肠球菌溶血素的表型及基因型检测

目的 探讨影响肠球菌溶血素检测的因素,提高肠球菌溶血素检测的准确性. 方法 分别用兔血、人血、绵羊血检测48株肠球菌的溶血素表型,比较其检出率;用PCR检测溶血性肠球菌的溶血素cylA基因片段;对129株肠球菌同时进行溶血素表型(兔血检测)及基因型的检测,比较其检出率的差异. 结果 兔血、人血的肠球菌溶血素检出率分别为41.7%和35.4%,而绵羊血的肠球菌溶血素检出率为0(P＜0.01);14.06%cylA基因阳性菌株未出现相应表型, 6.78%溶血表型阳性菌株PCR未检测到溶血素cylA基因. 结论 兔血及人血对肠球菌溶血素较敏感,绵羊血对肠球菌溶血素不敏感;溶血素表型及基因型的检测不完全相符;对肠球菌溶血素同时进行表型及基因型的检测,能提高肠球菌溶血素检测的准确性.     

肠球菌毒力岛基因的检测

目的 探索肠球菌中毒力岛基因的存在情况.方法 使用PCR和杂交方法对155株肠球菌进行毒力岛相关基因检测.结果 155株肠球菌中,88.39%携带至少一个毒力岛基因,各基因阳性率由高至低依次为hyd(81.94%),psaA(78.06%)、nuc(57.42%)、esp(53.55%)、cylB(52.90%)和gls24-lik e(38.06%);除esp基因,其他5个基冈的阳性率均是粪肠球菌高于屎肠球菌,其中nuc、cylB、gls24-like三个基冈的阳性率有统计学差异.粪肠球菌中临床分离株各基因的阳性率和所携带的基冈数均高于健康人分离株.结论 肠球菌普遍携带毒力岛相关基因,粪肠球菌各基因阳性率高于屎肠球菌,粪肠球菌中临床分离株所携带的毒力基因、毒力岛基因数目均明显高于健康人分离株.     

肠球菌庆大霉素高耐性传递

目的 对临床分离的肠球菌进行药敏分析,研究其庆大霉素高耐性的遗传学基础。方法 通过电击转化和质粒丢失试验确定庆大霉素高耐性质粒,PCR扩增和末端双脱氧法测序分析庆大霉素高耐基因。结果 确定一庆大霉素高耐性质粒（pG301)及其重组质粒（pG401),PCR扩增出－1.6kb扩增片段,测序结果与6‘-O-氨基糖苷乙酰转移酶－2“－N－氨基糖苷酸转移酶[aac(6‘)-aph(2“)]双功能酶基因基本一致。结论 在所分离的肠球菌中,耐药性相当普遍。庆大霉素高耐基因可位于不可自主接合转移的较小质粒上,在电击转化过程中可发生重组,在此质粒中介导庆大霉素高耐性的基因是aac(6‘)-aph(2“)双功能酶基因。     

氢氧化钙对粪肠球菌生物膜形成相关毒力因子作用的研究

目的：研究粪肠球菌毒力因子gelE、cylA、ace、esp在氢氧化钙作用粪肠球菌生物膜后的表达情况。方法体外建立对数期、稳定期、饥饿期粪肠球菌生物膜模型,以氢氧化钙作用于粪肠球菌生物膜后用qRT-PCR检测毒力因子gelE、cylA、ace、esp的基因表达相对量。结果氢氧化钙作用后,gelE、cylA、ace、esp基因表达相对量,饥饿期高于稳定期及对数期;饥饿期gelE基因表达相对量高于esp,也高于cylA及ace,差异具有显著性意义（ P＜0．05）。结论氢氧化钙作用生物膜可抑制粪肠球菌毒力因子gelE、cylA、ace、esp的表达。     

粪肠球菌和屎肠球菌临床分离株的毒力因子与耐药性分析

目的 检测临床分离肠球菌的耐药和毒力因子,比较粪肠球菌和屎肠球菌的耐药性和毒力特征.方法 采用琼脂稀释法检测肠球菌对万古霉素(VAN)、四环素(TET)、环丙沙星(CIP)、红霉素(ERY)、复方新诺明(SMZ)、替考拉宁(TEC)、克林霉素(CLI)的耐药性;采用微量板测定肠球菌的生物膜形成能力;观察肠球菌的β溶血和明胶溶解结果,同时用PCR方法检测相应基因cylA和gelE.结果 粪肠球菌和屎肠球菌的耐药率分别为0%～100%和3.23%～96.77%,后者对环丙氟哌酸、红霉素的耐药程度高于前者.β溶血试验阳性率为19.23%,cylA基因阳性率为35.38%;明胶表型阳性率为21.54%,gelE阳性率为40.0%,其中有46.15%(12/26)阳性者未出现相应表型;生物膜形成检出率为36.92%;粪肠球菌3种毒力因子(表型和基因型)的阳性率均高于屎肠球菌.结论 屎肠球菌耐药率高于粪肠球菌,粪肠球菌毒力因子阳性率高于屎肠球菌.     

引起血流感染的耐万古霉素肠球菌基因型、 毒力及MLST分型研究

目的 调查引起血流感染的耐万古霉素肠球菌 (VRE) 的检出情况,并对其进行耐药基因型、毒力和多位点序列分型 (MLST) 研究。 方法 收集2012年7月~2015年7月从笔者医院血培养阳性标本中分离的68株屎肠球菌和28株粪肠球菌,采用含6μg/ml万古霉素的脑心浸液平皿筛选VRE。采用多重PCR法检测vanA、vanB及粪、屎肠球菌种特异基因,另一种多重PCR法检测常见5种毒力基因 (esp、hyl、gelE、asa1和cylA)。采用MLST技术分析菌株序列型 (ST) 从而进行同源性分析。 结果96株肠球菌中共检出22株VRE (22/96,2.9%),包括20株屎肠球菌 (20/68,9.4%) 和2株粪肠球菌 (2/28,7.1%)。所有VRE耐药表型与基因型一致,属vanA型。20株屎肠球菌VRE仅esp (16/20,0.0%) 和hyl (10/20,0.0%) 阳性;2株粪肠球菌VRE仅gelE和 asa1阳性。20株屎肠球菌VRE分属7个ST型,包括8株ST78 (8/20,0.0%)、6株ST17 (6/20,0.0%) 以及2株ST18和ST389、ST414、ST571、ST564各1株。 结论 笔者医院VRE耐药问题严重,耐药基因和毒力基因携带率高。20株屎肠球菌VRE经eBURST软件分析均属于与医院感染相关的CC17克隆复合群。     

肠球菌兔心内膜炎模型的建立

目的:建立肠球菌毒力相关性兔心内膜炎模型,用于肠球菌类毒力因子的研究.方法:用粪肠球菌(Enterococcus fae-calis)标准毒株OG1RF和粪肠球菌sprE基因缺陷突变株来建立兔心内膜炎模型,通过心内膜炎相关指标的检测来判断毒力下降情况.结果:突变株在兔心内膜炎模型中产生赘生物的大小、重量以及菌落计数都明显低于标准株.结论:肠球菌毒力相关性兔心内膜炎模型建立成功,可用于肠球菌其他可能毒力因子的研究.     

肠球菌小鼠腹膜炎模型的建立

目的:建立肠球菌毒力相关性小鼠腹膜炎模型,用于肠球菌类毒力因子的研究.方法:用粪肠球菌标准毒株OG1RF和粪肠球菌sprE基因缺陷突变株来建立小鼠腹膜炎模型,通过腹膜炎指标的检测来判断毒力下降情况.结果:突变株在小鼠腹膜炎模型中的半数致死量(LD50)提高了7倍,存活率也明显高于标准株.6 h和12 h外周血白细胞变化低于标准株,6h腹水TNF-α水平和活化TNF-α低于标准株组.结论:肠球菌毒力相关性小鼠腹膜炎模型建立成功,可用于肠球菌其它可能毒力因子的研究.     

临床分离粪肠球菌和屎肠球菌的耐药性监测

目的：了解粪肠球菌和屎肠球菌对抗菌药物的耐药性,为临床提供治疗依据。方法：对住院及门诊病人送检样本中培养分离出316株肠球菌(粪肠球菌126株,屎肠球菌190株)的感染分布与耐药情况进行分析。采用稀释法进行药物敏感试验,结果按美国临床实验室标准化研究所标准判定。结果：屎肠球菌对青霉素G的耐药率最高(93.7%),其次为红霉素、氨苄西林和环丙沙星。粪肠球菌对奎奴普丁/达福普汀耐药率最高为(74%),其次为四环素、红霉素和环丙沙星。粪肠球菌和屎肠球菌对利奈唑胺和万古霉素的耐药率均低于(2%),替考拉宁的耐药率最低均为(0)。结论：粪肠球菌和屎肠球菌对不同抗菌药物的耐药率有较大差异,在抗感染治疗前应先做细菌培养和药物敏感试验,依据报告结果合理选用抗菌药物。     

310株医院感染肠球菌的鉴定及治疗药物筛选

目的 :了解医院感染肠球菌的临床分布及其对常用抗菌药物的耐药状况 ,为临床治疗肠球菌感染提供药物筛选依据。方法 :用生物梅里埃API 2 0Strep鉴定系统 ,对 310株医院感染的肠球菌进行鉴定 ,并用K \|B法测定其对万古霉素等 9种抗生素的敏感性 ,采用WHONET 4软件分析试验结果。结果 :310株肠球菌属中粪肠球菌占 90 % ,屎肠球菌占 7.1% ,其他肠球菌占 2 .9% ,肠球菌属在各类感染性标本中的分离率以尿液、呼吸道分泌物及伤口分泌物居多。药敏结果显示 ,肠球菌对庆大霉素和环丙沙星的耐药率最高 ,对青霉素和氨苄西林的耐药率较高 ,未检出万古霉素及替考拉宁耐药菌株。结论 :医院感染的肠球菌存在着不同的耐药谱 ,应根据药敏试验妥善筛选药物进行治疗 ,糖肽类抗生素为肠球菌重症感染的最佳选择。     

鲍曼不动杆菌耐药性及致病特征研究进展

近年来,鲍曼不动杆菌已经成为我国医院内获得性感染的主要病原菌之一。随着抗生素的广泛应用,多重耐药以及泛耐药株的临床分离率不断提高。在对其耐药性变迁及耐药机制研究的同时,研究人员开始进一步关注其致病力及致病机制。耐药性增加与其致病力的变化是否存在一定的相关性尚不明确。本文将对鲍曼不动杆菌的耐药特征、耐药机制及其致病力特征进行综述,以更好的了解鲍曼不动杆菌耐药性变化机制及致病力演变的特征,更好的指导鲍曼不动杆菌临床预防及感染治疗。     

武汉市和周边地区临床分离肠球菌的耐药性比较

目的 了解不同地区肠球菌的耐药性，为临床治疗提供依据。方法 采集武汉市8所医院及周边地区6所医院临床分离的不重复的肠球菌。菌种鉴定用微生物检测常规方法或API、ATB系统，药敏试验用K-B法，资料用WHONET-5软件和χ^2检验进行统计学分析。结果 武汉市临床分离的肠球菌中粪肠球菌、屎肠球菌分别占70．1％、20．8％，周边地区为80．8％、13、9Voo；武汉市标本来源构成前5位的为尿液37．8％、分泌物15.0％、引流液8.2％、痰液7．3%、伤口分泌物6.8％，周边地区为尿液32、8％、生殖道分泌物19、8Yoo、分泌物19、4％、痰液11、8％、伤口分泌物4.6%；武汉市和周边地区粪肠球菌对万古霉素、呋喃妥因、氨苄西林、高浓度庆大霉素的耐药率分别为2．1%、7．2％、22．6%、41．4％和1.8％、6.9％、23．2%、40．3％；武汉市和周边地区屎肠球菌对以上4种抗生素的耐药率分别为1．3%、18．2%、76.3％、73.0%和1．9%、21.3%、64.6％、62．0％。结论 武汉市临床分离的肠球菌耐药率比周边地区高，各地区应动态监测并及时公示肠球菌感染和耐药性资料，以指导临床用药。     

弓形虫RH、B36、Fukaya株毒力及致病性的比较研究

目的 探讨不同毒力的弓形虫株与其致病性的关系。方法 应用体外培养和动物模型观察ＲＨ,Ｂ３６,Ｆｕｋａｙａ三虫株对组织细胞的损害及其致病,致畸,致死的差异。结果 Ｖｅｒｏ细胞在８ｈ内的侵袭率及分解产物脂肪酸含量以Ｂ３６株为高,胞内２４ｈ敏感数以ＲＨ株为最多,Ｂ３６次之,Ｆｕｋａｙａ最低。此结果与虫体对细胞的损害程度,对仔鼠智力发育的影响密切相关,细胞因子激活巨噬细胞后,对弓形虫抑虫或杀虫虫程度与ＮＯ     

细菌接合性耐药质粒与毒力关系的研究

目的　研究伤寒菌接合性耐药质粒ｐＲＳＴ９８ 与宿主菌毒力的关系。方法　用伤寒菌同源染色体的含ｐＲＳＴ９８ 野生株、消除ｐＲＳＴ９８ 菌株及ｐＲＳＴ９８ 重新导入消除菌株后,检测它们在人、兔及豚鼠血清中抵抗力的改变。将ｐＲＳＴ９８ 导入不含质粒的鼠伤寒无毒株ＲＩＡ,比较接合子ｐＲＳＴ９８／ＲＩＡ 与含一毒力质粒的鼠伤寒毒株ＳＲ－ １１ 及ＲＩＡ在体外对Ｈｅｐ－ ２ 、ＣＨＯ 和ＨｅＬａ 细胞的粘附、侵袭能力;经口感染小鼠观察３ 种菌在体内播散、繁殖及引起所在脏器的病理改变,并经腹腔感染测定对小鼠的半数致死量。结果　携带ｐＲＳＴ９８ 的菌株在血清中的抵抗力显著高于无此质粒菌株（ Ｐ＜ ０ ．０５）;ｐＲＳＴ９８ 在体外不影响宿主菌对上述３ 种细胞的粘附、侵袭力,但能使携带该质粒的ｐＲＳＴ９８／ＲＩＡ在小鼠肠系膜淋巴结、脾和肝脏的活菌数显著增加（ Ｐ＜ ０．０５） ,并引起相应的病理变化;腹腔注射小鼠ＬＤ５０ 比ＲＩＡ降低１０００ 倍（Ｐ＜ ０．０１） 。结论　伤寒菌耐药质粒ｐＲＳＴ９８ 具有多效性,不但能编码对药物的抗性,同时还能使宿主菌的毒力增强。     

产超广谱β-内酰胺酶细菌及耐药性的检测

目的：三种检测超广谱-β内酰胺酶（ESBLs）方法的比较及调查产ESBLs细菌的耐药现状。方法：对342株肠杆菌科细菌同时用纸片扩散初筛法，确证法和双纸片协同法进行检测。结果：初筛法、确证法、双纸片法检出ESBLs菌株阳性率分别为12.0％、6.7％、6.4％。产ESBLs菌对10种常用抗生素耐药明显高于非产酶菌株。结论：选择准确快速的检测方法，提高ESLBs菌株的阳性检出率具有十分重要的临床意义。     

肠球菌耐药现状调查及抗感染用药探讨

[目的 ]了解肠球菌 ,尤其是万古霉素的肠球菌的耐药状况 ,并指导临床合理用药 .[方法 ]对延边医院 1999～ 2 0 0 0年感染标本中分离出的 12 8株肠球菌 ,分别进行药物敏感试验和 β 内酰胺酶测试 ,并对试验数据进行分析处理 .[结果 ]万古霉素肠球菌占肠球菌感染标本总数的 1 1% ,而产 β 内酰胺酶的肠球菌占 5 6% ;屎肠球菌对常用抗生素的耐药率明显高于粪肠球菌 .[结论 ]肠球菌在临床常用的 8种抗生素中对万古霉素最敏感 ,对不同特征的肠球菌感染应采取不同的治疗方案 .     

254株肠球菌的分布及耐药性分析

目的 了解该院2001年1月～2004年12月临床分离的肠球菌的菌种分布和耐药情况。方法 采用梅里埃API细菌生化鉴定系统对肠球菌进行鉴定，用K-B法进行药敏测定。结果 254株肠球菌中以粪肠球菌和屎肠球菌分离率最高，分别占76．8％和14．6％，其他肠球菌占8．6％；肠球菌对万古霉素的耐药率为零，对青霉素、氨苄西林的耐药率，粪肠球菌为8．7％和7．7％，屎肠球菌均为89．2％；粪肠球菌和屎肠球菌的耐药率对高浓度庆大霉素分别为34．4％和56．8％，对呋喃妥因分别为9.7％和29．7％，对左氧氟沙星分别为26．7％和75．7％，对氯霉素分别为40．0％和29．7％，对红霉素分别为79．0％和91．9％。结论 引起医院感染的肠球菌主要是粪肠球菌和屎肠球菌，对青霉素类抗生素的耐药性屎肠球菌明显高于粪肠球菌，未检出耐万古霉素的肠球菌。