白花蛇舌草-半枝莲药对组分对结肠腺癌Lovo细胞生物学行为的影响

摘要:目的　探讨白花蛇舌草-半枝莲药对组分对结肠腺癌Lovo细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响及作用机制。方法　将白花蛇舌草、半枝莲按质量1∶1进行3次煎煮,获得水提物,后取适量浸膏用石油醚回流脱脂,再以乙酸乙酯进行多次萃取,获得白花蛇舌草-半枝莲药对组分,并计算得率。实验分为对照组（正常培养Lovo细胞）、白花蛇舌草-半枝莲药对组分低剂量组（10 mg/L）、中剂量组（30 mg/L）及高剂量组（50 mg/L）。通过噻唑蓝比色法（MTT）检测各组细胞培养24、48、72 h后的增殖抑制率。各组细胞培养48 h后,流式细胞仪检测细胞周期分布;Transwell实验检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;TUNEL法检测细胞凋亡情况;Western blot法检测Grb2相关结合蛋白1（Gab1）、血管内皮生长因子受体2（VEGFR-2）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、苏氨酸激酶（Akt）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达情况。结果　化学萃取后的白花蛇舌草-半枝莲药对中主要含有对羟基苯乙酮、野黄芩苷、木犀草素和芹菜素4种化合物,组分得率为0.61%。与对照组相比,低、中、高剂量组细胞增殖抑制率升高,G1期肿瘤细胞比例增加,细胞凋亡指数增高,侵袭细胞数和划痕闭合率明显减小（均P＜0.05）,细胞中Gab1、VEGFR-2、PI3K、Akt、MMP-9、Bcl-2蛋白表达降低,Bax表达升高（均P＜0.05）,且存在剂量依赖性。结论　白花蛇舌草-半枝莲药对组分可抑制结肠腺癌Lovo细胞的增殖,降低其迁移和侵袭能力,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制Gab1/VEGFR-2/PI3K/Akt信号通路活化有关。     

白花蛇舌草抗肿瘤作用及机制最新研究进展

目的:综述白花蛇舌草抗肿瘤作用及机制的最新进展。方法:通过整理近年来国内外对白花蛇舌草抗肿瘤作用及机制的最新研究成果进行归纳总结。结果:现有文献表明白花蛇舌草在体内外均有抗肿瘤作用,其主要作用机制是诱导肿瘤细胞凋亡、影响其信号通路、增强免疫功能等。结论:白花蛇舌草的抗肿瘤作用已经得到研究者认可,但其作用机制还不完全明确。     

白花蛇舌草水提物通过抑制MAPK通路致肺癌细胞的凋亡

目的：研究白花蛇舌草（BHSSC）水提物对肺癌细胞增殖、凋亡的影响以及体内抑制肿瘤活性,进一步通过研究其对凋亡关键通路MAPK信号通路的影响,以阐明白花蛇舌草抗肺癌分子机制。方法：制备BHSSC水提取物,采用MTT法研究其对人肺癌细胞株A549和PC-9细胞体外增殖的抑制活性,并进一步构建人肺癌的裸鼠移植瘤模型,研究BHSSC水提物的体内抗肿瘤活性;通过Western blot技术研究BHSSC水提取物对MAPK通路中关键蛋白 Erk、JNK、p38的表达水平和磷酸化水平的影响,进而阐明白花蛇舌草诱导肺癌细胞凋亡机制。结果：BHSSC水提取物可以剂量依赖性地促进肺癌细胞的凋亡,从而抑制肺癌细胞的增殖。当剂量达到600 μg·mL-1 时,肺癌细胞抑制率达到95%（P<0.01）。荷瘤裸鼠模型结果显示,在给药21天后,给药组与肺癌模型组相比,肿瘤体积显著减小,平均抑瘤率达到70%（P<0.01）。Western blot结果提示,BHSSC水提物能够显著抑制MAPK通路中关键蛋白p38、Erk、JNK的磷酸化水平。结论：BHSSC水提物能够通过抑制肺癌细胞MAPK通路的活化,促进肺癌细胞凋亡,从而抑制肺癌的体内体外增殖。     

胃炎停胶囊提取工艺的研究

目的 研究胃炎停胶囊中各组分的醇提，挥发油提取，水煎者提取的工艺方法。方法 以醇浸膏得率，齐墩果酸含量为指标，考察渗滤法提取亲脂性部分的工艺条件；以加水量和提取时间两因素考察对挥发油提取取得率的影响；用正交试验优选水煎煮的提取工艺条件。结果 白花蛇舌草，半枝莲亲脂部分以60％乙醇为溶媒，收集12倍量渗滤液，结果齐墩果酸含量和浸膏收率高；高良姜加10倍量水提取4h，可使挥发油基本馏出；水提部分工艺为加14倍量水，提取2次，每次1h。结论上述实验结果可为胃炎停胶囊提取工艺的确定提供实验依据。     

半枝莲粗提物对小鼠肝脏药物代谢酶的调节作用

目的通过研究半枝莲水提物和乙醇提取物对昆明（KM）小鼠细胞色素P450酶（CYP）、谷胱甘肽S-转移酶（GST）活性的抑制作用,研究半枝莲与其他药物合用时可能发生的相互作用。方法按照随机对照原则,以半枝莲水提物和乙醇提取物1、2和5g·kg^-1·d^-1剂量为低、中和高剂量连续灌胃给药5d,以HPLC方法检测探针药及其代谢产物量来表示相应酶的活性;以分光光度法测定细胞溶质中GST酶活性。结果与对照组比较,中、高剂量半枝莲水提物组与乙醇提取物组CYP2C与CYP3A活性显著下降;高剂量水提物组GST活性显著下降;而各组CYP2D与CYP2E1活性未见改变。结论半枝莲水提物和乙醇提取物对KM小鼠的细胞色素P450酶和GST活性都有不同程度的抑制作用,呈现出剂量相关性。     

白花蛇舌草化学成分和药理作用研究进展

目的对白花蛇舌草的化学成分和药理作用进行综述,进一步为该植物的保肝作用的研究提供物质基础。方法对相关文献进行归纳总结,并对其化学成分分类综述。结果报道的白花蛇舌草主要含有黄酮类、蒽醌类、萜类和甾醇类等化学成分,药理作用包括抗肿瘤、抗氧化、抗菌、免疫调节和保肝等作用。结论通过对白花蛇舌草药学活性及各类化合物的讨论,揭示了白花蛇舌草药理学作用的分子基础,并且有利于进一步开展其保肝活性的研究。     

舌莲胃康胶囊的质量标准研究

目的:建立舌莲胃康胶囊的质量标准。方法:采用薄层色谱(TLC)法对舌莲胃康胶囊中莪术、三七、白花蛇舌草进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定半枝莲中野黄芩苷的含量。结果:TLC斑点清晰、分离度好,阴性无干扰;野黄芩苷检测浓度在0.01～0.10mg.mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9998),平均回收率为97.86%,RSD=1.62%(n=6)。结论:所建标准可用于舌莲胃康胶囊的质量控制。     

白花蛇舌草、金钱草、丹参和甘草的配伍抑菌效应研究

目的白花蛇舌草、金钱草、丹参和甘草,几种抑菌中药材配伍前后的抑菌效应的变化。方法采用体外抑菌试验,试管二倍稀释法,先测定各抑菌中药材的抑菌性,再对这几种中药材进行配伍,同法测定其抑菌效果。结果白花蛇舌草、金钱草、丹参和甘草配伍后,对细菌和霉菌抑菌的总体效果相当于几种药材中,抑菌性最强药材的抑菌效果;对酵母菌的总体抑菌作用,达到抑菌性最强药材抑菌效果的2倍。甘草的不同配伍比例(0,0.5,1),对整个配伍的抑菌效果无明显作用。结论 4种抑菌中药材配伍后,对细菌、霉菌和酵母菌抑菌作用有明显的协同效应。     

高效液相色谱法同时测定白花蛇舌草中两组分的含量

目的 :建立白花蛇舌草中齐墩果酸与熊果酸的含量测定方法。方法 :色谱柱为NucledureC18 柱 ,流动相为乙腈 -磷酸盐缓冲液 (45∶55) ,检测波长为220nm。结果 :齐墩果酸的平均回收率为 (96 79±2 42) % ,熊果酸的平均回收率为 (97 15±2 33) %。结论 :本方法可同时测定齐墩果酸和熊果酸的含量 ,可用于药材质量控制     

超声提取白花蛇舌草总黄酮工艺研究

目的研究白花蛇舌草总黄酮的超声提取工艺。方法以超声波法提取总黄酮类物质,采用正交实验优化提取工艺。利用聚酰胺柱色谱法纯化提取的总黄酮,以芦丁为对照品,利用NaNO2 Al（NO3）3 NaOH显色法计算总黄酮含量。结果最佳提取工艺为白花蛇舌草药材以70%乙醇为提取溶剂,料液比1：20,超声提取30 min,提取3次,提取率2.38%。结论优选出的最佳工艺简单易行,能完全提取白花蛇舌草中总黄酮。     

不同来源白花蛇舌草注射液过敏反应比较研究

目的研究白花蛇舌草注射液的致敏性并比较不同来源白花蛇舌草注射液过敏反应的差别,遴选优质药品。方法将实验动物分为阴性对照组、阳性对照组(卵清蛋白)、白花蛇舌草注射液组,通过豚鼠主动全身过敏反应(ASA)试验和大鼠皮肤被动过敏反应(PCA)试验对白花蛇舌草注射液的致敏性进行研究。结果 A厂家和C厂家ASA试验和PCA试验均为阴性,B厂家除两批样品PCA试验为阳性外,其余样品ASA试验和PCA试验为阴性。结论不同厂家生产的白花蛇舌草注射液由于生产条件不同等原因,其过敏反应存在差别,其鞣质的含量可能与PCA有关。     

白花蛇舌草与水线草饮片的微距图像鉴别

目的：通过微距图像鉴别白花蛇舌草与水线草。方法：通过微距摄像采集白花蛇舌草与水线草各部位图像。结果：采集到白花蛇舌草与水线草的花序、茎、叶等微距图像。结论：白花蛇舌草和水线草的花序和叶的微距图像可作为其鉴别依据。     

半枝莲和白花蛇舌草药对中总黄酮的提取及纯化工艺研究

目的 筛选出半枝莲和白花蛇舌草药对中总黄酮提取及纯化的最佳工艺条件。方法 以总黄酮提取率和浸膏量为评价指标,选择两者配比、乙醇体积分数、料液比、提取时间4个因素作为考察对象,L₉（3⁴）正交试验优选总黄酮提取工艺。然后结合静态和动态实验方法,以吸附率、解吸率为指标,确定聚酰胺树脂纯化的工艺条件及参数。结果 确定药对中总黄酮提取的工艺条件：半枝莲与白花蛇舌草药对的配比为4：1,25倍量体积分数为70%的乙醇,提取3次,每次2 h。聚酰胺树脂纯化药对中总黄酮的工艺条件：上样液中总黄酮浓度为63.14 mg/ml,pH为4.0,以1.5 ml/min的流速上样,先用流速为3 ml/min的3.1床容积（BV）的水洗脱,再用流速为3 ml/min的9.3 BV体积分数为65%的乙醇洗脱,收集洗脱液,测得总黄酮纯度为40.39%,转移率为81.57%。结论 优化的提取工艺条件稳定、可行,黄酮提取率较高。聚酰胺树脂纯化的工艺条件简便,效果良好。     

半枝莲粗提物对人肝脏细胞色素P450酶的影响

目的 研究半枝莲水相和乙醇相提取物对人细胞色素P450主要酶活性的影响，为半枝莲的开发和合理地临床应用提供参考。方法 以咪哒唑仑、甲苯磺丁脲、咖啡因、氯唑沙完、异喹呱和试卤灵为探针药，用高效液相色谱法分别测定不同提取溶质的半枝莲粗提物对人细胞色素P450主要酶活性的影响。结果 ①半枝莲粗提物对CYP3A4、CYP2C9、CYP1A2、CYP1A1酶的活性呈现出剂量依赖性抑制作用。②半枝莲水相粗提物比乙醇相粗提物对CYP1A1和CYP1A2酶的体外抑制作用强。结论半枝莲水相提取物和乙醇相提取物是CYP3A4、CYP2C9、CYP1A2、CYP1A1体外抑制剂。     

白花蛇舌草联合化疗对癌症治疗的Meta分析

目的 利用Meta分析方法评价白花蛇舌草联合化疗治疗癌症的临床疗效.方法 按照循证医学的要求全面检索中国期刊全文数据库、PubMed数据库等,把符合纳入标准的7篇文献作为Meta分析的对象.采用RevMan 4.2专用软件进行统计分析.结果 7项研究疗效OR合并检验,Z=4.37 （P＜0.01）,表明白花蛇舌草联合化疗与单纯化疗比较,两组临床疗效差异有统计学意义.3项研究KPS评分OR合并检验,Z=3.84（P＜0.01）,表明白花蛇舌草联合化疗与单纯化疗对患者生存质量改善的差异有统计学意义.结论 现有的临床证据表明,白花蛇舌草联合化疗治疗癌症疗效优于单纯化疗,并且比单纯化疗更能提高患者生存质量.     

HPLC法同时测定白花蛇舌草中齐墩果酸和熊果酸的含量

目的建立同时测定白花蛇舌草中齐墩果酸和熊果酸含量的方法。方法采用HPLC法 ,色谱柱为HiQsilC18V (4 6mm× 15 0mm ,5 μm) (带预柱 ) ,流动相为甲醇 四丁基溴化铵(2 0mmol·L-1) 三乙胺 (V∶V∶V =90∶10∶0 0 2 ) (用冰醋酸调pH 6 9) ,检测波长 2 10nm ,流速0 3mL·min-1,进样量 2 0 μL。结果齐墩果酸和熊果酸分别在 9 80～ 15 6 8mg·L-1(r =0 9999)和 33 5～ 6 70mg·L-1(r =0 9999)内峰面积与质量浓度呈良好的线性关系 ;平均回收率 (n =9)分别为 98 3% (RSD =1 3% )和 98 0 % (RSD =1 4 % )。结论此方法可为不同产地白花蛇舌草中齐墩果酸和熊果酸的含量测定提供科学的依据     

白花蛇舌草悬浮细胞分批培养规律的研究

目的利用白花蛇舌草茎尖的分生组织建立植物悬浮细胞培养系,确定白花蛇舌草悬浮细胞分批培养时的变化规律。方法通过接种不同量的细胞液确定最适接种量,以细胞干重、蔗糖、铵离子、硝酸盐氮和多糖含量作为检测指标,确定白花蛇舌草悬浮细胞分批培养时的变化规律。结果白花蛇舌草悬浮细胞分批培养的最适接种量为15%,此时细胞干重达到最大值。在此接种量下,当培养时间达到9 d时,pH很快降低到3左右,细胞干重不再增加。培养液中的主要营养成分碳源———蔗糖,在培养开始时,有比较大的降低,在培养后期,细胞干重不再增加时,也不再有大的改变。氮源[NO3-]优于[NH4+]先被利用,而且[NO3-]的利用速率要远高于[NH4+],达到7.14μg/(mL.d);细胞液中多糖的生成和细胞的生长属于非偶联型,在培养后期,逐渐大量生成。结论初步确定白花蛇舌草悬浮细胞分批培养时的变化规律,为以后的培养工艺优化打下了基础。     

A new acylated flavonol glycoside and antioxidant effects of Hedyotis diffusa

A study on the bioactive principles of Hedyotis diffusa Willd., led to the isolation of a new acyl flavonol di-glycoside which was characterized as kaempferol 3-O[2"-O-(E-6'"-O-feruloyl)-beta-D-glucopyranosyl]-beta-D-galactop yranoside by spectral and chemical methods from the methanolic extract. In addition, three known flavonol glycosides and six known iridoid glycosides were also obtained. The above-mentioned glycosides were tested for antioxidant effects on xanthine oxidase inhibition, xanthine-xanthine oxidase cytochrome c and TBA-MDA systems.     

Apoptosis-inducing effects of two anthraquinones from Hedyotis diffusa WILLD

Two anthraquinones which inhibit activity of the Src tyrosine kinase were isolated from a water extract of Hedyotis diffusa WILLD. and identified as 2-hydroxy-3-methylanthraquinone (compound 1) and 1-methoxy-2-hydroxyanthraquinone (compound 2). Both compounds showed inhibitory activity against protein tyrosine kinases v-src and pp60src and arrested the growth of SPC-1-A, Bcap37 and HepG2 cancer cells. Observation of mitochondrial membrane potential collapse and caspase-3 activation following treatment with the compounds indicates that their apoptotic induction activity may act via the mitochondrial apoptotic pathway. Compared with compound 2, compound 1 is more active as an antagonist of Src kinase, which might account for its higher potency to induce growth arrest and apoptosis. These results provide a deeper insight into the functions of these two simple anthraquinones and the anti-tumour pathway of Hedyotis diffusa WILLD.     

2-Hydroxy-3-methylanthraquinone from Hedyotis diffusa Willd induces apoptosis in human leukemic U937 cells through modulation of MAPK pathways

The herb of Hedyotis diffusa Willd (H. diffusa Willd), an annual herb distributed in northeastern Asia, has been known as a traditional oriental medicine for the treatment of cancer. Recently, Chinese researchers have discovered that two anthraquinones isolated from a water extract of H. diffusa Willd showed apoptosis-inducing effects against cancer cells. However, the cellular and molecular mechanisms responsible for this phenomenon are poorly understood. The current study determines the role of mitogen-activated protein kinases (MAPK) in human leukemic U937 cells apoptosis induced by 2-hydroxy-3-methylanthraquinone from H. diffusa. Our results showed that 2-hydroxy-3-methylanthraquinone decreased phosphorylation-ERK1/2 (p-ERK1/2), and increased p-p38MAPK, but did not affect expressions of p-JNK1/2 in U937 cells. Moreover, treatment of U937 cells with 2-hydroxy-3-methylanthraquinone resulted in activation of caspase-3. Furthermore, PD98059 (ERK1/2 inhibitor) significantly enhanced 2-hydroxy-3-methylanthraquinone-induced apoptosis in U937 cells, whereas caspase-3 inhibitor or SB203580 (p-p38MAPK inhibitor), decreased apoptosis in U937 cells. Taken together, our study for the first time suggests that 2-hydroxy-3-methylanthraquinone is able to enhance apoptosis of U937 cells, at least in part, through activation of p-p38MAPK and downregulation of p-ERK1/2. Moreover, the triggering of caspase-3 activation mediated apoptotic induction.