甘肃马先蒿毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷制备工艺研究

目的建立制备甘肃马先蒿中毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷单体的方法。方法以毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷质量分数为考察指标,通过静态吸附和动态解吸附实验,从01A1、D101、HPD100、AB-8、XAD-6、DM130、DM-301、DM-201、YWD06B及YWD06C中筛选出最佳树脂,确定制备甘肃马先蒿总苯乙醇苷的最佳纯化工艺。并以中压柱色谱技术分离制备毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷单体,根据波谱数据鉴定结构。结果最佳纯化工艺为上样溶液含生药20 mg/m L,上样体积流量为3 BV/h,先用3 BV的水除杂,再用5 BV 50%乙醇以2 BV/h的体积流量洗脱,洗脱液减压浓缩,冷冻干燥,得甘肃马先蒿总苯乙醇苷纯化物,该纯化物中毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的质量分数为42.29%和28.51%。经中压柱色谱精制后分离制备的毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷单体质量分数分别为98.33%和99.24%。结论该方法高效快速、经济简单、易于实现,可用于毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷单体的制备。     

傣百解药用部位和非药用部位体外抗肺癌活性对比研究

目的:研究傣百解药用部位根和非药用部位地上部分乙醇提取物不同极性萃取物体外抗肺癌细胞的活性,筛选出傣百解的抗肿瘤活性部位,分析地上部位作为替代药材的可行性。方法:将傣百解地上部位和根干燥粉碎,用95%乙醇回流提取,减压浓缩得到醇提取物;以水分散后,依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取,得到乙酸乙酯部位(A1和B1)、正丁醇部位(A2和B2)和水部位(A3和B3)。采用MTT法测定不同浓度部位对人肺癌细胞A549和H1299增殖的影响。结果:傣百解地上部位和根对两种肺癌细胞株均有一定的细胞毒活性,地上部位的抗肿瘤活性优于根,两个部位中A1和B1萃取物抑制肿瘤细胞增殖活性最强,对A549肿瘤细胞的IC50分别为51.28μg/mL和117.18μg/mL,对H1299肿瘤细胞的IC50分别为63.12μg/mL和95.11μg/mL。结论:傣百解地上部位的抗肿瘤活性优于根,具有替代可行性。     

车前子及车前草中毛蕊花糖苷与异毛蕊花糖苷的含量比较

目的:分析比较车前子及车前草中毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷含量差异,为车前质量控制与临床用药提供实验依据。方法:采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-0.1%甲酸水溶液(40∶60),同时测定车前子及车前草中毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷的含量,流速0.6 m L·min-1,柱温25℃,检测波长330nm。结果:车前子与车前草中毛蕊花糖苷质量分数分别为9.70,0.32 mg·g-1,异毛蕊花糖苷质量分数分别为1.28,1.51 mg·g-1。结论:车前子中毛蕊花糖苷含量高于车前草,异毛蕊花糖苷含量低于车前草,临床应合理用药,并建议车前增加异毛蕊花糖苷为质控指标。     

臭牡丹不同提取物的抗肿瘤活性筛选及其对裸鼠移植瘤中EMT相关蛋白的影响

目的:比较臭牡丹不同提取部位的抗肿瘤作用及其作用机制。方法:根据前期研究结果,采用乙酸乙酯、石油醚萃取、大孔树脂纯化方法,将臭牡丹苯乙醇苷类、黄酮类、萜类成分进行分离提取并纯化。建立CCK8、划痕试验、Transwell侵袭小室经典的抗肿瘤药理模型,检测臭牡丹三大活性部位对人肺腺癌A549体外增殖、迁移、侵袭的影响。并通过建立A549裸鼠移植瘤模型,检测各组裸鼠癌组织与癌旁组织中β-连环蛋白(β-catenin)、波形蛋白(Vimentin)、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、糖原合成酶激酶-3(GSK-3β)、磷酸化糖原合成酶激酶-3蛋白(p-GSK-3β)蛋白的表达水平。结果:苯乙醇苷部位以类叶升麻苷和异类叶升麻苷为对照,峰面积归一化法测得苯乙醇含量为88.93%;黄酮类部位以芦丁为对照,紫外分光度法测得黄酮含量均值为60%;萜类以齐墩果酸为对照品,紫外分光光度法测得石油醚部位萜类成分含量为50.99%。CCK8法测得臭牡丹苯乙醇苷、黄酮、萜类成分的IC_(50)平均值分别为0.125、0.46、1.43 mg/ml。划痕试验测得臭牡丹苯乙醇苷、黄酮、萜类成分的24 h愈合率分别为14.6%、16.9%、19.9%; 48 h愈合率分别为22.4%、20.4%、29.7%,均明显降低(P0.01)。与模型对照组相比,Transwell侵袭小室试验显示各药物干预组的穿膜细胞数均显著降低(P0.01),0.4 mg/ml黄酮组与0.15 mg/ml苯乙醇苷组尤为显著。体内实验中,模型对照组瘤组织中的β-catenin、Vimentin蛋白表达增强(P0.01),E-cadherin、GSK-3β、p-GSK-3β蛋白表达明显下调(P0.05或P0.01)。与模型对照组比较,臭牡丹0.2 g/kg组能下调瘤组织中的β-catenin、Vimentin蛋白表达(P0.05),上调GSK-3β、p-GSK-3β(P0.05)蛋白表达。结论:臭牡丹苯乙醇苷、黄酮、萜类成分均对人肺腺癌A549细胞的增殖、迁移与侵袭具有一定的抑制作用,其中苯乙醇苷部位、黄酮部位对A549细胞体外抑制作用均明显,且具量效关系。萜类部位显示出的抗肿瘤作用不突出,可能与其纯度有关。臭牡丹提取物的抗肿瘤作用可能是通过调节瘤组织中β-catenin、Vimentin、E-cadherin、GSK-3β、p-GSK-3β蛋白的表达从而阻断肿瘤局部的上皮间质转化(EMT)而起作用。     

波长切换法测定车前子生品及盐炙品中3个成分的含量

目的:建立车前子生品及盐炙品中京尼平苷酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷3个成分的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱Agilent-C_(18)(4.6 mm×150 mm,5μm),以甲醇(A)-0.5%醋酸水(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 m L·min~(-1)。结果:京尼平苷酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷浓度分别在0.007~350μg/m L;0.04~200μg/m L;0.09~450μg/m L范围内与峰面积呈现良好的线性关系。结论:该方法分离效率高,重复性好,可用于车前子药材的质量控制。     

地黄炮制过程中异毛蕊花糖苷含量的动态变化

目的:建立HPLC同时测定地黄中毛蕊花糖苷及异毛蕊花糖苷含量的方法,比较鲜地黄及其炮制品中异毛蕊花糖苷的含量变化情况。方法:采用Waters-Symmetry ShieldTMRP18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.1%乙酸(18∶82),流速1 m L·min-1,检测波长334 nm,柱温30℃,进样量20μL。结果:在鲜地黄中暂未检测到异毛蕊花糖苷,而鲜地黄通过一定温度及时间的加工炮制后可产生异毛蕊花糖苷。清蒸不同时间的地黄样品中,毛蕊花糖苷及异毛蕊花糖苷含量变化属于一个动态变化过程,且蒸制时间对地黄中异毛蕊花糖苷含量影响较大;鲜地黄在一定温度下烘制可产生异毛蕊花糖苷成分,但烘制不同时间段,其含量变化不明显。毛蕊花糖苷与异毛蕊花糖苷在一定条件下可以相互转化。结论:地黄中异毛蕊花糖苷的产生部分由毛蕊花糖苷转化而来,可考虑将异毛蕊花糖苷也列为熟地黄的质量控制指标性成分之一。     

续随子地上部分乙醇提取物的正己烷部分的抗肿瘤活性部位研究

目的：研究药用植物续随子地上部分乙醇提取物的正己烷部分的抗肿瘤活性部位。方法：化学分离与体外抗肿瘤活性筛选相结合,快速寻找到活性部位。化学分离的手段包括乙醇提取、不同极性溶剂萃取、硅胶柱色谱分离、MTT法测定不同流份的抗肿瘤活性。结果：续随子地上部分乙醇提取物的正己烷部分经过硅胶柱色谱粗分离得到的流份Fr．11-13、Fr.46—54、Fr．73—86、Fr．87—92具有较强的体外抗肿瘤活性,对肺癌细胞A549的IC50值分别是19．74±3．52、33．11±4．61、26．45±1．77、24．60±2．96μg／ml。结论：续随子地上部分乙醇提取物的正己烷部分具有进一步研究的价值,化学分离与体外抗肿瘤活性筛选相结合有助于抗肿瘤活性成分的分离。     

UHPLC-MS/MS同时测定大鼠血浆中裸花紫珠3个酚苷类成分及其药动学研究

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)同时测定大鼠血浆中毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷及连翘酯苷B的水平,并计算3个酚苷类成分在大鼠体内的药动学参数。方法大鼠ig给予裸花紫珠提取物(5 g/kg)后不同时间取血浆,血浆样品经盐酸处理,乙腈沉淀蛋白后,以乙腈-0.005%甲酸为流动相,通过Phenomenex#174;Kinetex C18柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm)梯度洗脱;采用电喷雾离子化源(ESI)三重四极杆串联质谱,以多反应监测模式(MRM)负离子测定血浆中毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、连翘酯苷B。结果毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、连翘酯苷B分别在7.77~3 880.00 ng/m L(r~2=0.995 5)、5.04~2 520.00 ng/m L(r~2=0.994 9)、1.78~890.00 ng/m L(r~2=0.995 1)呈良好的线性关系,各成分的提取回收率在75.2%~89.9%,日内、日间精密度RSD均小于8.8%。大鼠ig给予裸花紫珠提取物后,毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷及连翘酯苷B均在30 min左右达到最大血药浓度,AUC0~t分别为(93 881.65±18 326.65)、(29 204.97±8 499.88)、(15 027.05±3 763.82)ng·min/m L,Cmax分别为(2 179.00±355.60)、(737.57±210.31)、(227.30±48.38)ng/m L,t1/2z分别为(235.41±117.90)、(151.56±49.23)、(161.68±63.92)min。结论建立的UHPLC-MS/MS方法简便、快速、专属性强,可用于大鼠血浆中毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、连翘酯苷B的同时测定及其药动学研究。     

北美车前种子中三种活性成分的含量测定

目的测定北美车前种子中京尼平苷酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷的含量,为北美车前种子的开发利用提供实验依据。方法采用高效液相色谱法(HPLC),C_(18)(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,以甲醇为流动相A,0.5%的乙酸水溶液为流动相B,梯度洗脱,检测波长254(0～40 min), 322 nm(40～50 min),同时测定京尼平苷酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷三种成分的含量,柱温30℃,流速1mL·min~(-1)。结果京尼平苷酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷浓度分别在3.6～360,1.924～192.4,3.24～324μg·mL~(-1 )范围内与峰面积呈线性关系。此方法测得北美车前种子中京尼平苷酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的含量分别是14.594 6, 8.381 7,2.265 6 mg·g~(-1)。结论该方法分离效率高,重复性好,准确可靠,可应用于北美车前种子含量测定;北美车前种子中京尼平苷酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷三种成分的含量均较高,具有一定的药用价值。     

正交试验设计优选杜虹花止血有效成分毛蕊花糖苷的提取工艺研究

目的:筛选杜虹花毛蕊花糖苷成分的最佳提取工艺条件。方法:采用正交试验设计,以乙醇浓度、料液比、提取次数和提取时间为考察因素,以毛蕊花糖苷含量为评价指标,确定其最佳提取工艺。结果:最佳提取工艺为:加60%乙醇,液料比为1∶25,加热回流提取1次,每次1 h,毛蕊花糖苷含量≥7.05 mg/g。结论:该工艺操作简便,稳定可行,重复性好,可为杜虹花止血有效成分毛蕊花糖苷的提取和开发提供参考。