新型PDE4抑制剂Roflupram改善阿尔茨海默病大鼠的认知障碍及神经炎症

目的验证新型PDE4抑制剂罗氟普兰(roflupram)能否改善Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病大鼠的学习记忆障碍,及可能的机制是否与缓解小胶质细胞激活引起的炎症相关。方法 SD大鼠双侧海马CA1区微量注射Aβ25-35(10μg)造模。动物分组包括:假手术对照组、Aβ25-35注射组、Aβ25-35注射+盐酸多奈哌齐组、Aβ25-35注射+Rolipram组、Aβ25-35注射+Roflupram低、中、高剂量。连续灌胃给药14 d后,进行Morris水迷宫实验,20 d后进行避暗实验。采用Western blot法检测海马c AMP下游信号分子(p-PKA、p-CREB),前致炎因子(i NOS、COX-2、TNF-α、IL-1β),胶质细胞激活标记物(GFAP、Iba-1),炎症相关蛋白(p-p38、核内NF-κB p65)的蛋白水平变化,并用PCR的方法分析海马内i NOS、COX-2、TNF-α和IL-1βmRNA水平的变化。结果行为学结果显示,Roflupram能明显改善由Aβ25-35造成大鼠的空间学习记忆能力和被动回避学习记忆能力障碍。分子生物学分析的结果如下:与Aβ25-35注射组比较,各药物处理后均可以使海马内p-CREB、p-PKA蛋白表达水平不同程度的升高,使NF-κB p65(核内)、p-p38、i NOS、COX-2、TNF-α、IL-1β、GFAP和Iba-1的蛋白水平不同程度的降低,i NOS、COX-2、TNF-α和IL-1βmRNA水平下降。结论 Roflupram能够改善Aβ25-35诱导痴呆大鼠的学习记忆功能障碍,该效应与抑制小胶质细胞的活化、减少炎性因子的表达,从而缓解神经炎症有关。     

参乌胶囊对β-淀粉样肽大鼠模型脑内炎症反应的影响

目的:观察中药新复方参乌胶囊对Aβ25-35肽段海马注射大鼠模型脑内炎症反应的影响.方法:大鼠单侧(左侧)海马内注射Aβ25-35,用免疫组化方法观察海马内小胶质细胞和星形胶质细胞数量,放免法检测海马内炎性因子IL-1β和TNFα含量,用尼氏染色法检测海马神经元数量.结果:参乌胶囊灌胃给药2周,能够明显抑制Aβ模型大鼠海马内胶质细胞的活化状态,减少小胶质细胞和星形胶质细胞的数量和面积,并且减少炎性因子IL.1β和TNFα的产生,减轻神经元损伤.结论:参乌胶囊能够抑制Aβ引起的神经炎性反应,起到保护神经元的作用.     

当归芍药散活性部位JD-30对淀粉样β蛋白片段25-35抑制大鼠海马脑片CA1区长时程增强的改善作用

目的研究当归芍药散改善学习记忆能力的物质基础和作用机理。方法采用细胞外微电极记录技术,记录大鼠海马脑片CA1区群峰电位(PS)幅值和高频刺激诱发LTP后PS的增幅。结果用含当归芍药散活性部位JD-30(25,50和100mg.L-1)的人工脑脊液灌流大鼠海马脑片,其CA1区的PS幅值无明显变化。用相同浓度的JD-30孵育海马脑片90min以上并持续灌流,其CA1区高频刺激后的PS增幅与空白对照组相比无明显差异。而用Aβ25-35200nmo.lL-1处理的海马脑片CA1区高频刺激后的PS增幅受到明显抑制;若同时给予Aβ25-35和上述浓度的JD-30处理海马脑片,CA1区高频刺激后的PS增幅较Aβ25-35组升高,其中JD-30100mg.L-1组的PS增幅达到正常对照组水平。提示JD-30对正常海马脑片CA1区的基础突触传递和LTP没有影响,但可改善Aβ25-35所抑制的LTP。结论JD-30可改善神经突触可塑性,拮抗Aβ对LTP的抑制作用可能是其益智机制之一。     

表没食子儿茶素促进Nrf2的核转位减轻Aβ_(25-35)对SH-SY5Y细胞的损伤

目的研究表没食子儿茶素(epigallocatechin,EGC)对Aβ_(25-35)损伤SH-SY5Y细胞的保护作用及机制。方法采用Aβ_(25-35)损伤SH-SY5Y细胞,MTT和LDH法,考察EGC对SH-SY5Y细胞活力的影响。应用DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS水平,通过测定细胞内SOD、GSH-Px和MDA活性,考察细胞氧化应激水平。Western blot测定细胞中Nrf2、NQO1、HO-1、Prdx6和Trx1蛋白含量。结果 Aβ_(25-35)损伤SH-SY5Y细胞,导致细胞存活率明显降低。5、10、20μmol·L~(-1) EGC能够减轻Aβ_(25-35)诱导的SH-SY5Y细胞损伤及LDH释放。而且EGC能够减少Aβ_(25-35)诱导的细胞内ROS水平的增加,减轻氧化应激损伤。同时,EGC能够明显增强Aβ_(25-35)损伤后Nrf2、NQO1、HO-1、Prdx6和Trx1的表达。结论EGC能够抑制Aβ_(25-35)诱导的SH-SY5Y细胞损伤,通过促进Nrf2核转位,提高抗氧化水平,降低Aβ_(25-35)神经毒性。     

基于NLRP3炎性小体通路研究葡萄籽原花青素对AD大鼠的保护作用

目的通过双侧海马注射Aβ_(1~42)制备大鼠AD模型,探讨葡萄籽原花青素(GSP)抑制小胶质细胞NLRP3炎性小体通路保护AD大鼠学习记忆能力的可能机制。方法双侧海马注射Aβ_(1~42)建立AD大鼠模型,造模48 h后开始灌胃给予GSP 100,200和400 mg·kg~(-1),假手术组和模型组灌胃给予相同容量的生理盐水。药后通过新物体识别实验和Morris水迷宫实验观察大鼠的学习记忆能力,WB法检测各组大鼠脑组织NLRP3的含量,ELISA法检测大鼠海马和皮质IL-1β和IL-6的含量。结果 GSP各剂量均可明显增加AD大鼠的新物体识别指数。Morris水迷宫实验中GSP对定位航行实验的逃避潜伏期无显著影响;GSP各剂量组可明显缩短空间探索实验的大鼠探索潜伏期,并且200和400 mg·kg~(-1)可显著性增加AD大鼠进入平台区域的次数,100 mg·kg~(-1)可增加AD大鼠进入平台区域的次数,但无统计学差异。GSP可明显减少大鼠脑组织的NLRP3表达,进而减少海马和皮质中IL-1β和IL-6含量。结论 GSP对Aβ_(1~42)诱导的AD大鼠学习记忆障碍具有明显的改善作用,其机制可能是通过抑制脑组织NLRP3炎性小体通路,减少炎性因子IL-1β和IL-6的产生,减轻Aβ_(1~42)诱导的炎症反应而实现。     

地塞米松和淀粉样β蛋白联合作用致大鼠学习记忆能力下降

目的研究地塞米松(DEX)和淀粉样β蛋白(Aβ)联合作用对大鼠学习记忆能力的影响。方法①整体实验SD大鼠摘除肾上腺后,在sc给予DEX 0.2 mg.kg-1〔糖皮质激素(GC)维持对照组〕维持GC水平的基础上,按分组再分别sc给予DEX 1和5 mg.kg-1,Aβ25-355μg,DEX1+Aβ25-35和DEX5+Aβ25-35组,Morris水迷宫检测逃避潜伏期和游泳距离;HE染色观察海马CA1区病理变化。②体外实验海马神经元分为正常对照组,DEX 1和10μmol.L-1组,Aβ25-35 1和5μmol.L-1组(,DEX 1+Aβ25-35 1),(DEX 1+Aβ25-35 5),(DEX 10+Aβ25-35 1)和(DEX 10+Aβ25-35 5)组,MTT法检测细胞存活率,连续性监测法检测海马神经元乳酸脱氢酶(LDH)释放率;碱性单细胞凝胶电泳检测DEX 10μmol.L-1组,Aβ25-35 5μmol.L-1组,DEX 10+Aβ25-35 5和H2O2 100μmol.L-1组海马神经元拖尾长度。结果①整体实验与GC维持对照组相比,DEX 1 mg.kg-1组的逃避潜伏期和游泳距离差异无统计学意义,DEX 5 mg.kg-1和Aβ25-35组逃避潜伏期和游泳距离有升高趋势,但差异无显著性;DEX+Aβ25-35组逃避潜伏期和游泳距离显著延长(P<0.05)。与单用DEX和单用Aβ25-35组相比,DEX+Aβ25-35组海马CA1区神经元数目明显减少、排列紊乱、核固缩和浓染。②体外实验与正常对照组相比,DEX1和10μmol.L-1组及Aβ25-351μmol.L-1的细胞存活率以及LDH释放率差异无显著性,Aβ25-35 5μmol.L-1的LDH释放率升高(P<0.05);与相同浓度的单用DEX和单用Aβ25-35组相比,同时给予DEX和Aβ25-35后,细胞存活率显著降低,LDH释放率明显升高(P<0.05)。与正常对照组相比,单用DEX 10μmol.L-1组彗星拖尾长度无明显改变,单用Aβ25-35 5μmol.L-1彗星拖尾长度显著延长;与单用Aβ25-35组相比,DEX+Aβ25-35组彗星拖尾长度进一步延长(〔11.8±2.3)μm vs(9.8±1.8)μm,P<0.05〕。结论 DEX和Aβ联合作用致鼠学习记忆能力下降和海马组织损伤,此作用可能与DEX直接促进Aβ致海马神经元损伤有关。     

褪黑激素对β—淀粉样多肽25—35片段所致皮层海马神经细胞毒性损伤的防护作用

目的:观察褪黑激素对β-淀粉样多肽25-35片段(Nβ_(25-35)所致神经细胞毒性作用的影响.方法:用相衬倒置显微镜观察原代培养的神经细胞的形态;用噻唑兰(MTT)法、乳酸脱氢酶(LDH)测定及台盼兰染色观察神经细胞的存活情况.结果:Aβ_(25-35)(20μmol/L)可引起培养的神经细胞数量减少,部分突起消失;台盼兰着色细胞数增加;神经细胞增殖能力降低;培养上清液中LDH释放量增加;褪黑激素(Ⅰ,10μmol/L)可抑制Aβ_(25-35)诱导的上述毒性损伤.结论:Aβ_(25-35)对原代培养的皮质-海马神经细胞有直接的细胞毒作用,褪黑激素对Aβ_(25-35)所致神经细胞毒性损伤具有剂量依赖性的防护作用.     

艾司西酞普兰对Aβ25-35诱导的大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的研究艾司西酞普兰(escitalopram,ESC)对β-淀粉样肽片段(β-amyloid peptide,Aβ25-35)诱导的阿尔茨海默病海马神经元细胞损伤的保护作用,并探讨其可能机制。方法以Aβ25-35诱导大鼠海马神经元细胞建立阿尔茨海默病(alzheimer disease,AD)模型,随机分为空白对照组、Aβ组、不同ESC组(0.5、1.0、1.5μmol·L-1)、Aβ+不同ESC(0.5、1.0、1.5μmol·L-1)组。通过荧光显微镜观察腺病毒(adenoviruses-enhanced green fluorescent protein,Ad-EGFP)转染的神经元细胞形态,MTS法检测细胞活性,Western blot检测脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)的表达。结果与空白组比较,Aβ组及Aβ+不同浓度艾司西酞普兰组神经元细胞分支及长度均减少,细胞活力降低,差异有统计学意义(P<0.05),BDNF释放减少;与Aβ组比较,Aβ+不同ESC组神经元细胞分支数目及长度均增加,细胞活力上升,差异有统计学意义(P<0.05),BDNF释放增多。结论艾司西酞普兰能显著改善阿尔茨海默病模型神经元的存活率,发挥细胞保护作用,其机制可能是通过上调BDNF、减缓神经元退行性变以促进神经元的修复。     

蛇毒神经生长因子对PC12细胞凋亡的保护作用

目的 建立β-淀粉样蛋白诱导大鼠嗜铬瘤PC12细胞凋亡的体外AD细胞模型,研究蛇毒神经生长因子(NGF)的保护作用.方法 以荧光显微镜观察细胞形态变化,四唑氮蓝(MTT)法,乳酸脱氢酶(LDH)释放法,流式细胞术等检测凝聚态β-淀粉样蛋白毒性片断Aβ25-35诱导的PC12凋亡,同时检测蛇毒NGF的干预作用.结果 MTT法、LDH释放率显示凝聚态Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用呈剂量依赖,20μmol·L-1 Aβ25-35作用组细胞LDH释放率随NGF作用的浓度增高而降低;荧光显微镜观察20μmol·L-1 Aβ25-35作用于PC12细胞出现凋亡改变,NGF预处理细胞的形态明显改善;流式细胞仪分析,Aβ25-35作用PC12细胞凋亡率具有剂量依赖关系,100ng*mL-1NGF预处理的细胞凋亡率降低(P＜0.05).结论 凝聚态Aβ25-35对PC12 细胞具有毒性作用;蛇毒NGF有对抗Aβ25-35致PC12细胞凋亡的作用.     

阿魏酸钠对抗Aβ(25-35)致大鼠学习记忆障碍与IL-1β和p38MAPK表达的相关性探讨

目的研究阿魏酸钠(sod ium feru late)对抗Aβ25-35致大鼠学习记忆障碍与白介素-1β(IL-1β)和丝裂原激活的蛋白激酶p38(M itogen-activated prote in k inase,p38MAPK)表达的相关性。方法大鼠脑室内一次性注射Aβ25-35制备AD动物模型,通过大鼠行为学和海马CA1区的病理学改变观察阿魏酸钠的作用。W estern b lot和ELISA方法检测磷酸化p38MAPK和IL-1β蛋白表达量的变化。RT-PCR分析FasLmRNA表达水平。结果脑室内注射Aβ25-35可使大鼠出现明显的学习记忆障碍,即逃避潜伏期明显延长,原平台象限游泳时间占总游泳时间百分比明显降低。这些行为学的改变伴随有海马CA1区星形胶质细胞激活和浸润,IL-1β蛋白表达和FasL mRNA表达水平明显增加,海马CA1区锥体神经元损伤。另外,Aβ25-35也能引起磷酸化的p38MAPK蛋白表达明显增加。阿魏酸钠(50,100,250 mg.kg-1,连续应用4 wk)与阳性对照药布洛芬(15 mg.kg-1)均能明显对抗Aβ25-35所致大鼠学习记忆障碍,抑制Aβ25-35引起的IL-1β、磷酸化p38MAPK和FasL mRNA表达增加,海马CA1区锥体神经元的损伤和星形胶质细胞激活和浸润也被明显减轻。结论阿魏酸钠通过抑制Aβ25-35引起的海马炎症反应和p38MAPK活性,减轻大鼠海马锥体神经元的损伤,改善大鼠的学习记忆功能。     

N-乙酰基半胱氨酸对Aβ_(25-35)活化calpain活性的影响及可能机制

目的探讨N-乙酰基半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)对β淀粉样蛋白毒性片段25-35(Aβ_(25-35))活化calpain活性的影响及可能机制。方法运用Aβ_(25-35)来诱导皮质神经元的损伤,实验分为空白对照组、Aβ_(25-35)组、NAC与Aβ_(25-35)共同作用组,采用荧光酶标法检测calpain活性、氧自由基(H2O2)和线粒体膜电位;用化学发光法测定神经元内ATP水平。结果 Aβ_(25-35)(20μmol·L_(-1))作用12h可明显升高calpain活性;与Aβ_(25-35)处理组相比,NAC(10 mmol·L_(-1))预先作用24h,然后再与Aβ_(25-35)共同作用12h,可明显降低calpain活性;与空白对照组相比,Aβ_(25-35)处理组中的H_2O_2明显升高、线粒体膜电位和ATP水平明显下降;而与Aβ_(25-35)处理组相比,NAC预处理组中的H_2O_2水平下降、线粒体膜电位和ATP水平升高,这些差异皆有统计学意义。结论这些研究结果提示,NAC可能通过线粒体的保护作用来降低Aβ_(25-35)诱导的异常活化的calpain活性。     

RNA干扰高迁移率族蛋白1对Aβ_(25-35)刺激HT22细胞中晚期糖基化终末产物受体/Toll样受体4信号通路相关蛋白表达的影响

目的研究RNA干扰高迁移率族蛋白1(HMGB1)对β淀粉样蛋白片段25-35(Aβ25-35)刺激HT22细胞HMGB1、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、Tol样受体4(TLR4)、NF-κB、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等蛋白表达的影响。方法 Aβ25-350,2.5,5,10,20和40μmol·L-1作用HT22细胞24 h后,MTT法检测细胞存活,计算半数抑制浓度(IC50)。将对数生长期的HT22细胞分为5组:正常细胞对照组、Aβ25-3540μmol·L-1组、小干扰RNA(siRNA)50μmol·L-1组、siRNA或scramble siRNA+Aβ25-35组(HT22细胞转染si RNA或scramble si RNA 50μmol·L-1作用24 h后,再加入终浓度为40μmol·L-1人工合成的Aβ25-35处理24 h),显微镜观察细胞形态变化,免疫荧光检测HMGB1在细胞中位置的改变,Western印迹法检测细胞内HMGB1,RAGE,TLR4和NF-κB P65的表达,ELISA法检测细胞上清液中IL-1β和TNF-α的水平。结果Aβ25-35作用HT22细胞24 h,IC50为41.17μmol·L-1。后续采用Aβ25-3540μmol·L-1进行实验。Aβ25-3540μmol·L-1作用24 h后,细胞大量死亡,聚集成团,突起减少,细胞间隙增大,且HMGB1从核内转移至核外。细胞内的HMGB1,RAGE,TLR4和NF-κB P65表达均显著升高(P<0.05),细胞上清液中IL-1β和TNF-α的水平显著升高(P<0.05);经siRNA 50μmol·L-1处理24 h,可显著降低细胞内HMGB1,RAGE,TLR4和NF-κB P65的表达(P<0.05)及细胞上清液中IL-1β和TNF-α的水平(P<0.05)。结论 RNA干扰HMGB1可减少Aβ25-35刺激HT22细胞HMGB1,RAGE,TLR4和NF-κB P65的表达。     

下调蛋白激酶PINK1对Aβ_(25-35)所致阿尔茨海默病痴呆模型大鼠病理变化的影响

目的线粒体功能障碍是阿尔茨海默病(AD)发生发展过程中非常重要的机制之一。线粒体自噬可以清除受损的线粒体。磷酸酶及张力蛋白同源物诱导的蛋白激酶1(PINK1)是一种与线粒体自噬相关的蛋白激酶。本研究主要观察蛋白激酶PINK1对Aβ25-35所致阿尔茨海默病痴呆模型大鼠病理学的影响。方法体内采用采用5月龄雄性SD大鼠和同月龄纯合雄性PINK1-/-大鼠(SD背景),侧脑室注射Aβ25-35。采用Y迷宫、新物体辨别实验、避暗实验和Morris水迷宫实验考察学习记忆和认知能力,转棒实验和自发活动考察运动功能。ELISA检测大鼠海马炎症因子IL-18,IL-1β和TNF-α的含量,Western蛋白印迹法检测海马突触相关蛋白PSD95和SYP的表达,免疫荧光和Western蛋白印迹法检测Neun的表达。用线粒体分离试剂盒提取线粒体,观察LC3与线粒体共定位。体外采用si RNA下调PC12细胞PINK1表达,再加入Aβ25-35,确认PINK1下调后是否加重了Aβ25-35对细胞的损伤:观察细胞形态,考察细胞死亡率;JC-1染色考察线粒体膜电位;LPS作用于BV2细胞一定时间后,取条件培养基,加入PC12细胞(含PINK1 si RNA组),考察细胞死亡率,确认PINK1 si RNA组细胞是否对LPS诱导小胶质细胞所释放的炎症因子更敏感。结果行为学实验结果显示,PINK1-/-对动物的运动能力没有影响,但在避暗实验中与SD和SD+Aβ25-35组大鼠相比,PINK1-/-+Aβ组大鼠错误次数显著增加。与SD组大鼠相比,PINK1-/-、PINK1-/-+Aβ25-35组SYP,PSD95和Neun的表达显著减少;炎症因子IL-18,IL-1β和TNF-α的含量显著增加;PINK1-/-组LC3与线粒体的共定位显著减少。PINK1-/-+Aβ组LC3与线粒体的共定位显著增加。体外实验结果显示,与单独孵育Aβ25-35组细胞相比,PINK1沉默后给予Aβ25-35细胞生存率显著降低;线粒体膜电位显著降低;且PINK1沉默后给予条件培养基,细胞生存率也显著降低。结论PINK1敲除加重了Aβ25-35所致AD模型大鼠长时记忆障碍,加重Aβ25-35所致AD痴呆模型大鼠突触功能障碍,神经元损伤以及神经炎症。PINK1敲除抑制了部分线粒体自噬,加重了Aβ25-35对细胞的损伤,且对LPS诱导小胶质细胞所释放的炎症因子更敏感。     

阿托伐他汀对Aβ_(1-42)诱导的大鼠AD模型保护作用及其机制研究

目的观察阿托伐他汀(atorvastatin,Ato)对Aβ1-42诱导的AD大鼠学习记忆功能、炎症因子释放以及突触素(synaptophysin,SYP)和磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达的影响及机制。方法选用健康SD大鼠60只,随机分为4组:正常对照组、Aβ1-42组、Ato+Aβ1-42组、Ato组,每组15只,采用侧脑室注射给药。应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测AD大鼠海马组织上清液内白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)含量;Morris水迷宫实验观察AD大鼠的行为学变化;Western blot法检测AD大鼠海马突触素(synaptophysin,SYP)、pJNK蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,脑室注射Aβ1-42后大鼠出现明显的学习记忆障碍,即逃避潜伏期明显延长,原平台象限游泳时间占总游泳时间百分比明显降低(P<0.01);海马组织上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量明显增加(P<0.01);SYP蛋白表达量明显减少(P<0.01);pJNK蛋白表达水平明显增加(P<0.01)。Ato给药后可明显对抗Aβ1-42引起的大鼠学习记忆障碍,抑制Aβ1-42引起的IL-1β、IL-6、TNF-α含量(P<0.05,P<0.01)、SYP蛋白表达增加(P<0.01)及p-JNK蛋白表达水平明显减少(P<0.05)。结论 Ato能够明显改善Aβ1-42引起的AD大鼠学习记忆障碍、炎症细胞因子释放增加及SYP蛋白表达降低,这种保护作用可能与Ato抑制JNK信号转导通路的激活有关。     

Aβ1-42诱导阿尔茨海默病模型大鼠海马内细胞因子表达变化的研究*

目的探讨β淀粉样蛋白（Aβ）1-42诱导的阿尔茨海默病（AD）模型大鼠海马内致炎细胞因子和抗炎细胞因子表达的变化。方法24只SD大鼠随机分为正常对照组（intact组）、PBS对照组和AD模型组。PBS对照组为海马CA1区注射PBS,AD模型组为海马CA1区注射Aβ1-42。应用Morris水迷宫测试大鼠逃避潜伏期;Nissl染色观察海马CA1区神经元的损害情况;Western blot方法检测海马组织中淀粉样前体蛋白（APP）以及蛋白质磷酸酶-2A （PP2A）的表达量;Real-time PCR法检测海马内细胞因子白介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子（TNF）-α、干扰素（IFN）-γ、IL-4、IL-10和转化生长因子（TGF）-β的mRNA水平。结果大鼠双侧海马内注射Aβ1-42后,动物的空间学习记忆能力降低、海马CA1区神经元胞体丢失、海马内APP表达上调而PP2A表达下调。AD模型大鼠的海马内,致炎细胞因子IL-1β、TNF-α和IFN-γ的mRNA表达上调,而抗炎细胞因子IL-4、IL-10和TGF-β的mRNA表达下调。结论 AD大鼠脑内存在致炎/抗炎失衡的神经炎症,它参与了AD的发病机制。     

复方脑康胶囊对β-淀粉样肽诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用研究

目的:研究复方脑康胶囊对β-淀粉样肽(Aβ)25-35(Aβ25-35)诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用。方法:将SH-SY5Y细胞接种后分为对照、Aβ25-35(25μmol.L-1)和复方脑康胶囊(0.725g.mL-1)+Aβ25-35(25μmol.L-1)组。通过测定细胞存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、细胞轴突长度、胞体面积,观察复方脑康胶囊对Aβ导致神经毒性的保护作用。结果:与对照组比较,Aβ25-35组SY5Y细胞的轴突长度和胞体面积均较小,MTT代谢率降低,LDH漏出率升高,而加入复方脑康胶囊水提液后,可使上述指标恢复或接近正常。结论:复方脑康胶囊具有神经保护作用,可减轻Aβ导致的神经毒性。     

知母皂苷对Aβ_(25-35)引起的巨噬细胞炎症介质释放的抑制作用及信号转导机制

目的观察知母皂苷(SAaB)是否能对抗淀粉样β蛋白片段25-35(Aβ25-35)引起的巨噬细胞炎症介质释放并探讨其信号转导通路的影响。方法小鼠腹腔巨噬细胞培养24 h,加入不同浓度SAaB(10、30和100μmol·L-1)或加入不同的阻断剂(诱导性一氧化氮合酶阻断剂SMT、MEK1的特异性阻断剂PD98059、p38MAPK特异性阻断剂SB203580和PI3K特异性阻断剂LY294002),之后加入Aβ25-35(20μmol·L-1)继续培养。Aβ25-35作用2 h后,采用Westernblot观察巨噬细胞磷酸化Akt/PKB蛋白表达水平的改变。Aβ25-35作用48 h后,取巨噬细胞培养上清液分别测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和一氧化氮(NO)的含量变化。结果 PD98059和LY294002均可明显抑制Aβ25-35引起的巨噬细胞TNF-α产生增加和磷酸化Akt/PKB表达明显增加。SMT可完全对抗Aβ25-35引起的NO释放增加。SAaB可明显抑制Aβ25-35引起的TNF-a和NO的产生增加,并呈明显的浓度依赖性。SAaB也可明显抑制Aβ25-35引起磷酸化Akt/PKB表达增加。结论 SAaB能够明显的抑制Aβ25-35引起的巨噬细胞炎症因子释放,这种抑制作用部分通过SAaB抑制Akt/PKB信号转导通路产生。     

瓜子金皂苷己抑制IL-1β的释放及其机制研究

目的研究瓜子金皂苷己(polygalasaponin F,PS-F)对LPS诱导的BV2小胶质细胞炎症反应中炎性因子IL-1β释放的影响及其作用机制。方法实验分为空白组、LPS模型组、LPS+PS-F (0.10、1.00、10.00μmol·L~(-1))给药组。运用ELISA法检测培养液上清中IL-1β的分泌量;real-time PCR检测IL-1βmRNA的表达;Western blot检测IL-1β、NLRP3、caspase-1、ASC、caspase-11的蛋白表达量。结果 ELISA、real-time PCR和Western blot结果均表明,PS-F能有效抑制LPS诱导BV2小胶质细胞释放炎性因子IL-1β(P<0.01,P<0.05);Western blot结果表明,PS-F可以下调NLRP3、caspase-1、ASC、caspase-11的蛋白表达,其中ASC、caspase-11所得结果差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PS-F可以有效抑制LPS诱导BV2细胞炎症反应中炎性因子IL-1β的释放,且与下调NLRP3炎性小体、抑制caspase-11的激活有关。     

高脂血症与Aβ的协同作用促进引发阿尔茨海默症

目的探讨高脂血症与β样淀粉蛋白(amyloid-beta peptides,Aβ)在衰老大鼠发生阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)时的相互作用及病理变化。方法 70只♂SD大鼠按体重随机分为7组,除sham组及Aβ_(25-35)、HLD组外,其余大鼠均给予皮下注射D-半乳糖(D-gal)6周,制备衰老模型;在此基础上给予高脂饲料,制备高脂血症模型,以及双侧海马CA1区定位注射凝聚态Aβ_(25-35)构建衰老期高脂血症伴发AD的复合模型。采用Morris水迷宫、尼氏染色、Western blot、免疫组织化学染色等方法,观察高脂血症对老年AD大鼠学习记忆、海马神经元凋亡以及tau蛋白过度磷酸化特异性位点改变的影响。结果在Morris水迷宫实验中,与sham组相比,Aβ_(25-35)组、D-gal+Aβ_(25-35)组以及D-gal+Aβ_(25-35)+HLD组大鼠在目标象限停留时间明显减少(P<0.01)、穿越平台的次数也减少(P<0.01),而D-gal组、HLD组、D-gal+HLD组与sham组相比差异无显著性。尼氏染色中,与sham组相比,Aβ_(25-35)组、D-gal+Aβ_(25-35)组以及D-gal+Aβ_(25-35)+HLD组海马神经元凋亡率明显增多(P<0.01);与Aβ_(25-35)组相比,D-gal+Aβ_(25-35)组神经元凋亡率无明显变化,但D-gal+Aβ_(25-35)+HLD组神经元凋亡率明显增加(P<0.01);与Dgal+Aβ_(25-35)组相比,D-gal+Aβ_(25-35)+HLD组神经元凋亡率明显增多(P<0.01)。Western blot中,与sham组、Aβ_(25-35)组、Dgal组、HLD组、D-gal+Aβ_(25-35)组以及D-gal+HLD组相比,Dgal+Aβ_(25-35)+HLD组大鼠tau蛋白Thr181位点的磷酸化明显增加(P<0.01)。结论高脂血症对老年大鼠的学习记忆能力以及抗氧化能力无明显影响;高脂血症可与Aβ协同作用,加重Aβ对神经元的损伤,并促进tau蛋白Thr181位点的过度磷酸化,是引发AD的危险因素。