GSDMD介导的细胞焦亡在呼吸系统疾病中研究进展

细胞焦亡是一类新发现的程序性细胞死亡方式,由炎性半胱氨酸蛋白酶介导发生快速细胞膜破裂、细胞崩解,并释放细胞内容物和IL-18、IL-1β等大量炎性因子参与细胞死亡。GSDMD蛋白是细胞焦亡的最终执行蛋白,通过介导经典、非经典细胞焦亡途径发挥作用。在多种呼吸系统疾病中,均发现有GSDMD表达水平升高,提示GSDMD介导的细胞焦亡,可能成为呼吸系统疾病的潜在诊疗靶点,本文章就GSDMD介导的细胞焦亡在呼吸系统疾病中作用的研究进展进行综述。     

N-乙酰半胱氨酸对抑郁模型大鼠行为及神经递质的影响

目的 观察 N-乙酰半胱氨酸（NAC）对抑郁模型大鼠行为、各脑区单胺递质的影响, 探讨 NAC 潜在的抗抑郁作用及机制。 方法 选取成年雄性 SD 大鼠 32 只, 随机分为模型组、氟西汀（FLX）组、NAC 组、对照组, 每组 8 只;前 3 组单笼孤养, 釆用连续 6 周慢性轻度不可预见性应激（CUS）的方法建立慢性抑郁大鼠模型, 并于第 3 周末至第 6 周末对 NAC 组和 FLX 组分别给予 NAC 和 FLX 灌胃, 模型组和对照组给予同体积生理盐水灌胃。 CUS 前、后及干预后以体质量测量、糖水消耗实验、旷场实验对大鼠行为进行评估; 以库仑阵列电化学高效液相色谱法测定各组大鼠前额叶（PFC）、纹状体（ST）、杏仁核（AM）和海马（HIP）单胺神经递质去甲肾上腺素（NE）、5-羟色胺（5-HT）、多巴胺（DA）水平。 结果 （1）干预后对照组、NAC 组、FLX 组较模型组大鼠体质量增加多、糖水消耗量多、水平运动距离长、直立次数多、粪便粒数少（均 P < 0.05）。（2）与对照组相比, 模型组大鼠前额叶、纹状体、杏仁核、海马等脑区单胺神经递质 NE、DA 和 5-HT 水平明显降低（均 P < 0.05）;与模型组相比, NAC 组、FLX 组前额叶、纹状体、杏仁核、海马等 NE、DA、5-HT 浓度显著升高（均 P < 0.05）。 结论 NAC 和 FLX 均可有效改善抑郁模型大鼠的抑郁行为, 并在总体上提高前额叶、纹状体、杏仁核、海马等脑区单胺神经递质的水平。     

氧化锌纳米颗粒对小鼠小胶质细胞HMGB1/TLR4/RAGE信号通路和炎症反应影响的研究

目的 探讨氧化锌纳米颗粒(Zinc oxide nanoparticles, ZnO NPs)对小鼠小胶质细胞HMGB1/TLR4/RAGE信号通路的影响,以及HMGB1/TLR4/RAGE信号通路在ZnO NPs导致的小鼠小胶质细胞炎症反应和细胞焦亡中的可能作用。方法 采用ZnO NPs处理BV2小鼠小胶质细胞24 h, MTT法检测ZnO NPs对小鼠小胶质细胞增殖活性影响;LDH实验检测细胞膜完整性;ELISA法检测细胞培养基中IL-1β分泌水平;Western blot法检测HMGB1、TLR4、RAGE、Caspase-1和GSDMD蛋白表达水平。结果 ZnO NPs染毒24 h后,小鼠小胶质细胞出现明显的生长抑制(P<0.05),细胞培养液上清LDH活性升高,细胞内HMGB1、TLR4和RAGE蛋白表达增加(P<0.05),而用丙酮酸乙酯(Ethyl Pyruate, EP)处理后,上述蛋白含量均下降,差异有统计学意义(P<0.05);细胞内Caspase-1、GSDMD和GSDMD-N水平升高(P<0.05),细胞上清液中IL-1β分泌水平增加(P...     

水通道蛋白4在小鼠脑老化中的作用

水通道蛋白4(AQP4)主要分布在星形胶质细胞足突膜上,是脑内最重要的水通道亚型。已经发现,AQP4除参与调节脑内水平衡外,还参加学习记忆、脑外伤、脑缺血、脑肿瘤等一系列生理、病理过程。脑老化伴随着学习记忆下降,以及易发生脑缺血、脑肿瘤等老年相关性疾病,但AQP4在脑老化中的作用尚未见报道。目的观察AQP4在小鼠脑老化中的作用。方法对年轻(2～3个月)和老年(17～19个月)AQP4基因敲除小鼠(AQP4-/-)与野生型相应年龄的小鼠(AQP4+/+),观察AQP4基因敲除对老年小鼠自发活动、学习记忆、大体脑形态以及神经元、星形胶质细胞、小胶质细胞密度等的影响。结果老年小鼠自发活动减少,在穿梭箱被动避暗实验中,测试时进入暗箱的潜伏期明显短于年轻鼠,但AQP4+/+和AQP4-/-小鼠间无明显差异。甲苯胺蓝染色显示,老年小鼠皮层神经元密度(Ⅲ～Ⅳ层)显著低于年轻小鼠(P<0.05),海马CA1区厚度无明显差异,AQP4+/+和AQP4-/-小鼠间无明显差异。免疫组化显示,老年小鼠海马CA1的星形胶质细胞(GFAP阳性)数量明显高于年轻小鼠(P<0.01),而小胶质细胞数量在老年和年轻小鼠间无明显差异。免疫荧光显示,老年小鼠星形教胶质细胞的面积变小,而AQP4-/-小鼠的星形胶质细胞突起少而短、细胞面积明显小于AQP+/+小鼠(P<0.05),神经元和小胶质细胞形态无明显变化。结论 AQP4参与脑老化过程中的星形胶质细胞变化,而与运动、学习记忆相关的脑功能及神经元、小胶质细胞等脑结构变化无明显关系。     

柴胡加龙骨牡蛎汤有效部位对慢性应激大鼠行为及海马神经组织的影响

目的:探究柴胡加龙骨牡蛎汤有效部位(CLMAF)对慢性应激模型大鼠行为和星形胶质细胞的作用。方法:采用慢性不可预知应激刺激与孤养结合的方式建立大鼠慢性应激抑郁模型,通过开野实验和糖水偏好实验观察阳性药氟西汀(20 mg.kg-1)和CLMAF高、低剂量(140、70 mg.kg-1)对模型大鼠行为学的影响;采用HE染色和星形胶质细胞标志物——胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学染色,观察各组大鼠海马星形胶质细胞阳性表达和神经元形态结构的变化。结果:氟西汀和CLMAF高、低剂量均明显提高慢性应激模型大鼠糖水偏好程度、开野实验水平运动得分和垂直运动得分,显著增加模型大鼠星形胶质细胞的表达并且改善海马神经元的病理状态。结论:CLMAF可改善慢性应激大鼠抑郁样状态,其抗抑郁机制可能与保护海马神经元及星形胶质细胞表达的提高有关。     

IVF/ICSI助孕后早期流产患者蜕膜组织焦亡相关因子表达水平的研究

目的 探讨体外受精（IVF）/卵胞浆内单精子注射（ICSI）助孕妊娠后早期流产患者蜕膜组织中焦亡相关因子的表达及作用。方法 选取行IVF/ICSI助孕妊娠后早期流产患者102例（研究组），同期因意外妊娠行人工流产术的患者100例（对照组），收集蜕膜组织。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法及Western blot法检测蜕膜组织中焦亡相关因子Nod样受体蛋白3(NLRP3)、白细胞介素（IL）-1β、胱天蛋白酶1(Caspase1)、gasdermin D(GSDMD)mRNA及蛋白表达，TUNEL法检测蜕膜组织中细胞焦亡情况，Pearson法分析蜕膜组织中细胞焦亡率与NLRP3、IL-1β、Caspase1、GSDMD蛋白水平的相关性。结果 与对照组相比，研究组蜕膜组织中NLRP3、IL-1β、Caspase1、GSDMD mRNA及蛋白水平、蜕膜组织中细胞焦亡率升高（P<0.05）；研究组患者蜕膜组织中细胞焦亡率与NLRP3、IL-1β、Caspase1、GSDMD蛋白表达水平均呈正相关（r分别为0.429、0.474、0.498、0.540，均P<0.05）。结论 ...     

水通道蛋白4参与抑郁症发病机制研究进展

大脑具有高阶功能,由几种细胞组成,如神经元和神经胶质细胞。星形胶质细胞是一种神经胶质细胞。水通道蛋白4(AQP4)是一种调节水渗透性的膜结合蛋白,是水通道蛋白家族的成员,其在中枢神经系统(CNS)的星形胶质细胞的末端表达。最近,AQP4已被证明不仅可作为水通道蛋白,调节星形胶质细胞的各种生物学功能,例如水转运、钾空间缓冲、钙波传递、谷氨酸盐稳态和铁传递。而且还可作为通过长时程增强或长时程抑制参与神经兴奋和突触可塑性。尸检结果发现,抑郁症患者脑体积缩小,脑中AQP4表达减少;敲除AQP4会加重皮质酮诱发小鼠抑郁模型的症状,其机制与损伤星形胶质细胞功能和海马神经发生有关;AQP4与氟西汀治疗抑郁症过程中所表现的症状改善和神经发生增强有关;AQP4与部分难治性抑郁的发病机制相关。所以AQP4作为治疗抑郁症的新靶点值得进一步关注。     

当归芍药散通过调节ER/NF-ΚΚB/NLRP3缓解卵巢切除小鼠认知功能

目的雌激素下降是导致围绝经期女性认知功能障碍的风险因素,雌激素的缺失大大增加了围绝经期女性罹患阿尔茨海默病(AD)的风险。然而,长期的雌激素代替疗法在安全性上尚存在较大的争议,因此寻找更为安全有效的治疗方法,显得尤为重要。当归芍药散(DSS)是治疗妇人妊娠腹痛的经典方,其对AD也有较好的疗效。近来,研究人员进一步发现,DSS可以改善增加海马雌激素的合成改善雌激素缺乏引起的认知功能缺陷,但其发挥作用的分子机制尚不清楚。本研究旨在探讨DSS发挥改善雌激素缺失模型小鼠认知障碍的分子机制,为中医药治疗神经退行性疾病提供实验依据。方法将75只雌性ICR小鼠随机分为对照组和模型组,通过双侧卵巢摘除法(OVX)建立雌激素缺失动物模型,对照组仅切除卵巢旁附近少量脂肪,随后将模型动物随机分为:OVX组,DSS治疗组(每天3.2和6.4 g·kg~(-1))和阳性药治疗组(β-雌二醇,E2,每天100μg·kg~(-1)),DSS治疗组给予灌胃治疗,阳性药治疗组给予皮下注射治疗,对照组给予等体积蒸馏水治疗。治疗12周后,通过Morris水迷宫测试、Y迷宫测试及旷场实验观察认知功能,免疫组化染色法观察小鼠海马小胶质细胞和星形胶质细胞激活,ELISA法检测海马炎症因子IL-1β分泌,Western蛋白印迹法检测海马NF-κB、NLRP3、胱天蛋白酶1、ASC、IL-1β及雌激素受体(ER)ERα和ERβ蛋白的表达。结果 DSS可显著缩短OVX小鼠在Morris水迷宫定位航行的逃避潜伏期,增加模型小鼠在Y迷宫三个臂中的交替百分比,增加模型小鼠在旷场中心区域活动的时间,此外,DSS可明显下调OVX小鼠小胶质细胞标志物Iba-1和星形胶质细胞标志物GFAP的表达,下调海马IL-1β的分泌,降低OVX模型小鼠海马p-NF-κB、NF-κB、NLRP3、胱天蛋白酶1、ASC和IL-1β蛋白的表达,此外,DSS还能增加OVX小鼠海马的雌激素受体ERα和ERβ的表达。结论 DSS可能是通过调节海马ER/NF-κB/NLRP3通路发挥缓解雌激素缺乏引起的认知功能缺陷,DSS可能是治疗围绝经期女性认知功能障碍的潜在药物。     

细胞焦亡的研究进展

摘要： 细胞焦亡（pyroptosis）是促炎形式的程序性细胞死亡, 并且依赖于半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（caspases） 活性。由caspases通过切割gasermin D （GSDMD） 的氨基端和羧基端的连接体调控, 后者移位到膜上并穿孔, 诱导水分渗透, 细胞肿胀并释放炎性因子, 继而发生细胞焦亡。细胞焦亡的形态学特征、 发生及调控机制等均不同于凋亡、 坏死等其他细胞死亡方式, 其是机体一种重要的天然免疫反应, 在抗击感染以及疾病中均有重要作用。通过对细胞焦亡的更深入研究, 可以认知其在相关疾病中的作用, 为临床提供新的治疗思路。     

雷公藤甲素对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞线粒体自噬、NLRP3炎症小体活化和细胞焦亡的影响

目的 探究雷公藤甲素对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（FLSs）线粒体自噬、NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化和细胞焦亡的影响。方法 将FLSs细胞和类风湿关节炎FLSs细胞进行传代培养。将类风湿性关节炎FLSs细胞采用0、10、20、40 ng/mL雷公藤甲素进行处理。采用蛋白质印迹法（Western blotting）检测线粒体自噬相关蛋白LC3B、p62、PHB2、NLRP3的蛋白表达。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测炎症因子白细胞介素（IL）-1β和IL-18的水平。采用流式细胞术检测细胞焦亡情况,并采用Western blotting法检测焦亡相关蛋白GSDMD和GSDMD-N表达。结果 采用10、20、40ng/mL雷公藤甲素处理类风湿关节炎FLSs后,雷公藤甲素各剂量组均能显著减弱类风湿关节炎FLSs细胞的线粒体自噬相关蛋白LC3B的表达,上调p62和PHB2的表达;NLRP3表达水平均显著降低,IL-1β和IL-18水平显著降低;细胞焦亡率显著降低;GSDMD蛋白表达显著上升,GSDMD-N蛋白表达下降（P<0.05、0.01、0.001）,且呈剂量...     

AQP4调节氟西汀的抗抑郁效应和促成年海马神经再生的作用

目的：研究水通道蛋白4（AQP4）在氟西汀抗抑郁效应和促成年海马神经再生中的作用。方法：应用AQP4基因敲除（AQP4^-/-）及野生型（AQP4^＋/＋）CD1小鼠建立慢性温和应激抑郁模型（CMS），造模成功后给予氟西汀（10mg／kg，i．p．）治疗4周。应用悬尾实验、糖水偏爱实验观察小鼠行为学改变，采用免疫组化及Western blot等方法研究海马神经再生及相关信号通路的变化。     

中药津力达颗粒通过抑制肝细胞焦亡来改善非酒精性脂肪肝

目的非酒精性脂肪肝(NAFLD)是代谢综合征的肝表现,肝脂肪变、肝炎症及肝细胞气球样变是NAFLD的必要条件。在本研究中,我们旨在系统地研究传统中药津力达(JLD)颗粒能否抑制高脂饮食诱导的C57BL/6J小鼠肝细胞焦亡及游离脂肪酸诱导的非酒精性脂肪肝HepG2细胞模型焦亡,从而改善NAFLD。方法动物实验通过高脂饮食喂养C57BL/6J建立脂肪肝模型,按分组分别灌胃给与JLD颗粒或羟甲纤维素钠(CMC-Na)20周。生化分析方法检测小鼠血清内甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)、低密度脂蛋白(LDL-C)和游离脂肪酸(NEFA)含量。HE和油红染色检测肝细胞脂滴及炎细胞浸润,Western印迹法检测焦亡相关蛋白NLRP3,胱天蛋白酶1,P20和IL~(-1)β的表达,并通过实时PCR(q RT-PCR)检测胱天蛋白酶1,IL~(-1)8和Il-1β的基因表达水平。细胞实验使用HepG2细胞,给与或不给予JLD,然后暴露于游离脂肪酸(FFA)中共孵育18 h,MTS检测HepG2肝癌细胞生存活性,检测细胞各组甘油三酯(TG)和GOT含量,尼罗红染色观察HepG2细胞脂滴,Western印迹法技术检测细胞焦亡通路相关信号分子NLRP3,胱天蛋白酶1、IL~(-1)8和IL~(-1)β蛋白表达。结果动物实验结果显示,与正常组相比,模型组小鼠TG,GOT,GPT,LDL-C和NEFA含量明显增加(P<0.01);HE和油红染色显示脂滴增多;炎症小体NLRP3、焦亡通路依赖蛋白胱天蛋白酶1和p20蛋白表达水平升高(P<0.01);胱天蛋白酶1,IL~(-1)8和IL~(-1)β基因表达水平升高(P<0.05)。给予JLD后明显降低TG,LDL-C和NEFA的含量,减少细胞内的脂滴堆积,抑制焦亡通路蛋白和基因的表达(P<0.01)。细胞实验结果显示,与FFA组相比,JLD促进FFA损伤HepG2肝癌细胞18 h后细胞增殖,降低TG、GOT的含量(P<0.01),脂滴明显减少,下调焦亡蛋白NLRP3,胱天蛋白酶1,P20和IL~(-1)β的表达(P<0.01)。结论 JLD具有治疗NAFLD的作用。这种作用可能是通过抑制焦亡通路基因和蛋白的表达介导的,从而为JLD的临床应用治疗NAFLD提供了实验依据。     

大黄素调控组蛋白乙酰化促进HpG2肝癌细胞焦亡及凋亡的发生

目的 研究天然产物大黄素是否能够影响HpG2肝癌细胞中组蛋白乙酰化水平,进而加速肝癌细胞焦亡和凋亡,为肝癌的治疗提供新的靶点。方法 CCK-8法检测不同浓度大黄素对Hp G2细胞活力的影响;生物信息学分析TCGA数据库中肝癌患者组蛋白乙酰化相关基因表达情况,验证候选基因赖氨酸乙酰基转移酶2A(KAT2A)与细胞凋亡通路的相关性;实时荧光定量PCR(q PCR)检测Hep G2细胞与L02细胞KAT2A m RNA水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大黄素对Hp G2细胞中组蛋白乙酰转移酶(HAT)、组蛋白去乙酰转移酶(HDAC)、白细胞介素(IL)-1β、IL-18的影响;流式细胞术检测大黄素对肝癌细胞凋亡的影响;Western blot检测细胞凋亡、细胞焦亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2-相关X蛋白质(Bax)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、Gasdermin家族成员D N端(GSDMD-N)及KAT2A的表达情况。结果 大黄素能降低Hp G2细胞活性,半抑制浓度(IC₅₀)95%置...     

细胞焦亡在糖尿病大血管并发症中作用的研究进展

细胞焦亡是一种炎症性细胞程序死亡模式。体内外研究表明,细胞焦亡主要通过激活炎性小体、活化天冬氨酸特异蛋白酶-1/4/5/11 (caspase-1/4/5/11)、切割gasdermin家族成员D (gasdermin D, GSDMD)、释放白细胞介素-18 (interleukin-18, IL-18)和IL-1β等炎性细胞因子参与糖尿病大血管并发症的发生发展。近几年,细胞焦亡通过炎症的级联反应导致的全身慢性炎症对糖尿病大血管并发症的影响受到人们的持续关注。本文对细胞焦亡在糖尿病大血管并发症中的研究和相关药物进行阐述,为临床治疗糖尿病大血管并发症提供新思路。     

氟西汀对早期应激大鼠行为及海马S100B表达的影响

目的:研究氟西汀对早期应激模型大鼠行为及海马星形胶质源性蛋白(S100B)的影响。方法:将孕17 d的14只大鼠所生的雄性乳鼠60只,随机分为3组:正常对照组(对照组)、慢性早期应激抑郁模型组(抑郁模型组)及早期慢性应激氟西汀干预组(氟西汀组),每组20只。抑郁模型组和氟西汀组大鼠经历28 d早期生活应激,对照组不予任何处理。后各组灌胃(氟西汀组给予氟西汀10 mg/kg,抑郁模型组和对照组给予同体积蒸馏水)28 d。采用旷场实验、糖水偏爱实验于出生后第29日和第57日天检测大鼠的行为。采用Western blot检测第57日各组海马S100B的表达。结果:1旷场实验:于出生后第29日,抑郁模型组和氟西汀组的水平得分和垂直得分低于对照组,而潜伏期均显著长于对照组(P<0.05);各组灌胃28 d后(出生后第57日),氟西汀组的水平得分与垂直得分均显著上升,而潜伏期显著下降,与抑郁模型组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。2糖水偏爱实验:末次灌胃后(第57日)抑郁模型组糖水消耗率(45±8.5)%显著低于氟西汀组(67±3.6)%和对照组(62±8.1)%(P<0.05)。3氟西汀组和对照组的海马S100B表达显著高于抑郁模型组(P<0.05)。结论:氟西汀能够改善早期应激抑郁模型大鼠的行为能力和激活海马星形胶质细胞活性。     

干扰素调节因子1通过调控细胞焦亡参与小鼠肝脏缺血再灌注损伤

摘要：目的　探讨小鼠肝脏缺血再灌注损伤（LIRI）过程中干扰素调节因子-1（IRF-1）对焦亡的影响。方法　（1）24只C57BL/6正常雄性小鼠按照随机数字表法分为假手术（Sham）组与缺血再灌注（IR）2 h、6 h和12 h组,每组6只。Sham组不进行IR处理,其他3组采用血管夹夹闭肝中叶、左叶脉管（门静脉、动脉与胆道）60 min后分别再灌注2、6、12 h建立LIRI模型。全自动生化仪检测各组血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）;酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清白细胞介素-1β（IL-1β）水平;HE染色观察肝脏病理改变;免疫组织化学染色检测IRF-1表达情况;TUNEL染色检测肝脏细胞凋亡和焦亡情况;Western blot检测IRF-1、半胱天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）、Cleaved-Caspase-1及gasdermin D（GSDMD）蛋白水平;透射电镜检测肝组织细胞形态变化。（2）将小鼠正常肝脏AML12细胞分别进行过表达和沉默IRF-1表达后进行模拟IR处理,分为过表达IRF-1+IR组、空载体+IR组、IRF-1 siRNA+IR组及其对照组（NC+IR组）。Western blot检测4组细胞IRF-1、Caspase-1、Cleaved-Caspase-1和GSDMD蛋白水平;透射电镜检测细胞形态变化;流式细胞术检测细胞焦亡情况;酶标仪检测细胞上清乳酸脱氢酶（LDH）释放量。结果　（1）体内实验结果显示,与Sham组比较,IR6 h组和12 h组血清ALT、AST和IL-1β水平均有明显升高（P＜0.05）,IRF-1、Caspase-1和GSDMD蛋白表达升高（P＜0.05）;同时肝细胞出现肿胀、排列紊乱、空泡、片状坏死和红细胞淤积并伴有核膜损伤和线粒体肿胀。（2）体外AML12细胞过表达IRF-1后Cleaved-Caspase-1和GSDMD的表达增加,而敲低IRF-1表达后Caspase-1和GSDMD表达随之减少（P＜0.05）。沉默IRF-1表达后,与NC+IR组相比,IRF-1 siRNA+IR组细胞质膜和核膜的破坏减轻,细胞焦亡率下降,LDH释放量减少约20%（P＜0.05）。结论　IRF-1可通过调节Caspase-1和GSDMD的表达以及IL-1β的释放导致小鼠LIRI。     

黄芩苷对抑郁症模型小鼠海马钙结合蛋白D28K表达的影响

目的观察黄芩苷对抑郁症模型小鼠的行为学变化及海马细胞中钙结合蛋白D28K (calbindin-D28K)表达的影响。方法选用健康成年ICR小鼠60只,随机分为空白对照组,模型组,阳性对照(氟西汀5.2 mg·kg~(-1))组,黄芩苷低、中、高剂量(4、 8、 12 mg·kg~(-1))组(均n=10)。采用慢性不可预见性刺激诱导小鼠抑郁症模型,空白对照组小鼠不制模,制模同时各组灌胃给药,每日1次,共21 d。通过检测糖水偏爱分数和强迫游泳总不动时间观察小鼠行为学变化。取脑组织切片,原位末端标记染色(TUNEL)法观察海马细胞凋亡情况,免疫组化法检测海马细胞中calbindin-D28K表达水平。结果与空白对照组比较,模型组小鼠糖水偏爱分数显著降低(P <0.01),强迫游泳总不动时间显著增加(P <0.01),细胞凋亡数量显著增多(P <0.01), calbindin-D28K表达显著减少(P <0.01)。与模型组比较,黄芩苷低、中、高剂量组和阳性对照组小鼠糖水偏爱分数显著增加(P <0.01),强迫游泳总不动时间显著减少(P <0.01),细胞凋亡数量明显减少(P <0.01),海马细胞calbindin-D28K的表达增多(P <0.01);且黄芩苷高剂量组与阳性对照组各指标相当(P> 0.05)。结论黄芩苷可改善抑郁症模型小鼠行为,减少海马神经细胞凋亡,诱导海马calbindin-D28K表达。     

单纯酒精依赖患者海马和额叶皮质胶质细胞损害的模式

<正>酒精是人类使用时间最长,流传最广泛的亲神经精神活性物质,酒精依赖及其相关问题已成为仅次于心血管疾病、肿瘤而位居第三的全球性公共卫生问题。目前我国酒精性饮料的产量、消耗量和酒精依赖患病率均大幅度增加,由此造成家庭、社会、经济及认知教育等众多问题[1-4]。脑胶质细胞,尤其是星形胶质细胞在许多脑功能得以正常发挥的关键活动中居于中心地位,酒精依赖作为学习记忆的疾病,星形胶质细胞在其中的作用日渐受到关注[5-11]。大量研究提示,星形胶质细胞呈现分子和功能异质性[12],面临不同损害时呈现差异性应答。由于大脑对酒精的应答具有脑区适应性模式,其中海马和前额叶皮质在急、慢性酒精处理或酒精戒断时自始至终起应答,并且线索诱发的复饮会激活这两个脑区[13],故本文暂以脑区为星形胶质细胞异质性的分界,追踪星形胶质细胞在酒精依赖大脑(海     

氟西汀对慢性应激大鼠海马胶质原纤维酸性蛋白和缝隙连接蛋白43表达的影响

目的：抑郁症发病率逐年上升但其发病机制不明。本实验通过观察慢性应激抑郁模型大鼠海马星形胶质细胞特异性标志物-胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）和反应星形胶质细胞网络的缝隙连接蛋白43（Connexin43，Cx43）的变化及经典抗抑郁剂氟西汀对此变化的影响，探讨抑郁症发生和氟西汀治疗后星形胶质细胞结构和星形胶质细胞网络的变化。方法：实验分三组：①对照组（不给予任何刺激），     

Forskolin与链脲佐菌素诱导的tau蛋白过度磷酸化介导的神经元焦亡在阿尔茨海默病中的机制

目的焦亡是一种程序性的细胞死亡方式,特征为依赖胱天蛋白酶(caspase)1的激活,并伴有促炎因子释放。阿尔茨海默病(AD)病程发展的进程中,Aβ激活细胞焦亡通路为AD的主要病理改变之一。而tau蛋白过度磷酸化作为AD的另一主要病理改变,其对焦亡有何影响目前少有报道。因此,我们提出假设"过度磷酸化tau蛋白通过激活炎症小体-胱天蛋白酶1途径,介导神经元焦亡"。方法分别向大鼠侧脑室注射弗斯可林(forskolin,FSK)和链脲佐菌素(STZ)建立2种大鼠脑内tau蛋白过度磷酸化模型;使用FSK和STZ处理PC12细胞,在体外进一步验证tau蛋白与细胞焦亡之间的关系。并且通过行为学、免疫荧光、MTT比色法、酶联免疫吸附、蛋白活性测试和基因沉默等方法,检测tau蛋白及焦亡相关蛋白的表达水平,考察过度磷酸化的tau蛋白对细胞活性,痴呆模型大鼠空间记忆能力以及焦亡相关蛋白表达水平的影响。结果抑制胱天蛋白酶1或IL-1β/IL-18的活性,不仅可以显著改善FSK和STZ诱导的PC12细胞损伤,还可以改善痴呆模型大鼠的空间认知障碍,降低tau蛋白的表达水平。FSK诱导的痴呆模型大鼠脑内以及FSK和STZ处理的PC12细胞表达焦亡通路相关蛋白NLRP1、胱天蛋白酶1、IL-1β和IL-18水平均显著提高,而GSK-3β抑制剂Li Cl可显著降低胱天蛋白酶1活性,下调焦亡相关蛋白表达水平。结论炎症小体激活介导了PC12和痴呆大鼠脑内tau蛋白过度磷酸化引起神经毒性,而焦亡通路胱天蛋白酶1下游的促炎因子IL-1β和IL-18的释放在放大炎症反应的同时也促进tau蛋白的过度磷酸化。