金莲花总黄酮提取物对脂多糖致大鼠急性肺损伤的影响

目的探讨金莲花总黄酮提取物对脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤的保护作用,并讨论其可能的作用机制。方法将60只雄性SD大鼠随机分为6组,分别是正常对照组、模型组、金莲花总黄酮提取物低剂量组(125 mg/kg·bw)、中剂量组(250 mg/kg·bw)、高剂量组(500 mg/kg·bw)和地塞米松阳性对照组(2 mg/kg·bw),每组10只。金莲花总黄酮提取物各剂量组每天按设定剂量灌胃给予受试物,其余3组均灌胃给予相同体积的蒸馏水,连续30 d,阳性对照组在造模前1 h灌胃给予2 mg/kg·bw地塞米松。第31天,除正常对照组外,其余各组大鼠均经口气管插管后,采用雾化注射器喷入LPS溶液(3 mg/kg·bw)建立大鼠急性肺损伤模型。染毒3 h后,经腹主动脉采血处死大鼠。检测全血中性粒细胞百分比,检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)活性及丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量;检测肺泡灌洗液中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1-β(IL-1β)和白介素6(IL-6)含量;计算右肺中叶湿/干重比(W/D),苏木素-伊红(HE)染色观察右肺后叶病理组织学变化。结果与模型组比较,金莲花总黄酮提取物高剂量组中性粒细胞百分比明显降低(P0.05);金莲花总黄酮提取物高剂量组大鼠右肺中叶W/D比值明显降低(P0.05);金莲花总黄酮提取物高剂量组大鼠血清SOD和GSH活性明显高于模型组(P0.05),中、高剂量组MDA明显降低(P0.05);金莲花总黄酮提取物中、高剂量组NO含量低于模型组(P0.05)。在肺泡灌洗液检测中发现,与模型组相比,高剂量组TNF-α含量明显降低(P0.05),低、中和高剂量组IL-1β有不同程度的降低,但差异无统计学意义(P0.05),金莲花总黄酮提取物不同剂量组IL-6水平较模型组有明显降低(P0.05);病理组织学观察显示,与模型组相比较,金莲花总黄酮提取物不同剂量组的炎症反应程均有不同程度的减轻。结论金莲花总黄酮提取物对LPS致大鼠急性肺损伤具有保护作用,其作用机制可能与其抗氧化作用、减轻肺水肿和减少炎症因子的释放有关。     

薄荷酮对内毒素致炎症模型小鼠的保护作用研究

目的观察薄荷酮对内毒素(LPS)致炎症模型小鼠的保护作用,并初步探讨与NLRP3炎症小体激活相关的调控作用机制。方法♂C57BL/6J小鼠按体质量分层随机分为空白对照组、模型对照组、地塞米松组(5 mg·kg~(-1))、薄荷酮0.25 g·kg~(-1)及0.5 g·kg~(-1)剂量组。除地塞米松组实验当日腹腔注射给药1次外,其余各组小鼠连续灌胃给药5 d,每天1次。各组小鼠末次给药30 min后,除空白组小鼠外,其余各组小鼠腹腔注射LPS(15 mg·kg~(-1),10 m L·kg~(-1))制备炎症反应模型,造模12 h后,小鼠取血分离血清,采用ELISA及液相蛋白芯片技术测定炎症因子IL-18、IL-1β、IL-5、TNF-α、IFN-γ、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及巨噬细胞炎性蛋白-1β(MIP-1β)的水平;取小鼠全血进行白细胞(WBC)计数;剖取肺组织计算肺脏指数,并测定肺组织中NO含量,进行肺组织病理组织学检查;RT-PCR法检测肺组织中NLRP3、caspase-1及IFN-α mRNA表达;免疫组化法观察肺组织中cathepsin B、P2X7R蛋白表达。结果 0.5 g·kg~(-1)薄荷酮明显降低内毒素致炎症模型小鼠血清IL-18、IL-1β、IL-5、TNF-α、IFN-γ、G-CSF、GM-CSF、MIP-1β的水平(P<0.05或P<0.01),下调模型小鼠肺组织NLRP3、IFN-α mRNA表达及cathepsin-B、P2X7R蛋白表达(P<0.05或P<0.01),明显降低模型小鼠肺组织中NO的含量(P<0.05);0.25 g·kg~(-1)薄荷酮明显降低模型小鼠血清中IL-1β、IL-5、TNF-α、MIP-1β含量(P<0.05),下调肺组织中P2X7R蛋白表达及NO水平(P<0.05或P<0.01);病理组织学检查显示0.5、0.25 g·kg~(-1)薄荷酮能明显减少肺组织切片中嗜中性粒细胞数量(P<0.01),减轻肺泡膈的增厚;薄荷酮对模型小鼠全血白细胞计数与肺指数的升高表现出降低趋势。结论薄荷酮对内毒素致炎症模型小鼠有保护作用,能抑制血清多种炎性细胞因子的释放而减轻肺部炎性损伤,该作用可能与干扰NLRP3炎症小体的激活有关。     

四氢嘧啶类新衍生物(XD-7006)对脂多糖所致大鼠发热的解热作用

目的研究四氢嘧啶类新衍生物(XD-7006,1,3-二正丁基-1,2,3,6-四氢嘧啶-4,5-二甲酸二乙酯)对脂多糖(lipopolysacchride,LPS)所致发热大鼠的解热作用及其机制。方法将符合条件的48只SD大鼠随机分为6组:空白对照组、模型组、XD-7006高、中、低剂量组(80,40和20 mg·kg~(-1))及阿司匹林组(80 mg·kg~(-1)),除空白对照组外,其他5组实验动物均采用腹腔注射100μg·kg~(-1) LPS建立大鼠发热模型,每小时记录1次大鼠体温,连续监测5 h。利用酶联免疫吸附测定(Elisa)检测实验动物血清中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)水平及脑组织中发热介质前列腺素E_2(PGE_2)和环磷酸腺苷(cAMP)含量。结果 XD-7006剂量为80和40 mg·kg~(-1)时均能不同程度抑制LPS诱导的大鼠发热体温,并降低其TNF-α和IL-1β水平及脑组织中PGE_2和cAMP的含量,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 XD-7006具有一定的解热作用,其机制可能与降低血清中的TNF-α和IL-1β水平及脑组织中PGE_2和cAMP的含量有关。     

双丹口服液对大鼠糖尿病肾病的作用研究

目的探讨双丹口服液(SDO)对大鼠糖尿病肾病(DN)的治疗效果及其作用机制。方法采用高脂高糖饲料加30mg·kg~(-1)链脲佐菌素诱导大鼠DN模型,随机分为治疗组、阳性对照组、模型组和正常对照组。治疗组分别灌胃(ig)10.0,5.0和2.5mL·kg~(-1) SDO高剂量组,皮下注射10μ·kg~(-1)胰岛素组(阳性对照),模型组和正常组分别ig 5.0mL·kg~(-1)生理盐水,各组给药2次/d,连续给药8周后检测大鼠空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、24h尿量、血肌酐、尿素氮和血脂等生化值,测定T-SOD、T-AOC、MDA和NO等氧化应激指标,血液流变仪测定全血黏度,光镜下观察肾脏组织病理学改变。结果 SDO各给药组大鼠24h尿量、血肌酐、尿素氮、血总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白的含量明显较模型组降低,高密度脂蛋白含量升高,血黏度降低(P<0.05或P<0.01);SDO各剂量组大鼠血T-SOD、T-AOC活力明显升高,MDA、NO含量降低(P<0.05或P<0.01);SDO各给药组对血糖及糖化血红蛋白无影响(P>0.05);SDO各给药组对大鼠的全血黏度和肾组织损伤均有所改善。结论首次证实SDO对大鼠DN具有显著治疗作用,其机制与改善血脂代谢紊乱、促进抗氧化应激能力有关。     

八肽胆囊收缩素对内毒素血症大鼠肺组织损伤的影响

目的观察八肽胆囊收缩素(CCK-8)对脂多糖(LPS)诱导的内毒素血症(ETM)大鼠肺损伤的影响。方法按随机数字表法将SD大鼠分为4组(n=6):对照组、模型组、LPS+CCK-8组和CCK-8组。尾静脉注射LPS(1 mg·kg-1)复制ETM大鼠肺损伤模型。ETM形成(LPS后30 min)后,给予CCK-8(20μg·kg-1),检测对照组和模型组血液细菌内毒素含量;用ELISA试剂盒检测肺脏中炎症因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)的变化;光镜和透射电镜下观察肺组织结构变化。结果注射LPS 30 min后,模型组的血液细菌内毒素含量(EU·mL-1)明显高于对照组。与模型组相比,CCK-8可明显抑制肺组织TNF-α、IL-1β和IL-6的增加,减轻肺组织结构损伤。结论在ETM形成后应用CCK-8,可明显减轻LPS诱导的ETM大鼠肺组织损伤。     

水飞蓟素对伴刀豆球蛋白A致免疫性肝损伤小鼠的保护作用

目的研究水飞蓟素对伴刀豆球蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导的免疫性肝损伤小鼠的保护作用,探讨其可能的肝保护机制。方法将实验小鼠30只随机分为对照组、模型组、水飞蓟素组(200 mg·kg~(-1)),各10只。对照组和模型组小鼠按10 m L·kg~(-1)灌胃0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)水溶液,水飞蓟素组小鼠灌胃同等容量的水飞蓟素(200 mg·kg~(-1),0.5%CMC-Na混悬),每日1次,共10 d。实验末期,模型组和水飞蓟素组小鼠尾静脉注射Con A(15 mg·kg~(-1))建立小鼠免疫性肝损伤模型,检测小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)活性及肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量;苏木精-伊红(HE)染色法观察肝组织病理学变化。ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-6(IL-6)含量。结果水飞蓟素明显降低Con A所致免疫性肝损伤小鼠血清ALT、AST和ALP水平(P<0.01),还可增加肝组织SOD、CAT、GSH的活性,降低肝组织MDA水平(P<0.05或P<0.01),明显改善肝脏病理组织状况;显著降低小鼠血清TNF-α、IL-4和IL-6含量(P<0.01)。结论水飞蓟素能明显减轻Con A诱导的小鼠免疫性肝损伤,该作用与其增加肝组织中抗氧化酶的活性、降低脂质过氧化水平、降低TNF-α、IL-4和IL-6等促炎因子水平有关。     

龙胆苦苷对类风湿性关节炎的保护作用及其机制

目的通过体内外实验研究龙胆苦苷(Gent)对类风湿性关节炎(RA)的保护作用及机制。方法 SD大鼠右后足足趾皮下注射弗氏完全佐剂0.1 m L造模。14 d后,将大鼠分为正常组、佐剂性关节炎(AIA)组、地塞米松(Dex)0.1 mg·kg~(-1)组、Gent 100和200 mg·kg~(-1)组并按上述剂量灌胃给药14 d。记录大鼠原发与继发侧足趾容积,Wood法评估关节炎指数,计算胸腺和脾脏指数,HE染色观察大鼠踝关节组织病理学,Western印迹法检测滑膜组织中NF-κB信号通路相关蛋白表达。滑膜切除术取得RA患者滑膜组织,胶原酶消化法提取原代成纤维样滑膜细胞(FLS),MTT法检测药物细胞毒性,EDU及划痕法分别检测Gent及Dex对TNF-α(10μg·L~(-1))诱导的细胞异常增殖及迁移的调控作用,免疫荧光法检测NF-κB P65的核转位。结果Gent 200 mg·kg~(-1)及Dex能显著降低AIA大鼠原发与继发侧足趾肿胀(P<0.05,P<0.01)和大鼠关节炎指数评分(P<0.05)。HE染色显示,Gent及Dex能显著减轻AIA大鼠踝关节滑膜增生,炎细胞浸润,血管翳生成,以及软骨和骨的侵蚀破坏。与AIA组比较,Dex组大鼠胸腺、脾脏严重萎缩(P<0.05,P<0.01),Gent 200 mg·kg~(-1)对胸腺指数有抑制作用(P<0.05)。Western印迹法结果显示,Gent能抑制AIA大鼠滑膜组织IκB的降解及p-IκB,p-P65的表达(P<0.01)。RA-FLS经TNF-α刺激后,细胞异常增殖及迁移,加入Gent(25,50和100μmol·L~(-1))和Dex(100 nmol·L~(-1))预保护后,Gent 50和100μmol·L~(-1)及Dex组细胞增殖及迁移显著降低(P<0.01)。免疫荧光结果显示,Gent 50和100μmol·L~(-1)及Dex组能显著抑制NF-κB P65的核转位(P<0.05,P<0.01)。结论 Gent对RA具有保护作用,其保护作用可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

银杏内酯通过抗炎和抗氧化保护缺血再灌注导致的大鼠心肌损伤

目的探究银杏内酯(BB)对心肌缺血再灌注(MI/R)模型大鼠心肌组织的影响。方法采用结扎大鼠左冠状动脉前降支30 min制备MI/R模型,按分组分别ig给予BB 2,4和8 mg·kg-1,连续4周。记录各组大鼠心率(HR),检测心肌梗死面积。用试剂盒检测血液中肌酸激酶MB型同工酶(CK-MB)及乳酸脱氢酶(LDH)浓度,HE染色观察心肌组织损伤,TUNEL染色检测心肌细胞凋亡率。ELISA法检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量;检测外周血白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-10浓度。免疫组化检测Ki67及IL-6表达水平,Western印迹法检测心肌组织中Bcl-2、Bax、活化的胱天蛋白酶3、转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶(HO-1)、NAD(P)H醌脱氢酶1(NQO1)、NF-κB P65、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)和IκBα激酶(p-IKK)蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,MI/R模型组大鼠心肌梗死面积百分比及外周血中CK-MB和LDH浓度显著增加(P<0.01),HR下降(P<0.01),心肌组织出现心肌纤维断裂及炎性浸润现象。与MI/R模型组比较,MI/R模型+BB 2,4和8 mg·kg-1组中心肌梗死面积百分比及CK-MB和LDH浓度显著降低(P<0.05),心率上升(P<0.05),心肌组织纤维排列趋向规则,炎症细胞浸润明显减少损伤明显减轻。与正常对照组比较,MI/R模型组凋亡细胞百分比及Ki67阳性细胞百分比、Bax及活化的胱天蛋白酶3表达显著增加(P<0.01),Bcl-2表达显著减少(P<0.01)。与MI/R模型组比较,MI/R模型+BB 2,4和8 mg·kg-1组中Ki67阳性细胞百分比和Bcl-2表达显著增加(P<0.05),凋亡细胞百分比、Bax和活化的胱天蛋白酶3表达显著减少(P<0.05)。MI/R可降低大鼠心肌组织中SOD及GSH-Px活性(P<0.01),提高MDA浓度(P<0.01),BB可减弱MI/R对SOD,GSH-Px和MDA的影响(P<0.05,P<0.01)。与正常对照组比较,MI/R模型组大鼠外周血中IL-1β,TNF-α和IL-10浓度及心肌组织中IL-6阳性细胞百分比显著升高(P<0.01)。与MI/R模型组比较,MI/R模型+BB 2,4和8 mg·kg-1组中IL-1β,TNF-α浓度和IL-6阳性细胞百分比显著降低(P<0.05),IL-10浓度显著升高(P<0.01)。此外,MI/R模型组大鼠心肌组织中的Nrf2,HO-1和NQ1蛋白表达水平显著降低(P<0.01);NF-κB P65,p-IKK和p-IκBα1蛋白表达水平显著升高(P<0.01),BB可有效逆转MI/R对这些信号通路蛋白的作用(P<0.05,P<0.01)。结论 BB可通过抗炎及抗氧化对MI/R大鼠产生保护作用。     

依达拉奉对1-溴丙烷诱导大鼠中枢神经系统损伤的保护作用

目的观察1-溴丙烷(BP)的中枢神经毒性,从神经炎症角度探索依达拉奉(Edv)的保护机制。方法成年雄性Wistar大鼠每天ig给予BP 800 mg·kg~(-1)制备模型,4 h后分别ip给予Edv 1,3和5 mg·kg~(-1),连续12 d。自给药第7天采用Morris水迷宫首先进行连续5 d的定位航行实验,检测大鼠的逃避潜伏期和游泳总距离;第6天进行空间探索实验,测定大鼠穿越原平台位置的次数,评价空间记忆能力。行为学实验结束后,每组随机取4只大鼠制作全脑冰冻切片,进行尼氏染色和免疫组化染色,另8只大鼠分别采用ELISA和硝酸还原酶法检测大鼠大脑前额叶皮质肿瘤坏死因子α(TNF-α)和一氧化氮(NO)含量。结果 Morris水迷宫实验结果显示,定位航行实验第2~5天BP 800 mg·kg~(-1)组大鼠的逃避潜伏期分别比正常对照组增加了60.8%,81.9%,124.0%和323.3%,游泳总距离增加47.0%,66.4%,106.0%和277.6%(P<0.05,P<0.01);空间探索实验中,BP组大鼠穿越平台次数也较正常对照组明显减少(P<0.01);病理形态学观察发现,BP组大鼠大脑前额叶皮质小胶质细胞激活明显,神经元丢失;大脑组织中NO和TNF-α含量分别比正常对照组增加147.6%(P<0.05)和18.7%(P<0.01)。给予BP同时给予不同剂量的Edv,其中Edv 5 mg·kg~(-1)组大鼠第4天和第5天的逃避潜伏期分别比BP组减少38.4%和44.3%(P<0.01),游泳总距离减少34.5%和43.3%(P<0.05,P<0.01);同时给予Edv组大鼠大脑前额叶皮质小胶质细胞活化和神经元丢失明显减轻,NO及TNF-α含量也明显降低,Edv 1,3和5 mg·kg~(-1)组NO分别降低53.8%,55.4%和59.8%,TNF-α分别降低12.2%,15.8%和22.2%(P<0.05,P<0.01)。结论 Edv可能通过抑制脑内炎症减轻BP的中枢神经毒性。     

番茄红素对高脂血症模型大鼠脑血管和神经元的保护作用

目的研究番茄红素对高脂血症所致脑血管和神经元损伤的保护作用。方法 SD大鼠在饲喂高脂饮食的同时每天ig给予番茄红素5,25,45,65,85,105和125 mg·kg~(-1),同时设正常对照组、高脂模型组和氟伐他汀钠10 mg·kg~(-1)组,实验期4周。用试剂盒检测血清和脑总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)、总抗氧化能力(T-AOC)、白细胞介素1(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、血管内皮生长因子(VEGF)和一氧化氮(NO)水平;Western蛋白印迹法检测脑组织密封蛋白5、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和磷酸化P38蛋白(p-P38)水平;尼氏染色观察海马CA1和CA3区神经元形态变化并对其计数;高效液相色谱法检测血清番茄红素浓度。结果实验第4周末,与高脂模型组相比,番茄红素25～85 mg·kg~(-1)组血清和脑TC,TG,LDL-C,Ox-LDL,IL-1,TNF-α,VCAM-1,VEGF及脑NO,GFAP,p-P38水平降低(P<0.01),血清T-AOC,NO及脑密封蛋白5水平和脑海马区神经元数升高(P<0.01),105和125 mg·kg~(-1)组仅血清TC,TG,LDL-C及血清和脑IL-1,TNF-α水平降低(P<0.05),血清NO水平升高(P<0.01)。番茄红素干预剂量与血清番茄红素浓度呈二次曲线关系(P<0.01),其中65和85 mg·kg~(-1)组血清番茄红素浓度高于其他各组(P<0.01)。结论番茄红素主要通过影响血液中胆固醇水平以减少Ox-LDL生成,减轻炎性反应,减轻对血管内皮的损伤,维护血脑屏障通透性,间接降低星型胶质细胞活化程度,减少脑P38蛋白磷酸化及IL-1,TNF-α和NO分泌,发挥脑血管和神经元保护作用。