三氧化二砷对鼠肝癌VEGF及COX-2表达影响的研究

目的 研究三氧化二砷(As2O3)对HepA小鼠肝癌血管内皮生长因子(VEGF)及环氧合酶-2(COX-2)表达的影响.方法 建立皮下种植肝癌小鼠模型,用药后观察小鼠肿瘤体积变化及抑瘤率;利用免疫组化观察移植瘤中VEGF及COX-2.结摹三氧化二砷对小鼠肝癌瘤体体积和抑瘤率均具有抑制作用;三氧化二砷降低了VEGF及COX-2的表达,与未用药对照组相比均差异有统计学意义(P<0.05).结论三氧化二砷能缩小肿瘤体积、增加抑瘤率,并能降低VEGF及COX-2的表达.     

三氧化二砷联合全反式维甲酸对小鼠肝癌细胞H22及移植瘤的抑制作用

目的探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)联合全反式维甲酸(all trans retinoic acid,ATRA)在体内和体外对小鼠肝癌H22细胞的抑制作用.方法建立小鼠肝癌H22移植瘤模型,观察As2O3联合ATRA的体内抑瘤作用;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法测定As2O3联合ATRA在体外对小鼠肝癌H22细胞株的生长抑制作用.结果 As2O3联合ATRA在体外能明显抑制H22细胞的生长和增殖,抑制率为52.24%;在体内对H22小鼠的肿瘤体积、重量均有明显的抑制作用,抑制率分别为66.25%、62.07%.结论 As2O3和ATRA在体内和体外对H22肿瘤细胞的生长均有抑制作用,联合应用作用加强,有协同作用.     

三氧化二砷诱导骨髓瘤细胞JAK/STAT3通路抑制作用的研究

目的 研究三氧化二砷（As₂O₃)诱导人骨髓瘤细胞U266、RPMI8226细胞内JAK/STAT3信号转导通路抑制与细胞增殖之间存在的关系。方法 采用MTT法观察As₂O₃对骨髓瘤细胞作用的半数抑制浓度（IC₅₀）,流式细胞技术检测As₂O₃作用前后细胞周期的改变情况,甲基化特异性PCR法检测As₂O₃作用前后骨髓瘤细胞内SOCS-1基因甲基化状态的变化,Western blotting法检测As₂O₃作用前后磷酸化STAT3蛋白的表达差异。结果 As₂O₃作用72 h后,骨髓瘤细胞U266、RPMI8226细胞内磷酸化STAT3蛋白表达水平明显降低,同时伴随SOCS-1基因启动子区CpG岛甲基化程度明显减弱至消失,细胞增殖发生G₀/G₁期阻滞,上述三者变化均与As₂O₃浓度呈正相关（r=0.85,P<0.05）。结论 As₂O₃可诱导骨髓瘤细胞增殖受抑,与As₂O₃诱导细胞内JAK/STAT3信号转导通路抑制存在一定关系,且与细胞内SOCS-1基因甲基化状态改变相关。     

Inhibitory Effects of Parthenolide on the Angiogenesis Induced by Human Multiple Myeloma Cells and the Mechanism

The inhibitory effects of parthenolide （PTL） on angiogenesis induced by multiple myeloma （MM） cells in vitro and the mechanism were investigated. Human MM line RPMI8226 cells were cultured in vitro. The effects of MM culture supernatant on the migration and tubule formation ability of human umbilical vein endothelial cells （HUVECs） treated with PTL were observed. By using Western blot, the expression of p65 and IкB-α in MM cells was detected. RT-PCR was used to assay the expression of VEGF, IL-6, MMP2 and MMP9 mRNA in MM cells. ELISA was used to measure the levels of VEGF and IL-6 in MM cell culture supernatant. The expression of MMP2 and MMP9 in MM cells was examined by immunohistochemistry. （1） In 3.5, 5.0, 7.5 and 10 μmol/L PTL groups the number of migrated cells was 310±56, 207±28, 127±21 and 49±10 respectively, which was significantly different from that in positive control group （598±47） （P〈0.01）. In 3.5 and 5.0 μmol/L PTL groups the areas of capillary-like structures were 0.092±0.003 and 0.063±0.002 mm2, significantly less than in positive control group （0.262±0.012 mm2） （P〈0.01）, but in 7.5 and 10 μmol/L PTL groups no capillary-like structures were found; （2） After treatment with different concentrations of PTL for 48 h, the expression of p65 protein was gradually decreased, while that of IкB-α was gradually enhanced with the increased concentration of PTL; （3） After treatment with 3.5, 5.0, 7.5 and 10 μmol/L PTL for 48 h, the VEGF levels in the supernatant were 2373.4±392.2, 1982.3±293.3, 1247.0±338.4 and 936.5±168.5 pg/mL respectively, significantly different from those in positive control group （2729±440.0 pg/mL） （P〈0.05）. After treatment with 7.5 and 10 μmol/L PTL, the IL-6 levels in the culture supernatant were 59.6±2.8 and 41.4±9.8 pg/mL respectively, signifi- cantly lower than in positive control group （1287.3±43.5 pg/mL） （P〈0.05）; （4） RT-PCR revealed that PTL could significantly inhibit the expression of V     

五氧化二砷对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的 评估五氧化二砷(As_2O_5)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及凋亡的影响,比较As_2O_5和三氧化二砷(As_2O_3)影响HUVEC增殖的差异.方法 以不同浓度As_2O_5和As_2O_3作用于指数生长期的3～5代HUVEC,采用3-(4,5-二甲基)-二苯基四氮唑溴盐法(MTT)检测HUVEC存活情况,相差显微镜观察和Annexin V/PI双染法流式细胞仪观察HUVEC凋亡情况.结果 MTT检测结果显示,0.5、1.0、5.0、10.0 mg/L As_2O_5作用48 h下HUVEC存活率分别为(72.5±13.8)%、(52.9±6.2)%、(15.0 ± 12.8)%、 (13.8 ± 13.2)%,其中1.0(P=0.006)、5.0(P=0.007)和10.0mg/L(P=0.008)作用组的HUVEC存活率明显低于对照组,但5.0与10.0mg/L组间差异无统计学意义(P=0.119);在1.0 mg/L As_2O_5作用下,24、48、72、96 h时HUVEC存活率分别为(88.4 ± 6.3)%、(53.1 ±8.8)%、(30.7 ± 7.9)%、(16.3 ± 4.6)%,其中48(P=0.042)、72(P=0.025)和96 h(P=0.012)时间组的HU-VEC存活率明显低于对照组.相差显微镜和Annexin V/PI双染法观测结果显示,As_2O_5可诱导HUVEC凋亡.培养48 h时,As_2O_5和As_2O_5对HUVEC的IC_(50)值分别为1.1和0.3 mg/L.结论 As_2O_5可抑制HUVEC增殖,起效浓度为1 mg/L.As_2O_5导致HUVEC死亡的主要方式是细胞凋亡.As_2O_5对HUVEC增殖的抑制作用弱于As_2O_3.     

三氧化二砷对人肺腺癌细胞A549/DDP裸鼠体内的多药耐药逆转作用

目的研究三氧化二砷（As_2O_3）对人肺腺癌耐顺铂细胞A549/顺铂（DDP）裸鼠移植瘤的耐药逆转作用。方法建立人肺腺癌裸鼠移植瘤模型,观察As_2O_3、DDP及联合用药对体内移植瘤生长状况的影响;采用流式细胞术（FCM）测定不同用药对肿瘤细胞凋亡率变化和耐药细胞A549/DDP P-糖蛋白（P-gp）表达;采用RT-PCR检测不同用药对A549/DDP移植瘤组织MRP1-mRNA和LRP-mRNA表达的变化。结果体内裸鼠抑瘤实验显示As_2O_3有一定抑瘤作用,联合应用DDP可显著抑制肿瘤生长。FCM结果显示应用As_2O_3后肿瘤细胞平均凋亡率,明显高于对照组（P〈0.05）[（17.204±3.091）%vs（3.436±0.537）%],低浓度As_2O_3联合DDP后肿瘤细胞的凋亡率,明显高于DDP组（P〈0.05）[（14.472±3.891）%vs（5.612±1.167）%]。FCM对P-gp表达检测提示As_2O_3对移植瘤Pgp水平无影响。RT-PCR检测结果示含As_2O_3组MRP1表达明显低于不含As_2O_3组（P〈0.05）,肺癌耐药相关蛋白（LRP）在转录水平呈现相对低表达,含As_2O_3组同不含As_2O_3组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 As_2O_3能在体内逆转A549/DDP细胞的耐药性,其机制可能是As_2O_3可通过下调MRP1基因表达,提高A549/DDP细胞对DDP敏感性逆转其耐药,并可能通过诱导肿瘤细胞凋亡来起作用。     

三氧化二砷逆转肺癌细胞株耐药的实验研究

目的：观察三氧化二砷（As2O3）与肺腺癌细胞株HTB-56、相应耐药细胞株HTB-56／DDP共孵育有无诱导细胞凋亡以及逆转耐药作用。方法：采用人肺腺癌细胞株HTB-56、HTB-56／DDP作为实验细胞，以As2O3和顺铂（DDP）作干预，用MTT法检测As2O3单独和与DDP共孵育后细胞的生长抑制率得半数抑制浓度得出抗药倍数；以电镜观察干预后细胞凋亡情况。结果：不同浓度As2O3作用相同时间或相同浓度作用不同时间对HTB-56、HTB-56／DDP的细胞抑制率有明显差异（P〈0．05）；HTB-56／DDP细胞株与HTB-56细胞株相比，对顺铂的抗性倍数为14．65倍；而与As2O3共孵育对DDP的抗药倍数则为6．35，逆转倍数约为3．5，As2O3对其有增敏及逆转耐药作用和诱导细胞凋亡。结论：As2O3有明显抗肿瘤作用，能增强肺癌耐药细胞株对DDP的敏感性，对逆转耐药有一定的作用。     

BDNF及受体TrkB在大鼠小脑的表达研究

目的:研究BDNF及其受体TrkB在大鼠小脑时空分布变化。方法:进行免疫组织化学实验,观察BDNF及TrkB在正常大鼠发育期、成年期和老龄期小脑内的定位分布及时间变化。结果:发育期小脑皮质的外颗粒层、梨状细胞层和内颗粒层均有BDNF表达,梨状细胞层的阳性Purkinje细胞染色明显。成年期内颗粒层阳性细胞逐渐增多,梨状细胞层的Purkinje细胞BDNF表达及阳性细胞数量达高峰。老年期阳性细胞染色强度呈增龄减低,Purkinje细胞发生了轻度的退行性变,TrkB表达在小脑皮质分布模式类似BDNF的表达。结论:BDNF及TrkB表达的时空变化始终与小脑皮质的发生发育过程相关。生后0天,二者在小脑皮质外颗粒层、梨状细胞层和内颗粒层均有较强表达,以梨状细胞层为主。第10天左右,小脑皮质发育为典型的三层结构,Purkinje细胞表达BDNF及TrkB最为显著。成年后,表达水平保持较稳定。老龄后明显减弱,BDNF及TrkB阳性Purkinje细胞发生轻度的退行性改变。     

The effect of brain-derived neurotrophic factor on angiogenesis

To investigate the in vitro and in vivo proangiogenic effects of brain-derived neurotrophic factor （BDNF）, human umbilical vein endothelial cells （HUVECs） were isolated and cultured in primary culture. The effect of BDNF on the proliferation of HUVECs was examined by MTT assay. The effects of BDNF on HUVEC migration and tube formation were studied by modified Boyden cham- ber assay and tube formation assay, respectively. Matrigel plug assay and chorioallantoic membrane assay were used to evaluate the effects of BDNF on angiogenesis in vivo. Our results showed that BDNF substantially stimulated the migration and tube formation of HUVECs in vitro, although it did not induce HUVEC proliferation. BDNF also induced angiogenesis both in matrigel plug of mouse model and in chick chorioallantoic membrane. In conclusion, BDNF can promote angiogenesis both in vitro and in vivo, and may be a proangiogenic factor.     

Tgf-beta antisense therapy increases angiogenic potential in human keratinocytes in vitro

BACKGROUND: Transforming growth factor-beta (TGF-beta) has been identified as an important component of wound healing. Recent developments in molecular therapy offer exciting prospects for the modulation of wound healing, specifically those targeting TGF-beta. The purpose of this study was to analyze the effect of TGF-beta targeting on the expression of angiogenic vascular endothelial growth factor (VEGF), a key regulator of angiogenesis, and in vitro angiogenic activity. METHODS: Expression of angiogenic VEGF in tissue samples from chronic dermal wounds was investigated by immunohistochemistry. The effect of TGF-beta targeting using antisense oligonucleotides on the expression of VEGF was analyzed by ELISA and RT-PCR in cultured human keratinocytes. Human endothelial cells (EC) were grown in conditioned medium produced from the treated keratinocytes. EC migration was measured using a modified Boyden chamber, EC tube formation was analyzed under the light microscope. RESULTS: Immunohistochemical investigation demonstrated a decreased expression of VEGF protein in tissue samples from chronic dermal wounds compared to normal human skin. Antisense TGF-beta oligonucleotide treatment upregulated VEGF secretion in vitro. Addition of conditioned medium from TGF-beta antisense-treated keratinocytes resulted in an increase of endothelial cell migration and tube formation. CONCLUSIONS: Our results demonstrate that TGF-beta antisense oligonucleotide technology may be a potential therapeutic option for stimulation of angiogenesis in chronic wounds.     

脑源性神经营养因子及酪氨酸激酶受体B在大鼠小脑的表达

目的研究脑源性神经营养因子及酪氨酸激酶受体B在大鼠小脑的时空分布变化。方法采用免疫组织化学方法实验,观察脑源性神经营养因子及酪氨酸激酶受体B在正常大鼠发育期、成年期和老龄期小脑内的定位分布及时间变化。结果发育期小脑皮质的外颗粒层、梨状细胞层和内颗粒层均有BDNF表达,梨状细胞层的阳性Purkinje细胞染色明显。成年期内颗粒层阳性细胞逐渐增多,梨状细胞层的Purkinje细胞BDNF表达及阳性细胞数量达高峰。老年期阳性细胞染色强度呈增龄减低,Purkinje细胞发生了轻度的退行性变,TrkB表达在小脑皮质分布模式类似BDNF的表达。结论小脑皮质BDNF及TrkB的时空表达基本一致。表达高峰为生后20天。老龄期呈增龄性下降,细胞出现退行性改变。     

三氧化二砷对前列腺癌PC-3细胞周期调节分子的影响

目的：本试验通过检测三氧化二砷（As2O3）对前列腺癌（PCA）PC-3细胞周期素依赖性激酶（CDK）、CDK抑制剂（CDKI）pRb相关蛋白、E2F的影响，探讨其抗PCA的机制，为临床应用提供依据。方法：应用Western blotting及免疫沉淀技术检测细胞周期调节分子CDK、CDKI、周期素、pRb相关蛋白和E2F的变化及细胞周期素-CDKI和pRb相关蛋白-E2F复合物的形成；激酶试验测定As2O3对CDK、周期素相关激酶活性的影响。结果：As2O3可诱导PC-3细胞Cip1／p21和Kip1／p27呈计量依赖性增加，而CDK2，6和周期素E，A下调；As2O3增强周期素-CDKI的结合，而降低CDK2，4，6和周期素D1和E相关激酶的活性；As2O3使次磷酸化pRb／p107和pRb2／p130以及与E2F4结合增加。结论：As2O3以CDKI或Rb相关蛋白为作用靶点来阻止细胞周期进程、抑制细胞生长，具有治疗PCA的作用。     

霉酚酸及地塞米松对内皮细胞血管生成能力的影响

目的 比较霉酚酸、地塞米松对血管内皮细胞血管生成能力的影响,进一步探讨上述免疫抑制剂抗炎作用的机制。方法 以体外培养的人脐静脉来源的内皮细胞为研究对象,利用体外血管生成体系观察2种免疫抑制剂对内皮细胞血管生成作用的影响,同时利用划伤愈复测定、^3H-TdR掺入率及粘附能力测定实验分别观察其对内皮细胞迁移、增殖和粘附能力进行了测定。结果 霉酚酸酯能明显抑制血管内皮细胞血管生成。此外霉酚酸酯还表现出对血管内皮细胞增殖和迁移能力的抑制能力,而地塞米松对此则无显著影响;对于粘附能力,2种免疫抑制剂均未出表现出显著的效应。结论 在本研究条件下霉酚酸较地塞米松表现出更强的抑制血管内皮细胞血管生成的作用。霉酚酸的上述特点可能是其在多种伴血管炎改变的自身免疫性疾病中有较显著疗效的机制之一。     

三氧化二砷对类风湿关节炎滑膜细胞的影响

目的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的滑膜B型细胞(成纤维细胞样细胞)是增殖滑膜的增殖细胞,表达c-myc基因。本项实验研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)是否影响体外培养的RA滑膜B型细胞的增殖及c-myc基因表达。方法分离、培养RA滑膜B型细胞;用含As2O3浓度分别为2μmol/L和5μmol/L的培养液,分别作用于培养细胞24h和48h;采用流式细胞仪测定细胞死亡情况;采用流式细胞仪测定c-myc蛋白水平。结果2μmol/L As2O3和5μmol/L As2O3作用于RA滑膜B型细胞24h均可使死亡细胞百分率增加,2μmol/L As2O3致细胞死亡率高于5μmol/L As2O3致细胞死亡率,而48h死亡细胞百分率较24h减少,;5μmol/L As2O3作用于细胞48h促进RA滑膜B型细胞增殖,并使c-myc蛋白水平增高。结论As2O3依据作用时间和浓度的不同既可诱导RA滑膜B型细胞死亡,又可促进RA滑膜B型细胞增殖,并上调c-myc基因表达。     

三氧化二砷与人参皂甙Rg3联合对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移能力的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)和人参皂甙Rg3(ginsenoside Rg3)联合运用对人肝癌SMMC-7721细胞黏附侵袭转移能力的影响以及与单独运用的差异。方法采用MTT法观察经As2O3、人参皂甙Rg3单独与联合作用后人肝癌SMMC-7721细胞对基底膜黏附能力的影响;Transwell膜侵袭系统观察As2O3与人参皂甙Rg3单独与联合作用后SMMC-7721细胞游走与穿透基底膜能力的影响。结果As2O3和人参皂甙Rg3单独与联合应用均能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞与Marigel的黏附,抑制细胞游走与穿透基底膜的能力(P<0.05),其联合抑制作用优于单独运用(P<0.05)。结论As2O3和人参皂甙Rg3均有抗肿瘤侵袭转移作用,两者联合可增强抑制效应。     

As2O3磁性纳米微球磁感应加热治疗宫颈癌的研究

目的探讨As2O3磁性纳米微球磁感应加热治疗宫颈癌的作用和机理。方法用培养的SiHa细胞建立裸鼠人宫颈癌移植瘤模型,将研制的As2O3纳米微球、磁性纳米微球、As2O3磁性纳米微球等注入肿瘤细胞接种处,加高频交变磁场磁感应加热治疗3次后,d 45实验结束,分析比较3个实验组较对照组的延迟出瘤时间、质量抑制率、肝功能和肾功能情况及肿瘤、瘤周和内脏组织学的改变。同时观察磁流体热疗的升温和恒温效果。结果在高频交变磁场下,As2O3磁性纳米微球组肉眼未见肿瘤生长,该组的肿瘤质量抑制率为99.93%,明显高于As2O3纳米微球组(85.20%,P<0.01)及磁性纳米微球组(87.72%,P<0.01)。各实验组裸鼠血清AST、ALT、Bun及Cr水平与对照组相比无显著性差异(P>0.05),瘤旁和内脏组织未见明显损伤。结论在高频交变磁场作用下,As2O3纳米微球、磁性纳米微球、As2O3磁性纳米微球治疗裸鼠宫颈癌均有效,以As2O3磁性纳米微球效果最佳。本研究所采用的As2O3磁性纳米微球联合磁流体热疗技术具有双重抗癌功能,为宫颈癌和其他实体瘤的治疗提供了一条新途径。      

褪黑素对卵巢癌SKOV3细胞侵袭、迁移和血管生成的影响

研究褪黑素对卵巢癌SKOV3细胞侵袭、迁移和血管生成的影响。MTT实验、划痕实验和Transwell侵袭实验分别观察褪黑素对SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移的影响。诱导HUVECs成管,观察褪黑素对其影响。Western blot法检测SKOV3细胞内血管内皮生长因子(VEGF)、钙黏附蛋白E(E-cadherin)、基质金属蛋白酶9(MMP9)和波形蛋白(Vimentin)的表达。建立卵巢癌移植瘤模型,免疫组化检测CD31的表达。结果显示,褪黑素能抑制卵巢癌SKOV3细胞的侵袭和迁移,并且明显下调MMP-9、Vimentin和VEGF蛋白的表达,上调E-cadherin的表达。此外,褪黑素抑制了HUVECs的小管生成,体内CD31的免疫组化结果也显示褪黑素能够抑制微血管密度。结果提示,褪黑素能抑制卵巢癌细胞的侵袭、迁移和血管生成。     

FAP对体外内皮细胞增殖及其小管形成的影响

目的探讨成纤维细胞激活蛋白(fibroblast activation protein,FAP)在体外对内皮细胞的增殖和小管形成的影响。方法应用不同浓度FAP(0、300、600、1 200 pmol/L)处理人脐静脉内皮细胞EA.hy926,采用MTT检测内皮细胞增殖,划痕愈合实验分析细胞迁移并使用三维胶模型研究内皮细胞的小管形成。结果与正常对照组相比,FAP可以诱导内皮细胞迁移和增殖(P<0.05),并促进内皮细胞小管形成(P<0.01),其中600 pmol/L浓度的FAP处理组作用较其他组明显增强(P<0.01)。结论 FAP在体外可促进人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成。此发现为进一步研究FAP在血管生成中的机制提供了理论基础。     

三氧化二砷对大肠癌Ls174细胞致腹水生成的影响

目的研究三氧化二砷（As2O3）对人大肠癌裸鼠腹腔种植腹水生成的影响。方法将大肠癌Ls174细胞通过单独培养,与5-氟尿嘧啶（5-Fu）、As2O3分别共培养后行腹腔内注射构建裸鼠腹水模型,通过单独和联合注入化疗药物,观察腹水生成情况以及检测腹水细胞中耐药基因谷胱甘肽硫转移酶酸性同工酶（GST。百）mRNA表达,比较三氧化二砷对大肠癌致腹水生成的影响。结果5FU和As2O3组裸鼠腹水生成明显减少,且生存期延长,耐药基因GST-π TmRNA表达最低。结论三氧化二砷能够抑制或消除人大肠癌裸鼠腹腔种植及腹水的生成,不同程度地延长生存期并通过下调耐药基因GST-πmRNA表达提高对化疗药物的敏感性。