蛇六谷饮片煎煮前后刺激性比较及煎煮时间研究

目的:比较蛇六谷饮片煎煮前后的刺激性,并确定其最佳煎煮时间。方法:以口腔黏膜刺激性强度和刺激持续时间的综合评分为判断标准,考察不同煎煮时间下蛇六谷饮片及其水煎液的口腔黏膜刺激性,优选蛇六谷饮片的煎煮时间。结果:蛇六谷饮片经沸水煎煮后的上清液无口腔黏膜刺激性,且蛇六谷饮片的口腔黏膜刺激性显著降低。随着煎煮时间延长,蛇六谷饮片刺激性微弱增加,最佳煎煮时间为60 min。结论:应进一步探讨蛇六谷饮片的炮制方法与其药理作用的关系,为临床合理用药提供参考。     

海洋共生菌中脑苷脂对RAW264.7细胞的抗炎作用研究

海洋微生物因具有生长迅速、代谢可调控、菌种易选育、可持续利用等特点成为寻找药理活性物质的新源泉。使用从海洋共附生菌中提取的脑苷脂,采用CCK8法检测其对小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）细胞的毒性,建立RAW264.7细胞炎症模型,检测脑苷脂对炎症因子IL-6和IL-1β的含量变化,运用实时荧光定量PCR技术检测IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1、MIP-2和INOS mRNA表达量。通过Western Blot技术检测炎症相关信号通路p-ERK1/2、MyD88、NF-κB、NLRP3、p62、p-IKB和p-JNK蛋白的表达量。研究结果显示,脑苷脂可以降低IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1、MIP-2和INOS炎症因子的含量和mRNA表达量,抑制p-ERK1/2、MyD88、NF-κB、NLRP3、p-IKB和p-JNK蛋白的表达量。这些结果表明,脑苷脂可以通过抑制MyD88/NF-κB/MAPK/NLRP3信号通路实现对脂多糖诱导的RAW264.7细胞的抗炎作用。这为脑苷脂类化合物用于治疗炎症相关疾病提供数据参考,为开发新型海洋药物奠定基础。     

STAT5通路抑制剂对脂多糖诱导RAW264.7细胞的保护作用研究

目的观察信号传导及转录激活因子(STAT)5通路抑制剂对经脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞株一氧化氮(NO)和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)表达的影响。方法将处于对数期的RAW264.7细胞分为空白对照组、STAT5通路抑制剂对照组、LPS诱导组和STAT5通路抑制剂低、中、高浓度组,实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定iNOS mRNA的表达量,Western blot测定iNOS以及磷酸化STAT5(p-STAT5)的蛋白表达量。结果RAW264.7细胞培养24 h后,空白对照组、STAT5通路抑制剂对照组、LPS诱导组以及STAT5通路抑制剂低、中、高浓度组细胞中NO的含量差异有统计学意义(F=25.69,P<0.05);低、中、高浓度STAT5通路抑制剂对RAW264.7细胞释放NO的抑制率差异有统计学意义(F=132.49,P<0.05)。空白对照组、STAT5通路抑制剂对照组、LPS诱导组和STAT5通路抑制剂低、中、高浓度组细胞iNOS mRNA以及蛋白质的表达量比较差异有统计学意义(F=123.59、23.37,P<0.05)。空白对照组、STAT5通路抑制剂对照组、LPS诱导组和STAT5通路抑制剂低、中、高浓度组细胞p-STAT5/STAT5表达比较差异有统计学意义(F=12.07,P<0.05)。结论STAT5通路抑制剂能够抑制RAW264.7细胞iNOS的表达以及NO的产生,其机制可能与抑制STAT5磷酸化的表达有关。     

不同分子量枸杞多糖对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

目的:研究不同分子量枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)对小鼠巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用.方法:本研究通过水提醇沉及柱分离法以获得不同分子量的LBP成分.运用CCK8法检测不同给药浓度的LBP对RAW 264.7细胞增殖的影响;采用中性红吞噬实验测定LBP对细胞...     

青蒿乙素对脂多糖诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7炎症反应的抑制及机制

目的 探讨青蒿乙素的抗炎活性及其作用机制.方法 采用细菌脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7建立炎症反应模型,经青蒿乙素处理后,采用Griess试剂检测NO的含量;采用酶联免疫法(ELISA)检测促炎症因子的水平;采用Western Blot检测炎症相关蛋白及激酶的表达水平.结果 青蒿乙素能明显抑制RA...     

海菖蒲黄酮FEA对LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应的改善作用研究

目的 研究海菖蒲黄酮FEA(Enhalus acoroides in flavonoids, FEA ) 对LPS刺激RAW264.7细胞引起的炎症反应的改善作用。方法 用浓度为1 μg/mL的LPS刺激RAW264.7细胞6个小时后,用含有不同浓度的海菖蒲黄酮FEA作用RAW264.7细胞20 h,采用ELISA方法测定RAW264.7细胞分泌的NO、TNF-α、IL-1β和IL-6的含量,采用western-blot方法检测NF-κB信号通路中IκBα、P-IκBα、p65、P-p65的蛋白表达含量。结果 海菖蒲黄酮FEA可以抑制由LPS刺激RAW264.7细胞引起的NO、TNF-α、IL-1β和IL-6细胞因子的分泌,减少磷酸化蛋白IκBα和p65的表达量。结论 海菖蒲黄酮FEA可以减少细胞炎症因子的产生和抑制NF-?B信号通路的活化来改善炎症作用。     

田蓟苷对动脉粥样硬化模型小鼠的改善作用及机制研究

目的研究田蓟苷对动脉粥样硬化(AS)模型小鼠的改善作用及可能机制。方法以8只C57BL/6J小鼠作为正常组;将40只载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠随机分为模型组,田蓟苷低、中、高剂量组[2.1、3.5、7.0 mg/(kg·d)]和辛伐他汀组[阳性对照药物,3.5 mg/(kg·d)],每组8只。正常组小鼠饲以普通饲料,其余各组小鼠饲以高脂饲料建立AS模型。同时,正常组和模型组小鼠灌胃生理盐水,各给药组小鼠灌胃相应药液,每天1次,连续12周。测定小鼠血浆中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;观察小鼠主动脉病理形态学变化;测定小鼠主动脉中细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞间黏附分子1(VCAM-1)和增殖细胞核抗原(PCNA)的阳性率;测定小鼠主动脉中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、转化生长因子(TGF-β₁)、Smad2、Smad3 mRNA的表达水平以及TGF-β₁、Smad2/3、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)蛋白的表达水平。结果与正常组比较,模型组小鼠血浆中TC、TG、LDL-C、Ox-LDL、IL-1β、IL-6、MCP-1、TNF-α水平均显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.01);主动脉有脂质斑块生成,且斑块面积较大并致使管腔严重狭窄;主动脉中MMP-2、MMP-9、TGF-β₁、Smad2和Smad3 mRNA的表达水平,ICAM-1、VCAM-1、PCNA蛋白表达阳性率以及TGF-β₁、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白的表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组上述指标水平大部分均显著回调(P<0.05或P<0.01)。结论田蓟苷可能是通过抑制TGF-β₁/Smads信号通路的激活,进而抑制血管平滑肌细胞增殖、减轻炎症反应、调节脂质代谢来抑制AS的形成。     

血红铆钉菇多糖对RAW264.7巨噬细胞免疫调节作用研究

目的 研究血红铆钉菇多糖对RAW264.7小鼠单核巨噬细胞的免疫调节作用.方法 将小鼠的巨噬细胞进行复苏培养,制备细胞悬液,设置空白对照组以及不同质量浓度的血红铆钉菇多糖(CRPS25-Ⅱ)组(1、20、40、80和160μg/ml).采用MTT法测定血红铆钉多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7的细胞毒性;采用RT-PC...     

壮药三七姜醇提物及含药血清对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症的抗炎作用及机制

目的 研究壮药三七姜醇提物及含药血清对脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞炎症的抗炎作用及机制。方法 将三七姜醇提物（75.35 g/kg）或纯净水灌胃大鼠以制备含药血清或空白血清。以RAW264.7细胞为研究对象,将细胞分为正常对照组,LPS组（1μg/mL）,三七姜醇提物高、中、低剂量组（50、25、12.5μg/mL）,4%或15%空白血清组,4%或15%空白血清+LPS组,4%或15%含药血清组,4%或15%含药血清+LPS组,按相应条件培养24 h后,检测各组细胞活力和细胞中一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6含量,以及Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)mRNA表达水平,一氧化氮合酶（NOS）、环氧化酶2(COX-2)蛋白表达水平。结果 各组细胞培养24 h后,细胞活力差异无统计学意义。与正常对照组比较,LPS组细胞中NO、TNF-α、IL-1β、IL-6含量,TLR4、NF-κB mRNA表达水平和NOS、COX-2蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）。与4%或15%空白血清组比较,4%或15...     

黑碳对RAW264.7细胞功能的影响及机制研究

目的 探究黑碳(Black Carbon)对小鼠巨噬细胞RAW264.7功能的影响及白细胞介素33(IL-33)产生的相关机制.方法 利用含有不同浓度黑碳的DMEM培养液对RAW264.7细胞染毒24 h,染毒结束后采用MTT法测定细胞存活率;流式细胞术检测细胞吞噬功能和CD54、CD86表达;实时荧光定量PCR检测I...     

马钱苷元对人胰腺癌细胞BXPC3的抗肿瘤作用及机制研究

目的 研究山茱萸提取物马钱苷元对人胰腺癌细胞株BXPC3的体外抗肿瘤作用,并探讨其可能的抗肿瘤机制。方法 共设置2组实验,即对照组和马钱苷元组。采用CCK-8试验检测细胞存活率的改变,流式细胞仪检测马钱苷元对细胞周期的影响。同时利用划痕试验及基质胶Transwell小室试验分别检测马钱苷元对人胰腺癌细胞株BXPC3迁移和侵袭的影响。最后通过Western blotting检测AKT-mTOR信号通路相关蛋白AKT、mTOR和S6磷酸化水平的改变。结果 与对照组相比,马钱苷元对人胰腺癌细胞株BXPC3的增殖具有抑制作用,且呈明显的时间和浓度依赖性,100 μmol·L^-1马钱苷元作用于BXPC3细胞24 h,48 h的抑制率分别为（21.49±0.01）%,（29.25±0.03）%;马钱苷元能够使细胞周期阻滞于S期并抑制细胞株BXPC3的迁移（P<0.01）和侵袭（P<0.01）,下调AKT、mTOR和S6的磷酸化水平。结论 马钱苷元可能通过抑制AKT-mTOR信号通路发挥其抗肿瘤活性。     

人参皂苷对细胞自噬信号通路调控作用的研究进展

细胞自噬是细胞在自噬相关基因(Atg)的调控下,利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质的过程。细胞自噬的主要信号通路包括有依赖mTOR的PI3K/Akt信号通路、AMPK信号通路、以及非依赖mTOR的Beclin-1和p53信号通路。人参皂苷是一种固醇类化合物,主要存在于人参属中药材中,是人参中重要的活性成分,在肿瘤,心脑血管疾病,免疫系统等疾病的临床治疗中发挥显著地疗效。近年来研究报道,多种人参皂苷单体及其代谢产物的药理作用与细胞自噬有关,其作用机制涉及多条细胞自噬信号通路。本文综述人参皂苷对细胞自噬的作用及其相关自噬信号通路的调控作用的最新研究进展,以期为人参皂苷临床治疗相关疾病提供进一步的理论指导和实验参考。     

天麻素在甲基苯丙胺诱导SH-SY5Y细胞自噬中的作用及机制研究

目的研究天麻素(gastrodin)在甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)诱导SH-SY5Y细胞自噬中的作用,并探讨其作用机制。方法体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,不同浓度的METH(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mmol·L~(-1))处理SY5Y细胞,并在6、12、24、48 h观察SY5Y细胞自噬的情况,确定自噬的最佳浓度和时间点。提前1 h给予1mmol·L~(-1)天麻素进行干预,用显微镜观察细胞形态变化,采用激光共聚焦显微镜观察LC3-Ⅱ的改变,Western blot检测天麻素干预前后LC3-Ⅱ、Beclin-1以及Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的表达情况。结果随着METH浓度(0~3.0 mmol·L~(-1))的增加,SY5Y细胞逐渐变圆、突起逐渐变短、消失,同时部分细胞质内可见大小不等的空泡结构形成,细胞间隙逐渐增宽,最终细胞呈漂浮状态。随着METH浓度的增加,SY5Y细胞LC3-Ⅱ表达水平逐渐增强。激光共聚焦显微镜结果显示,天麻素+METH组LC3-Ⅱ的表达水平比METH组降低。与对照组相比,METH组LC3-Ⅱ和Beclin-1表达水平明显增强(P<0.01),mTOR和Akt差异无显著性,p-mTOR、p-Akt表达水平明显降低(P<0.01);给予天麻素干预后,与METH组相比,LC3-Ⅱ和Beclin-1表达水平降低,而mTOR、p-mTOR、Akt、p-Akt表达水平升高。结论 METH可诱导SY5Y细胞自噬,天麻素可减弱METH诱导的SY5Y细胞自噬,这一作用与天麻素调控Akt和mTOR信号通路密切相关。     

山茱萸新苷对糖尿病肾病模型小鼠的保护作用及机制

目的 探讨山茱萸新苷对糖尿病肾病（DN）模型小鼠的保护作用及潜在机制。方法 将雄性KK-Ay小鼠以高脂高糖饲料喂养2周复制DN小鼠模型。将造模成功的小鼠随机分为模型组、氨基胍组（阳性对照,100 mg/kg）、山茱萸新苷组（100 mg/kg）,另取雄性C57BL/6J小鼠作为正常组,每组6只。各药物组小鼠灌胃相应药液,正常组和模型组小鼠灌胃等体积生理盐水,每天1次,连续8周。检测各组小鼠空腹血糖（FBG）、24 h尿蛋白,血清白细胞介素12(IL-12)、IL-10、尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）水平,观察其肾组织病理损伤、纤维化改变和肾小球微观结构,检测其肾皮质中晚期糖基化终末产物受体（RAGE）、Ⅳ型胶原（COL-Ⅳ）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白的表达情况。结果 与正常组比较,模型组小鼠肾皮质可见明显的炎症细胞浸润和纤维化改变,肾小球系膜增生严重且基底膜有大量不规则块状暗色致密物沉积;其FBG、24 h尿蛋白水平,血清IL-12、BUN、Scr水平,肾皮质RAGE、COL-Ⅳ、i NOS蛋白的表达量均显著升高,血清IL-10水平显著降低（P<0.01）。与模型组比...     

魔芋葡甘露聚糖逆转大肠癌5-氟尿嘧啶耐药的作用及其机制研究

目的 探究魔芋葡甘露聚糖（konjac glucomannan,KGM）体内外逆转大肠癌5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil, 5-FU）耐药作用及其相关机制。方法 构建HCT-8/5-FU耐药细胞株,采用MTT法验证HCT-8/5-FU细胞的耐药性以及KGM和5-FU对HCT-8/5-FU细胞的增殖抑制作用;采用CompuSyn软件分析KGM和5-FU联合用药的联合指数,评价联合效应;流式细胞术检测两药对HCT-8/5-FU细胞凋亡的影响;Western blotting检测PI3K/Akt信号通路蛋白表达情况;构建裸鼠移植瘤模型,检测KGM和5-FU体内抑瘤效果。结果 HCT-8/5-FU细胞株对5-FU的敏感性显著降低;KGM和5-FU单用均能够抑制HCT-8/5-FU细胞的增殖,两者联用能够更加有效地抑制HCT-8/5-FU细胞增殖;CompuSyn软件分析结果表明KGM和5-FU具有协同作用;KGM和5-FU联用能够显著增加HCT-8/5-FU细胞凋亡率,并抑制PI3K/Akt信号通路活性（P<0.05）;KGM和5-FU联用的抑瘤率显著高于5-FU单独使用（P<0.05）。结论 KGM能够逆转大肠癌5-FU耐药,其作用机制跟PI3K/Akt信号通路有关。     

红景天苷对人舌癌细胞的凋亡作用及机制研究

目的：探讨红景天苷对人舌癌细胞增殖和凋亡的影响,并解释其分子机制,为舌癌的临床治疗提供新的思路。方法：CCK-8法和克隆形成实验检测红景天苷药物对人舌癌细胞增殖能力的影响;Annexin V/PI双染法和TUNEL法检测细胞凋亡情况;PI染色法检测红景天苷对细胞周期的影响;细胞迁移法检测红景天苷对舌癌细胞迁移的影响;免疫印迹法和实时荧光定量PCR法检测细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase 3的表达水平;免疫印迹法检测细胞内ERK和PI3K/AKT信号通路关键蛋白的表达水平的变化。结果：红景天苷能显著抑制人舌癌细胞的增殖且呈剂量依赖性。Annexin V/PI双染法和TUNEL法显示,随着红景天苷浓度的增加,Tca-8113细胞凋亡明显增多。PI染色法显示,红景天苷处理细胞后,G2/M期细胞明显减少。细胞迁移实验表明,红景天苷作用于舌癌细胞后,随着给药浓度的逐渐升高,细胞的迁移能力明显降低。免疫印迹结果表明,红景天苷可以使Bax和Cleaved caspase 3蛋白表达水平升高,Bcl2的蛋白表达水平降低。同时,红景天苷可以抑制ERK和PI3K/AKT信号通路。结论：红景天苷可以明显抑制人舌癌Tca-8113细胞的增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制ERK和PI3K/AKT信号通路有关。     

薯蓣皂苷元对小鼠免疫性睾丸炎的作用及机制

目的:研究薯蓣皂苷元(diosgenin, Dio)对小鼠免疫性睾丸炎的作用及机制。方法:小鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、盐酸左氧氟沙星组,以及Dio低、高剂量组,左侧睾丸注射30μL 10%冰醋酸诱导小鼠免疫性睾丸炎。给药21 d后,检测睾丸组织氧化应激及炎性因子水平、病理变化、细胞凋亡情况、NF-κB/NLRP3和Keap/Nrf2信号通路相关蛋白及阳性细胞表达。结果:模型组小鼠睾丸部分生精上皮结构紊乱,出现空泡样变,睾丸间质出现大量炎性浸润;Dio组小鼠睾丸各级病理改变得到有效恢复。与空白组比较,模型组小鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-6和MDA水平明显升高(P<0.01),SOD和GSH-Px水平明显降低(P<0.01),睾丸细胞凋亡率明显升高(P<0.01),睾丸NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、Keap1、Nrf2蛋白及NF-κB、Nrf2阳性细胞表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,Dio组上述炎症及氧化应激指标水平明显纠正(P<0.01),睾丸细胞凋亡率明显降低(P<0...     

黄芪多糖对肺癌A549细胞自噬的作用及机制研究

目的 探讨黄芪多糖（APS）对黄嘌呤氧化酶（XOD）诱导的肺癌A549细胞自噬模型及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路的影响及对自噬相关调节因子表达。方法 实验分为6组：正常组、模型组(20 U·L^-1 XOD处理24 h)、低、中、高3个浓度实验组(在模型组基础上分别使用100,200和400 mg·L^-1 APS进行处理)及3-MA抑制组(在模型组基础上使用2 mmol·L^-1 3-甲基腺嘌呤进行处理)。以免疫荧光法检测自噬相关蛋白,以蛋白质印迹法检测PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白,以实时荧光定量聚合酶链反应法检测mRNA的表达水平。结果 正常组、模型组、高浓度实验组及3-MA抑制组的微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）的蛋白荧光强度分别为6 368.50±17.90,2.57×10⁴±224.03,7 443.00±19.20和8 356.50±18.52;抗坏死骨片1（P62）的蛋白荧光强度分别为2.86×10⁴     

褐藻素诱导人宫颈癌HeLa细胞的自噬作用机制研究

目的:研究褐藻素诱导人宫颈癌He La细胞的自噬作用机制。方法:1、10、20、40、80μmol/L褐藻素培养He La细胞48 h后,MTT法测定细胞活力并计算抑制率。0(空白对照)、10、20、40μmol/L褐藻素培养He La细胞48 h后,流式细胞仪测定细胞周期与凋亡率;通过吖啶橙染色与Lyso-Tracker Red染色、He La-GFP-LC3细胞测试法在荧光显微镜下观察细胞自噬状态;Western blot法检测细胞自噬流量与相关蛋白的表达。结果:10、20、40、80μmol/L褐藻素培养细胞48 h后对细胞生长有明显抑制作用。10、20、40μmol/L褐藻素培养细胞48 h后可将细胞阻滞于G0/G1期,但对细胞凋亡无明显影响;40μmol/L褐藻素培养细胞48 h后细胞自噬程度加重;与空白对照比较,40μmol/L褐藻素可促进LC3Ⅰ转化为LC3Ⅱ以及Beclin-1、PTEN、p21的表达,但抑制p-Akt、p-p70S6K、p-m TOR、Cyclin D1、CDKZ表达。自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA,5 mmol/L)预处理可逆转褐藻素诱导的He La细胞自噬作用;U0126可部分逆转褐藻素诱导的He La细胞自噬作用。结论:褐藻素可通过抑制Akt信号通路以及激活MEK/ERK信号通路诱导He La细胞自噬。