p16基因突变及蛋白表达异常与人胰腺癌关系的研究

目的：研究ｐ１６基因的突变及蛋白表达异常在人胰腺癌发生及侵润转移中的作用。方法：应用ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＳＳＣＰ、ＤＮＡ测序及免疫组织化学技术,对３５例人胰腺癌的ｐ１６基因第２外显子进行了检测,研究ｐ１６基因的突变及蛋白表达情况。结果：１２例在ｐ１６基因第２外显子部分存在至少５２２ｂｐ的纯合缺失。７例存在２个点突变（突变位点均相同）：其一为第１２６密码子碱基ＧＴＣ→ＡＡＴ的错义突变,氨基酸由缬氨酸（Ｖａｌ）变成了天冬酰胺（Ａｓｎ）;另一为第１２７密码子ＧＣＡ→ＧＣＧ的同义突变。缺失及突变共占５４．３％（１９／３５）。Ｐ１６蛋白三维结构模拟提示,Ｖａｌ１２６Ａｓｎ对蛋白空间结构有一定影响,从而影响Ｐ１６蛋白的功能。１２例缺失标本呈现Ｐ１６蛋白表达阴性,９例标本（其中７例点突变）出现Ｐ１６蛋白表达下降,共占６０％（２１     

人肺癌组织中p53,Rb基因突变研究

为探讨肺癌发生的分子遗传学机理，采用聚合酶链反应及聚合酶链反应－单链构象多态性技术，对４１例人肺癌组织中ｐ５３基因外显子５～８及Ｒｂ基因外显子１４～１６、２２～２３进行了突变分析。结果显示：ｐ５３基因突变１６例（１６／４１，３９％），分布于外显子５～７；Ｒｂ基因异常４例（４／４１，９．８％），其中外显子１４～１６区域部分缺失和外显子２２～２３区域突变各２例；在９例小细胞肺癌标本中，７例发生ｐ５３及Ｒ５基因的突变，其中１例存在ｐ５３基因两个外显子突变，另１例同时存在ｐ５３及Ｒｂ基因的突变。对部分ｐ５３基因突变标本序列分析，均在１个或３个密码子上存在导致ｐ５３蛋白异常的单碱基置换或插入突变。以上结果表明：肺癌、特别是小细胞肺癌的发生可能与ｐ５３及Ｒｂ基因的突变有关。     

p53基因突变、int-2基因扩增与食管癌的关系

ｐ５３基因突变、ｉｎｔ－２基因扩增与食管癌的关系邵根泽任运生张少英温博贵食管癌的发生是一个涉及多基因改变的多步骤过程，ｃ－ｍｙｃ、ＥＧＲＦ、ｉｎｔ－２、ｈｓｔ－１、ＣｙｃｌｉｎＤ等癌基因以及ｐ５３、Ｒｂ、ＡＰＣ、ＭＣＣ、ｐ１６等抑癌基因的异常是食管癌...     

肺癌组织p16和Rb基因mRNA表达的双重原位杂交观察

目的：研究Ｐ１６和Ｒｂ基因在ｍＲＮＡ表达及其与肺癌的关系。方法：制备ｐ１６和Ｒｂ基因ｃＤＮＡ探针,采用双重原位杂交的方法,地８９例肺癌和正常肺组织进行了Ｐ１６ 一Ｒｂ基因ｍＲＮＡ表达的定位研究。结果：小细胞肺癌ｐ１６ｍＲＮＡ阳性表达率高达８２．４％,而非小细胞肺癌阳性率为４５．８％,两者差异有显著性。非小细胞肺癌ＲｂｍＲＮＡ阳性表达率为８１．９％,而小细胞肺癌一率仅５．９％,两者差异有高度显著性,     

肝癌组织中N—ras基因突变和p53蛋白表达

目的：研究Ｎ－ｒａｓ和ｐ５３基因与肝癌发生，发展的关系。方法：应用多聚酶链反应－单链构象多态性分析法（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）和免疫组化法，检测２９例肝癌中的Ｎ－ｒａｓ基因突变和ｐ５３蛋白的表达。结果，１３例肝癌ｐ５３蛋白阳性（４４．８％），表明广西地区肝癌中曾普遍存在ｐ５３基因的突变，肝癌及癌旁组织中Ｎ－ｒａｓ基因在第２～３７密码子间的突变率分别为７９．３１％和８０．７７％，２２例有２个以上突变位点（     

p53、c-erbB-2、PCNA和EGFR在膀胱癌中过表达及其意义

目的：研究癌基因和抑癌基因蛋白产物在膀胱移行细胞癌中异常表达与病理分级、临床分期、复发和预后的关系。方法：应用免疫组化Ｓ－Ｐ法检查１１７例膀胱移行细胞癌组织中ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ和ＥＧＦＲ的表达水平。结果：１１７例膀胱移行细胞癌中ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ和ＥＧＦＲ阳性表达率分别为４７．０％、２９．９％、５３．８％和４８．７％。ｐ５３和ＰＣＮＡ阳性表达产物定位于肿瘤细胞核内，ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性表达产物定位于细胞膜上，ＥＧＦＲ阳性表达产物定位于细胞膜或细胞浆内。结果表明ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ和ＥＧＦＲ异常表达与膀胱癌的分级、分期、复发及术后生存率等之间有统计学意义。结论：ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ和ＥＧＦＲ异常表达有助于评估膀胱癌预后，多基因异常表达作为预后评价指标更有意义。     

膀胱移行细胞癌中p16基因的改变

目的 明确ｐ１６基因在膀胱移行细胞癌中的改变。方法 采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）及ＤＮＡ甲蜞化分析技术分别检测５２例膀胱移行细胞癌中ｐ１６基因的缺失、突变及５′ＣｐＧ岛甲基化。结果 ５２例膀胱移行细胞癌中１１例（２１．５％）存在ｐ１６基因的缺失;仅１例肿瘤于ｐ１６基因外显子２出现点突变;１９例（３６．５％）肿瘤发现ｐ１６基因５′ＣｐＧ岛甲基化。结     

转化生长因子β1对G1期的负性调节

ＴＧＦ是具有生物活性的多肽，它通过下调Ｇ１期细胞周期蛋白Ａ，Ｄ，Ｅ的表达、改变细胞周期蛋白依赖性激酶ＣＤＫ２，ＣＤＫ４和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子ｐ１６，ｐ１５，ｐ２１，ｐ２７的活性，使细胞停滞在Ｇ１期，ＴＧＦ－β１还可通过抑癌基因产物Ｒｂ非磷酸化状态的聚积和下调Ｇ１早期“演进因子”ｃ－ｍｙｃ的表达阻止Ｇ１期细胞向Ｓ期进展     

p16和Rb基因蛋白在肺癌中的表达

目的：研究ｐ１６和Ｒｂ基因蛋白的表达与肺癌临床病理学特征的关系。方法：采用免疫组织化学方法对８９例肺癌进行了ｐ１６和Ｒｂ蛋白的定位观察。结果：肺癌；ｐ１６基因蛋白的总丢失率为４７．２％，且与肺癌的组织学类型，淋巴结转移，临床病理分期有关。Ｒｂ基因蛋白的总丢失率为３１．５％，与组织学类型有关。     

乳癌组织端粒酶活性表达及其与p16基因的关系

目的：探讨乳房恶性肿瘤组织中端粒酶活性的表达情况及ｐ１６抑癌基因的影响。方法：应用端粒重复放大程序－酶标法（ＴＲＡＰ－ＥＬＩＳＡ）及ＴＲＡＰ－银染法检测３５例有乳癌组织及２４例良性肿瘤组织中的端粒酶活性,并采用多重ＰＣＲ技术对乳癌组织的ｐ１６基因的缺失空谈进行了分析,结果：３５例乳癌标本中有２８例端粒酶活性表达为阳性（８０％）,而２４例乳房良性肿瘤标本中仅１例端粒酶活性表达阳性（４．１％）。此外３５例乳癌标本中的１５例存在有ｐ１６基因的外显子２及外显子１的缺失（４２．８％）,而该１５例中有１４例被检测为端粒酶活性阳性（９３．３％）,但２０例未缺失标本的端粒酶阳怀率仅为７０％（１４／２０）。结论：端粒酶活性与乳房肿瘤组织的恶性程度密切相关,提示端粒酶参与了肿瘤的形成过程,而端粒酶活性的增高与ｐ１６抑癌基因的缺失突     

cyclinD1,Rb基因蛋白在乳腺癌中的表达

目的：探讨ｃｙｃｌｉｎＤ１基因及Ｒｂ基因的表达与乳腺癌发生发展的关系。方法：应用ＡＢＣ免疫组化法检测２４例良性乳腺组织及５８例乳腺癌中ｃｙｃｌｉｎＤ１及Ｒｂ蛋白表达。结果：乳腺癌中ｃｙｃｌｉｎＤ１过表达阳性率５８．６２％（３４／５８）显著高于良性乳腺组织中的１６．６７％（４／２４），Ｐ＜０．０５。ｃｙｃｌｉｎＤ１过表达出现于导管原位癌并持续于浸润、转移等进展过程中，与年龄、肿瘤大小、组织学类型及淋巴结状态无相关性，但与组织学分级负相关。乳腺癌中Ｒｂ蛋白表达阳性率为３６．２％（２１／５８），显著低于良性乳腺组织的７５％（１８／２４），Ｐ＜０．０５；未见Ｒｂ失表达与临床病理参数间存在相关性，Ｒｂ表达与ｃｙｃｌｉｎＤ１过表达呈正相关。结论：ｃｙｃｌｉｎＤ１过表达及Ｒｂ失表达是乳腺癌发生中的重要事件且前者是一早期分子事件；ｃｙｃｌｉｎＤ１过表达发挥作用可能部分依赖于Ｒｂ蛋白的存在；提示细胞周期调控异常参与乳腺癌的发生。     

细胞周期调控基因在鼻咽癌发生中的表达

目的　研究 p16、Rb蛋白在各型鼻咽粘膜中的表达及意义。 方法　选择鼻咽粘膜慢性炎、癌前病变及鼻咽癌组织各 30例 ,采用免疫组化LSAB法检测p16、Rb蛋白在上述组织中的阳性表达率。结果　在鼻咽粘膜慢性炎、癌前病变及鼻咽癌组织中 p16蛋白的阳性表达率分别为 10 0 % (0 / 30 )、6 0 % (18/ 30 )及 2 6 .7% (8/ 30 ) ;Rb蛋白的阳性表达率为 76 .7%(2 3/ 30 )、5 6 .7% (17/ 30 )及 33 .3 % (10 / 30 )。经统计学分析 :p16、Rb蛋白在鼻咽粘膜慢性炎症中的阳性表达率高于癌前病变组织 ,差异有显著性 (P <0 .0 1和P <0 .0 5 ) ;p16蛋白在鼻咽癌组织中的表达较癌前病变组织显著下调 (P <0 .0 1) ,而Rb蛋白在两者间的差异无显著性 (P >0 .0 5 )。p16、Rb蛋白的阳性表达率在炎症及癌前病变组织中呈负相关性 (P <0 .0 1) ,而在鼻咽癌组织中二者则无相关性。结论　p16基因的畸变在鼻咽癌的发生中具有直接的促成作用 ;而Rb基因的变异则是鼻咽粘膜癌变的早期事件 ,对鼻咽癌的发生起着间接的促进作用     

化学诱发大鼠肝癌变过程中癌基因原位表达的动态观察

目的：探讨化学诱发大鼠肝癌变的启动、促进、发展和癌形成各个阶段癌基因表达的改变与病理改变的关系。方法：采用的为ＳｏｌｔＦａｒｂｅｒ模型和原位分子杂交方法。结果：ｃｍｙｃ和Ｎｒａｓ基因在促癌阶段呈高表达；在诱癌中期以后，随增生结节的发展和癌的形成表达呈增加的趋势。结论：ｃｍｙｃ和Ｎｒａｓ基因在肝癌的发生中，具有协同和持续作用。从分子病理学角度，进一步证实肝细胞增生结节与肝细胞的癌变关系密切     

中药何首乌饮抗大鼠卵巢组织衰老的机理

目的探讨何首乌饮抗大鼠卵巢组织衰老的机理。方法36只SD大鼠随机分为3组:正常组、模型组、预防组。采用D-半乳糖连续腹腔注射法制造雌性大鼠亚急性衰老模型,预防组在造模的同时以中药方剂何首乌饮灌胃。应用逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)方法检测各组大鼠卵巢组织p53、p19ARF、Rb及p16基因的表达,用Western blotting方法检测各组大鼠卵巢组织Rb及p16蛋白的表达情况。结果何首乌饮明显抑制了衰老大鼠卵巢组织中p53、p19ARF、Rb以及p16基因表达的上调趋势(P<0.05),且明显降低了衰老大鼠卵巢组织中Rb及p16蛋白的表达(P<0.05)。结论何首乌饮抑制衰老途径中关键的调节因子p53、p19ARF、Rb及p16的表达,从而起到抗大鼠性腺衰老的作用。     

p16INK4A和 p15INK4B对人肝癌细胞增殖和凋亡影响的研究

目的　为探讨抑癌基因 p16 INK4 A和 p15 INK4 B对 Rb基因状态不同的人肝癌细胞系增殖和凋亡的影响。方法　在分析细胞系遗传背景鉴定基础上采用脂质体将构建的 p XJ- p16、p XJ- p15重组质粒转染人肝癌细胞系 BEL74 0 2 (p16 / p15 Rb )和 SMMC772 1(p16 / p15 / Rb- )。应用 PCR、RNA斑点印迹、MTT、集落形成、流式细胞仪等技术检测外源性 p16和 p15基因、m RNA表达及其对肝癌细胞增殖、凋亡的影响。结果　经转染的 BEL74 0 2 - p16 ,BEL74 0 2 - p15细胞 ,分别存在外源性 p16、p15基因 ,在含外源基因细胞中相应的 m RNA表达增强 ;BEL74 0 2 - p15细胞生长速度、集落形成率显著低于对照细胞 BEL 74 0 2 (P<0 .0 1) ;细胞周期分析观察到与亲本细胞比较 ,BEL 74 0 2 - p15的 G1期细胞由 37.7%增高到 4 3.6 % ,S期细胞由 2 2 %下降到 13% (P<0 .0 5 ) ,并出现 G1亚峰 (凋亡峰 )。与此相反 ,BEL74 0 2 - p16细胞增殖未见抑制 ,细胞周期分布无明显差异 ,集落形成率也未见减少。此外 ,SMMC772 1- p16细胞增殖也无抑制。结论　外源性 p15 INK4 B具有抑制人肝癌细胞生长 ,诱导细胞凋亡的作用 ,其作用不受内源性p15影响。而 p16 INK4 A对肝癌细胞生长抑制的作用可能依赖于 RB途径的完整性。     

Involvement of multiple cell cycle aberrations in early preneoplastic liver cell lesions by tumor promotion with thioacetamide in a two-stage rat hepatocarcinogenesis model

Thioacetamide (TAA) induces oxidative stress and hepatocarcinogenicity in rats. We previously reported that TAA promotion caused various disruptions in cell cycle protein expression in rats, including downregulation of p16^Ink4a, which is associated with intraexonic hypermethylation in hepatocellular proliferative lesions. This study further investigated the contribution of cell cycle aberrations associated with early hepatocarcinogenic processes induced by TAA using antioxidants, enzymatically modified isoquercitrin (EMIQ) and α-lipoic acid (ALA), in a two-stage rat hepatocarcinogenesis model. TAA-promotion after initiation with N-diethylnitrosamine increased the number and area of hepatocellular foci immunoreactive for glutathione S-transferase placental form (GST-P) and the numbers of proliferating and apoptotic cells. Co-treatment with EMIQ and ALA suppressed these increases. TAA-induced formation of p16^Ink4a? foci in concordance with GST-P⁺ foci was not suppressed by co-treatment with EMIQ or ALA. TAA-promotion increased cellular distributions of cell proliferation marker Ki-67, G₂/M and spindle checkpoint proteins (phosphorylated checkpoint kinase 1 and Mad2), the DNA damage-related protein phosphorylated histone H2AX, and G₂-M phase-related proteins (topoisomerase IIα, phosphorylated histone H3 and Cdc2) within GST-P⁺ foci, and co-treatment with EMIQ or ALA suppressed these increases. These results suggest that downregulation of p16^Ink4a may allow selective proliferation of preneoplastic cells by TAA promotion. However, antioxidants did not counteract this gene control. Moreover, effective suppression of TAA-induced cellular population changes within preneoplastic lesions by antioxidants may reflect facilitation of cell cycling and accumulation of DNA damage causing the activation of cell cycle checkpoints, leading to G₂ and M phase arrest at the early stages of hepatocarcinogenesis promoted by TAA.     

子宫颈腺癌中HPV16/18感染对p16Ink4a、Rb蛋白表达的影响

目的研究16、18型人乳头瘤病毒(HPV16/18)DNA与细胞周期相关蛋白p16Ink4a、Rb在子宫颈腺癌中的表达情况及HPV16/18感染对p16Ink4a、Rb蛋白表达的影响。方法采用组织微阵列技术结合原位杂交和免疫组化EliVision二步法标记检测HPV16/18DNA和p16Ink4a、Rb蛋白在86例子宫颈腺癌、15例子宫颈腺上皮异型增生及24例慢性子宫颈炎组织中的表达。结果子宫颈腺癌组和子宫颈腺上皮异型增生组HPV16/18DNA阳性表达率分别为65·1%和46·7%,均明显高于慢性子宫颈炎组8·3%(P<0·01);p16Ink4a蛋白在子宫颈腺癌组的阳性表达率为74·4%,显著高于慢性子宫颈炎组33·4%(P<0·01)。Rb蛋白在子宫颈腺癌组的阳性表达率为33·7%,低于慢性子宫颈炎组45·8%,但差异无显著性(P>0·05)。HPV16/18感染与子宫颈腺癌的病理分级和组织学类型无关,但与p16Ink4a蛋白表达呈正相关(P<0·05)。p16Ink4a与Rb蛋白表达与子宫颈腺癌的病理分级有关,G2、G3组p16Ink4a阳性表达率明显高于G1组(P<0·05),G3组Rb阳性表达率明显低于G1组(P<0·05)。p16Ink4a表达与子宫颈腺癌组织学类型有明显相关性,子宫内膜样腺癌p16Ink4a阳性表达率明显高于透明细胞腺癌(P<0·05)。结论子宫颈腺癌的发生与HPV16/18感染有关,HPV16/18感染可能影响p16Ink4a、Rb蛋白表达,使子宫颈腺上皮发生癌变并促进恶性发展。     

Expression and localization of the transforming growth factor-beta type I receptor and Smads in preneoplastic lesions during chemical hepatocarcinogenesis in rats

Little is known about the involvement of Smad-related molecules in the regulation of the Transforming Growth Factor (TGF)-beta signaling pathway during hepatocarcinogenesis, particularly with respect to preneoplastic lesions of a rat liver. The aims of this study were to investigate the localizations and temporal expressions of TGF-beta Receptor Type 1 (TGR1) and Smads during the promotion stage of chemical hepatocarcinogenesis in rats. We investigated expressions and localizations of TGR1, Smad2, Smad4, and Smad7 by using semi-quantitative RT-PCR and immunohistochemistry in preneoplastic lesions during rat chemical hepatocarcinogenesis induced by Solt and Farber's method. The down-regulation of TGR1, Smad2, and Smad4 was evident during the later steps of the promotion stage of chemical hepatocarcinogenesis. In contrast with other Smads, increased Smad7 expression was evident during the later steps of the promotion stage. Also immunohistochemistry revealed that the main site of TGR1, Smad2, Smad4, and Smad7 expression was mainly in hepatocytes of the preneoplastic lesions of a rat liver. Dysregulation of the downstream effectors of TGF-beta such as TGR1, Smad2, Smad4 and, Smad7 might contribute to the progression of preneoplastic lesions during chemical hepatocarcinogenesis in a rat.