冬凌草甲素通过线粒体途径诱导入黑色素瘤A375—S2细胞凋亡

目的 研究冬凌草甲素诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的作用机制。方法 MTT法检测冬凌草甲素对A375-S2细胞生长的影响及各种Caspase抑制剂、佛波酯(PMA)、PKC抑制剂H-7对冬凌草甲素作用的影响；DNA凝胶电泳法检测细胞凋亡；LDH法测定乳酸脱氢酶(LDH)活力。结果 冬凌草甲素对A375-S2细胞生长有显著抑制作用，并能显著诱导A375—S2细胞发生凋亡，其作用呈明显的量效关系和时间依赖性。形态学观察可见凋亡小体的形成，琼脂糖凝胶电泳可见凋亡典型的DNA梯带；Caspase家族抑制剂，Caspase-9抑制剂能显著抑制冬凌草甲素诱导A375-S2细胞的凋亡。大剂量PMA(400ng／mL)显著抑制34．3μmol／L冬凌草甲素诱导A375-S2细胞凋亡，而小剂量PMA(10ng／mL)与冬凌草甲素有协同杀死细胞的作用，且PKC抑制剂H-7也可下调这种凋亡作用。Caspase-3的抑制剂可抑制Caspase-3的活力升高。结论 适宜浓度的冬凌草甲素(34．3μmol／L)诱导A375-S2细胞凋亡，这种作用是通过线粒体调节Caspase的激活来实现的。     

紫草素通过线粒体途径诱导A375-S2细胞凋亡

目的 :研究紫草素诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的机制。方法 :MTT法测定紫草素对A375-S2细胞的生长抑制实验 ,形态学观察分析细胞凋亡的形态学变化 ,DNA电泳研究细胞死亡的机制 ,免疫印迹实验检测相关蛋白的表达。结果 :紫草素可明显地抑制A375-S2细胞的生长 ,在 25～40 μmol·L^-1之间呈明显的量效关系和时效关系。 10μmol·L^-1紫草素可诱导A375-S2细胞凋亡 ,琼脂糖凝胶电泳可见典型的DNA“梯状”条道。caspase-3和caspase-9的抑制剂阻止紫草素诱导的凋亡 ,紫草素可诱导A375-S2细胞caspase-9的活力增加 ,免疫印迹结果显示的上调的Bax和下调的Bcl-X_L 表达证实了紫草素诱导的A375-S2细胞的凋亡是通过线粒体途径发挥作用的。结论 :10μmol·L^-1紫草素可明显地诱导A375-S2细胞凋亡 ,并经历了caspase-9激活的线粒体信号转导途径。     

土槿皮乙酸体外诱导A375-S2细胞凋亡

目的 :研究土槿皮乙酸 (pseudolaricacidB)诱导A375 S2细胞凋亡的作用 ,探讨其抗癌作用机制。方法 :采用噻唑蓝 (MTT)法、形态学观察、DNA凝胶电泳及Westernblot检测法。结果 :土槿皮乙酸可剂量 时间依赖性的诱导A375 S2细胞凋亡 ,5 μmol·L^-1土槿皮乙酸处理 36h的细胞 ,Hoechst 332 5 8荧光染色后有明显的凋亡小体出现 ;凝胶电泳法显示有明显的DNAladder出现。细胞内抑制凋亡蛋白Bcl 2 ,Bcl xL和caspase激活的DNA酶抑制物(ICAD)表达量时间依赖性地减少 ,而促凋亡蛋白Bax表达量增加。结论 :土槿皮乙酸对A375 S2细胞的杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡 ,降低Bcl 2 ,Bcl xL和ICAD蛋白的表达 ,增加Bax蛋白表达为其诱发A375 S2细胞凋亡的机制之一。     

冬凌草甲素诱导HepG2肝癌细胞凋亡机制的研究

目的:研究冬凌草甲素(oridonin)诱导HepG2凋亡的分子机制。方法:MTT法、Hoechst33258荧光染色、流式细胞分析法和Western blot分析法。结果:冬凌草甲素诱导HepG2细胞发生死亡呈时间和浓度依赖性,其作用24h的半数有效抑制浓度IC50=(29.7±1.5)μmol.L-1。Hoechst33258荧光染色证明冬凌草甲素诱导HepG2细胞发生了凋亡;30μmol.L-1冬凌草甲素作用于HepG2细胞使之产生大量的活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS),p53抑制剂PFTα显著地抑制了ROS的产生,从而抑制了细胞凋亡的发生;在HepG2细胞中,30μmol.L-1冬凌草甲素促进了Bax的表达,抑制了Bcl-2的表达,同时线粒体下游蛋白caspase-9,-3的抑制剂明显地抑制了30μmol.L-1冬凌草甲素诱导的HepG2细胞凋亡。结论:冬凌草甲素通过p53蛋白诱导ROS的产生,从而导致HepG2细胞凋亡,除此之外冬凌草甲素还通过线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡。     

冬凌草甲素通过激活caspase途径诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

目的 研究冬凌草甲素诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用原理及caspase途径在凋亡过程中的作用.方法 噻唑蓝(MTT)法,形态学观察,RT-PCR及流式细胞法.结果 冬凌草甲素对MDA-MB-231细胞生长抑制作用呈时间剂量依赖性.形态学观察可见MDA-MB-231的增殖受明显抑制.冬凌草甲素可诱导细胞内抑制凋亡基因Bc1-xl表达量时间依赖性减少,促凋亡基因Bid表达量增加,caspase-3 的表达增加.40 μmol/L药物处理48 h后,流式法检测细胞凋亡率为75%.结论 冬凌草甲素诱导MDA-MB-231细胞凋亡,这种作用可能是通过改变Bc1-xl/Bid的表达比率、激活caspase-3 而实现的.     

竹红菌甲素诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的分子机制

 目的研究竹红菌甲素(hypocrellin A,HA)诱导人黑色素瘤(A375-S2)细胞死亡的分子生物学机制。方法应用结晶紫染色法、流式细胞技术及RT-PCR技术等。结果HA能够诱导A375-S2细胞产生凋亡,并诱导细胞周期停滞在S期,同时诱导细胞周期蛋白CyclinB1的mRNA表达增加。结论HA诱导细胞周期因子CylinB1 mRNA表达增加与细胞周期停滞在S-期密切相关,同时细胞周期的阻碍可能是诱导A375-S2细胞凋亡的一个重要原因。     

冬凌草甲素通过激活ERK途径诱导U937细胞凋亡

目的:研究冬凌草甲素诱导人组织淋巴瘤U937细胞凋亡的机制及ERK激酶在凋亡过程中的作用。方法:噻唑蓝(MTT)法,Hoechst 33258染色法,DNA凝胶电泳及Western blot检测法。结果:冬凌草甲素对U937细胞生长抑制作用呈时间剂量依赖性。27μmol.L^-1冬凌草甲素作用细胞12 h后,Hoechst 33258染色细胞,出现明显凋亡小体,并诱导ERK发生磷酸化。ERK磷酸化抑制剂PD98059阻断了冬凌草甲素诱导的细胞生长抑制及DNA片段化。细胞内抑制凋亡蛋白Bcl-X_L表达量时间依赖性减少,促凋亡蛋白Bax表达量增加,而ERK抑制剂可逆转这种作用。结论:冬凌草甲素(27μmol.L^-1)诱导U937细胞凋亡,这种作用是通过活化ERK激酶,改变其下游Bax/Bcl-X_L的表达比率,从而促进U937细胞发生凋亡。     

冬凌草甲素注射剂诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其机制研究

目的研究冬凌草甲素注射剂诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及与细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的关系。方法 MTT法检测冬凌草甲素注射剂对SGC-7901细胞的细胞毒活性;倒置显微镜观察冬凌草甲素注射剂对细胞形态学的影响;流式细胞术测定细胞凋亡率;激光共聚焦显微术检测SGC-7901细胞[Ca2+]i的变化;JC-1单染,激光共聚焦显微术检测SGC-7901细胞中线粒体膜电位的变化。结果冬凌草甲素注射剂对SGC-7901细胞的IC50为21.74μmol/L;作用48 h后,细胞生长密度变疏,细胞皱缩,其中冬凌草甲素注射剂高浓度组大部分细胞破碎。冬凌草甲素注射剂5.5、11、22μmol/L作用24 h后SGC-7901细胞凋亡率分别为7.07%、18.57%、22.96%;钙离子荧光强度高于对照组;线粒体膜电位荧光强度显著低于对照组。结论冬凌草甲素注射剂通过升高SGC-7901细胞[Ca2+]i诱导细胞凋亡。     

冬凌草甲素诱导人肾癌A-704细胞凋亡及机制研究

目的:研究冬凌草甲素( oridonin,Ori)对人肾癌细胞的生长抑制、诱导凋亡作用及其机制.方法:MTT法检测Ori对密度为1×104/mL的人肾癌A-704细胞的生长抑制作用;流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染色法检测Ori作用于人肾癌A-704细胞24 h的细胞凋亡率;实时监测聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测32 μmol·L-1Ori作用人肾癌A-704细胞24h后的Bcl-2,Bax及Caspase-3基因表达水平的变化.结果:Ori可显著抑制人肾癌A-704细胞的生长,并呈明显的时间-效应关系和浓度-效应关系,64 μmol· L-1 Ori作用人肾癌A-704细胞60 h后抑制率为73％.随着Ori作用浓度增加,凋亡细胞数和坏死细胞数均增加,浓度越高,坏死细胞率增加越多,64 μmol·L-1Ori作用人肾癌A-704细胞24 h后,坏死细胞升至32.4％.随着32 μmol·L-1Ori作用时间延长,人肾癌A-704细胞Bax,Caspase-3基因的表达逐渐增强,Bcl-2基因的表达逐渐减弱(P均＜0.05).结论:Ori通过上调Bax基因和降低Bcl-2基因表达诱导细胞凋亡,从而抑制人肾癌A-704细胞的生长.     

冬凌草甲素诱导人多发性骨髓瘤 LP1细胞凋亡的实验研究

目的探讨冬凌草甲素（Oridonin）对LP-1细胞的诱导凋亡作用及其机制。方法采用不同浓度冬凌草甲素处理人多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）LP-1细胞,通过MTT比色法检测LP-1细胞的增殖活性,AnnexinV／PI双染色法检测LP-1细胞的凋亡效应,透射电子显微镜观察药物作用后细胞超微结构的变化,RT—PCR检测凋亡相关基因mRNA表达变化。结果冬凌草甲素抑制LP－1细胞增殖呈时间和剂量依赖性;AnnexinV／PI双染色法检测显示,随着作用药物浓度的增加以及药物作用时间的延长,LP－1细胞凋亡率显著增加。通过透射电子显微镜可见药物作用后的细胞呈现核染色质边集,线粒体肿胀等细胞凋亡的表现。冬凌草甲素作用后TJP－1细胞中PDCD5、BidmRNA表达上调,Bel－2、NF—KBmRNA表达下调。结论冬凌草甲素通过上调Bid及下调Bel－2mRNA表达降低线粒体膜电位、触发LP－1细胞的线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡;亦可作为NF－KB活性抑制剂阻断NF－KB激活,诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖。其中PDCD5作为凋亡促进剂的作用仍需进一步的深入研究。     

冬凌草甲素对人黑色素瘤A375细胞侵袭和转移的影响及机制研究

目的研究冬凌草甲素对人黑色素瘤A375细胞侵袭和转移的抑制作用及其作用机制。方法采用细胞培养技术体外培养A375细胞,用不同浓度冬凌草甲素处理细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖率;划痕实验分析细胞的迁移能力;Transwell小室实验研究细胞的侵袭能力;黏附实验评价细胞的黏附能力;Western blotting法检测转录因子Snail、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9蛋白的表达。结果冬凌草甲素对A375细胞48 h半数抑制浓度(IC50)为47.94μmol/L;与对照组比较,5、10、20μmol/L冬凌草甲素可明显降低A375细胞的体外迁移、侵袭及黏附能力(P0.05),且具有量效关系。冬凌草甲素作用于细胞后,E-cadherin蛋白表达水平明显上调(P0.05),Snail、N-cadherin、vimentin、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显下调(P0.05)。结论冬凌草甲素具有体外抑制A375细胞侵袭和转移的作用,其机制可能与调控上皮-间质转化(EMT)及MMPs有关。     

黄芩苷对人黑色素瘤A375细胞增殖的影响

目的:探讨黄芩苷对人黑色素瘤A375细胞株体外增殖的抑制作用。方法:选用人黑色素瘤A375细胞进行体外培养,以不同浓度的黄芩苷分别处理黑色素瘤A375细胞,连续6天使用倒置显微镜进行观察,计数,绘制生长曲线;以不同浓度(0.1～50μmol/L)的黄芩苷分别处理黑色素瘤A375细胞细胞24、48、72h后,用MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:生长曲线及MTT法显示黄芩苷对黑色素瘤A375细胞有抑制作用,并呈剂量和时间依赖性;流式细胞仪检测到细胞在黄芩苷作用后,细胞凋亡率增加。结论:黄芩苷对人黑色素瘤A375细胞具有明显抑制作用,细胞凋亡可能是其机制之一。     

葛根素通过线粒体途径诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡

目的:探讨线粒体途径在葛根素(PUE)诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡中的作用.方法:葛根素高、中、低剂量(1.5×104,1.5×10-4,1.5×10-5 mol·L-1)干预体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC),观察线粒体膜电位的变化,Western Blot检测凋亡相关基因Caspase-9,Bax和Bcl-2的蛋白表达.结果:葛根素加药组与正常组相比线粒体膜电位明显降低,葛根素可使Caspase-9的蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达下降而Bax蛋白表达升高,葛根素对PASMC的诱导作用还具有浓度依赖性.结论:葛根素可通过线粒体途径诱导PASMC凋亡.     

黄芪注射液影响人恶性黑色素瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨黄芪注射液在体外对人恶性黑色素瘤A375细胞凋亡的影响。方法应用DAPI荧光染色观察黄芪注射液作用后A375细胞凋亡情况,设对照组;流式细胞仪检测黄芪注射液对A375细胞凋亡率的影响;分光光度法检测黄芪注射液作用后A375细胞中caspase-3蛋白活性情况。结果与对照组相比,黄芪注射液处理组荧光显微镜下可以见到明显的凋亡小体,且呈时间和质量浓度依赖;同时发现黄芪注射液可使A375细胞凋亡率明显升高,并呈浓度依赖性;caspase-3蛋白活性检测发现,100,200 mg/m L的黄芪注射液不影响Caspase-3的活性,300,400 mg/m L的黄芪注射液降低Caspase-3的活性。结论黄芪注射液有诱导人恶性黑色素瘤细胞A375细胞凋亡的作用,其诱导黑色素瘤凋亡是通过影响Caspase-3蛋白非依赖性途径实现的。     

秦皮甲素通过抑制Ras/ERK通路诱导人肺癌细胞A549凋亡

目的探讨秦皮甲素通过抑制Ras/ERK通路诱导人肺癌细胞A549凋亡的作用。方法 MTT法检测肺癌细胞A549的增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶caspase3、8、9的活性,免疫印迹法检测K-Ras、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白表达的变化。结果秦皮甲素可抑制人肺癌细胞A549的增殖,IC50值为0.4 mmol/L,并诱导凋亡;caspase3和caspase9表达增强,caspase8表达无明显改变。p-ERK1/2和K-Ras蛋白表达减弱,而ERK1/2蛋白表达无明显变化。结论秦皮甲素通过显著抑制K-Ras的表达和ERK1/2的磷酸化水平诱导人肺癌细胞A549凋亡。     

Bryonia dioica aqueous extract induces apoptosis through mitochondrial intrinsic pathway in BL41 Burkitt's lymphoma cells

Ethnopharmacological relevance

Bryonia dioica Jacq. is a climbing perennial herb with tuberous roots which is widely used in traditional medicine in Algeria for the treatment of cancers; it belongs to the genus Bryonia (Cucurbitaceae).

Aim of the study

To investigate the cytotoxic and apoptogenic activities, the phytochemical composition and acute toxicity of the aqueous extract of Bryonia dioica roots growing in Algeria.

Materials and methods

Dried roots of Bryonia dioica were extracted with water (decoction). The cytotoxic effects of the aqueous extract in the Burkitt's lymphoma BL41 cell lines were evaluated by flow cytometry. Apoptosis induction was assessed by two corroborative assays; propidium iodide (PI) staining of cell DNA and flow cytometric light scatter analysis. The mitochondria membrane potential was investigated using a fluorescent dye DIOC6. The expression of caspases-3, -8, -9 and PARP was assessed by Western blot. The phytochemical screening of the roots of Bryonia dioica was performed using qualitative phytochemical standard procedures.

Results

The Bryonia dioica aqueous extract induced cell death in a dose-dependent manner. The IC50 of Bryonia dioica aqueous extract was estimated to be approximately 15, 63 μg/ml. This was accompanied by induction of apoptosis, activation of caspase-3 and -9, cleavage of PARP and loss of mitochondria membrane potential. Furthermore, the phytochemical screening of roots of Bryonia dioica showed the presence of various bioactive such as polyphenols, sterols and triterpenes, alkaloids, c-heterosides, carbohydrates and saponins.

Conclusion

The aqueous extract of Bryonia dioica induces apoptosis in the Burkitt's lymphoma BL41 cell lines via the mitochondrial pathway. The flavonoids, sterols and triterpens detected could be responsible for the cytotoxic and apoptogenic activities of the aqueous extract of Bryonia dioica. These findings suggest that Bryonia dioica could be considered as a promising source for developing novel therapeutics against Burkitt's lymphoma.