灵芝多糖对小鼠黑素瘤细胞的体外抑制作用

目的：探讨灵芝多糖在体外对小鼠黑素瘤B16F10细胞株的抑制作用。方法：以小鼠黑素瘤B16F10细胞株为研究对象,用MTT法检测灵芝多糖对肿瘤细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞毒作用。结果：经灵芝多糖作用后黑素瘤B16F10细胞增殖活性受抑,细胞死亡增多。结论：灵芝多糖可抑制B16F10细胞的增殖,促进细胞死亡。     

肺癌患者血清对植物血凝素活化的淋巴细胞表达穿孔素和颗粒酶B的抑制作用

目的探讨肺癌患者血清对植物血凝素(PHA)活化的淋巴细胞表达穿孔素和颗粒酶B的影响。方法收集肺癌患者外周静脉血,分离血清和淋巴细胞,用肺癌患者血清作用于PHA活化的淋巴细胞,采用免疫细胞化学染色及Western blot技术测定淋巴细胞穿孔素和颗粒酶B的表达,以健康血清为对照。结果免疫细胞化学染色显示,在肺癌患者血清的作用下,PHA活化的淋巴细胞穿孔素和颗粒酶B的表达明显低于对照组;Western blot技术也显示,在肺癌患者血清的作用下,PHA活化的淋巴细胞穿孔素和颗粒酶B的表达明显低于对照组,差异有统计学意义(分别为t=11.105,P=0.000;t=13.885,P=0.000)。结论肺癌患者血清对PHA活化的淋巴细胞表达穿孔素和颗粒酶B具有抑制作用。     

人白介素-10在NIH3T3细胞中的表达及生物学效应的初步观察

目的观察IL-10的免疫抑制作用.方法将构建好的pLXHIL-10载体,经包装细胞PA317包装后感染小鼠成纤维细胞株NIH3T3,用ELISA和原位杂交的方法检测hIL-10的表达,并对其生物学活性进行初步观察.结果检测到感染细胞中有hIL-10 mRNA的表达,感染细胞培养上清中存在hIL-10,证实感染细胞培养上清对混合淋巴细胞培养反应有明显的抑制作用.结论hIL-10可抑制混合淋巴细胞反应.     

大鼠支持细胞（Sertoli）对淋巴细胞作用初探

目的探索Sertoli细胞对淋巴细胞的作用,为人工构建免疫豁免等提供思路。方法酶解法分离培养幼龄大鼠睾丸的Sertoli细胞;用丝裂原ConA、LPS分别刺激T、B淋巴细胞活化;用MTT法测定Sertoli细胞上清作用过的淋巴细胞增值活力;用AnnexinV/PI法测定经Sertoli细胞培养上清作用后淋巴细胞的凋亡率。结果 Sertoli细胞培养上清明显抑制ConA（MTT测定OD值阳性/对照：0.22/0.11）和LPS（MTT测定OD值阳性/对照：0.19/0.09）对淋巴细胞的促增殖作用,也可诱导这两种淋巴细胞凋亡率上升（34.5Vs29.9与48.6Vs33.9）。结论 Sertoli细胞培养上清对丝裂原激活的T、B细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用。     

中药热毒清对淋巴细胞膜流动性和DNA合成的影响

本文观察了中药热毒清对小鼠脾脏淋巴细胞膜流动性及淋巴细胞DNA合成的影响,并与伴刀豆球蛋白(ConA)和植物血凝素(PHA)的作用进行比较。结果表明:热毒清使脾混合淋巴细胞或T淋巴细胞膜的流动性升高,并能拮抗ConA或PHA诱导的使膜流动性降低的效应。体外,热毒清抑制ConA转化小鼠淋巴细胞的能力,随浓度加大而增强。上述生物效应,在整体实验中并不明显。     

梅花鹿免疫细胞生长因子样活性研究

目的:测定梅花鹿脾细胞培养上清的生长因子样活性.方法:采用MTT掺入法检测细胞增殖;采用细胞机械创伤模型,检测此上清促进创伤愈合作用.结果:梅花鹿脾细胞培养上清对正常小鼠NIH3T3细胞具有促增殖作用,对创伤的NIH3T3细胞具有促进愈合作用,并且在无血清培养液中此上清对正常NIH3T3细胞也具有促增殖作用.结论:推测梅花鹿脾细胞培养上清具有生长因子样活性,并在细胞培养基中代替血清的作用.     

大鼠支持细胞(Sertoli)对淋巴细胞作用初探

目的 探索Sertoli细胞对淋巴细胞的作用,为人工构建免疫豁免等提供思路.方法 酶解法分离培养幼龄大鼠睾丸的Sertoli细胞;用丝裂原ConA、LPS分别刺激T、B淋巴细胞活化;用MTT法测定Sertoli细胞上清作用过的淋巴细胞增值活力;用AnnexinV/PI法测定经Sertoli细胞培养上清作用后淋巴细胞的凋亡率.结果 Sertoli细胞培养上清明显抑制ConA(MTT测定OD值阳性/对照:0.22/0.11)和LPS(MTT测定OD值阳性/对照:0.19/0.09)对淋巴细胞的促增殖作用,也可诱导这两种淋巴细胞凋亡率上升(34.5Vs29.9与48.6Vs33.9).结论 Sertoli细胞培养上清对丝裂原激活的T、B细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用.     

脾破裂移植患者细胞免疫功能的影响

目的:探讨严重创伤脾破裂自体脾移植术前后外周血T、B淋巴细IL-2含量与保脾患者细胞免疫功能的关系。方法:采集16例严重脾破裂自体脾移植术前后外周血，应用间接免疫荧光检测技术，测定了外周血T、B淋巴细胞数目及激活淋巴细胞表面IL-2R表达。采用IL-2细胞依赖株MTT比色法测定PHA刺激外周血单个核细胞培养上清IL-2水平。结果:发现创伤患者其测定水平均显著低于对照组。结论:根据本组病例初步研究证明，创伤患者外周T、B淋巴细胞数目、活化淋巴细胞IL-2R的表达及IL-2诱生水平低下，其变化可能对愈后有密切关系。     

黄芪糖蛋白对T淋巴细胞增殖活性的影响

目的：探讨黄芪糖蛋白（HQGP）对T淋巴细胞增殖与给药时间的关系、T淋巴细胞增殖与活化程度的关系,以及对双向混合淋巴反应的影响。方法：体外培养小鼠脾细胞,MTT法测定在不同时间给予一定浓度HQGP、给予相同浓度HQGP和不同浓度ConA刺激,双向混合淋巴反应对T细胞增殖的影响。结果：HQGP在不同时间对ConA刺激的T淋巴细胞增殖均有抑制作用,但培养12h给药的抑制作用最强;其抑制作用与T细胞的活化程度无相关性;能明显抑制双向混合淋巴反应,并呈剂量依赖性。结论：在体外实验中,HQGP对小鼠脾淋巴细胞增殖具有免疫抑制活性,且与活化程度无相关性。     

JM细胞培养上清对人B淋巴细胞和小鼠脾细胞增殖的免疫调节作用

JM是来自人胸腺不成熟T细胞的急性淋巴细胞白血病细胞系。作者用SAC刺激的人外周血纯化B淋巴细胞和小鼠脾细胞增殖为模型,观察了JM细胞培养上清(SPN_(JM))对人B淋巴细胞和小鼠脾细胞增殖的免疫调节作用。发现具有T细胞抑制活性的SPN_(JM)对人和小鼠B淋巴细胞的增殖具有促进作用。在无SAC诱     

十全大补汤抗小鼠黑色素瘤作用及与顺铂联合用药的研究

目的 探讨十全大补汤（SQDB）对小鼠黑色素瘤的抑制作用及机制,阐明其与顺铂（DDP）联合用药的作用效果及给药方式。方法 流式细胞术考察SQDB对小鼠黑色素瘤细胞B16F10细胞周期及凋亡的影响;分离小鼠脾细胞,MTS法考察SQDB对刀豆蛋白A（Con A）及脂多糖（LPS）促进小鼠脾细胞向T、B淋巴细胞转化的影响;构建小鼠黑色素瘤皮下移植瘤模型,通过 HE染色、免疫组化、TUNEL染色等方法考察SQDB的抑瘤作用;构建小鼠黑色素瘤转移瘤模型,探讨SQDB抗肿瘤转移作用及潜在机制。结果 10 mg/mL的SQDB能诱导B16F10黑色素瘤细胞凋亡;2.5、5、10 mg/mL SQDB减少了G₀/G₁期细胞数;10 mg/mL SQDB增加了S期细胞数;2.5 mg/mL SQDB增加了G₂/M期细胞数。5%和10%含药血清能够促进Con A所致B淋巴细胞增殖;5%、10%和15%含药血清对于LPS所致T淋巴细胞增殖亦有一定促进作用。同时,SQDB与DDP联用能够显著抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡;在小鼠黑色素瘤转移模型中,DDP与SQDB同时合用,或者先用DDP再用SQDB均能显著抑制黑色素瘤肺转移;两者同时给予能够显著提高小鼠胸腺指数,而先给SQDB再给DDP则显著逆转小鼠脾指数下降的现象,单用SQDB能够降低肿瘤组织局部IL-1β水平,促进IL-4分泌,从而抑制肿瘤转移。结论 SQDB能够抑制黑色素瘤B16F10增殖,促进其凋亡及小鼠脾淋巴细胞增殖;与DDP同时或贯序使用能够增强对小鼠移植瘤及转移瘤模型的抑制作用。      

Wistar大鼠树突状细胞的体外培养、扩增与鉴定

目的：探讨体外分离、培养和扩增大鼠骨髓来源树突状细胞（DC）的有效方法。方法：采用改良的Chen－WoanDC培养方法，梯度离心提取骨髓单核细胞中的非粘附细胞，加入GM CSF 5?ng/ml、IL 4 5?ng/ml进行诱导扩增，对培养的目的细胞进行形态学、OX62－FITC免疫荧光检查以及功能学鉴定。结果：DC前体细胞培养10?d呈典型树突状结构，表面标志物染色阳性，流式细胞学检查OX62单抗阳性率86％，不同培养时段的DC诱发混合淋巴细胞反应以培养10?d的DC最强，培养10?d的DC诱发混合淋巴细胞反应对同源淋巴细胞有更好的活性。结论：改良的Chen－Woan法为体外诱导扩增大鼠骨髓来源DC的有效方法。     

人CTLA4单克隆抗体的制备和鉴定

目的 :制备人的细胞毒性T淋巴细胞相关抗原 4 (CTLA4 )的单克隆抗体。　方法 :利用蛋白纯化技术获得人CTLA4Ig蛋白免疫Balb/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞NS1融合 ,用ELISA法筛选分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,并用Western印迹和流式细胞检测仪鉴定所制备的单克隆抗体。　结果 :获得一个稳定的分泌抗人CTLA4的杂交瘤细胞株。该细胞克隆培养上清中所含的单抗能和经过PHA刺激后的人T细胞结合 ,但不能和经过PHA刺激后的小鼠T细胞结合。　结论 :利用重组人CTLA4Ig制备获得高特异性的抗人CTLA4单克隆抗体。     

小鼠肝癌浸润性淋巴细胞的分离和培养

作者对小鼠肝癌肿瘤浸润性淋巴细胞(Tumor-infiltratjng lymphocyte,TIL)的分离和培养进行了初步研究。结果表明:运用酶消化加Ficoll或Percoll不连续密度离心法均能有效地获得TIL,两者相比,后者分得的TIL纯度更高(P<0.01)。TIL在含2000u/ml重组白细胞介素2(recombinant IL-2,rIL-2)RPMI 1640培养基中被激活,5～7 d后开始扩增,呈集落样生长,同时肿瘤细胞逐渐减少,至14d左右基本消失。培养40d时TIL扩增到原来的10~5倍,致分裂素PHA刺激的脾细胞上清液或LAK细胞上清液(称条件培养基)可促进TIL的扩增。     

白血病肿瘤免疫抑制因子活性和理化性质的探讨

4种人白血病细胞株,一种小鼠肉瘤细胞株的培养上清液和4种白血病患者血清均发现有免疫抑制活性。抑制PHA诱导的淋巴细胞增殖,抑制白细胞介素2的产生和反应性,以2BS人胚肺细胞作对照则无抑制作用.肿瘤细胞株培养上清液无细胞毒作用,其抑制作用无种属特异性和组织器官特异性.其中,来源于HL-60人早幼粒白血病细胞肿瘤免疫抑制因子的分子量为87kD,其化学本质为蛋白质,抗急性非淋巴细胞白血病药物对这种肿瘤免疫抑制因子的分泌有部分阻抑作用。     

钩吻素子对免疫磁珠分离纯化的小鼠CD4^＋T细胞体外增殖的影响

OBJECTIVE: To assess the separation efficiency of magnetic-activated cell sorting in the purification of CD4+ T cells from murine spleen, and observe the effects of koumine on the proliferation of the separated cells. METHODS: CD4+ T cells were isolated from murine spleen by magnetic-activated cell sorting (MiniMACS). Fluorescence-activated cell sortering was employed to determine the purity of CD4+ T cells before and after the separation procedure followed by evaluation of the cell viability using trypan blue staining. Concanavalin A- (ConA, 5 microg/ml) or phytahematoagglutinin (PHA,1 mg/ml)-induced murine T cells were treated with different concentrations of koumine (10-320 microg/ml), and their proliferation was determined by MTT colorimetry, and enzyme-linked immunosorbent assay was used to measure IL-2 level in the cell culture supernatant. RESULTS: The purity of CD4+ T cells reached (90.3+/-5.8)% after the purification with a cell viability of (94.9+/-3.6)%. Koumine (20-320 microg/ml) dose-dependently inhibited ConA- or PHA-induced proliferation of murine lymphocytes as compared with the controls (P<0.05). Koumine (20, 100, and 200 microg/ml) significantly decreased the level of IL-2 in comparison with the control group (P<0.05). CONCLUSIONS: CD4+ T cells of high purity can be obtained from murine spleen using MiniMACS without impairing the viability of the cells. Koumine significantly inhibits the proliferation of murine CD4+ T cells due to its immunosuppressive effect and inhibition of IL-2 secretion.     

蝉拟青霉多糖活性组分的筛选

目的:筛选出蝉拟青霉多糖中的活性组分.方法:体外培养小鼠黑色素瘤细胞B16,观察各多糖组分及其刺激脾细胞上清液对B16细胞的抑制作用.结果:经蝉拟青霉多糖组分PcPSA和PcPSB刺激的脾细胞上清液具有抑制B16细胞的作用.结论:经体外培养的B16细胞的抑制试验筛选出2个活性多糖组分PcPSA和PcPSB.     

STUDY ON IMMUNOPATHOGENESIS OF MINIMAL CHANGE NAPHROPATHY

Rat spleen lymphocytes (RSL) stimulated by mitogens in vitro were cultured on cryostat sections of rat kidney. After 36 hours glomerular polyanions (GPA) were stained with colloidal iron (CI). The results showed that the RSL stimulated with Con A were able to reduce GPA stainability as that treated with neuraminidase solution, and the effect was dose-dependent on Con A, whereas the supernatant of lymphocytes induced with Con A and the lymphocytes induced with PHA were not able to reduce GPA stainability. The result is in favor of the recent concept that the pathogenesis of MCN is associated with the loss of GPA which results from the dysfunction of the subpopulation of T lymphocytes.     

MHSP65-TCL抗黑色素瘤疫苗对免疫细胞活性的影响

目的研究B16黑色素瘤来源的MHSP65-TCL疫苗对黑色素瘤的治疗作用,以及该疫苗在疾病治疗过程中对免疫细胞活
性的影响。方法利用反复冻融的方法裂解B16黑色素瘤细胞制备肿瘤细胞裂解物（TCL）,将TCL同结核分支杆菌热休克蛋白
65（MHSP65）联用制备MHSP65-TCL。于不同时间点,给B16黑色素瘤荷瘤小鼠免疫MHSP65-TCL疫苗,观察该疫苗抑制黑
色素细细胞瘤的情况。与此同时,为了验证MHSP65-TCL中的TCL对免疫细胞活性的影响,我们将TCL于体外作用于小鼠脾
细胞,然后流式检测脾细胞CD69表达、脾细胞凋亡以及细胞培养上清液中IL-10和IFN-γ的表达情况。结果通过小鼠体内抑
瘤实验发现,B16黑色素瘤来源的MHSP65-TCL疫苗在小鼠体内产生了抑制黑色素细胞瘤的作用。通过体外细胞实验发现,
MHSP65-TCL中的TCL可以显著刺激体外培养的小鼠脾细胞的活化。除此之外,与这种细胞活化作用相反的,发现TCL还可
以诱导一部分体外培养的小鼠脾细胞发生凋亡,并促进脾细胞分泌IL-10,同时抑制IFN-γ的分泌。结论B16黑色素瘤来源的
MHSP65-TCL疫苗对黑色素瘤具有抑制作用。这种抑制作用主要是通过活化免疫细胞产生的。MHSP65-TCL的主要成分
TCL对免疫细胞还有抑制作用。这可能同TCL中存在的一些免疫细胞抑制物质有关。这些物质的明确以及去除将有助于提
高MHSP65-TCL疫苗的抗肿瘤效力。