哌拉西林抗铜绿假单胞菌的特性及临床应用

哌拉西林是青霉素类中活性最强的抗铜绿假单胞菌的药物，铜绿假单胞菌是外伤感染、二重感染以及老年人肺部感染的重要病原菌。铜绿假单胞菌也是医院感染的重要致病菌，尤其常见于重症监护病房（ICU）、烧伤病房及老年病房的医院感染患者。近年来，抗假单胞菌药物增强了抗菌活性，但其耐药率也在逐步增加，甚至局部爆发多重耐药铜绿假单胞菌感染流行，使临床治疗十分困难，带来严重后果。有学者提出铜绿假单胞菌对哌拉西林的敏感性可作为多重耐药的标志，所以哌拉西林的合理使用情况对今后铜绿假单胞菌感染的临床治疗效果影响重大，应强调严防哌拉西林的滥用。     

铜绿假单胞菌临床耐药性分析

由于激素和免疫抑制剂的长期应用,特别是广谱抗生素的大量使用和滥用,导致世界性细菌耐药性日趋严重[1].铜绿假单胞菌在医院感染中占有越来越大的比重.铜绿假单胞菌对多种类型的抗生素耐药,是临床治疗过程中抗生素的选择受到很大的限制.铜绿假单胞菌的耐药质粒不仅可以在同种细菌中传播,而且可以在异种细菌中引起耐药传播,使临床治疗更为复杂.我们对本院住院病人临床标本中分离的铜绿假单胞菌分布及耐药特点进行回顾性分析,结果如下.     

铜绿假单胞菌耐药性的临床调查

目的：了解2002年1月至2004年12月间中国医科大学附属第一医院铜绿假单胞菌耐药性的变化趋势，为临床治疗提供可靠依据。方法：采用生物梅里埃公司的API系统及VITEK2系统进行细菌鉴定，用K—B法及V1TEK2进行药敏试验，用WHONET5．3软件分析细菌的耐药性。结果：3年间铜绿假单胞菌对11种常用抗菌药物的耐药率存在普遍增高的趋势，对其中8种抗菌药物的耐药率变化显著（P〈0．05），且ICU病房的耐药率明显高于其他病区（P〈0．01）。结论：及时准确的细菌鉴定及药敏试验，能尽早发现铜绿假单胞菌的院内感染情况，为临床治疗提供重要的实验室依据。     

哌拉西林抗铜绿假单胞菌的特性及临床应用

哌拉西林是青霉素类中活性最强的抗铜绿假单胞菌的药物,铜绿假单胞菌是外伤感染、二重感染以及老年人肺部感染的重要病原菌。铜绿假单胞菌也是医院感染的重要致病     

铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶基因的检测

目的研究临床分离的铜绿假单胞菌(PA)携带的金属β-内酰胺酶(MBLs)的基因类型及其耐药情况。方法用VITEK-32全自动微生物分析仪测定43株临床分离的PA对抗菌药物的耐药情况,采用聚合酶链反应(PCR)法检测MBLs相关基因(IMP-1、VIM、SIM、SPM)。结果 43株PA中检测出MBLs基因阳性30株,阳性率达69.8%。其中VIM阳性14株,占32.6%;IMP-1阳性2株,占4.7%;SPM阳性4株,占9.3%;SIM阳性20株,占46.5%。结论 PA多携带MBLs基因,以VIM、SIM为主。     

铜绿假单胞菌临床分离株的耐药性分析

目的　对某院分离的铜绿假单胞菌的耐药性及变化趋势进行研究 ,为临床用药提供依据。方法　对 14 6株铜绿假单胞菌选用 12种常用抗生素进行药敏实验 ,实验采用K B法按NCCLS标准进行。结果　亚胺培南、妥布霉素、阿米卡星、哌拉西林 /三唑巴坦、头孢他啶对铜绿假单胞菌抗菌活性较强 ( >70 %) ,铜绿假单胞菌最敏感的抗生素为亚胺培南 ( 86 3 %)。抗菌作用较差的抗生素为头孢噻肟 ( 6 8%)、头孢曲松 ( 11 0 %)。结论　某院铜绿假单胞菌的临床分离株和耐药率逐年上升 ,应根据药敏结果合理选用抗生素     

EMA-PCR方法快速检测铜绿假单胞菌活菌研究

目的 探讨将叠氮溴乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)选择渗透性与PCR技术相结合（EMA-PCR）,建立有效快速检测铜绿假单胞菌活菌的方法。方法 以铜绿假单胞菌oprI基因为PCR检测靶基因,纯培养物提取模板进行PCR,检测PCR灵敏度、EMA使用浓度和曝光时间优化试验。结果 PCR检测灵敏度为3×103 CFU/mL;曝光处理时间为10 min;EMA浓度≤5 μg/mL对活菌DNA扩增没有明显抑制,终浓度为1 μg/mL EMA能有效抑制3×106 CFU/mL死菌扩增;1%活菌混合体系检测结果阳性。结论 EMA-PCR方法能有效快速检测铜绿假单胞菌活菌,能避免PCR检测可能造成的假阳性结果。     

铜绿假单胞菌的治疗策略

近年来铜绿假单胞菌感染明显增多,且治疗困难,已成为临床医师十分棘手的问题。本文以作者的经验为主,结合国内外近期文献进行综述,提出治疗的策略。     

铜绿假单胞菌的耐药性分析

目的:了解本院2010年1-12月铜绿假单胞菌的分离情况及耐药特点.方法:从2010年1-12月老年住院患者的痰液、分泌物等标本中分离出102株铜绿假单胞菌,统计其样本来源、科室分布、对不同抗菌药物的敏感性.结果:在检出的102株铜绿假单胞菌中58株来自呼吸内科,占56.86%;其次为神经外科,占13.73%,比较敏感的抗菌药物依次是多粘菌素(100%)、亚胺培南(82.36%)、哌拉西林/他唑巴坦(74.51%).结论:铜绿假单胞菌为非发酵菌中的假单胞菌属,很容易造成机会性感染,临床应合理选用抗菌药物,从而减少耐药菌株的产生,有效抑制铜绿假单胞菌耐药率过快增长,同时应不断检测抗菌药物的敏感性,为临床合理用药提供科学依据.     

PCR检测在真菌性角膜溃疡中的诊断价值

目的探讨聚合酶链反应(PCR)快速检测在真菌性角膜溃疡诊断中的价值。方法以源于医学条件致病性真菌18srRNA基因保守区的一对寡核苷酸序列为通用引物,对临床拟诊为真菌性角膜溃疡的36例标本进行PCR检测,并与培养方法进行对比。结果在400bp处出现DNA扩增带者为阳性。36份临床标本的真菌培养阳性率为58.3%,而经PCR扩增阳性率为86.1%,PCR扩增准确性为72.2%,敏感性为100.0%,特异性为33.3%。结论真菌通用引物进行PCR反应检测真菌性角膜溃疡速度快、阳性率高,有助于真菌性角膜溃疡的快速诊断。     

结肠镜及结肠造影检查前口服甘露醇清洁肠道的体会

结肠镜及结肠造影检查前口服甘露醇清洁肠道的体会晋城市郊区人民医院（０４８０００）正巧梅，李秀玲，常莲俊惠丰机械厂职工医院王敏１资料结肠镜检查及Ｘ线结肠造影是临床上诊断结肠疾患的主要方法，检查前必须彻底清洁肠道，才能保证检查的成功。过去我们在检查前常用...     

应用荧光聚合酶链反应对α地中海贫血进行植入前遗传学诊断

目的探讨应用跨越断裂点荧光聚合酶链反应（PCR）技术在α地中海贫血（简称α地贫）植入前遗传学诊断（PGD）中的应用。方法获取Ot地贫东南亚缺失型携带者单个淋巴细胞,建立了稳定的单细胞跨越断裂点荧光PCR检测技术,并对4对夫妇双方均为α地贫——SEA缺失型杂合子应用荧光PCR进行了α地贫的PGD。结果单个淋巴细胞平均扩增效率为90．0％（72／80）,平均等位基因脱扣（ADO）率为8．3％（6／72）。对4对夫妇进行4个周期PGO,共检测38个胚胎,获得38个卵裂球,其中34个卵裂球扩增成功,扩增效率为89．5％（34／38）,ADO率为5．9％（2／34）。经PCR分析,共获得11个正常胚胎,8个杂合子胚胎,15个重型地贫胚胎。移植了11个胚胎,获得2例临床妊娠。孕17周时经脐带血穿刺,分别证实为完全正常胚胎和杂合子胚胎,现已出生两名健康男婴。结论应用单细胞荧光PCR技术可对α地贫进行植入前遗传学诊断,达到优生的目的。     

多重巢式聚合酶链反应在β地中海贫血植入前遗传学诊断中的应用

目的探讨应用多重巢式聚合酶链反应(PCR)技术在β地中海贫血(简称β地贫)植入前遗传学诊断(PGD)中的应用。方法获取β地贫基因携带者单个淋巴细胞,建立了稳定的单细胞多重巢式PCR检测技术,可同时检测β珠蛋白基因及与β珠蛋白基因紧密连锁的HumTH01基因,并对4例已出生的重型β地贫患儿及双方均为β地贫基因携带者的夫妇应用多重巢式PCR进行了β地贫的PGD。结果利用单细胞多重巢式PCR,可以同时检测中国人常见的16种β地贫突变类型,单个淋巴细胞平均扩增效率为91．3％,平均等位基因脱扣(ADO)率为17．0％。对4对夫妇进行4个周期PGD,共活检33个胚胎,获得33个卵裂球,其中30个卵裂球扩增成功,扩增效率为90．9％,ADO率为13．3％。26个胚胎经PCR分析后获得明确诊断,移植了8个胚胎,获得1例临床妊娠。孕17周时经脐带血穿刺,证实为完全正常胚胎,现已出生1名正常女婴。结论应用单细胞多重巢式PCR技术可对β地贫进行植入前遗传学诊断,达到优生目的。     

人类白细胞抗原-Ⅰ类抗原的DNA分型与临床应用

目的采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲＳＳＰ）建立汉族人群白细胞抗原Ⅰ（ＨＬＡⅠ）类抗原Ａ、Ｂ位点ＤＮＡ分型方法。方法设计合成８１个特异性引物和１对阳性对照引物，组成２０个ＰＣＲ反应用于Ａ位点分型、４１个ＰＣＲ反应用于Ｂ位点分型，建立一步法ＰＣＲＳＳＰ方法，应用于６２份标准ＤＮＡ和３４５例肾移植供受者的ＨＬＡⅠ类ＤＮＡ分型。结果所有样本ＰＣＲＳＳＰ基因分型均获得成功，无假阳性和假阴性出现，４０份样本的重复率１００％，总耗时５小时。分型结果经双盲验证完全符合。可准确分辨出Ａ位点等位基因１９个、Ｂ位点等位基因４１个；实际检出汉族人群Ａ抗原特异性１３个、Ｂ抗原特异性３２个。结论ＰＣＲＳＳＰ技术行ＨＬＡⅠ类Ａ、Ｂ位点ＤＮＡ分型，分辨率高、特异性强、重复性好、相对简捷快速，分型结果较血清学方法更加精确可靠，适合于临床应用     

PCR技术在幽门螺杆菌相关胃溃疡临床治疗中的应用

目的:探讨PCR技术在幽门螺杆菌相关胃溃疡临床治疗中的应用。方法:采用PCR技术对64例幽门螺杆菌相关胃溃疡患者进行检测,对比治疗前后不同部位的PCR阳性率和治疗后不同胃溃疡愈合及疼痛水平。结果:治疗后患者不同部位的PCR阳性率均降低,溃疡愈合及疼痛水平均改善,且不同部位之间的阳性率有显著性差异(P<0.05);治疗8周时,细菌培养阴性患者中仍可检测到胃活检和胃液PCR阳性,但后者阴性患者中仍可检测到细菌培养阳性。结论:PCR检测阳性率可反应患者治疗情况及恢复情况,但不同部位的检出率不同,与细菌培养相比,胃活检具有较高的阳性率和准确率。     

聚合酶链反应联合直接基因测序快速诊断感染性眼内炎的研究

目的 探讨利用聚合酶链反应(PCR)联合直接基因测序技术检测感染性眼内炎的可行性及有效性,为感染性眼内炎患者的快速诊断寻求一种新的检测方式.方法 对我院2005年10月至2006年10月手术治疗的感染性眼内炎患者47例47眼.手术取材进行PCR联合直接基因测序检查并与细菌涂片、细菌培养、真菌培养、厌氧菌培养检查结果对比.结果 PCR联合基因诊断方法检查时间较传统方法耗时少.PCR病原菌检测阳性率高,为25例,25例阳性者中经直接基因测序出病原体类型19例.与病原体培养相比,敏感性为91.67%,特异性为77.14%,Kappa值为0.577.结论 对于感染性眼内炎,PCR联合直接基因测序技术是一种快速、有效的临床检查技术.     

PCR法直接筛选重组阳性克隆

目的　建立一个简便、可靠的重组阳性克隆的筛选方法。方法　应用扩增小鼠生精细胞凋亡相关基因时使用的引物 ,以基因重组扩增后得到的菌落为模板 ,直接进行PCR扩增。结果　在筛选的阳性菌落中可扩增到与小鼠凋亡相关基因片段大小一致的阳性条带 ;以阳性克隆提取质粒进一步进行PCR和酶切鉴定及序列分析 ,证明结果正确。结论　菌落PCR是一种简便、快速、可靠、有效的筛选重组阳性克隆的方法。     

共焦显微镜在角膜溃疡病原学诊断中的临床应用

目的评价共焦显微镜（confocal microscopy）在角膜溃疡病原学诊断中的临床应用。方法利用共焦显微镜对临床拟诊为角膜溃疡的36例患者进行检查，并对结果进行分析比较。结果36例中16例（16眼）观察到角膜基质内有菌丝，显示菌丝图像为相对暗的背景中呈明亮、线状形态。有2例（2眼）观察到了阿巴包囊，表现为位于浅基质层中白色闪光的圆形小体。结论作为一种无创伤性的快速诊断工具，共焦显微镜在角膜溃疡病原学诊断的临床应用中有着重要的作用和显著的优点，并在对该病的病理特点的研究中也有着巨大的潜力。     

真菌通用引物PCR反应鉴别兔眼真菌性和细菌性角膜溃疡

目的 利用真菌通用引物PCR反应，鉴别兔眼真菌性和细菌性角膜溃疡。方法 根据临床上常见的致病细菌菌株(金葡菌、绿脓菌)，真菌菌株(烟曲霉菌、白念菌、镰刀菌)，制作兔眼角膜溃疡的动物模型，选取一对真菌通用引物，一对寡核苷酸引物B2F(5'ACTITCGTAGGATAG-3')和B4R(5'-TGATCGtcttccataaata-3')，对标本进行聚合酶链反应。结果 在687bp处出现DNA扩增带者为阳性。造模后第3d真菌组出现扩增带阳性的90％，第5d真菌组出现扩增带阳性的96．6％。细菌组始终未出现阳性结果。结论 真菌通用引物PCR反应检测鉴别真菌性与细菌性角膜溃疡有较好的敏感性和特异性。