孕酮对Aβ所致星形胶质细胞炎症小体表达的影响及机制研究

目的研究神经甾体孕酮对Aβ所诱导星形胶质细胞NLRP3炎症小体表达的调节作用及潜在的分子机制。方法正常培养新生鼠原代脑皮质星形胶质细胞,分别应用ELISA、免疫荧光、Western blot等试验方法检测孕酮对于星形胶质细胞IL-1β分泌水平,以及pro-IL-1β和NLRP3炎症小体表达的影响,并研究调节星形胶质细胞NLRP3表达活化与内质网应激的可能关系。结果与Aβ干预组相比,孕酮处理能够显著性抑制Aβ所致星形胶质细胞IL-1β、pro-IL-1β合成分泌,并能够显著降低炎症小体NLRP3表达。另外,应用内质网应激诱导剂处理星形胶质细胞发现,其能明显促进星形胶质细胞IL-1β、pro-IL-1β合成分泌。与之相反,内质网应激抑制剂能够明显阻断孕酮对于Aβ所致NLRP3表达的抑制作用。结论孕酮能够通过调节星形胶质细胞内质网应激水平,显著抑制Aβ所致炎症小体NLRP3表达活化。     

纤维状α-突触核蛋白聚集体激活NLRP3炎症小体的机制研究

目的 探索纤维状α-突触核蛋白（α-synuclein）聚集体激活NLRP3炎症小体诱导神经炎症的机制。方法 构建纤维状α-synuclein聚集体,采用纤维状α-synuclein聚集体刺激BV-2小胶质细胞,检测白介素（IL）-1β、IL-18、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等相关炎症因子和NLRP3、caspase-1、ASC等蛋白的表达和mRNA水平评价NLRP3炎症小体激活;采用乳酸脱氢酶释放（LDH）实验检测细胞焦亡的发生。机制研究部分,检测Toll样受体（TLR）2和TLR4的激活,并分别加入TLR2和TLR4抑制剂C29和TAK-242检测对纤维状α-synuclein聚集体诱导的NLRP3炎症小体激活的影响及核转录因子-κB(NF-κB)的入核情况。结果 Westernblot和硫黄素T染色实验结果显示,纤维状α-synuclein聚集体成功制备。纤维状α-synuclein聚集体刺激BV-2小胶质细胞24 h后可激活NLRP3炎症小体,表现为IL-1β释放增加,相关蛋白NLRP3、caspase-1表达升高,N LR P3、ASC和I L-1β的m R NA...     

丹皮酚对脂多糖诱导的星形胶质细胞炎性因子分泌的影响

目的观察丹皮酚对体外培养的星形胶质细胞炎性因子分泌的影响,并探讨其作用机制。方法采用神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色法鉴定星形胶质细胞;实验分为对照组,模型组和2.5、5、10μmol·L-1丹皮酚组,0.5 mg·L-1脂多糖(LPS)诱导炎症反应。采用ELISA法测定培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用Western blot检测细胞IκBα蛋白表达和磷酸化水平及胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组星形胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著增加(P<0.01),胞浆IκBα蛋白表达受抑(P<0.01),IκBα蛋白磷酸化和胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平上调(P<0.01);5、10μmol·L-1丹皮酚能减少LPS活化的星形胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平(P<0.05或P<0.01),增加胞浆IκBα蛋白表达(P<0.05或P<0.01),抑制LPS上调的IκBα蛋白磷酸化和胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论丹皮酚能抑制LPS诱导的星形胶质细胞炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌,IκBα/NF-κB信号通路可能参与了丹皮酚对星形胶质细胞炎症反应的抑制作用。     

瓜子金皂苷己抑制IL-1β的释放及其机制研究

目的研究瓜子金皂苷己(polygalasaponin F,PS-F)对LPS诱导的BV2小胶质细胞炎症反应中炎性因子IL-1β释放的影响及其作用机制。方法实验分为空白组、LPS模型组、LPS+PS-F (0.10、1.00、10.00μmol·L~(-1))给药组。运用ELISA法检测培养液上清中IL-1β的分泌量;real-time PCR检测IL-1βmRNA的表达;Western blot检测IL-1β、NLRP3、caspase-1、ASC、caspase-11的蛋白表达量。结果 ELISA、real-time PCR和Western blot结果均表明,PS-F能有效抑制LPS诱导BV2小胶质细胞释放炎性因子IL-1β(P<0.01,P<0.05);Western blot结果表明,PS-F可以下调NLRP3、caspase-1、ASC、caspase-11的蛋白表达,其中ASC、caspase-11所得结果差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PS-F可以有效抑制LPS诱导BV2细胞炎症反应中炎性因子IL-1β的释放,且与下调NLRP3炎性小体、抑制caspase-11的激活有关。     

槐定碱对缺氧复氧星形胶质细胞炎症因子释放和细胞凋亡的影响

摘要：目的:研究槐定碱（sophoridine）对缺氧复氧星形胶质细胞炎症因子释放和细胞凋亡的影响及机制。方法:星形胶质细胞分成对照组、缺氧复氧（H/R）组、sophoridine低、中、高剂量组(10,20,40 mg·L-1)、sophoridine(40 mg·L-1)+pcDNA(阴性对照载体组、sophoridine(40 mg·L-1)+pcDNA-Toll样受体4（TLR4）（TLR4过表达载体）组。CCK-8法检测细胞增殖活性变化,流式细胞术检测细胞凋亡变化,Western blot法检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、TLR4蛋白表达,ELISA法检测细胞分泌的肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）变化。结果:与对照组比较,H/R组星形胶质细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6增多,TLR4蛋白水平升高（P<0.05）。与H/R组比较,sophoridine低、中、高剂量组星形胶质细胞增殖活性逐渐升高,细胞凋亡率逐渐降低,细胞中Bax蛋白表达逐渐减少,Bcl-2蛋白表达逐渐增多,细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6逐渐减少,TLR4蛋白水平逐渐降低（P<0.05）,且呈剂量相关性（P<0.05）。与sophoridine+pcDNA组比较,sophoridine+pcDNA-TLR4组星形胶质细胞中TLR4蛋白表达增多,细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6增多（P<0.05）。结论:槐定碱通过下调TLR4从而抑制缺氧复氧星形胶质细胞炎症因子的释放和细胞凋亡     

淫羊藿次苷Ⅱ通过调节IKK/IκB/NF-κB信号通路抑制脂多糖诱导的星形胶质细胞炎症反应

目的研究ICSⅡ对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞炎症反应的作用。方法体外分离新生SD大鼠脑皮质组织提取原代星形胶质细胞并进行培养。将星形胶质细胞分为空白组、空白+ICSⅡ高浓度组、模型组、模型+ICSⅡ低浓度组、模型+ICSⅡ中浓度组、模型+ICSⅡ高浓度组、模型+地塞米松组。ICSⅡ(5,10,20μmol·L-1)或DSMX(1μmol·L-1)预处理星形胶质细胞1 h后,继续与LPS共同作用24 h。采用MTT法检测ICSⅡ作用于星形胶质细胞的安全浓度范围,确定安全浓度后再观察ICSⅡ对LPS诱导的星形胶质细胞炎症反应的影响;采用ELISA法检测星形胶质细胞中TNF-α,IL-1β,NO,Aβ1-40和Aβ1-42的水平;采用Western蛋白免疫印迹技术检测COX-2,i NOS,IκB-α,NF-κB(p65)(胞核),NF-κB(p65)(胞质)和BACE1的蛋白表达,以及NF-κB(p65)、IKK-α和IKK-β磷酸化水平;采用分子对接技术模拟ICSⅡ与BACE1蛋白的结合。结果 ICSⅡ(0～50μmol·L-1)对星形胶质细胞无毒性作用。模型组较空白组星形胶质细胞中TNF-α,IL-1β和NO水平均显著上升(P<0.05);细胞炎症通路蛋白COX-2,i NOS,NF-κB(p65)(胞核)及BACE1表达升高(P<0.05);IκB-α和NF-κB(p65)(胞质)表达显著降低(P<0.05);NF-κB(p65),IKK-α和IKK-β的磷酸化水平明显上升(P<0.05)。给予ICSⅡ能够明显降低TNF-α,IL-1β和NO水平(P<0.05)。此外,ICSⅡ显著下调炎症相关蛋白COX-2,i NOS,NF-κB(胞核)及BACE1的表达(P<0.05),明显上调NF-κB(胞质)和IκB-α蛋白表达(P<0.05)。同时,明显降低NF-κB(p65),IKK-α和IKK-β的磷酸化水平(P<0.05),对LPS诱导的IκB-α降解、NF-κB活化及细胞核易位均具有显著的抑制作用。结论本研究条件下,ICSⅡ通过调节IKK/IκB/NF-κB信号通路发挥其对LPS诱导的星形胶质细胞炎症损伤的保护作用。     

丙泊酚对缺氧复氧的肠上皮细胞ROS/TXNIP/NLRP3通路及凋亡的影响

摘要：目的:探讨丙泊酚处理对缺氧复氧的肠上皮细胞活性氧（ROS）/硫氧还蛋白相互作用蛋白（TXNIP）/核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3（NLRP3）通路及凋亡的影响。方法:对人肠上皮HIEC细胞进行培养,并进行缺氧复氧处理;通过不同浓度(25,50,100μmol·L-1)丙泊酚对缺氧复氧HIEC细胞进行处理,细胞计数盒8（CCK-8）法检测细胞活力;流式细胞术检测HIEC细胞凋亡;2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）法检测HIEC细胞ROS水平;蛋白免疫印迹（WB）法检测凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl2）、Bcl-2相关基因（Bax）、及TXNIP、NLRP3、白介素-1β（IL-1β）表达情况。结果:与对照组比较,缺氧复氧组HIEC细胞活力、蛋白Bcl2表达水平显著降低,HIEC细胞凋亡率、细胞内ROS含量、蛋白Bax、Caspase-3、TXNIP、NLRP3、IL-1β表达水平显著升高（P<0.05）;与缺氧复氧组比较,不同浓度丙泊酚处理组HIEC细胞活力、蛋白Bcl2表达水平显著升高,细胞凋亡率、细胞内ROS含量、蛋白Bax、Caspase-3、TXNIP、NLRP3、IL-1β表达水平显著降低（P<0.05）。结论:丙泊酚处理能够抑制缺氧复氧HIEC细胞ROS/TXNIP/NLRP3通路及细胞的凋亡,可能对肠上皮细胞缺血再灌注损伤（I/R）有一定的保护作用。     

白藜芦醇抑制大肠埃希菌O104∶H4诱导的结肠上皮细胞NLRP3炎症小体活化

目的:研究白藜芦醇(RES)对大肠埃希菌O104∶H4感染的结肠上皮Caco-2细胞线粒体和氧化应激损伤及NLRP3炎症小体活化的影响。方法:RES(200μmol/L)预处理Caco-2细胞12 h,然后107 CFU/mL的大肠埃希菌O104∶H4(MOI 10∶1)感染细胞4 h。CCK-8法检测细胞活力,qRT-PCR法分析过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC1α)、细胞色素氧化酶4(COX-4)、核呼吸因子1(NRF1)、线粒体转录因子1(TFAM)、超氧化物歧化酶1(SOD1)和血红素加氧酶1(HO-1)mRNA表达水平,Western blot检测炎症小体NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1活化亚基p20(CASP1 p20)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1活化亚基p10(CASP1 p10)、pro-IL-1β和IL-1β蛋白表达水平,并对Caco-2细胞线粒体膜电位、氧耗量和活性氧(ROS)水平进行检测。结果:大肠埃希菌O104∶H4感染可明显诱导NLRP3、CASP1 p20、CASP1 p10、IL-1β蛋白和PGC1α、COX-4和NRF1 mRNA表达,促使氧消耗量和ROS水平增高,而细胞活力、TFAM mRNA表达和线粒体膜电位降低(P<0.05);RES处理后能明显抑制NLRP3、CASP1 p20、CASP1 p10、IL-1β蛋白和PGC1α、COX-4和NRF1 mRNA表达,降低氧消耗量和ROS水平,而细胞活力、TFAM mRNA表达和线粒体膜电位增高(P<0.05);另外,ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)也能显著抑制NLRP3炎症小体和IL-1β表达水平。结论:大肠埃希菌O104∶H4感染诱导Caco-2细胞线粒体释放ROS和NLRP3炎症小体活化,而RES可部分改善Caco-2细胞损伤,降低NLRP3炎症小体和ROS水平。     

胞外酸化对大鼠关节软骨细胞焦亡的影响及可能机制

目的观察胞外酸化对大鼠关节软骨细胞焦亡的影响,研究该过程中可能机制。方法利用酶消化法获得原代大鼠关节软骨细胞。软骨细胞分为不同pH处理组(pH7.4、pH 7.0、pH 6.5和pH 6.0)以及pH6.0酸化不同时间组(0、6、12、24、48 h),经ROS还原剂NAC预处理的酸化组和正常组,Real-time PCR和Western blot观察各组促炎细胞因子IL-1β、IL-18和炎症小体组成成分ASC、NLRP3、caspase-1基因和蛋白的表达情况,ELISA检测各组细胞培养基中的IL-1β、IL-18含量,AO/EB染色和LDH细胞毒性检测试剂盒分析细胞的死亡情况,ROS测定试剂盒观察细胞内ROS荧光强弱。结果与pH 7.4组比较,酸化组的促炎细胞因子IL-1β、IL-18和炎症小体组成成分ASC、NLRP3、caspase-1基因和蛋白的表达明显增加,荧光显微镜观察到ROS荧光明显增强,AO/EB染色和LDH检测实验发现酸化可以诱导软骨细胞死亡,且pH 6.0酸化处理组效果最明显;ROS还原剂NAC预处理可以明显下调IL-1β、IL-18、ASC、NLRP3、caspase-1基因和蛋白的表达,并且明显减弱软骨细胞内ROS荧光,同时明显下调细胞死亡率。结论胞外酸化可能通过上调细胞内ROS的含量,促使软骨细胞发生焦亡。     

牛磺酸对小鼠酒精性肝损伤的保护作用及其作用机制的研究

目的观察牛磺酸对小鼠酒精性肝损伤的保护作用,并对其保护机制进行初步探讨。方法采用慢性乙醇灌胃法诱导小鼠酒精性肝损伤模型。将40只C57BL/6J雄性小鼠随机分为4组:对照组、模型组、牛磺酸给药组和牛磺酸单独处理组,每组小鼠10只。运用H&E染色及Masson染色观察各组小鼠肝组织形态改变情况及纤维化情况,检测各组小鼠肝组织中丙二醛(MDA)的水平,Western blot检测各组小鼠肝脏中炎症小体(NLRP3)及相关炎性因子IL-1β蛋白表达情况。利用Hep G2细胞构造肝细胞酒精性损伤模型,分为4组,对照组、模型组、牛磺酸给药组和牛磺酸单独处理组,利用DCFH-DA染色检测肝细胞活性氧(ROS)水平,利用Western blot检测各组细胞中NLRP3及IL-1β蛋白表达情况。结果与模型组相比,牛磺酸给药组小鼠肝脏组织炎症及纤维化情况明显减轻,肝组织中MDA的含量明显减少(P<0.05),肝组织中NLRP3及IL-1β蛋白表达明显降低(P <0.01)。体外实验结果显示,牛磺酸给药组细胞中ROS水平较模型组明显降低(P <0.05);Western blot结果显示,牛磺酸给药组NLRP3及IL-1β蛋白表达较模型组相比表达明显降低(P <0.01)。结论牛磺酸在一定程度上抑制小鼠酒精性肝损伤的发生及发展,其保护机制主要可能与其抑制ROS的生成及抑制NLRP3和IL-1β炎症因子的表达相关。     

孕酮抑制Aβ诱导星形胶质细胞活化所致神经元损伤

目的探究孕酮抑制Aβ诱导的星形胶质细胞活化,发挥神经元保护作用及其机制,为孕酮在阿尔采末病(Alzheimer’s disease,AD)防治中的应用提供实验依据。方法将原代培养的星形胶质细胞随机分为对照组、Aβ组及Aβ加3个浓度孕酮组,分别处理24 h后,与神经元共培养。MTT法检测神经元的存活率;ELISA检测条件培养液中炎症因子IL-1β和TNF-α的水平;免疫荧光法和Western blot检测星形胶质细胞NF-κB的活性。结果孕酮浓度依赖地抑制Aβ诱导的星形胶质细胞活化引起的神经元存活率下降;抑制Aβ诱导的星形胶质细胞IL-1β和TNF-α释放的升高;抑制Aβ诱导星形胶质细胞NF-κB的活性增加。结论孕酮通过抑制Aβ诱导的星形胶质细胞活化,发挥神经元保护作用,其作用机制可能与NF-κB信号通路有关。     

甘草酸对幼鼠实验性结肠炎的治疗作用及其机制研究

目的探究甘草酸对幼鼠实验性结肠炎的治疗作用及其作用机制。方法将75只SD大鼠幼鼠随机分为对照组、模型组、柳氮磺胺吡啶组(0.5 g/kg)和甘草酸40、160 mg/kg组,每组各15只,制备实验性结肠炎模型的同时分别灌肠给药,连续7 d。观察大鼠一般情况,HE染色法观察大鼠结肠组织病理学变化并进行疾病活动指数(DAI)评分、黏膜损伤指数(CMDI)评定,酶联免疫法测定血清中白介素-4(IL-4)、白介素-17(IL-17)、白介素-1β(IL-1β)水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blotting法检测大鼠结肠组织中NLRP3、白介素-1β(IL-1β)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱天冬酶(caspase-1)表达。结果与模型组比较,甘草酸组幼鼠体质量逐渐增加,症状改善;炎症细胞浸润有所减少,腺体破坏程度降低;DAI评分、CMDI评分均降低,呈剂量相关性(P0.05);IL-4水平升高,IL-17、IL-1β水平降低,呈剂量相关性(P0.05);NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1βmRNA表达和蛋白表达均降低,呈剂量相关性(P0.05)。结论甘草酸能够治疗大鼠实验性结肠炎,可能与抑制NLRP3通路蛋白表达、降低炎症因子水平有关。     

新型倍半萜Souliene A抑制小胶质细胞活化作用及机制

目的研究Souliene A对LPS与IFN-γ介导的小胶质细胞激活的抑制作用与机制及其对小胶质细胞激活引起的神经元损伤的保护作用。方法分别用LPS与IFN-γ刺激小鼠小胶质细胞BV2,Griess法测定NO。Western blotting和半定量RT-PCR法检测iNOS,COX-2,IL-6,IL-1β,TNF-α的表达及其相关信号通路。ELISA法检测PGE2和IL-6,IL-1β,TNF-α的表达。用流式细胞术检测小胶质细胞内ROS生成。用MTT法检测神经元细胞的存活率。结果 SoulieneA能明显抑制NO和PGE2的生成,减少炎症介质IL-6,IL-1β,TNF-α的表达,抑制小胶质细胞内ROS的产生。SoulieneA还能抑制NF-κB的活化与Akt的磷酸化并能有效的抑制小胶质细胞条件培养液引起的神经元损伤。     

百草枯对小胶质细胞TLR-4蛋白及TNF-α和IL-1β基因表达水平的影响

目的探讨百草枯(paraquat,PQ)对小胶质细胞TLR-4蛋白及TNF-α和IL-1β基因表达水平的影响,为进一步探究百草枯诱导小胶质细胞炎症反应可能的作用机制提供线索。方法小鼠小胶质(BV2)细胞分为PQ(40μmol/L)染毒组、LPS阳性对照组(1μg/ml)和阴性对照组,分别处理6、12和24 h。Western blotting法检测TLR-4蛋白表达,荧光定量PCR法检测TNF-α和IL-1β基因表达水平。结果 6、12和24 h,PQ染毒组、LPS阳性对照组小胶质细胞TLR-4蛋白表达水平、TNF-α和IL-1β基因表达水平均显著增加。结论 PQ能增加小胶质细胞TLR-4蛋白表达,进而可能激活TLR-4信号通路,使炎症因子表达增加,诱导炎症反应。     

吡格列酮对脂多糖刺激的星形胶质细胞白介素-1β的抑制作用及机制

目的研究吡格列酮(Pio)对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞白介素-1β(IL-1β)抑制作用及JNK信号传导通路对其的影响。方法 ELISA法测定培养液中IL-1β的含量;免疫荧光染色法观察星形胶质细胞IL-1β的蛋白表达;Western blot检测星形胶质细胞磷酸化JNK1和磷酸化c-Jun蛋白表达水平的改变。结果星形胶质细胞在LPS(10 mg.L-1)刺激下IL-1β的含量、蛋白表达以及磷酸化JNK1、磷酸化c-Jun蛋白水平与正常对照组比较均增高。特异性JNK特异性阻断剂SP600125(10.0μmol.L-1)可明显抑制LPS引起的IL-1β产生增加;Pio(0.1、1.0、10.0μmol.L-1)则可降低IL-1β产生,抑制IL-1β的蛋白表达及下调p-JNK1、p-c-Jun蛋白水平。结论 Pio能明显抑制LPS诱导的大鼠皮层星形胶质细胞IL-1β表达增加,这种作用可能与其下调JNK信号转导通路有关。     

EGCG通过调控胱天蛋白酶介导的NLRP3炎症小体激活抑制LPS+Aβ诱导BV2细胞的炎症反应

目的从离体水平研究胱天蛋白酶11介导的NLRP3炎症小体激活在表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对LPS+Aβ诱导的BV2细胞炎症反应的抑制作用及其可能机制。方法应用LPS+Aβ诱导的BV2细胞建立MG活化模型,建立空白对照组,LPS+Aβ组,LPS+Aβ+EGCG组。实时PCR、Western印迹和ELISA检测EGCG对BV2细胞Iba-1表达及相关炎性因子IL-1β,IL-18的转录、表达和分泌水平。与SH-SY5Y进行条件培养,流式细胞术和CCK8检测SH-SY5Y细胞的存活率。Western印迹、免疫荧光等检测EGCG对BV2细胞胱天蛋白酶1与Iba-1的共定位、胱天蛋白酶1活性、胱天蛋白酶1 P20和胱天蛋白酶11 P26的蛋白表达水平。应用胱天蛋白酶11抑制剂wedelolactone处理LPS+Aβ诱导的BV2细胞。结果 (1) EGCG在降低LPS+Aβ诱导的BV2细胞Iba-1表达,抑制炎性因子IL-1β,IL-18的转录、表达和分泌水平,提示EGCG可抑制MG活化及其介导的炎症反应。(2) EGCG显著增加与LPS+Aβ诱导的BV2条件培养的SH-SY5Y细胞的存活率,提示EGCG可通过抑制MG内炎症反应改善神经元存活,发挥神经保护作用。(3) EGCG可显著降低LPS+Aβ诱导的胱天蛋白酶1与Iba-1共定位,胱天蛋白酶1活性及胱天蛋白酶1 P20、胱天蛋白酶11 P26蛋白的表达水平,提示EGCG抑制MG活化与其抑制胱天蛋白酶11表达和NLRP3炎症小体介导的炎症反应有关。(4)与EGCG处理一致,wedelolactone可降低LPS+Aβ诱导的胱天蛋白酶11 P26及胱天蛋白酶1 P20,IL-1β,IL-18和Iba-1的蛋白表达水平,提示胱天蛋白酶11可促进LPS+Aβ诱导的NLRP3炎症小体激活,而EGCG可抑制胱天蛋白酶11介导的NLRP3炎症小体激活。结论 EGCG通过抑制胱天蛋白酶11介导的NLRP3炎症小体激活抑制LPS+Aβ诱导BV2细胞的炎症反应,发挥神经保护作用。     

PNU282987通过α7神经型尼古丁受体激活PI3K/Akt/HSF1信号通路上调星形胶质细胞内源性αB-crystallin抑制Aβ聚集的研究

目的β-淀粉样蛋白(Aβ)的异常聚集,导致细胞外老年斑和细胞内神经原纤维缠结的形成,从而引发的细胞毒性诱导神经元凋亡,导致渐进性认知功能障碍的临床表现,是阿尔茨海默病(AD)常见发病机制之一。因此,我们研究PNU282987激活SD新生乳鼠大脑皮质星形胶质细胞α7尼古丁乙酰胆碱能受体(n ACh R)后通过PI3K/Akt/HSF1信号通路介导内源性αB-crystallin(Cryab)对Aβ聚集的影响。方法分离出生24 h内SD乳鼠皮质层的星形胶质细胞进行培养、纯化、并传代,通过细胞免疫荧光的方法对星形胶质细胞进行鉴定;体外制备Aβ1-42寡聚体并进行鉴定;将细胞分为空白对照组、MLA处理组、PNU282987处理组、PNU282987+MLA处理组、LY294002处理组、PNU282987+LY294002处理组、Aβ处理组、PNU282987+Aβ处理组、PNU282987+LY294002+Aβ处理组及HSF1敲低组。收集细胞总蛋白,通过Western蛋白印迹法检测p-Akt,Cryab,HSF1和Aβ的蛋白表达水平。结果细胞免疫荧光鉴定显示培养的原代星形胶质细胞占总细胞98%以上;Western蛋白印迹法对细胞中Cryab,p-Akt,HSF1和Aβ表达水平的结果显示:与空白对照组相比较,PNU282987处理后,Cryab,p-Akt,HSF1蛋白都表现出上升的趋势(P<0.05),而单独MLA组或LY294002组无明显差异;在HSF1敲低组,PNU282987上调Cryab的作用受到明显的抑制;正常对照组未检测到Aβ的表达,与Aβ组相比,PNU282987组的Aβ表达降低(P<0.05);与PNU282987+Aβ组相比,PNU282987+LY294002+Aβ组的Aβ表达升高(P<0.01)。结论在原代星形胶质细胞模型上,PNU282987可通过激活星形胶质细胞的α7 n ACh R介导HSF1上调内源性Cryab从而抑制Aβ集聚,PI3K/Akt信号通路很可能是这个过程中的重要参与因素,为探讨Cryab和HSF1可能是治疗AD的一个潜在靶点提供了一定的基础研究。     

奥拉帕尼通过PARP-1通路调控脂多糖诱导的A549细胞炎症反应

目的探讨奥拉帕尼对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞炎症损伤的保护作用。方法体外培养的肺泡上皮细胞(A549)同时加入LPS 10mg·L~(-1)+奥拉帕尼10和25μmol·L~(-1)孵育24 h。酶联免疫吸附试验(ELISA)测定白细胞介素6(IL-6),IL-8和IL~(-1)0释放;实时PCR技术检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL~(-1)β、IL-6、IL-8和细胞间黏附分子1(ICAM-1)mRNA的表达水平;流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)水平;Western印迹法检测细胞聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)蛋白表达水平和NF-κB通路相关蛋白磷酸化水平。结果与LPS 10 mg·L~(-1)损伤组相比,奥拉帕尼10和25μmol·L~(-1)显著降低LPS诱导的A549细胞IL-6,IL-8的释放(P<0.01)和ROS水平(P<0.01),升高IL~(-1)0水平(P<0.01),抑制了LPS诱导的TNF-α,IL~(-1)β,IL-6,IL-8和ICAM-1 mRNA表达水平(P<0.01),抑制LPS诱导的PARP-1蛋白表达和NF-κB通路磷酸化激活(P<0.01)。结论奥拉帕尼可有效缓解LPS诱导的肺泡上皮细胞炎症损伤和氧化应激,其作用机制可能为奥拉帕尼通过下调PARP-1的表达,继而影响NF-κB通路的活化,最终抑制了相关炎症因子的表达和释放。     

基于NLRP3炎性体信号通路研究桂枝芍药知母汤对尿酸钠诱导的大鼠中性粒细胞炎性信号表达的影响

目的基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性体信号通路观察桂枝芍药知母汤(GD)对尿酸钠诱导的大鼠中性粒细胞炎性信号表达的影响,以期探明其抗炎的药效作用机制。方法健康雄性SD大鼠30只,按体质量分为5组,每组6只,GD高、中、低剂量组(4,8,16 g/kg)、秋水仙碱阳性对照组(3×10-4g/kg)均灌胃给药,正常组给予等容积的蒸馏水,每天1次,连续给药7 d。最后1次灌胃1 h后,所有大鼠乙醚麻醉,取血清备用。SD雄性大鼠20只,参照文献方法提取分离大鼠中性粒细胞,接种培养。细胞试验分为2个实验组(不加受体抑制剂,加NALP3受体抑制剂),每个实验组均含6个组,正常对照组加入正常大鼠血清,模型对照组,高、中、低剂量组,秋水仙碱组全部滴加200 mg/L的尿酸钠混悬液造模,同时滴加含药血清,置于CO2细胞培养箱中,孵育12 h取出。酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达,DNA-蛋白质互作ELISA(DPI-ELISA)方法检测核因子-κB(NF-κB)活性;蛋白印迹法检测凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶-12(caspase-12)信号衔接蛋白表达水平;反转录聚合酶链反应(RTPCR)观测NLRP3炎性体m RNA的表达。结果细胞造模12 h后,与正常组比较,模型组大鼠中性粒细胞IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-KB、ASC(除了加NALP3受体抑制剂组)、NALP3 m RNA表达水平明显升高(P<0.05),Caspase-12表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,给药各组IL-1β、IL-6、TNF-α、NALP3 m RNA及GD中、高剂量组NF-κB、ASC表达均明显降低(P<0.05),GD高、中剂量组caspase-12表达明显升高(P<0.05),而秋水仙碱组caspase-12表达无明显变化(P>0.05)。结论 GD抗炎作用机制可能与降低中性粒细胞NLRP3、ASC表达,抑制IL-1β分化成熟及NF-KB活化,降低NLRP3炎性体信号通路炎性因子表达有关。与秋水仙碱不同的是,GD能够增加caspase-12表达,负反馈抑制NLRP3炎性体信号通路炎性因子表达,提示GD治疗痛风性关节炎新的抗炎机制。在加入NALP3受体抑制剂下,GD仍然能够降低模型大鼠中性粒细胞中TNF-α、NF-κB表达,提示GD可以通过另外信号通路发挥抗炎作用。     

黄连素下调NRAV和PI3K/AKT通路减轻RSV感染致HEp-2细胞的损伤

目的 探讨长链非编码RNA NRAV(LncRNA NRAV)和PI3K/AKT通路在黄连素(berberine, BE)减轻RSV感染致HEp-2细胞损伤中的机制。方法 将HEp-2细胞感染RSV,并用BE、PI3K激活剂740Y-P处理或过表达NRAV。qRT-PCR检测NRAV、RSV-F、NS2表达水平;CCK-8实验检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞的凋亡率和线粒体膜电位;ATP检测试剂盒检测ATP水平;Western blot检测细胞PI3K、AKT、PINK1、Parkin、Beclin1、p62、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、BNIP3、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达;MitoSOX染色检测细胞线粒体ROS(mtROS);ELISA检测细胞IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α分泌水平。结果 过表达NARV细胞凋亡率、RSV活性增加,敲低后结果相反;BE能显著抑制NRAV和PI3K/AKT通路(P<0.05),改善线粒体功能、诱导线粒体自噬,提高细胞的活性、降低凋亡率（P<0.05）,并降低NLRP3炎性小体活化水平和IL-1β、IL-6、IL-8...