腺苷对小鼠非特异免疫和体液免疫的抑制作用

腺苷(adenosine,Ade)1.3,13,130mg·kg~(-1)抑制小鼠全血白细胞和腹腔巨噬细胞的吞噬功能;减少小鼠血清溶菌酶的含量;降低小鼠血清溶血素的生成和空斑形成细胞的溶血能力。双嘧达莫10mg·kg~(-1)减弱Ade 130mg·kg~(-1)的体液免疫抑制作用;氨茶碱100mg·kg~(-1)可减弱Ade 130mg·kg~(-1)对脾空斑形成细胞溶血能力和外周血白细胞吞噬功能的抑制作用。     

姬松茸多糖ABP-AW1对免疫功能低下小鼠的免疫增强作用

目的探讨低分子质量姬松茸多糖ABP-AW1对免疫功能低下小鼠的免疫增强作用。方法 ICR小鼠ip给予环磷酰胺80 mg·kg~(-1),连续3 d,制备免疫功能低下小鼠模型;随后分别ig给予ABP-AW1 125,250和500 mg·kg~(-1),每天1次,连续7 d。治疗结束后处死小鼠,检测小鼠胸腺指数和脾指数,碳廓清实验检测小鼠巨噬细胞吞噬功能,MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖反应,ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞分泌白细胞介素2(IL-2)和干扰素γ(IFN-γ)水平,流式细胞术检测小鼠脾T淋巴细胞亚群CD4~+/CD8~+比值。结果与正常对照组比较,免疫低下模型小鼠胸腺指数和脾指数以及巨噬细胞吞噬指数均降低(P<0.05);ABPAW1 250和500 mg·kg~(-1)可显著提高免疫低下模型小鼠胸腺指数和脾指数(P<0.05),升高巨噬细胞吞噬指数(P<0.05)。与正常对照组比较,模型小鼠伴刀豆凝集素A(Con A)和脂多糖(LPS)分别诱导的T淋巴细胞增殖反应和B淋巴细胞增殖反应降低,脾细胞分泌IL-2和IFN-γ水平降低,脾细胞CD4~+/CD8~+比值下降(P<0.05);与模型组比较,ABP-AW1 250和500 mg·kg~(-1)可促进免疫低下模型小鼠Con A和LPS分别诱导的T淋巴细胞增殖反应和B淋巴细胞增殖反应(P<0.05),显著增加脾细胞IL-2和IFN-γ水平(P<0.05),明显逆转免疫低下小鼠脾细胞CD4~+/CD8~+比值的下降(P<0.05)。结论 ABP-AW1对免疫功能低下小鼠具有一定的免疫增强作用。     

拟人参皂苷F11抗阿尔茨海默病作用的Aβ相关机制

目的阿尔茨海默病(AD)是一种常见的神经退行性疾病,其主要病理特征为Aβ过度沉积形成的老年斑、Tau蛋白过度磷酸化形成的神经纤维缠结等。拟人参皂苷F11(PF11)是西洋参茎叶中分离提取的一种三萜皂苷化合物。我们前期研究结果显示,PF11具有拮抗东莨菪碱、D-半乳糖和LPS所致实验动物的认知障碍的作用,同时显著降低过度磷酸化Tau并减轻神经炎症,提示PF11可能通过干预AD发病的多种机制来实现改善认知障碍的作用。本文进一步评价PF11对AD模型动物认知功能障碍的改善作用,尤其对Aβ的产生及清除的相关机制。方法 (1) 6月龄和12月龄APP/PS1转基因小鼠灌胃给予PF11(8 mg·kg~(-1)),分别在给药3个月、1个月后进行行为学实验,并检测小鼠海马和皮质脑区中淀粉样蛋白前体蛋白(APP)及Aβ1-40的表达水平。(2)灌胃给予6月龄雄性SAMP8快速衰老小鼠PF11(2,8和32 mg·kg~(-1)),在给药3个月后进行行为学实验,并检测APP、β-分泌酶(BACE1)、晚期内含体Rab7和循环内含体Rab11的表达。(3)构建p EGFP-Rab5及p RFP-Rab7质粒并转染至原代小胶质细胞中,观察Rab转换。考察PF11对小胶质细胞吞噬、降解Aβ寡聚体(o Aβ)作用的影响,研究PF11对小胶质细胞内吞-自噬-溶酶体系统的保护作用。结果 (1) PF11给药可明显改善APP/PS1转基因小鼠的学习记忆能力,并可显著减少小鼠海马和皮质脑区中APP与Aβ1-40的表达水平。(2) PF11(8和32 mg·kg~(-1))可显著改善SAMP8小鼠的认知能力,显著减少小鼠海马和皮质脑区中Aβ的沉积,降低BACE1的表达水平,并可促进APP从细胞质向质膜的转运,提示PF11可能通过影响APP的剪切过程及亚细胞定位来减少Aβ的生成。此外,PF11(8和32 mg·kg~(-1))显著增加小鼠海马和皮质脑区中APP与Rab11的共定位,提示PF11可以促进APP与循环内含体结合从而减少Aβ的生成。(3) o Aβ可通过调节转录因子EB(TFEB)的核易位和延缓Rab的转化而阻碍溶酶体的自噬降解系统。PF11(30～100μmol·L-1)可通过促进自噬小体及内含体的成熟并恢复溶酶体功能,发挥促进小胶质细胞吞噬及降解Aβ的作用。结论 PF11可显著改善APP/PS1转基因小鼠、SAMP8小鼠的学习记忆障碍,同时减少小鼠海马和皮质脑区中Aβ的沉积。其机制与减少Aβ生成、促进其降解等多环节有关。     

单次皮质酮注射对小鼠情绪症状与认知功能的影响

目的通过单次皮下注射不同剂量的皮质酮,模拟不同程度急性应激状态,进而评价小鼠情绪症状与认知功能的变化。方法 SPF级BABL/c小鼠经自主活动性筛选后,按自主活动及体重随机分为正常对照组、皮质酮给药组(50,100,200 mg·kg~(-1))。行为学实验均在皮质酮注射1 h后进行。采用旷场实验、高架十字迷宫实验和悬尾实验评价皮质酮模拟急性应激对小鼠情绪症状的影响;采用新物体识别实验和Morris水迷宫实验评价皮质酮模拟急性应激对小鼠认知功能的影响。结果与对照组相比,皮质酮50 mg·kg~(-1)剂量组没有引起小鼠情绪及认知行为的明显改变。皮质酮100 mg·kg~(-1)剂量组显著降低小鼠在旷场实验中进入中心区域的时间(P<0.05)与次数(P<0.01);对高架十字迷宫和悬尾实验没有明显影响;可显著降低小鼠对新物体的偏好指数(P<0.05)以及水迷宫实验中的目标象限停留时间(P<0.05)及目标象限运动距离(P<0.01)。当皮质酮剂量达到200 mg·kg-1时可显著影响小鼠在旷场中活动的总距离。结论单次皮下注射皮质酮100 mg·kg~(-1)可介导小鼠出现焦虑样精神障碍以及物体识别记忆和空间记忆等认知功能损伤,可用于抗应激药物的筛选和相关机制研究。     

人诱导性多能干细胞源性小胶质细胞诱导方法的建立及其表型和功能的初步研究

目的建立人诱导性多能干细胞(hiPSC)诱导分化为小胶质细胞(hiMGL)的方法,研究hiMGL的表型及功能。方法按照本实验室前期建立的hiPSC向小胶质细胞诱导分化的方法,将健康老年人来源的外周血细胞重编程的hiPSC诱导分化为hiMGL。利用免疫荧光法检测小胶质细胞特异性表达蛋白TMEM119,Image Pro plus软件分析TMEM119阳性细胞率;分别采用LPS 0.5,1,2,4 mg·L~(-1)和H_2O_2 5,25,125,625μmol·L~(-1)刺激hiMGL 24 h后,应用CCK8法检测细胞活力;采用中性红检测细胞的吞噬功能。结果hiMGL表达小胶质细胞特异性表面标记物TMEM119,hi MGLs TMEM119阳性率为78%。在LPS 0.5～4 mg·L~(-1)刺激下,hiMGL细胞活力和吞噬能力与Control组相比均有升高,在LPS 2 mg·L~(-1)刺激下活力上升最为明显(P<0.05);在LPS 1,2 mg·L~(-1)刺激下吞噬功能增强最为明显(P<0.05)。在H_2O_2 5-125μmol·L~(-1)刺激下,hi MGL细胞活力无明显改变,吞噬功能增强;在H_2O_2 25μmol·L~(-1)的刺激下其吞噬功能与Control组相比增强最为明显(P<0.01);H_2O_2 625 mol·L~(-1)刺激下hiMGL活力和吞噬能力都明显下降(P<0.01)。结论本实验室诱导分化的hiMGL能够表达小胶质细胞特异性标记蛋白TMEM119,面对炎性刺激和氧化应激刺激其活力及吞噬功能均可受到影响。该结果提示,hiMGL在一定程度上具备小胶质细胞的表型及功能,为后续应用hiMGL研究神经退行性疾病奠定研究基础。     

新药T-006对东莨菪碱所致记忆障碍模型动物学习记忆的改善作用

目的探讨新药T-006对东莨菪碱所致小鼠学习记忆障碍的影响及其作用机制。方法将72只♂昆明小鼠随机分为6组:正常对照组、模型组(给予东莨菪碱)、阳性药对照组(多奈哌齐+东莨菪碱)、T-006组(T-006+东莨菪碱,包括T-006 1 mg·kg~(-1)组、T-006 3 mg·kg~(-1)组和T-006 10 mg·kg~(-1)组)。连续给药14 d,给药d 11进行Morris水迷宫实验。水迷宫实验连续进行5 d,前4 d为定位航行实验,d 5为空间探索实验。定位航行实验时,除正常对照组外,每天每只小鼠于入水前20 min腹腔注射2 mg·kg~(-1)东莨菪碱造模,正常对照组腹腔注射等量无菌生理盐水。空间探索实验时,实验动物不再给予东莨菪碱造模并且不进行T-006给药。5 d水迷宫实验结束后,立即取样并检测大脑海马和皮层抗氧化能力相关指标以及乙酰胆碱酯酶活性。结果与正常对照组比较,模型组小鼠学习记忆能力明显降低,海马和皮层中超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)含量明显下降,丙二醛(MDA)含量明显升高,乙酰胆碱酯酶(Ach E)活性明显增高;各剂量的T-006均能明显改善小鼠学习记忆障碍,所试剂量(3、10 mg·kg~(-1))的T-006明显提高脑组织中SOD活性和GSH含量,并降低MDA含量和ACh E活性。结论 T-006能明显改善东莨菪碱所致小鼠学习记忆障碍,该作用机制可能与其抗氧化作用以及抑制乙酰胆碱酯酶活性有关。     

复方丹参片对APP/PS1转基因小鼠焦虑样行为的调节作用

目的探讨复方丹参片对阿尔采末病(AD)APP/PS1转基因小鼠焦虑样行为的作用及机制。方法4月龄野生型小鼠(正常组)和APP/PS1转基因小鼠分别灌胃给予溶剂(模型组)或复方丹参片低剂量(180 mg·kg~(-1))、中剂量(360 mg·kg~(-1))、高剂量(720 mg·kg~(-1))和阳性药物舍曲林(15 mg·kg~(-1))60 d后,采用Morris水迷宫实验、新奇抑制摄食实验和高架十字迷宫实验评价复方丹参片对小鼠记忆障碍和焦虑样行为学表现的影响,采用高效液相色谱法(HPLC)和ELISA分别检测小鼠前额皮质、海马和杏仁核γ-氨基丁酸(GABA)和脑源性神经营养因子(BDNF)的含量。结果复方丹参片中、高剂量明显缩短小鼠找到平台的潜伏期,明显增加小鼠原有平台象限的探索时间(P<0.05,P<0.01)。高架十字迷宫试验结果显示,复方丹参片高剂量显著增加APP/PS1转基因小鼠在开臂的时间百分比和进入开臂的次数(P<0.01);新奇抑制摄食实验结果显示,复方丹参片中、高剂量显著缩短APP/PS1转基因小鼠摄食潜伏期(P<0.05,P<0.01)。HPLC和ELISA结果显示,复方丹参片中、高剂量可显著增加APP/PS1转基因小鼠不同脑区如前额皮质、海马和杏仁核GABA和BDNF含量(P<0.05,P<0.01)。结论复方丹参片改善AD转基因小鼠的学习记忆损伤和焦虑样行为,可能与增加脑组织GABA和BDNF水平有关。     

西罗莫司抗红藻氨酸诱发的未成年C57BL/6小鼠癫痫的有效剂量

目的探索西罗莫司(Sir)治疗未成年小鼠癫痫的安全有效剂量及作用。方法 10日龄的C57BL/6小鼠单次ip给予卡莫酸(红藻氨酸,KA)12.0 mg·kg-1诱导癫痫,于造模后24 h隔天分别ip给予Sir 0.3,1.0和3.0 mg·kg-1直至3 d、7 d、3周、5周和6周,采用Western蛋白印迹法检测S6蛋白表达及其磷酸化水平,确定最低有效剂量。观察Sir最低有效剂量对学习记忆和生长发育的影响,其中Doublecortin(DCX)免疫荧光染色检测海马神经元发育,Morris水迷宫测定小鼠学习记忆水平,悬尾、O迷宫和新事物认知实验测定小鼠焦虑抑郁状态。结果 Western蛋白印迹结果显示,Sir 0.3 mg·kg-1对正常小鼠和KA致痫小鼠S6蛋白磷酸化无显著影响,而1.0和3.0 mg·kg-1均可显著抑制KA致痫小鼠S6蛋白磷酸化(P<0.05)。选取Sir 1.0 mg·kg-1作为最低有效剂量。Sir 1.0 mg·kg-1对DCX表达和体质量无显著影响。Morris水迷宫结果显示,与正常对照组相比,模型组小鼠平台潜伏期和游泳距离明显延长(P<0.05),穿越平台象限次数明显下降(P<0.05),而Sir 1.0 mg·kg-1可显著逆转KA致痫模型小鼠学习记忆功能下降(P<0.05),且与正常对照组无显著差异。KA致痫模型小鼠在悬尾实验中显示悬尾不动时间明显上升(P<0.05),O迷宫实验中移动距离、开臂中停留时间以及新事物认知实验中与新事物的触碰时间、触碰频率、移动距离和速度明显缩短(P<0.05),而Sir1.0 mg·kg-1可显著逆转KA致痫模型小鼠的焦虑抑郁状态(P<0.05),且与正常对照组无显著差异。结论Sir 1.0 mg·kg-1对未成年期癫痫小鼠的m TOR信号通路异常激活和癫痫后共病形成有抑制作用,且不良反应轻微,为理想的给药剂量。     

SZY改善氧化应激致认知障碍的作用

目的探讨山茱萸单体化合物SZY对氧化应激致认知障碍的影响。方法采用2月龄雄性昆明小鼠,按体质量随机分为对照组、模型组、SZY(3,12.5和50 mg·kg~(-1))组、阳性药多奈哌齐(1 mg·kg~(-1))及石杉碱甲(0.1 mg·kg~(-1))组,每组15只。模型组每日颈背部皮下注射D-半乳糖(100 mg·kg~(-1)),对照组颈背部皮下注射等体积生理盐水,给药组连续等体积灌胃给药8周后通过Morrris水迷宫、新物体识别、避暗实验、旷场实验观测小鼠行为变化;通过血清内氧化相关指标(SOD,MDA,GSH-Px和T-AOC)来判断小鼠受氧化损伤程度;通过脑内乙酰胆碱(ACh)含量、乙酰胆碱酯酶(AChE)水平以及病理切片(HE、尼氏染色)检测小鼠大脑神经元受损伤程度。结果研究发现,与对照组小鼠相比,模型组小鼠空间和非空间认知功能均受到不同程度损伤;血清内氧化水平升高,抗氧化水平明显降低;ACh E水平升高,ACh含量下降;脑部神经元丢失明显,且具有显著性差异(P<0.05),给药SZY后损伤有所改善,与模型组相比具有显著性差异(P<0.05),并且具有一定的剂量依赖性,在剂量为12.5 mg·kg~(-1)条件下效果最为显著。结论 SZY对D-半乳糖所致小鼠学习记忆障碍有明显的改善作用,而这种作用可能是通过抑制氧化应激引起的神经细胞凋亡而发生的。     

TSPO激活剂YL-IPA08抗焦虑、抗抑郁作用及其机制研究

目的研究YL-IPA08的抗焦虑、抗抑郁作用,探讨其作用机制,并比较其与经典苯二氮类药物的作用特点与优势。方法采用放射配体竞争结合抑制实验检测受体亲和力;采用小鼠高架十字迷宫模型和大鼠Vogel饮水冲突模型抗焦虑抗焦虑行为效应,小鼠悬尾模型和大鼠强迫性游泳模型评价抗抑郁行为效应;并采用小鼠开场自发活动模型、戊巴比妥阈下剂量催眠模型、牵引模型、转杆模型、跳台模型,评价与CBR相关的潜在不良反应;采用ELISA法或放免法检测神经甾体水平;采用CCK8法检测细胞活性。结果 (1)受体结合实验证实:YL-IPA08与TSPO具有高亲和力(Ki=0.23 nmol·L-1),是对照化合物AC-5216(Ki=0.65 nmol·L-1)的2.8倍,且与CBR无结合。(2)药效学评价显示:YL-IPA08在小鼠悬尾模型(0.1～0.3 mg·kg-1,ig)和大鼠强迫性游泳模型(1～10 mg·kg-1,ig)上具有显著的抗抑郁作用,且可以被TSPO特异性拮抗剂PK11195(3 mg·kg-1,ip)所拮抗。YL-IPA08在小鼠高架十字迷宫模型(0.1～1 mg·kg-1,ig)和大鼠Vogel饮水冲突模型(3～6 mg·kg-1,ig)上具有抗显著的焦虑作用,而不能被CBR受体拮抗剂Flumazenil(10 mg·kg-1,ip)所拮抗。与苯二氮类抗焦虑剂地西泮(3 mg·kg-1,ip)不同,YL-IPA08不影响小鼠中枢兴奋性(0.3～30 mg·kg-1,ig),无镇静催眠效应(30～60 mg·kg-1,ig),对肌张力、运动平衡能力(0.3～100 mg·kg-1,ig)及记忆功能(0.3～30 mg·kg-1,ip)亦无明显影响。(3)机制研究发现:YL-IPA08(1～10 mg·kg-1,ig)可显著增加大鼠血清孕烯醇酮和孕酮的含量;YL-IPA08(0.1～2μmol·L-1)可显著促进体外培养星形胶质细胞合成分泌孕烯醇酮和孕酮的水平;YL-IPA08(0.03～3μmol·L-1)对皮质酮(200μmol·L-1)引起的星形胶质细胞损伤具有保护作用,该作用可被Trilostane所阻断。结论 YL-IPA08具有抗焦虑和抗抑郁作用,该作用可能与其高选择性激活TSPO,促进胶质细胞合成分泌神经甾体,保护神经细胞免受高浓度皮质酮损伤有关。YL-IPA08不产生明显的镇静、肌松、记忆障碍等中枢神经系统不良反应,较之地西泮具有明显的特色与优势。     

水通道蛋白4在小鼠脑老化中的作用

水通道蛋白4(AQP4)主要分布在星形胶质细胞足突膜上,是脑内最重要的水通道亚型。已经发现,AQP4除参与调节脑内水平衡外,还参加学习记忆、脑外伤、脑缺血、脑肿瘤等一系列生理、病理过程。脑老化伴随着学习记忆下降,以及易发生脑缺血、脑肿瘤等老年相关性疾病,但AQP4在脑老化中的作用尚未见报道。目的观察AQP4在小鼠脑老化中的作用。方法对年轻(2～3个月)和老年(17～19个月)AQP4基因敲除小鼠(AQP4-/-)与野生型相应年龄的小鼠(AQP4+/+),观察AQP4基因敲除对老年小鼠自发活动、学习记忆、大体脑形态以及神经元、星形胶质细胞、小胶质细胞密度等的影响。结果老年小鼠自发活动减少,在穿梭箱被动避暗实验中,测试时进入暗箱的潜伏期明显短于年轻鼠,但AQP4+/+和AQP4-/-小鼠间无明显差异。甲苯胺蓝染色显示,老年小鼠皮层神经元密度(Ⅲ～Ⅳ层)显著低于年轻小鼠(P<0.05),海马CA1区厚度无明显差异,AQP4+/+和AQP4-/-小鼠间无明显差异。免疫组化显示,老年小鼠海马CA1的星形胶质细胞(GFAP阳性)数量明显高于年轻小鼠(P<0.01),而小胶质细胞数量在老年和年轻小鼠间无明显差异。免疫荧光显示,老年小鼠星形教胶质细胞的面积变小,而AQP4-/-小鼠的星形胶质细胞突起少而短、细胞面积明显小于AQP+/+小鼠(P<0.05),神经元和小胶质细胞形态无明显变化。结论 AQP4参与脑老化过程中的星形胶质细胞变化,而与运动、学习记忆相关的脑功能及神经元、小胶质细胞等脑结构变化无明显关系。     

川芎嗪、丹参酮ⅡA、泛醌和艾地苯醌对小鼠水迷宫操作的影响(英文)

目的:观察川芎嗪、丹参酮ⅡA、泛醌和艾地苯醌四个药物对小鼠学习记忆的影响。方法:采用小鼠水迷宫评价促智作用。结果:与东莨菪碱模型组相比,丹参酮ⅡA(20mg·kg~(-1),ig)到达平台的时间从(36±19)s缩短至(11±5)s,进入死角错误从(7±5)次减少至(1.5±1.3)次;泛醌(20mg·kg~(-1),ig)也能缩短时间从(37±18)s至(17±12)s和减少错误次数从8±5至2.1±2.7;艾地苯醌(120mg·kg~(-1),ig)只能显著缩短时间从(8±6)s至(3.4±2.9)s。川芎嗪不能缩短时间和减少错误。结论:丹参酮ⅡA、泛醌和艾地苯醌能不同程度地改善小鼠因东莨菪碱所致的记忆损害。     

基于NLRP3炎性小体通路研究葡萄籽原花青素对AD大鼠的保护作用

目的通过双侧海马注射Aβ_(1~42)制备大鼠AD模型,探讨葡萄籽原花青素(GSP)抑制小胶质细胞NLRP3炎性小体通路保护AD大鼠学习记忆能力的可能机制。方法双侧海马注射Aβ_(1~42)建立AD大鼠模型,造模48 h后开始灌胃给予GSP 100,200和400 mg·kg~(-1),假手术组和模型组灌胃给予相同容量的生理盐水。药后通过新物体识别实验和Morris水迷宫实验观察大鼠的学习记忆能力,WB法检测各组大鼠脑组织NLRP3的含量,ELISA法检测大鼠海马和皮质IL-1β和IL-6的含量。结果 GSP各剂量均可明显增加AD大鼠的新物体识别指数。Morris水迷宫实验中GSP对定位航行实验的逃避潜伏期无显著影响;GSP各剂量组可明显缩短空间探索实验的大鼠探索潜伏期,并且200和400 mg·kg~(-1)可显著性增加AD大鼠进入平台区域的次数,100 mg·kg~(-1)可增加AD大鼠进入平台区域的次数,但无统计学差异。GSP可明显减少大鼠脑组织的NLRP3表达,进而减少海马和皮质中IL-1β和IL-6含量。结论 GSP对Aβ_(1~42)诱导的AD大鼠学习记忆障碍具有明显的改善作用,其机制可能是通过抑制脑组织NLRP3炎性小体通路,减少炎性因子IL-1β和IL-6的产生,减轻Aβ_(1~42)诱导的炎症反应而实现。     

尼克酰胺磷酸核糖转移酶在小鼠脑老化中的作用

尼克酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)可分布在细胞内和细胞外,已经发现NAMPT参与许多老年性疾病,如冠心病、糖尿病、高脂血症及癌症等,研究发现其代谢产物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)可通过SIRT1延缓动物衰老过程,年轻大小鼠脑内的NAMPT主要表达在神经元,参与神经元的代谢,并对脑缺血损伤及神经退行性疾病有保护作用。目的观察NAMPT在脑老化中的表达变化及其作用。方法对年轻(2～3个月)和老年(17～19个月)小鼠脑及血清进行NAMPT表达水平、分布及其产物水平的检测,并以NAMPT特异性抑制剂FK866模拟NAMPT降低,以重组NAMPT模拟细胞外NAMPT增加,观察对神经元和脑血管内皮细胞的影响。结果与年轻小鼠相比,老年小鼠脑NAMPT水平降低、而血清中NAMPT水平明显增高;老年小鼠脑内NAMPT水平在皮层和海马明显降低,而纹状体和小脑中的NAMPT水平维持不变;年轻小鼠NAMPT主要分布在神经元,老年小鼠脑内NAMPT主要分布于神经元和小胶质相比;老年小鼠脑内NAD水平在海马、纹状体和小脑明显降低,但皮层不变;NAMPT抑制剂FK866可浓度依赖性诱导神经元死亡;重组NAMPT处理是小鼠脑血管内皮细胞对缺糖缺氧损伤的易感性增加。结论老年时NAMPT的表达、分布及活性变化具有部位依赖性,NAMPT参与脑老化及老年性脑疾病的发生。     

姜黄素通过增强自噬抑制Aβ_(1-42)诱导的BV2小胶质细胞和原代小胶质细胞炎症反应

目的研究姜黄素对淀粉样β蛋白片段1-42(Aβ_(1-42))刺激所致小鼠小胶质细胞BV2细胞和原代小胶质细胞炎症的作用及机制。方法姜黄素0.1,1,5,10,15,25和40μmol·L~(-1)与BV2细胞培养24 h,MTT法和ATP法检测细胞存活。姜黄素5和10μmol·L~(-1)预处理BV2细胞和原代小胶质细胞2 h后,加入Aβ_(1-42)1 mg·L~(-1)共同作用24 h,使用实时荧光定量PCR法检测BV2细胞白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达水平,同时检测原代小胶质细胞TNF-α和iNOS mRNA表达水平;BV2细胞加姜黄素5和10μmol·L~(-1)培养2 h后,加Aβ_(1-42)1 mg·L~(-1)培养24 h,Western印迹法检测BV2细胞中iNOS、自噬相关蛋白5(Atg-5)和P62蛋白表达水平及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)与LC3-Ⅰ的比值;姜黄素5和10μmol·L~(-1)预处理BV2细胞和原代小胶质细胞24 h后,加入Aβ_(1-42)1 mg·L~(-1)共同作用4 h,Western印迹法检测BV2和原代小胶质细胞对Aβ_(1-42)的吞噬;原代小胶质细胞加入姜黄素5和10μmol·L~(-1),24 h后加Aβ_(1-42)1 mg·L~(-1)培养4 h,细胞免疫荧光染色法检测原代小胶质细胞对Aβ_(1-42)的吞噬和离子钙接头蛋白分子1(Iba1)蛋白表达水平。稳定敲降Atg-5的BV2细胞加姜黄素5和10μmol·L~(-1)培养2 h后,加Aβ_(1-42)1 mg·L~(-1)培养24 h,Western印迹法检测稳定敲降Atg-5的BV2细胞中LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ蛋白比值及iNOS,Atg-5和P62蛋白水平。结果 MTT和ATP结果显示,姜黄素≤25μmol·L~(-1)时对BV2细胞无明显细胞毒性。实时荧光定量PCR结果显示,与Aβ_(1-42)相比,姜黄素5和10μmol·L~(-1)组细胞内iNOS,IL-6和TNF-αmRNA水平明显降低(P<0.01),原代小胶质细胞内iNOS和TNF-αmRNA水平明显降低(P<0.01);Western印迹结果显示,与Aβ_(1-42)组相比,姜黄素10μmol·L~(-1)组细胞内iNOS和P62蛋白表达显著减少(P<0.01),LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ蛋白比值和Atg-5蛋白表达增加(P<0.01);与Aβ_(1-42)组相比,姜黄素10μmol·L~(-1)组BV2细胞和原代小胶质细胞对Aβ_(1-42)蛋白的吞噬明显增加(P<0.01);细胞免疫荧光结果显示,与Aβ_(1-42)组相比,姜黄素5和10μmol·L~(-1)组平均每个细胞内Aβ_(1-42)荧光强度明显增加(P<0.01),Iba1的荧光强度降低(P<0.01);与Aβ_(1-42)相比,姜黄素10μmol·L~(-1)不影响稳定敲降Atg-5的BV2细胞中LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ比值及iNOS,Atg-5和P62蛋白水平。结论姜黄素通过增强Atg-5表达,促进小胶质细胞对Aβ_(1-42)蛋白的吞噬,抑制Aβ_(1-42)诱导的小胶质细胞炎症反应。     

芍药苷降糖作用研究

目的研究芍药苷(paeoniflorin,PF)对正常、高血糖模型小鼠血糖的影响以及对高血糖模型大鼠血糖和肾功能的影响。方法以格列苯脲为阳性对照,观察PF(20、40、80 mg·kg~(-1))灌胃给药后对正常小鼠血糖的影响;四氧嘧啶诱导形成小鼠高血糖模型,以二甲双胍为阳性对照,观察PF(20、40、80 mg·kg~(-1))灌胃给药后对四氧嘧啶所致高血糖小鼠血糖的影响;以二甲双胍为阳性对照,观察PF(14、28、56 mg·kg~(-1))灌胃给药后对高脂饲料联合小剂量链佐菌素所致糖尿病大鼠血糖及其肾功能各项指标的影响。结果 PF不能降低正常血糖小鼠的血糖;能显著降低四氧嘧啶所致高血糖小鼠的血糖、链佐菌素联合高脂饲料所致高血糖大鼠的血糖,并能显著降低糖尿病大鼠血液中24 h尿微量白蛋白(PRO/24 h)、空腹血糖(FBG)、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)的水平,且呈量效依赖性。结论PF对正常小鼠的血糖无影响,对糖尿病小鼠和大鼠血糖有显著降低作用,并能显著改善由糖尿病引起的大鼠肾脏功能损伤。     

肌肽对皮层下缺血性血管性痴呆动物认知功能的保护作用

目的探讨肌肽对皮层下缺血性血管性痴呆动物的认知功能的作用。方法永久性结扎小鼠单侧颈总动脉建立皮层下缺血性血管性痴呆模型后饲养28 d,期间隔天给予肌肽(200、500、750 mg·kg-1)或生理盐水,采用运动量监测、敞箱实验、热板实验,恐惧记忆、水迷宫模型检测小鼠行为学指标。结果与假手术组相比,手术组动物的运动量和疼痛阈值没有改变;其中肌肽(200、500 mg·kg-1)能明显延长小鼠在敞箱实验中的探索时间,逆转手术引起的动物恐惧记忆中背景记忆能力的下降,并明显改善手术引起的水迷宫实验中动物的学习记忆能力的下降。结论单侧颈总动脉结扎所致的皮层下缺血性血管性痴呆会导致认知功能障碍,肌肽对皮层下缺血性血管性痴呆动物的认知功能有明显的保护作用。     

吡唑啉酮衍生物镉(Ⅱ)配合物体内外对黑素瘤B16细胞的抗肿瘤作用

目的研究吡唑啉酮镉(Ⅱ)配合物1-苯基-3-甲基-4-丙酰基-5-吡唑啉酮缩水杨酰肼-镉(Ⅱ)(Cd-PMPP-SAL)体内外对小鼠黑素瘤B16细胞的抗肿瘤作用及其作用机制。方法以Cd-PMPP-SAL1.0,1.5,3.0,5.0和10.0 mg·L~(-1)分别作用小鼠黑素瘤B16细胞24,48和72 h,采用MTT法检测B16细胞存活率;Cd-PMPP-SAL 6.25,12.50和25.00 mg·L~(-1)作用B16细胞24 h,用Hoechst33258染色观察B16细胞形态,AnnenxinⅤ/PI双染色法检测B16细胞凋亡率;胱天蛋白酶活性检测试剂盒检测B16细胞内胱天蛋白酶活性。C57BL/6J小鼠皮下接种B16细胞制备荷瘤模型,5 d后分别瘤内注射Cd-PMPP-SAL 6.25,12.50和25.00 mg·kg~(-1),每天1次,连续12 d。每天检测体质量,给药结束后处死小鼠,测量瘤体积并测瘤质量,计算抑瘤率。HE染色法观察瘤体、肝和肺组织病理变化;免疫组织化学法检测肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)和成纤维细胞生长因子2(FGF2)蛋白表达;TUNEL法检测移植瘤组织内的细胞凋亡。结果Cd-PMPP-SAL抑制B16细胞存活,IC_(50)为4.946 mg·L~(-1),95%置信限为4.24~5.65 mg·L~(-1);Cd-PMPP-SAL12.50和25.00 mg·L~(-1)作用24 h,B16细胞凋亡率为(12.8±1.4)%和(18.4±0.4)%,显著高于细胞对照组(1.7±0.1)(P<0.01);Cd-PMPP-SAL 25.00 mg·L~(-1)组胱天蛋白酶3和9活性与细胞对照组比较显著增高(P<0.01),胱天蛋白酶3/7活性变化不明显。瘤内注射Cd-PMPP-SAL 12.50和25.00 mg·kg~(-1)治疗组,从治疗第8天起瘤体积与模型组相比明显减小(P<0.01),对小鼠体质量无明显影响;Cd-PMPP-SAL 12.50和25.00 mg·kg~(-1)治疗组小鼠移植瘤组织有不同程度的坏死,肝、肺组织无明显病理变化;与模型组比较,Cd-PMPP-SAL 12.50和25.00 mg·kg~(-1)治疗组移植瘤组织VEGF和FGF2蛋白表达显著下降(P<0.05),凋亡细胞明显增加(P<0.05)。结论 Cd-PMPP-SAL体内外可有效地抑制B16细胞生长,该作用可能与诱导细胞凋亡及抑制肿瘤内血管生成有关。     

吡格列酮对脂多糖所致大鼠学习记忆障碍的改善作用及其机制

目的研究吡格列酮(Pioglitazone,Pio)对脂多糖引起的大鼠学习记忆障碍和海马CA1区锥体神经元损伤的保护作用。方法大鼠灌胃给予Pio(408、0 mg/kg)3周,脑室内注射LPS(5、30μg),2 d后进行Mor-ris水迷宫定位航行实验,连续训练5 d,第6天进行空间探索实验。行为学实验后,取脑组织,制成石蜡切片,进行尼氏(Nissl)染色和胶质纤维酸蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫组织化学染色,研究海马CA1区锥体神经元形态学改变和星型胶质细胞的活化浸润情况。结果脑内注射LPS可以引起大鼠学习和记忆障碍,表现为大鼠逃避潜伏期较对照组明显延长,大鼠在平台所在象限游泳距离百分比明显较对照组低,这些行为学改变伴随海马CA1区星型胶质细胞和锥体神经元的损伤。治疗组LPS所致的学习记忆损伤减轻,Pio能明显减轻海马CA1区锥体神经元的损伤和星型胶质细胞的浸润。结论吡格列酮能对抗LPS引起的锥体神经元的损伤和星型胶质细胞的活化浸润,从而改善大鼠的学习记忆能力。     

尼莫地平对邻苯二甲酸二丁酯所致小鼠学习记忆障碍的拮抗作用

目的探究尼莫地平(Nim)对邻苯二甲酸二丁酯(DBP)所致KM小鼠学习记忆障碍的拮抗作用。方法 36只♂KM小鼠随机分成4组:对照组、50 mg·kg~(-1)DBP组、2mg·kg~(-1)Nim组及DBP+Nim组,实验周期28 d后,检测各组小鼠潜伏期,脑海马的钙调蛋白(Ca M)、钙/钙调素依赖性蛋白激酶II(Ca MKII)、蛋白激酶C(PKC)、细胞色素C(Cyt C)、caspase-3、ERK1/2、p-ERK1/2水平,并通过观察HE、Nissl染色及TUNEL检测脑海马CA1区病理学变化。结果与50 mg·kg~(-1)DBP组比较,DBP+Nim组小鼠学习记忆能力有所改善,海马组织CA1病理学损伤及凋亡程度降低,PKC、Cyt C、caspase-3水平及p-ERK1/2表达量降低,Ca M、Ca MKII水平上升,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论DBP可影响Ca2+相关蛋白、上调p-ERK1/2表达,诱导KM小鼠脑海马神经元损伤及凋亡,而Nim改善DBP所致小鼠的学习记忆障碍,可能与其可拮抗胞内Ca2+浓度增加,降低DBP暴露后小鼠脑组织p-ERK1/2及caspase-3水平有关。