LW-AFC调节神经元限制性沉默因子改善学习记忆作用机制的初步研究

目的研究六味地黄苷糖(LW-AFC)对慢性应激小鼠学习记忆的调节作用,并探讨LW-AFC影响应激学习记忆的作用机制是否与调控神经元限制性沉默因子(REST)有关。方法应用雄性BALB/c小鼠,采用8种不同应激条件组合,进行慢性多重应激4周建立应激模型。自应激开始即灌胃给予LW-AFC(1.6 g·kg~(-1))。应用新物体识别实验和在体记录长时程增强(LTP)检测学习记忆能力的变化;采用放射免疫试验检测HPA轴的变化,包括血清皮质酮、垂体促肾上腺皮质激素(ACTH)及下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)含量;应用Western印迹法检测海马组织N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体NR2A和NR2B亚基以及REST蛋白表达。结果慢性多重应激4周后,应激小鼠新物体辨识指数明显降低(P<0.05),海马DG区LTP显著降低(P<0.01)。而给予LW-AFC可明显提高新物体辨识指数(P<0.05),升高海马DG区LTP的诱发(P<0.01)。LW-AFC可显著降低慢性多重应激小鼠的皮质酮(P<0.05)及CRH(P<0.05)含量;LW-AFC可明显升高海马组织中REST含量(P<0.05);并可升高NMDAR2A含量(P<0.05),从而增加NMDAR2A/2B比例。结论慢性应激4周可引起小鼠学习记忆能力减退。LW-AFC对慢性多重应激所致学习记忆损伤具有改善作用,其作用机制可能与改善HPA轴紊乱、升高REST含量、调节NMDAR2A/2B的平衡有关,提示LW-AFC可能通过影响REST信号通路发挥了抗应激作用,LW-AFC有望发展成为抗应激药物。     

钩藤源活性化合物297和315对慢性不可预知温和应激模型小鼠的影响

目的考察钩藤源活性化合物297和315对慢性不可预知温和应激(CUMS)小鼠的影响。方法应用雄性C57BL/6J小鼠,采用CUMS造模,20 mg·kg~(-1)的297和315分别伴随灌胃给药28 d;采用糖水消耗实验评价小鼠的抑郁样行为,采用高架十字迷宫实验评价小鼠的焦虑样行为,采用水迷宫实验评价小鼠的认知功能。结果 CUMS小鼠与正常小鼠相比,在高架十字迷宫实验中进入开臂时间及次数显著降低(P<0.01),在糖水消耗实验中糖水偏好指数显著降低(P<0.01),在水迷宫实验中进入目标象限的潜伏期显著延长(P<0.05);而化合物297可显著增加CUMS小鼠进入开臂时间及次数(P<0.05)和CUMS小鼠的糖水偏好指数(P<0.05),同时显著缩短CUMS小鼠进入目标象限潜伏期(P<0.05);化合物315对CUMS小鼠焦虑、抑郁样行为和空间学习记忆功能均无显著改善作用。结论 CUMS可造成小鼠的焦虑和抑郁样行为,同时损伤小鼠的空间学习记忆功能;化合物297可显著改善CUMS小鼠的焦虑和抑郁样行为,同时可改善CUMS小鼠的空间学习记忆功能,提示化合物297可能具有抗应激作用。     

梅花鹿鹿茸总蛋白对顺铂诱导肾损伤小鼠的保护作用及其机制

目的研究梅花鹿鹿茸总蛋白(SVPr)对小鼠肾毒性的保护作用及其机制。方法 40只ICR小鼠随机分为5组,即正常对照组(ig蒸馏水)、模型组(ig蒸馏水7 d,第7天ip给予顺铂25 mg·kg~(-1)造模,随后ig蒸馏水3 d)及SVPr 5,10和20 mg·kg~(-1)给药组(ig给予SVPr 7 d,末次给药2 h后ip给予顺铂25 mg·kg~(-1),随后ig给予SVPr治疗3 d)。用试剂盒方法测定小鼠肾功能指标尿素氮(BUN)和血肌酐(SCr),氧化应激反应指标超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)及炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平,Western蛋白印迹法测定胱天蛋白酶3、促凋亡蛋白(Bax)和抗凋亡蛋白(Bcl-2)表达,HE染色观察肾组织病理变化。结果 SVPr 5,10和20 mg·kg~(-1)可显著降低SCr,BUN,MDA,TNF-α和IL-6的水平及活化的胱天蛋白酶3和Bax表达(P<0.05,P<0.01),增加SOD,CAT和GSH的活性及Bcl-2的表达(P<0.05,P<0.01);改善肾组织病理变化。结论 SVPr改善顺铂诱导的小鼠肾毒性,其机制与抑制氧化应激、炎症反应及细胞凋亡有关。     

LW-AFC对LPS所致突触可塑性损伤和胶质细胞激活的影响

目的神经炎症参是阿尔茨海默病(AD)的发生发展的重要因素之一,可抑制海马突触可塑性。六味地黄苷糖(LW-AFC)是从经典名方六味地黄汤中提取活性组分所构成的活性成分群,包括糖苷、寡糖和多糖。本研究主要考察LW-AFC对神经炎症所致突触可塑性损伤的作用,并对其所含单体免疫活性进行初步评价。方法灌胃给予雄性BALB/c小鼠LW-AFC两周,在体记录海马-齿状回长时程增强变化,检测外周血淋巴细胞亚群、外周血和脑组织中炎性细胞因子,免疫荧光染色观察小胶质细胞激活水平,单次腹腔注射脂多糖(LPS)(250μg·kg~(-1),ip)建立炎症模型,观察LW-AFC的作用。在体外,对LW-AFC中部分单体对正常BV-2细胞及LPS刺激BV-2所致TNF-α分泌水平进行检测。结果腹腔注射LPS 4 h后小鼠的兴奋性突触后电位降低,即长时程增强减弱,预防给予LW-AFC可显著改善炎症所导致小鼠神经突触可塑性的降低,可显著减轻海马中小胶质细胞及星形胶质细胞的激活水平。LW-AFC可显著上调炎症模型小鼠脾脏淋巴细胞中CD19+细胞的比例,降低CD3+CD4+细胞比例;同时,LW-AFC能明显升高外周血中CD3+CD4+和CD3+CD25+细胞比例。LW-AFC可显著降低海马中IL-1β,IL-6,G-CSF和MCP-1,皮质中MCP-1以及外周血中TNF-α,IL-6,IL-12和INF-γ炎性细胞因子的水平。体外研究表明,LW-AFC中单体芍药苷、马钱苷酸、莫诺苷和水苏糖对正常BV-2细胞TNF-α的分泌有降低作用,而100μmol·L-1的芍药苷、马钱苷酸、莫诺苷以及10μmol·L-1的甘露三糖和CA-4-3对LPS刺激的BV-2细胞TNF-α的分泌有促进作用。结论LW-AFC对LPS所致突触可塑性损伤的改善作用以及对胶质细胞过度激活的减轻与LW-AFC对中枢神经和外周免疫系统炎症因子的降低及调节外周B细胞、辅助T细胞和调节性T细胞比例相关。     

人参茎叶总皂苷对顺铂致小鼠肾损伤的保护作用及机制

目的观察人参茎叶总皂苷(GSLS)对顺铂(CDDP)诱导肾损伤小鼠的保护作用,并探讨其可能机制。方法 32只雄性ICR小鼠随机分为正常对照组、CDDP模型组(一次性ip给予CDDP 20 mg·kg~(-1)诱导小鼠肾损伤)、CDDP+GSLS 150和300 mg·kg~(-1)给药组。给药组连续给予GSLS 7 d,末次给药1 h后,一次性ip给予CDDP 20 mg·kg~(-1)诱导小鼠肾损伤,继续给予GSLS 150和300 mg·kg~(-1)3 d,分别采用脲酶法和肌氨酸氧化酶法检测小鼠血尿素氮(BUN)和肌酐(CRE)水平,评价肾功能的变化;分别采用可见光法和微量酶标法检测肾组织中过氧化氢酶(CAT)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平,评价小鼠肾组织中氧化应激的水平;采用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β),评价肾组织中炎症水平;HE和PAS染色法观察肾组织病理变化;TUNEL和Hoechst33258染色法观察细胞凋亡。结果与正常对照组比较,CDDP组小鼠体质量显著下降(P<0.05),肾指数和血清中CRE,BUN,TNF-α和IL-1β水平显著升高(P<0.05,P<0.01),其中CRE和BUN分别升高了1倍和3倍,肾组织CAT和GSH显著下降(P<0.05);CDDP组肾组织中出现肾小球肿胀、肾小管扩张、肾小球上皮细胞坏死,管腔内出现透明管型,细胞核固缩或消失,肾间质水肿和炎症细胞浸润,大量糖原沉积,此外还有大量的TUNEL阳性细胞和Hoechst33258阳性细胞表达;与CDDP组比较,GSLS各治疗组小鼠血清中CRE和BUN水平明显降低(P<0.05,P<0.01),肾组织糖原沉积减少,肾小管上皮细胞凋亡减少(P<0.05);CDDP+GSLS 300 mg·kg~(-1)组TNF-α和IL-1β显著降低(P<0.05),CAT和GSH显著升高(P<0.05),肾组织坏死程度减轻(P<0.05)。结论GSLS对CDDP诱导的小鼠肾损伤具有保护作用,其机制可能与改善氧化应激、减少炎症反应及抗细胞凋亡有关。     

单次皮质酮注射对小鼠情绪症状与认知功能的影响

目的通过单次皮下注射不同剂量的皮质酮,模拟不同程度急性应激状态,进而评价小鼠情绪症状与认知功能的变化。方法 SPF级BABL/c小鼠经自主活动性筛选后,按自主活动及体重随机分为正常对照组、皮质酮给药组(50,100,200 mg·kg~(-1))。行为学实验均在皮质酮注射1 h后进行。采用旷场实验、高架十字迷宫实验和悬尾实验评价皮质酮模拟急性应激对小鼠情绪症状的影响;采用新物体识别实验和Morris水迷宫实验评价皮质酮模拟急性应激对小鼠认知功能的影响。结果与对照组相比,皮质酮50 mg·kg~(-1)剂量组没有引起小鼠情绪及认知行为的明显改变。皮质酮100 mg·kg~(-1)剂量组显著降低小鼠在旷场实验中进入中心区域的时间(P<0.05)与次数(P<0.01);对高架十字迷宫和悬尾实验没有明显影响;可显著降低小鼠对新物体的偏好指数(P<0.05)以及水迷宫实验中的目标象限停留时间(P<0.05)及目标象限运动距离(P<0.01)。当皮质酮剂量达到200 mg·kg-1时可显著影响小鼠在旷场中活动的总距离。结论单次皮下注射皮质酮100 mg·kg~(-1)可介导小鼠出现焦虑样精神障碍以及物体识别记忆和空间记忆等认知功能损伤,可用于抗应激药物的筛选和相关机制研究。     

柴胡皂苷-b2抑制内质网应激信号通路减轻四氯化碳致小鼠急性肝损伤

目的探讨柴胡皂苷-b2(SS-b2)对四氯化碳(CCl_4)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用及其对内质网应激通路的影响。方法 60只雄性BALB/c小鼠分为正常对照组、模型组、SS-b2(5,10和20 mg·kg~(-1))组和阳性药(水飞蓟宾10 mg·kg~(-1))组。各组小鼠连续7 d每天ig给予不同剂量的SS-b2、水飞蓟宾或生理盐水;末次给药后2 h,除正常对照组外,各组分别一次性ip给予5%CCl_4建立小鼠急性肝损伤模型。比色法检测血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;HE染色检测肝组织病理变化,免疫组织化学和Western蛋白印迹法检测小鼠肝组织中内质网应激通路蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、磷酸化真核起始因子2α(p-eIF2α)、转录激活因子4(ATF4)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,模型组小鼠血清中GPT和GOT的活性及MDA的含量明显升高(P<0.05,P<0.01),SOD活性明显降低(P<0.01),同时,肝组织内质网应激通路相关蛋白PERK,p-eIF2α,ATF4,GRP78和CHOP表达水平显著增高(P<0.01)。与模型组相比,不同浓度SS-b2组小鼠血清中GPT和GOT的活性及MDA的含量明显降低(P<0.05,P<0.01),SOD的活性明显升高(P<0.01);肝组织上述内质网应激通路相关蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01)。HE染色结果显示,不同浓度的SS-b2明显改善CCl_4引起的小鼠肝细胞肿胀、肝小叶周围胞核溶解和肝索排列紊乱,使细胞形态明显好转。结论 SS-b2对CCl_4诱导的小鼠急性肝损伤具有保护作用,其机制可能与改善氧化应激损伤,抑制内质网应激通路的激活有关。     

石见穿多糖对脂多糖和D-氨基半乳糖胺联合诱导小鼠急性肝衰竭的保护作用

目的研究石见穿多糖(PSSC)对脂多糖(LPS)/D-氨基半乳糖胺(Ga IN)诱导小鼠急性肝衰竭(ALF)的保护作用及可能机制。方法将昆明小鼠随机分为正常组、模型组、PSSC 30和100 mg·kg~(-1)给药组。给药组每日1次,连续给药1周。给药结束后,除正常组外,其余各组ip给予LPS 10μg·kg~(-1)和Gal N700 mg·kg~(-1),制备小鼠ALF模型。HE染色法检测肝组织病理变化;用试剂盒法检测血清谷草转氨酶(GOT)和谷丙转氨酶(GPT)及肝过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平;DCFH-DA荧光探针法检测肝组织活性氧(ROS)的相对含量;ELISA法测定血清及肝组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL~(-1)β)和IL-6的含量;胱天蛋白酶3活性测试试剂盒检测小鼠肝组织匀浆中胱天蛋白酶3的活性。结果与正常对照组相比,模型组小鼠肝细胞排列杂乱,胞质皱缩,细胞边界模糊,可见较大量的炎症细胞浸润和明显的肝组织内出血,病理评分明显升高(P<0.01);MDA和ROS含量分别升高至正常对照组的2.2倍和4.3倍(P<0.01),GSH含量下降至51%(P<0.01),抗氧化酶SOD,CAT和GSH-Px的活性分别降低至74%,36%和42%(P<0.01),TNF-α,IL~(-1)β和IL-6的水平有明显提高(P<0.01),胱天蛋白酶3活性升高至正常对照组的5.3倍(P<0.01)。与模型组相比,PSSC组小鼠存活比例明显升高(P<0.01);小鼠肝组织病理评分降低(P<0.01);MDA和ROS含量升高(P<0.01),GSH含量下降(P<0.01);TNF-α,IL~(-1)β和IL-6的含量降低(P<0.01);胱天蛋白酶3活性降低(P<0.01)。结论 PSSC对LPS和Gal N联合诱导的小鼠ALF具有良好的缓解作用,该作用可能与降低肝氧化应激、抑制肝炎症反应和细胞凋亡相关。     

丁螺环酮和米安色林对梁氏情境应激箱诱导小鼠焦虑和抑郁样行为的影响

目的设计和建立梁氏情境应激箱,通过观察抗焦虑和抗抑郁药对小鼠行为学指标的影响,评价梁氏情境应激箱对小鼠焦虑和(或)抑郁样情绪反应的诱导作用。方法梁氏情境应激箱由中央区和3个外周臂构成。ICR小鼠分别ip给予抗焦虑药物丁螺环酮(0.5和1.0 mg·kg~(-1))和抗抑郁药物米安色林(0.25和0.5 mg·kg~(-1)),观察小鼠首次进入中央区的潜伏期、中央区停留时间、中央区活动路程、外周区活动路程、区域间穿梭次数和总活动度。结果 1丁螺环酮0.5和1.0 mg·kg~(-1)明显缩短小鼠首次进入中央区的潜伏期,分别缩短了71.9%(P<0.05)和77.9%(P<0.05);剂量依赖性地增加中央区停留时间,各增加了59.5%和73.8%(P<0.05);丁螺环酮0.5和1.0 mg·kg~(-1)均可显著减少小鼠区域间穿梭次数(P<0.05),但对其中央区活动路程、外周区活动路程和总活动度无明显影响;2米安色林0.25和0.5 mg·kg~(-1)明显缩短小鼠首次进入中央区的潜伏期,分别缩短了72.4%(P<0.05)和82.3%(P<0.05);剂量依赖性地增加中央区停留时间,各增加了39.1%和43.9%(P<0.05);米安色林剂量依赖性地增加中央区活动路程(P<0.05)及区域间穿梭次数(P<0.05),但对外周区活动路程和总活动度无明显影响。结论梁氏情境应激箱对小鼠焦虑和(或)抑郁样情绪反应具有明确的诱导作用,可作为一个新的焦虑抑郁共病动物模型研究其病理生理机制,筛选和评价新型抗焦虑和(或)抗抑郁药物。     

复方丹参片对APP/PS1转基因小鼠焦虑样行为的调节作用

目的探讨复方丹参片对阿尔采末病(AD)APP/PS1转基因小鼠焦虑样行为的作用及机制。方法4月龄野生型小鼠(正常组)和APP/PS1转基因小鼠分别灌胃给予溶剂(模型组)或复方丹参片低剂量(180 mg·kg~(-1))、中剂量(360 mg·kg~(-1))、高剂量(720 mg·kg~(-1))和阳性药物舍曲林(15 mg·kg~(-1))60 d后,采用Morris水迷宫实验、新奇抑制摄食实验和高架十字迷宫实验评价复方丹参片对小鼠记忆障碍和焦虑样行为学表现的影响,采用高效液相色谱法(HPLC)和ELISA分别检测小鼠前额皮质、海马和杏仁核γ-氨基丁酸(GABA)和脑源性神经营养因子(BDNF)的含量。结果复方丹参片中、高剂量明显缩短小鼠找到平台的潜伏期,明显增加小鼠原有平台象限的探索时间(P<0.05,P<0.01)。高架十字迷宫试验结果显示,复方丹参片高剂量显著增加APP/PS1转基因小鼠在开臂的时间百分比和进入开臂的次数(P<0.01);新奇抑制摄食实验结果显示,复方丹参片中、高剂量显著缩短APP/PS1转基因小鼠摄食潜伏期(P<0.05,P<0.01)。HPLC和ELISA结果显示,复方丹参片中、高剂量可显著增加APP/PS1转基因小鼠不同脑区如前额皮质、海马和杏仁核GABA和BDNF含量(P<0.05,P<0.01)。结论复方丹参片改善AD转基因小鼠的学习记忆损伤和焦虑样行为,可能与增加脑组织GABA和BDNF水平有关。     

依鲁替尼长期给药对姥鲛烷诱导的系统性红斑狼疮模型小鼠的治疗作用和副作用

目的评估依鲁替尼长期给药对姥鲛烷诱导的系统性红斑狼疮(SLE)模型小鼠的治疗作用及副作用。方法 6周龄雌性BALB/c小鼠ip给予姥鲛烷0.5mL制备SLE小鼠模型。4周后,根据抗双链DNA(DS-DNA)抗体滴度和体质量均匀分为模型组、依鲁替尼30 mg·kg~(-1)治疗组和泼尼松10 mg·kg~(-1)治疗组,每天ig给药1次,连续28周。每4周测定1次体质量,ELISA法测定血清中抗DS-DNA抗体、抗单链DNA(SS-DNA)抗体和抗组蛋白抗体水平,评估关节炎红肿等症状的评分及发病率;生物化学法检测血清肌酐、尿素氮和尿液尿蛋白水平评估肾功能。给药28周后处死小鼠,ELISA检测白细胞介素6(IL-6)、干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;采集心、肝、脾、肺和肾,称重并计算脏器系数;生物化学法检测血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶和碱性磷酸酶活性评估肝功能;HE染色观察后足和肾组织病理变化,并用免疫组化法检测肾组织免疫复合物IgG沉积。结果与正常对照组比较,模型组抗DS-DNA,SS-DNA和组蛋白抗体及IL-6,IFN-γ和TNF-α水平均明显升高(P<0.01),血清肌酐、尿素氮和尿蛋白升高,关节炎症状严重(P<0.01),后足组织炎症细胞浸润严重(P<0.01),肾和脾显著增大(P<0.01)与模型组相比,依鲁替尼治疗28周可减缓SLE模型小鼠体质量下降,降低抗DS-DNA,SS-DNA和组蛋白抗体水平(P<0.01),减轻小鼠关节红肿等症状(P<0.01),并降低关节炎发病率,降低血清细胞因子IL-6,IFN-γ和TNF-α水平(P<0.01);后足关节病理观察显示,炎症细胞浸润、血管翳形成、软骨破坏和骨吸收减轻(P<0.01);肾组织病理观察显示,炎症细胞浸润和IgG免疫复合物沉积减少,血清肌酐、尿素氮和尿蛋白水平降低(P<0.01),血清GPT和ALP活性亦降低(P<0.01)。结论依鲁替尼给药28周对SLE模型小鼠有一定的治疗作用,未见明显副作用。     

反式虾青素对慢性酒精中毒小鼠记忆功能和NF-κB、iNOS、TNF-α表达的影响

目的研究反式虾青素对酒精诱导的记忆功能障碍的改善作用及对小鼠海马、前额叶皮质NF-κB p65、i NOS和TNF-α表达的影响。方法取40只♂ICR小鼠,随机分为空白对照组、酒精模型组7 d、14 d、21 d、28 d,通过观察小鼠对酒精的偏好程度,并采用水迷宫测试,确定小鼠认知记忆障碍出现的时间点。另取40只♂ICR小鼠,将其分为对照组、酒精模型组及反式虾青素(20、40、80 mg·kg~(-1))给药组,21 d慢性给药后,分别观察小鼠训练后1 h和24 h的探索平台潜伏期时间、进入目标象限次数、目标象限停留时间和游动速度;Western blot检测小鼠海马和前额叶皮层NF-κB p65、i NOS和TNF-α的表达。结果小鼠在给予酒精21 d后,摄入酒精量明显增加(P<0.01),并出现记忆功能障碍,表现为探索平台潜伏期增加(P<0.01)、进入目标象限次数减少(P<0.01)、目标象限停留时间减少(P<0.01)。21 d慢性给予80 mg·kg~(-1)反式虾青素后,能明显改善酒精引起的记忆功能障碍。此外,21 d酒精组海马脑区NF-κB p65、i NOS和TNF-α表达均明显增加(P<0.01),给予40、80 mg·kg~(-1)反式虾青素能明显抑制海马脑区NF-κB p65、i NOS和TNF-α的表达(P<0.01);相比于海马脑区,前额叶皮层脑区3种炎症相关蛋白表达也明显增加,但仅有80 mg·kg~(-1)反式虾青素能抑制其表达(P<0.05)。结论反式虾青素通过抑制海马与前额叶皮层脑区炎症相关蛋白NF-κB p65、i NOS和TNF-α的表达,发挥抗神经炎症的作用,从而改善慢性酒精引起的记忆功能障碍。     

双孢菇胞内和胞外多糖对伴刀豆凝集素A诱导免疫性肝损伤小鼠的保护作用

目的研究双孢菇胞内多糖(IPS)和胞外多糖(EPS)对伴刀豆凝集素A(Con A)所致小鼠免疫性肝损伤的保护作用。方法小鼠预先ig给予IPS或EPS 100,200和400 mg·kg~(-1),每日1次,连续12 d,末次给药后4 h尾静脉注射Con A 25 mg·kg~(-1)制备免疫性肝损伤小鼠模型。8 h后眼球取血,取肝、脾和胸腺。全自动生化分析仪测定血清谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)水平。流式细胞仪检测脾细胞中CD4~+和CD8~+T淋巴细胞百分比。生化试剂盒检测血清干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平。光学显微镜观察肝组织切片的病理改变。结果与正常对照组相比,模型小鼠胸腺指数明显降低(P<0.01),肝、脾指数明显增高(P<0.01);与模型组比较,预先给予IPS 100,200和400 mg·kg~(-1)及EPS 200和400 mg·kg~(-1)小鼠胸腺指数明显升高(P<0.01),肝、脾指数均明显降低(P<0.01)。与正常对照组相比,模型小鼠血清GOT和GPT活性及TNF-α和IFN-γ含量显著升高(P<0.01);预先给予IPS及EPS 200和400 mg·kg~(-1)小鼠血清GOT和GPT活性及TNF-α和IFN-γ含量较模型组显著降低(P<0.01)。与正常对照组相比,模型小鼠肝组织SOD活性降低(P<0.01),MDA水平升高(P<0.01);与模型组比较,预先给予IPS及EPS 200和400 mg·kg~(-1)SOD活性明显升高(P<0.01),MDA水平降低(P<0.01)。与正常对照组相比,模型小鼠脾细胞中CD4~+T淋巴细胞百分比和CD4~+/CD8~+T淋巴细胞比值明显下降(P<0.01);预先给予IPS和EPS 400 mg·kg~(-1)CD4~+T淋巴细胞百分比与模型组比较明显升高(P<0.01),CD4~+/CD8~+T淋巴细胞比值变化不明显。镜下观察模型组小鼠肝组织出现明显的病理改变,预先给予IPS和EPS能减轻Con A引起的病理变化。结论双孢菇IPS和EPS对小鼠免疫性肝损伤有一定的保护作用,其机制可能与清除自由基、抑制脂质过氧化和调节免疫系统平衡有关。     

TNF-α在丙泊酚诱发的神经元凋亡及认知功能障碍中的作用

目的探讨TNF-α在丙泊酚诱发的海马神经元凋亡及远期认知功能障碍中的作用。方法 7 d龄(P7)SD大鼠随机分为3组:Control组,无任何处理;P(single)组,腹腔注射丙泊酚50 mg·kg~(-1);P(repeated)组,腹腔注射丙泊酚50mg·kg~(-1),每天1次,共7次。丙泊酚两组于麻醉结束后2 h(对照组则分别对应上述两时间点)采用Western blot法检测海马组织TNF-α含量。另取P7大鼠随机分为5组:Control组;P(single)组;P(repeated)组;P(single)+ETN组,腹腔注射丙泊酚50 mg·kg~(-1)前30 min侧脑室注射依那西普0.4 mg·kg~(-1);P(repeated)+ETN组,腹腔注射丙泊酚50 mg·kg~(-1),每天1次,共7次,第1次和第4次丙泊酚注射前30min侧脑室注射依那西普0.4 mg·kg~(-1)。于P7、P13、P21、P35时间点,各组采用免疫组化法检测海马CA1区神经元凋亡。剩余大鼠于P36-P41行Morris水迷宫实验。结果丙泊酚单次或多次暴露均使海马组织TNF-α含量明显高于同期对照水平(P<0.05,P<0.01);P(single)组中,活化caspase-3阳性神经元于P7较对照组同时间点明显增多(P<0.05),而于其它时间点差异无显著性(P>0.05),逃避潜伏期和穿越平台次数与对照组比较均无差异(P>0.05);P(repeated)组中,P13、P21、P35时间点活化caspase-3阳性神经元均明显高于同期对照组水平(P<0.01),逃避潜伏期从d1~d5均明显高于对照组同期水平(P<0.01),且穿越平台次数明显低于对照组(P<0.01);依那西普侧脑室注射后,丙泊酚麻醉后各时点的活化caspase-3阳性神经元、逃避潜伏期及穿越平台次数与对照组比较差异均无显著性(P>0.05)。结论 TNF-α介导了丙泊酚诱发的发育期海马神经元凋亡和远期认知功能障碍,而远期认知功能障碍可能与持续性神经元凋亡有关。     

藏药复方多血康胶囊对脂多糖诱导急性肺损伤小鼠的保护作用

目的:考察藏药复方多血康胶囊对脂多糖诱导急性肺损伤小鼠的保护作用。方法:将60只KM小鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组(阳性对照,1 mg/kg)和复方多血康胶囊高、中、低剂量组(3.6、1.8、0.9 g/kg,以生药计),每组10只。ig给药,空白组和模型组小鼠ig等体积生理盐水,每天1次。连续给药7 d后,除空白组外,其余各组小鼠均ip脂多糖诱导急性肺损伤。造模6h后,观察小鼠肺组织病理改变,测量肺组织含水量,检测肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平以及血清中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠肺组织发生充血水肿、炎症细胞浸润、肺泡间隔及肺泡壁明显增宽等病理变化,肺组织含水量和肺组织中MDA水平以及血清中IL-6、TNF-α水平均显著升高(P<0.01),肺组织中SOD、GSH-Px水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较,各给药组小鼠肺组织损伤程度均不同程度降低;除复方多血康胶囊低剂量组大鼠肺组织含水量、肺组织中MDA水平以及血清中TNF-α水平变化不明显外,其余各给药组小鼠上述指标均显著改善(P<0.05或P<0.01)。结论:藏药复方多血康胶囊可明显减轻小鼠氧化应激和炎症反应,对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠有一定保护作用。     

铃兰毒苷通过PPARγ/NF-κκB信号通路抑制葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠实验性结肠炎

目的研究铃兰毒苷(CNT)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠实验性结肠炎的保护作用及其对PPARγ/NF-κB信号通路的影响。方法 40只雄性C57BL/6小鼠分为正常对照组、模型组、CNT(50和150μg·kg~(-1))组和阳性药(柳氮磺胺嘧啶,200 mg·kg~(-1))组。除正常对照组外,各组分别给予4%DSS饮用水建立实验性结肠炎模型,各组小鼠连续7 d每天灌胃给予不同剂量的药物或生理盐水。观察小鼠体质量,结肠长度、大肠和脾重和疾病活性指数;Western印迹和免疫组化实验检测结肠组织中P65和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)蛋白表达;ELISA法检测小鼠血清和结肠组织肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-1β的含量。结果与正常对照组相比,模型组小鼠体质量下降(P<0.01),结肠长度缩短(P<0.05),小鼠大肠和脾质量增加(P<0.05),疾病活性指数增加(P<0.01),结肠组织中P65和PPARγ表达水平升高(P<0.01),同时,血清和结肠中TNF-α,IL-6和IL-1β的含量升高(P<0.01)。与模型组相比,不同剂量CNT组小鼠体质量、结肠长度、大肠和脾重及疾病活动指数均有所改善(P<0.05),血清和结肠中TNF-α,IL-6和IL-1β的含量降低(P<0.05,P<0.01),结肠组织中上述炎症相关蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论 CNT对DSS诱导的小鼠实验性结肠炎具有保护作用,其机制可能与PPARγ/NF-κB信号通路有关。     

维药昆仑雪菊多糖对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的预防作用及机制研究

目的:研究维药昆仑雪菊多糖(KSCP)对四氯化碳(CCl_4)所致小鼠急性肝损伤的预防作用及机制。方法:将96只小鼠随机分为正常组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、联苯双酯滴丸组(阳性对照,1.5 mg/10 g)和KSCP低、中、高剂量组(0.3、0.6、1.2 mg/10 g),每组16只,ig给药,每天1次,连续10 d。除正常组外,其余各组小鼠均ip 1%CCl_4菜籽油溶液诱导肝损伤。造模24 h后,检测各组小鼠血清中谷氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)的水平和肝组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化物(SOD)的水平,计算小鼠肝、脾指数,观察肝组织病理变化并进行病理评分,检测肝组织中凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清中ALT、AST、TNF-α、IL-1水平和肝组织中MDA水平以及肝、肾指数均明显升高(P<0.01),肝组织中SOD水平明显降低(P<0.01);肝组织发生肝细胞坏死、变性和炎症细胞浸润等病理变化,病理评分明显增加(P<0.01);肝组织中Caspase-3蛋白表达水平以及Bcl-2/Bax比值均明显降低(P<0.01)。与模型组比较,各给药组小鼠上述指标均明显改善(P<0.05或P<0.01)。结论:KSCP对CCl_4所致小鼠急性肝损伤有一定预防作用,其机制可能与抗氧化、抗炎及调节凋亡相关蛋白的表达有关。     

薄荷酮对内毒素致炎症模型小鼠的保护作用研究

目的观察薄荷酮对内毒素(LPS)致炎症模型小鼠的保护作用,并初步探讨与NLRP3炎症小体激活相关的调控作用机制。方法♂C57BL/6J小鼠按体质量分层随机分为空白对照组、模型对照组、地塞米松组(5 mg·kg~(-1))、薄荷酮0.25 g·kg~(-1)及0.5 g·kg~(-1)剂量组。除地塞米松组实验当日腹腔注射给药1次外,其余各组小鼠连续灌胃给药5 d,每天1次。各组小鼠末次给药30 min后,除空白组小鼠外,其余各组小鼠腹腔注射LPS(15 mg·kg~(-1),10 m L·kg~(-1))制备炎症反应模型,造模12 h后,小鼠取血分离血清,采用ELISA及液相蛋白芯片技术测定炎症因子IL-18、IL-1β、IL-5、TNF-α、IFN-γ、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及巨噬细胞炎性蛋白-1β(MIP-1β)的水平;取小鼠全血进行白细胞(WBC)计数;剖取肺组织计算肺脏指数,并测定肺组织中NO含量,进行肺组织病理组织学检查;RT-PCR法检测肺组织中NLRP3、caspase-1及IFN-α mRNA表达;免疫组化法观察肺组织中cathepsin B、P2X7R蛋白表达。结果 0.5 g·kg~(-1)薄荷酮明显降低内毒素致炎症模型小鼠血清IL-18、IL-1β、IL-5、TNF-α、IFN-γ、G-CSF、GM-CSF、MIP-1β的水平(P<0.05或P<0.01),下调模型小鼠肺组织NLRP3、IFN-α mRNA表达及cathepsin-B、P2X7R蛋白表达(P<0.05或P<0.01),明显降低模型小鼠肺组织中NO的含量(P<0.05);0.25 g·kg~(-1)薄荷酮明显降低模型小鼠血清中IL-1β、IL-5、TNF-α、MIP-1β含量(P<0.05),下调肺组织中P2X7R蛋白表达及NO水平(P<0.05或P<0.01);病理组织学检查显示0.5、0.25 g·kg~(-1)薄荷酮能明显减少肺组织切片中嗜中性粒细胞数量(P<0.01),减轻肺泡膈的增厚;薄荷酮对模型小鼠全血白细胞计数与肺指数的升高表现出降低趋势。结论薄荷酮对内毒素致炎症模型小鼠有保护作用,能抑制血清多种炎性细胞因子的释放而减轻肺部炎性损伤,该作用可能与干扰NLRP3炎症小体的激活有关。     

不确定性空瓶饮水刺激法和束缚应激法建立小鼠焦虑模型及比较

目的通过比较不确定性空瓶饮水刺激法和束缚应激法诱发小鼠产生焦虑样情绪,筛选一种重复性好、刺激性小且易于操作的方法建立小鼠焦虑模型,为寻找合适的抗焦虑药物的药效学评价模型提供实验依据。方法 SPF级雄性C57BL/6J小鼠采用不确定性空瓶饮水刺激法建立小鼠焦虑模型,实验分为自由饮水组、定时饮水组、生理应激组和空瓶刺激组,每组8只。自由饮水组小鼠全天自由进食饮水;定时饮水组小鼠每天固定2个时间点、间隔12 h,每次饮水10 min;在相同的时间点,生理应激组小鼠每天确保1次饮水10 min,另一次既不给水也不给空瓶;空瓶刺激组小鼠每天饮水时间随机给予1次或2次空瓶进行刺激,共计饮水12次,空瓶16次;实验持续14 d。采用束缚应激法建立小鼠焦虑模型,实验分为正常对照组和束缚应激组,每组8只。正常对照组小鼠正常饲养,束缚应激组小鼠于每天早上9∶00头朝离心管的底部束缚在管内,第1天束缚2 h,随后每天束缚时间延长2 h,直至每天8 h,连续21 d。小鼠在空瓶刺激7和14 d后或束缚应激7,14和21 d后观察体质量的变化。造模结束后,通过旷场实验检测小鼠自主活动和探索行为,高架十字迷宫实验检测小鼠进入开放臂的次数和在开放臂内停留时间;采用ELISA测定束缚应激21 d后小鼠血浆皮质酮(CORT)水平和海马组织中5-羟色胺(5-HT)含量。结果不确定性空瓶饮水刺激法:与自由饮水组相比,定时饮水组小鼠在开放臂内停留时间显著下降(P<0.05);与定时饮水组相比,空瓶刺激7 d后,小鼠体质量显著下降(P<0.05),其他各项行为学指标无明显变化。束缚应激法:与正常对照组相比,束缚应激14 d后,小鼠体质量显著降低(P<0.05),小鼠的自主活动和探索行为无明显变化,进入开放臂的次数和在开放臂内停留时间均显著下降(P<0.05);束缚应激21 d后,小鼠体质量显著降低(P<0.05),血浆CORT含量和海马组织中5-HT含量显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论不确定性空瓶饮水刺激法建立小鼠焦虑模型的稳定性和敏感性欠佳,不可控因素较多,刺激14 d未成功建立小鼠焦虑模型。束缚应激14 d可成功建立小鼠焦虑模型,其机制可能与下丘脑-垂体-肾上腺轴功能紊乱和5-HT代谢异常相关。     

水飞蓟素对伴刀豆球蛋白A致免疫性肝损伤小鼠的保护作用

目的研究水飞蓟素对伴刀豆球蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导的免疫性肝损伤小鼠的保护作用,探讨其可能的肝保护机制。方法将实验小鼠30只随机分为对照组、模型组、水飞蓟素组(200 mg·kg~(-1)),各10只。对照组和模型组小鼠按10 m L·kg~(-1)灌胃0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)水溶液,水飞蓟素组小鼠灌胃同等容量的水飞蓟素(200 mg·kg~(-1),0.5%CMC-Na混悬),每日1次,共10 d。实验末期,模型组和水飞蓟素组小鼠尾静脉注射Con A(15 mg·kg~(-1))建立小鼠免疫性肝损伤模型,检测小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)活性及肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量;苏木精-伊红(HE)染色法观察肝组织病理学变化。ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-6(IL-6)含量。结果水飞蓟素明显降低Con A所致免疫性肝损伤小鼠血清ALT、AST和ALP水平(P<0.01),还可增加肝组织SOD、CAT、GSH的活性,降低肝组织MDA水平(P<0.05或P<0.01),明显改善肝脏病理组织状况;显著降低小鼠血清TNF-α、IL-4和IL-6含量(P<0.01)。结论水飞蓟素能明显减轻Con A诱导的小鼠免疫性肝损伤,该作用与其增加肝组织中抗氧化酶的活性、降低脂质过氧化水平、降低TNF-α、IL-4和IL-6等促炎因子水平有关。