碱性磷酸酶部分cDNA的定序克隆

碱性磷酸酶(ALP)是较为肯定的参与钙化的酶类。牙髓组织合有ALP,性质与肝/骨/肾型(L/B/K)ALP相似。采用基因工程技术,研究细胞中ALP基因表达情况,有助于从分子水平上了解药物的作用机理。由于从细胞全基因组文库中获得ALP基因的工程量大,耗时耗力,因此,我们以体外合成的大鼠L/B/KALPcDNA的高保守性的ALP活性区的2段核酸序列为引物,采用反转录PCR和定序克隆获得大鼠L/B/KALP部分cDNA的分子克隆。     

狗牙髓碱性磷酸酶理化性质的鉴定

动物及人体组织中的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase ALP)可分为3型,即肝/骨/肾型、肠型和胎盘型,其性质也分别得到鉴定。与骨组织解剖结构相似的牙髓组织含有丰富的ALP,但其性质及作用尚不清楚。根据其酶解作用推测它可能参与钙化的进行。已知牙髓组织具有创伤后自我修     

透明质酸对尼古丁作用下人牙周膜成纤维细胞增殖影响研究

目的观察不同浓度的尼古丁对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)增殖的影响,并探讨透明质酸对尼古丁作用下对HPDLFs的保护作用。方法体外成功培养的HPDLFs,按不同的处理分为4组:(1)单纯细胞组(对照组);(2)尼古丁组:浓度分别为10、100、250、500、1 000μg/m L;(3)HA组:浓度为0.1%和0.2%;(4)尼古丁组+HA组(总10子组)。观察4组细胞增殖率,ALP的活性,Runx2、ColⅠ、OPN、OCN的mRNA的水平,细胞钙矿化能力。结果 (1)与对照组相比,各浓度尼古丁组均可以抑制HPDLFs的增殖率、ALP活性,Runx2、ColⅠ、OPN、OCN的mRNA水平,未见钙化矿化结节。(2)与对照组相比,HA组均可以促进HPDLFs的增殖率、ALP活性和Runx2、ColⅠ、OPN、OCN的mRNA水平并观察到了钙化矿化结节。(3)与尼古丁组相比,HA+尼古丁组对HPDLFs的增殖率和ALP活性起到促进作用,对Runx2、ColⅠ、OPN、OCN的mRNA的表达水平有提高并均观察到钙化矿化结节;各组差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 HA能够介导HPDLFs增殖,增加ALP活性和矿化组织相关蛋白,包括Runx2、ColⅠ、OPN和OCN等,并且抵抗尼古丁对HPDLFs的毒性作用,从而起到保护作用。     

rhTGF-β1、rhBMP-2和rhbFGF单独或者联合应用对BMSC的ALP活性和钙化能力影响

目的 :研究重组人碱性成纤维细胞生长因子 (rhbFGF)、重组人转化生长因子 β1(rhTGF β1)和重组人骨形成蛋白 2 (rhBMP 2 )单独和联合使用 ,对骨髓基质细胞 (BMSC)碱性磷酸酶 (ALP)活性和钙化能力影响。方法 :体外培养大鼠骨髓基质细胞 ,分别用一定浓度的rhTGF β1(5 μg/L)、rhBMP 2 (2 0 0 μg/L)和rhbFGF(1μg/L)单独或者联合应用 ,测定第 12、14天的碱性磷酸酶活性 ;加入矿化诱导液 ,用Vonkossa染色 ,检测 10、2 0和3 0天的钙化情况。结果 :rhBMP 2可增强BMSC的ALP活性 ,rhbFGF和rhTGF β12种因子单独或者联合使用抑制BMSC的ALP活性 ,rhTGF β1和rhBMP 2以及rhbFGF和rhBMP 2联合使用时 ,抑制BMSC的ALP活性 ;3种生长因子联合使用时 ,抑制BMSC的ALP活性 ,研究发现f b组和b组可显著促进BMSC向成骨细胞转化 ,增强细胞的矿化能力 ;其它各组对BMSC向成骨细胞转化、矿化能力无显著作用。结论 :生长因子rhBMP 2(2 0 0 μg/L)单独应用和rhbFGF(1μg/L)在此浓度下结合使用可以提高体外培养骨髓基质细胞的钙化能力。     

rhBMP-7对牙髓细胞影响的体内、外研究

目的:观察rhBMP-7对体外培养的人牙髓细胞生物学的影响,及其诱导大鼠牙髓组织异位成骨作用.方法:体外人牙髓细胞连续培养,MTT法、碱性磷酸酶(ATP)检测法比较不同浓度BMP-7对体外人牙髓细胞增殖及ALP活性的影响.将BMP-7处理过的大鼠牙髓组织移植到同种异体大鼠的肾被膜下和头部皮下,分别在术后10、20 d观察移植组织的钙化情况.结果:60μg/L的rhBMP-7可以显著地刺激体外培养的人牙髓细胞增殖,同时提高细胞ALP活性.将用此浓度处理过的大鼠牙髓组织移植后数天,移植组织会在其诱导下产生不同程度的钙化.结论:BMP-7可诱导大鼠牙髓组织异位成骨.     

氢氧化钙调节骨代谢的体外研究

目的　观察氢氧化钙对骨组织成骨活性的影响 ,为根尖周病药物治疗学提供实验依据。方法　利用与牙槽骨生物学特点相似的小鼠颅骨建立体外培养模型 ,观察氢氧化钙作用下骨组织碱性磷酸酶 (alkalinephosphatase ,ALP)分泌活性及无机磷含量的变化。结果　适当浓度的氢氧化钙可以提高成骨细胞ALP的分泌活性 ,同时培养基中无机PO4 3 浓度也呈现有意义的变化。结论　Ca(OH) 2具有激活成骨细胞钙化酶活性、增加局部环境中PO4 3 浓度的作用 ,使矿物沉积更易于发生 ,促进根尖病变修复。     

尼古丁对大鼠牙槽骨内ALP和DMP1 C末端表达的影响

目的:观察尼古丁对大鼠牙槽骨内碱性磷酸酶(ALP)和牙本质基质蛋白1(DMP1)C末端表达的影响. 方法:将20只5周龄健康雄性Wistar大鼠随机等分为实验组和对照组,每组再随机等分为30天和60天两个亚组,实验组每天腹腔注射尼古丁0.73 mg·kg-1. 分别使用钙钴法和免疫组化法检测ALP和DMP1 C末端在大鼠牙槽骨内的表达. 结果: 对照组:ALP和DMP1 C末端都为深棕色线形表达于牙槽骨的钙化前缘, 形成明显的矿化条带;ALP和DMP1 C末端分别为棕色沉淀和棕黄色颗粒状密布于骨细胞周围.实验组:ALP和DMP1 C末端表达部位同对照组,表达强度减弱;相对于30天组,60天组变化更明显. 结论:尼古丁可能通过抑制大鼠牙槽骨内ALP和DMP1 C末端的表达,抑制大鼠牙槽骨的矿化.     

氢氧化钙对牙髓碱性磷酸酶活性的作用

氢氧化钙可促进牙髓、牙本质修复,但作用机制不清楚。本文观察了氢氧化钙、氯化钙和氢氧化钡对提取的人牙髓组织ALP的体外水解作用和对牙髓细胞ALP活性的作用,结果显示,氢氧化钙可激活ALP的体外水解和牙髓细胞ALP活性,氯化钙对两种反应均表现抑制作用,氢氧化钡激活ALP的体外水解作用,但抑制牙髓细胞ALP活性。     

联合应用柚皮苷及黄芩苷对人牙周膜细胞生物学活性的影响

目的:观察中药有效成分柚皮苷和黄芩苷联合应用对人牙周膜细胞(hPDLCs)生物学活性的作用。方法:用酶结合组织块法原代培养hPDLCs;通过MTT法、酶联免疫吸附法、诱导矿化实验测定二者配比之后对hPDLCs增殖、Ⅰ型胶原蛋白的表达、碱性磷酸酶(ALP)活性及钙化结节形成的影响。结果:1.0 mg/L的柚皮苷与0.1 mg/L黄芩苷配伍对细胞增殖、Ⅰ型胶原蛋白表达、ALP活性以及矿化的促进作用明显。结论:柚皮苷与黄芩苷配伍组合可增强hPDLCs的成骨能力。     

牙本质非胶原蛋白对人牙髓干细胞增殖活性及矿化能力的影响

目的：明确牙本质非胶原蛋白（dentin non—collagenous proteins,dNCPs）对人牙髓干细胞（human dental pulp stemcells,hDPSCs）增殖及矿化能力的影响。方法：通过细胞活性噻唑蓝（MTT）比色法、碱性磷酸酶（ALP）活性检测、茜素红钙化结节染色和氯代十六烷基吡啶定量分析钙离子浓度,检测10¨g／mLdNCPs对hDPSCs增殖和矿化能力的影响。结果：dNCPs分别诱导1、3、5、7、9d,人牙髓干细胞增殖活性与对照组相比无显著性差异（P〉0．05）;诱导3、5、7d时,人牙髓干细胞ALP活性明显上调,与对照组相比有统计学差异（P〈0．01）;诱导2周后,茜素红染色显示10μg／mLdNCPs组出现较大钙化结节,定量分析显示,其形成钙化结节的能力明显高于对照组（P〈0．001）。结论：10μ∥mLdNCPs可明显促进人牙髓干细胞的矿化能力,对其增殖活性的影响则不明显。     

rhBMP-2和FGF-2对成骨细胞矿化及ENPP1、ANK、TNAP表达的影响

目的:研究重组人骨形态发生蛋白(rhBMP-2)和重组人碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)对成骨细胞(MC3T3-E1 Subclone 14)矿化及焦磷酸合成酶(ENPP1)、跨膜蛋白(ANK)和组织非特异性碱性磷酸酶(TNAP)表达的影响,探讨生长因子影响细胞矿化的机制。方法:将MC3T3-E1 Subclone 14细胞分成3组:成骨细胞诱导液(OS)成骨诱导培养组(对照组),OS与rhBMP-2培养组(rhBMP-2组),OS与FGF-2培养组(FGF-2组)。培养12 d后进行ALP活性检测及茜素红染色,实时荧光定量PCR检测矿化相关基因ENPP1、ANK和TNAP表达的差异。结果:rhBMP-2组ALP活性以及钙化结节明显高于对照组,ENPP1、ANK和TNAP均高表达;FGF-2组ALP活性以及钙化结节明显低于对照组,ENPP1和ANK呈高表达,TNAP低表达。结论:rhBMP-2和FGF-2通过调节ENPP1、ANK和TNAP的表达变化来影响骨的矿化。     

PGE_2对鼠头盖骨培养上清中ALP活性的作用

目的 :观察不同浓度的PGE2 对骨器官培养上清中ALP活性的作用。方法 :分离培养仔鼠 (1～3d)头盖骨 ,检测培养上清中ALP活性。结果 :10～ 10 0 μg/LPGE2 抑制ALP活性 ,1.0 μg/LPGE2 对ALP活性无明显作用 ,0 .0 1～ 0 .1μg/LPGE2 对ALP活性有刺激作用。结论 :PGE2 对骨器官培养上清中ALP活性的作用取决于其局部浓度。     

透明质酸抑制下颌骨髁突软骨钙化的实验研究

目的：探究透明质酸（HA）对下颌骨髁突软骨钙化的影响及其机制。方法：取新生小鼠（3 d）的髁突软骨及长骨软骨分别置于空白（培养对照组）和加有 HA（HA 组）的培养基中行小组织块培养,分别培养6周后,HE、茜素红、碱性磷酸酶（ALP）染色观察2组软骨组织的钙化情况,免疫组化观察 VEGF、MMP-13蛋白表达情况。结果：培养对照组髁突软骨内观察到钙化、基质中 VEGF 和 MMP-13表达阳性以及阳性细胞较多。HA 组未观察到髁突和长骨软骨内成骨和钙化发生,但观察到软骨表面积的增大,VEGF 及 MMP-13在软骨细胞基质内表达阴性,阳性细胞率减少（P ＜0．05）。结论：在体外培养环境下,HA 可以抑制下颌骨髁突软骨钙化,其机制可能是抑制了 VEGF 及 MMP-13的表达。     

成骨生长肽对体外人牙髓细胞增殖和矿化作用的影响

目的 观察成骨生长肽(OGP)对体外人牙髓细胞增殖和矿化作用的影响.方法 酶消化组织块法体外培养人牙髓细胞(hDPCs),倒置相差显微镜观察hDPCs的形态.CCK-8、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测筛选最佳浓度OGP;最佳浓度组、对照组、单纯矿化液组和含最佳浓度的矿化液组做茜素红、Von Kossa染色和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测.结果 酶消化组织块法可以良好的体外培养hDPCs;OGP浓度在10-7 ～ 10-11 mol/L均能促进hDPCs增殖和ALP活性:促增殖最佳浓度为10-10 mol/L,随时间延长,与10-9 mol/L浓度组间差异无统计学意义;OGP浓度为10-9 mol/L时能显著增强ALP活性.茜素红和Von Kossa染色观察第14、21天,四组均有钙化结节形成,联合组结节最大,数量最多;RT-PCR结果显示第7、14、21天,联合组的Ⅰ型胶原、牙本质涎磷蛋白(DSPP)和骨钙素(OCN)的mRNA表达量均高于其他各组(P ＜ 0.01).结论 OGP能促进体外hDPCs的增殖和分化,结合两者最优浓度为10-9 mol/L;茜素红和Von Kossa染色可以观察钙化结节形成过程;OGP联合矿化诱导液可以显著提高体外hDPCs的矿化.     

芒柄花素促进牙囊干细胞成骨向分化

目的:研究芒柄花素对牙囊干细胞(human dental follicle stem cells, hDFSCs)成骨分化的影响。方法:首先对hDFSCs进行分离、培养及鉴定,并使用含不同浓度芒柄花素(0、0.1、1、10μmol/L)培养基培养细胞。通过CCK-8实验、结晶紫染色和活/死细胞荧光染色评估细胞的活性状况;通过细胞骨架荧光染色观察细胞骨架状况;采用RT-qPCR检测细胞成骨相关基因的表达变化;利用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色及活性检测法评估细胞成骨分化过程中ALP活性的影响;通过茜素红染色法评估细胞成骨分化过程中钙化结节数量的影响。结果:hDFSCs具有干细胞特性;不同浓度的芒柄花素对hDFSCs活性无显著性影响;1μmol/L的芒柄花素可显著促进Runx2、OCN、Col-Iα1的mRNA表达;并能够提高的细胞内ALP活性和钙化结节的数量。结论:1μmol/L芒柄花素可促进hDFSCs的成骨分化。     

纤维蛋白粘合胶对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的：探讨纤维蛋白粘合胶（FG）对牙周膜细胞（PDLCs）增殖和碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法：应用细胞培养技术,噻唑盐比色测定法（MTT法）和酶动力学方法,观察FG对PDLCs的增殖作用和时间效应以及ALP活性的作用。结果：FG组的PDLCs增值和ALP活性较对照组均有显著升高,且在作用的第1天就显著促进了细胞的增殖。结论：FG可促进PDLCs的增殖和ALP活性。     

神经生长因子对山羊骨髓间充质干细胞向成骨分化的调节作用

目的:研究神经生长因子(NGF)对山羊骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的调节作用. 方法:体外培养山羊BMSCs,流式细胞仪鉴定表面标志物;将第3 代BMSCs分为空白对照组、成骨诱导对照组、NGF组和实验组,检测各组碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OC)水平、应用von Kossa染色的方法比较各组细胞成骨性能. 结果:流式细胞术测得各组细胞均呈CD90、CD105强阳性表达,CD34、CD45阴性.实验组ALP和OC表达明显高于其它3 组,差异有显著性意义(P<0.05).成骨诱导对照组细胞von Kossa染色阳性,可见黑色钙化结节,实验组较成骨诱导对照组钙化结节数目明显增多,面积增大.而NGF组各项指标与空白对照组无明显差异.结论:单纯使用NGF并不能诱导山羊BMSCs向成骨细胞转化,但NGF对山羊BMSCs向成骨细胞分化过程具有明显的促进作用.     

骨形成蛋白—2和碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的联合效应

目的了解重组人骨形成蛋白-2（rhBMP-2）和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)单独和联合作用对人牙周膜细胞（PDLC）碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法体外培养人PDLC,分别用不同浓度的rhBMP-2和bFGF单独或联合作用,用酶动力学方法检测PDLC的ALP活性。结果50～200μg/L浓度的rhBMP-2可显著增强人PDLC的ALP活性（P<0.01）,而10μg/L浓度的bFGF可显著抑制人PDLC的ALP活性(P<0.01),rhBMP-2和bFGF联合作用仍可较明显地增强人PDLC的ALP活性（P<0.05）。结论rhBMP-2和bFGF联合应用可增强人PDLC的ALP活性。     

BMP-2与TNF-α对成骨细胞增殖和分化作用的比较分析

目的 通过BMP-2及TNF-α分别刺激原代培养的成骨细胞,探讨BMP-2及TNF-α对成骨细胞增殖和分化不同作用并进行比较分析。方法 在无菌条件下手术切取Wistar（1周龄）大鼠颅骨并提取成骨细胞,原代细胞培养、传代、纯化、扩增并进行鉴定。采用BMP-2及TNF-α进行诱导,观察成骨细胞增殖,用利用MTT法检测其变化,利用PNPP偶氮法（4-硝基苯基磷酸二钠盐）检测成骨细胞碱性磷酸酶（ALP）活性。结果 通过ALP染色和钙化的细胞实验均为阳性,证明体外培养扩增的细胞具有典型的成熟成骨细胞的特征。采用BMP-2及TNF-α来诱导大鼠成骨细胞与对照组的差异有统计学意义（P＜0.05）。细胞增殖活性及ALP活性随BMP-2浓度的升高而增加,而随TNF-α浓度的升高而降低。结论 BMP-2转染后的成骨细胞增殖和分化功能都有所提高。而TNF-α对成骨细胞的增殖和分化均有抑制作用。对体外培养的成骨细胞,BMP-2和TNF-α分别起到促进和抑制作用。