卵巢癌中IGF-1/IGF-1R轴与临床病理特征及预后的相关性

目的 研究卵巢癌中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)/IGF-1受体(IGF-1R)轴与临床病理特征、手术预后的相关性.方法 选择2015年3月至2017年12月期间在本院妇产科手术切除的卵巢癌组织、卵巢良性肿瘤组织、正常卵巢癌组织,采用免疫组化检测IGF-1、IGF-1R的阳性率,采用荧光定量PCR检测IGF-1、I...     

足月分娩巨大儿的产妇胎盘IGF-1基因表达和启动子区CpG位点甲基化水平研究

目的研究足月分娩巨大儿的产妇胎盘胰岛素样生长因子l(IGF-1)基因表达和启动子区Cp G位点甲基化水平。方法回顾性选取邢台市第三医院收治的2017年9月至2018年6月102例正常妊娠且足月分娩的产妇和新生儿,根据新生儿出生体重进行分组,以正常体重儿为对照组(57例),以巨大儿(45例)为观察组。比较两组胎盘IGF-1基因表达水平和DNA甲基化水平等情况,并采用Pearson相关性分析胎盘IGF-1基因表达量与IGF-1甲基化水平及新生儿出生体重的关系。结果两组胎盘IGF-1基因表达水平和甲基化水平的比较,并无显著差异(P0. 05)。经Pearson相关性分析结果显示,胎盘IGF-1 mRNA相对表达量与IGF-1甲基化水平并无明显关系(P0. 05)。两组胎盘启动子区Cp G位点均呈现低甲基化水平。以所有新生儿出生体重的均值(4 257 g)为临界值,结果发现相比出生体重≥4 257 g组,出生体重4 257 g组IGF-1 mRNA相对表达量明显升高(P 0. 05)。经Pearson相关性分析结果显示,胎盘IGF-1 mRNA相对表达量与新生儿出生体重存在正相关关系(r=0. 48,P 0. 01)。结论产妇胎盘IGF-1基因表达量与新生儿出生体重存在正相关关系,其表达量的高低均与处在低甲基化程度的胎盘IGF-1中的甲基化水平并无密切关系。     

LRP15基因启动子区甲基化与其表达的关系

为了研究LRP15基因启动子区的甲基化状况及其与基因表达的关系,探讨LRP15基因的甲基化调控机制,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS—PCR)检测LRP15基因启动子区的甲基化状况,应用甲基化抑制剂-杂氮-2’-脱氧胞嘧啶(CdR)及去乙酰化酶抑制刑曲古抑菌素(TSA)诱导CpG岛去甲基化及组蛋白乙酰化,观察启动子区CpG岛甲基化与基因表达的关系。结果显示：白血病细胞系K562中LRP15基因启动子区呈高甲基化状态,并抑制了该基因的表达。单独应用或联合TSA应用CdR均可去除该基因启动子区的高甲基化状态,并诱导该基因的表达。这表明LRP15基因的表达受到启动子区甲基化的调控;该基因在K562细胞系中不表达与其启动子区高甲基化及组蛋白去乙酰化密切相关。结论：甲基转移酶抑制剂与去乙酰化酶抑制剂在白血病治疗中可能具有一定的价值。     

肾透明细胞癌组织IGF-1和IGF-1R的表达及其临床意义

目的：探讨胰岛素样生长因子（IGF）-1及IGF-1受体（IGF—1R）在肾透明细胞癌组织的表达及其临床意义。方法：应用实时荧光定量PCR法检测IGF-1及IGF-1R基因在肾透明细胞癌组织和相应癌旁组织中的表达水平,并分析其与临床病理指标的关系。结果：IGF-1mRNA和IGF-1R mRNA在肾透明细胞癌组织中的阳性表达率均为100％,在相应癌旁组织中均为80％。肾透明细胞癌组织中IGF-1mRNA和IGF-1R mRNA的相对表达强度分别为0．42±0．05、0．38±0．02,对应癌旁组织中分别为0．05±0．01和0．06±0．01,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。肾透明细胞癌患者的AJCC分期越高,IGF-1、IGF-1R水平越高（P〈0．05）。结论：肾透明细胞癌组织和相应癌旁组织普遍表达IGF-1和IGF-1R基因,其中肾透明细胞癌存在IGF-1和IGF-1R高表达;IGF-1和IGF-1R与肾透明细胞癌密切相关,可有助于预测患者病情进展。     

胶质瘤患者RASSF1A基因转录表达和启动子区甲基化的研究

目的 探讨RASSF1A(RAS association domain family 1A)基因mRNA表达水平和基因启动子区CpG岛甲基化程度及其与启动子甲基化的关系。方法 用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测28份胶质瘤组织和4份正常脑组织中RASSF1A基因mRNA相对表达水平;用甲基化特异性PCR方法研究胶质瘤组织、正常脑组织和U251细胞株中,RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果 RASSF1A mRNA在4份正常脑组织中全部表达;在脑胶质瘤中表达缺失率为21.4％(6/28),且表达量低于正常脑组织,但与患者年龄、性别、肿瘤大小、恶性程度间的差异无显著意义(P>0.05)。按病理学分类,胶质母细胞瘤与少突胶质肿瘤的差异有显著意义(P=0.011)。脑胶质瘤中RASSF1A基因启动子发生甲基化的频率为39.3％(11/28),正常脑组织和U251细胞株中,RASSF1A基因启动了未发生甲基化。11份启动子区甲基化的胶质瘤标本中,5份同时伴mRNA表达缺失(P=0.022)。结论 RASSF1A基因启动了在胶质瘤中发生异常甲基化。尽管RASSF1A mRNA在脑胶质瘤中表达缺失并不广泛,但其表达普遍下调。推测启动子区CpG岛甲基化可能是导致RASSF1A基因在胶质瘤中表达缺失或表达水平下调的一种机制。     

脑膜瘤患者IGF-1、IGFBP-3测定的意义

目的：探索人脑膜瘤患者IGF-1、IGFBP-3与脑膜瘤发生发展的关系,为提高脑膜瘤的早期诊断率提供实验依据。方法正常对照组、脑膜瘤组各30例,血清标本均用免疫放射分析法测定IGF-1、IGFBP-3浓度。术中分别取两组的组织标本,行常规HE切片染色及IGF-1免疫组化染色,观察免疫组化染色结果。结果脑膜瘤组血清IGF-1水平明显升高,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。脑膜瘤组血清IGFBP-3水平也明显升高（P＜0.05）。二组血清IGF-1水平均与血清IGFBP-3水平呈正相关（r=0.594、0.474,P＜0.05）。正常脑组织中IGF-1无表达;脑膜瘤组织中的IGF-1表达水平也升高（P＜0.05）。结论IGF-1可能促进了脑膜瘤的发生发展。IGFBP-3可能协同IGF-1促进了脑膜瘤的发生发展。     

儿童急性肾功能衰竭时IGF-1、IGFBP-1的变化及意义

目的：探讨胰岛素样生长因子-1（IGF—1）和胰岛素样生长因子结合蛋白-1（IGFBP—1）在儿童急性肾功能衰竭（ARF）时的变化及意义。方法：选择18例ARF患儿。留取外周静脉血1ml。用双抗体夹心ELISA法测定IGF—1、IGFBP—1。12例健康儿童作为对照。结果：ARF患儿血IGF—1浓度低与对照组，而IGFBP-1高于对照组（P均〈0．01）。结论：IGF-1对肾损伤有一定的保护作用，而IGFBP—1可调控IGF—1的生物利用度，且与病情的严重程度相关。     

高血压及高血压合并高脂血症患者血清IGF-1、IR关系探讨

目的 探讨高血压及高血压合并高脂血症患者血清胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、胰岛素抵抗指数（IR）之间的关系。方法采用放射免疫方法检测39例高血压患者、36例高血压合并高脂血症患者及50例健康对照者血清IGF-1、胰岛素（INS）水平，并计算IR值进行比较分析。结果高血压及高血压合并高脂血症患者血清IGF-1含量均低于正常对照组（P〈0．05）；INS高于正常对照组（P〈0．05）；IR高于正常对照组（P〈0．01）。结论高血压及高血压合并高脂血症患者血清IGF-1水平降低与胰岛素抵抗有着密切关系。两组患者存在着不同程度的动脉硬化可能导致血清IGF-1含量下降。     

实时荧光定量检测人血浆中RASSF1A基因启动子甲基化

目的 建立检测人血浆DNA中RASSF1A基因甲基化的方法.方法 以肺癌细胞株NCI-H460作为RAssF1A基因启动子区甲基化阳性样本,传统酚/氯仿法提取细胞DNA,经紫外分光光度计定量后以10倍稀释的浓度梯度依次投入到200 μl健康人血浆中,制备得到模拟肺癌患者血浆.用磁珠法从模拟血浆样本和15例早期肺癌患者血浆中提取总DNA.对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰,并以TaqMan技术的实时荧光定量甲基化特异性PCR(MSP)进行检测.以模拟血浆样品作为标准品,用外标准曲线法对肺癌患者血浆中的甲基化RASSF1A进行定量.结果 实时荧光定量MSP对模拟肺癌患者血浆的检测最低限为150拷贝(甲基化的肿瘤DNA)/ml(血浆).15例肺癌患者5例RASSF1A甲基化阳性(33.3%).5例肺癌患者血浆中甲基化的RASSF1A基因的浓度分别为2.56×103,8.20×104,1.45×104,3.31×104和4.24×104拷贝/ml.结论 实时荧光定量MSP法检测肺癌患者血浆DNA中RASSF1A基因甲基化,灵敏度高,特异性强.     

IGF-1、TGF-1在冠心病患者血清变化意义研究

目的探讨冠心病患者血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、转化生长因子-1(TGF-1)水平及意义。方法选取2018年1月至12月在我院治疗的冠心病患者140例作为观察组,其中急性冠脉综合征(ACS)患者68例,稳定型心绞痛(SAP)患者72例,同时选取健康体检者140例作为对照组,检测IGF-1、TGF-1及左心室射血分数(LVEF)。结果观察组血清IGF-1、TGF-1分别为(27.39±3.11)ng/ml和(35.52±4.15)ng/ml,明显低于对照组(P0.05);ACS患者血清IGF-1、TGF-1以及LVEF分别为(23.01±2.80)ng/ml、(25.59±3.60)ng/ml和(45.04±5.29)%,明显低于SAP患者(P0.05);IGF-1与LVEF呈正相关(r=0.347,P0.05),TGF-1与LVEF无明显相关性(P0.05)。结论冠心病患者IGF-1、TGF-1水平降低,尤其ACS患者降低明显,其中IGF-1与心功能有一定相关性。     

白血病细胞系中抑癌基因PTEN启动子区甲基化状态检测及其去甲基化研究

目的 探讨抑癌基因PTEN表达沉默的机制及诱导PTEN表达对白血病细胞的作用.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation specific PCR,MSP)检测白血病细胞系HL-60、Nalm-6、Raji、KG-1a、U937、NB4、K562中PTEN基因启动子区域甲基化状态;用甲基化转移酶抑制剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理白血病细胞,MSP检测甲基化状态的改变、RT-PCR检测PTEN mRNA水平的改变、瑞特染色观察细胞形态学改变、膜联蛋白V/碘化丙锭(Annexin V/PI)标记染色检测细胞凋亡.结果 检测的白血病细胞系中HL-60、Nalm-6、Raji、KG-1a、U937细胞PTEN基因显示超甲基化状态,而NB4和K562细胞显示低甲基化状态;5-Aza-CdR处理HL-60和Nalm-6细胞后,PTEN基因甲基化降低、mRNA表达水平则逐渐增高,并呈剂量依赖性,细胞出现凋亡现象.结论PTEN基因启动子区异常甲基化可能导致该基因转录表达失活或沉默,甲基化抑制剂可以诱导PTEN表达,并引起白血病细胞凋亡.     

巢式甲基化特异性聚合酶链反应在p16基因启动子过甲基化检测中的应用

目的　介绍巢式甲基化特异性聚合酶链反应 (nMSP)法 ,探讨了最佳PCR扩增条件 ,并用该法分析新鲜癌组织、石蜡包埋组织及肿瘤患者血清中p16基因启动子的甲基化状态。方法　将基因组DNA变性成为单链 ,用亚硫酸氢盐修饰单链DNA ,将所有未甲基化的胞嘧啶被转变为尿嘧啶 ,而甲基化的胞嘧啶则不变。设计针对甲基化和非甲基化等位基因特异引物 ,进行巢式聚合酶链反应扩增 ,最后经凝胶电泳检测目的片段。结果　在 3种类型的标本中都检测出了p16基因启动子甲基化。用甲基化特异性聚合酶链反应法 (MSP)和nMSP法分别检测 34例非小细胞肺癌 (NSCLC)患者血清 ,p16基因启动子甲基化阳性率分别为 5 3% (18/34)和 74 % (2 5 /34) ,nMSP法具有更高的灵敏度。结论　筑巢式甲基化特异性聚合酶链反应是一种灵敏度高、特异性强的甲基化检测方法 ,可广泛应用于不同类型标本基因启动子甲基化分析。     

垂体瘤患者血清IGF-1、IGFBP-3水平表达及其临床意义

目的 分析垂体瘤患者血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP-3)水平表达及其临床意义.方法 将本院自2014年1月至2018年7月收治的60例垂体瘤患者纳入研究范围,选取同期于本院行体检的健康志愿者60例设为对照组;放射免疫法检测垂体瘤患者及对照组血清IGF-1、IGFBP-3水平...     

乳腺癌患者血清VEGF和IGF-1联合检测的临床意义

目的探讨血清VEGF和IGF-1的表达在乳腺癌临床诊断和预后判断中的意义。方法 42例乳腺癌患者、15例乳腺良性病变者和40例健康体检女性的血清VEGF和IGF-1的水平用ELISA方法测定,E2、PRL、HGH、CEA和CA-153的浓度用化学发光法测定,分析在ER、PR、C-erbB-2的表达和淋巴结转移等病理状态下指标的变化和相关性。结果乳腺癌患者组血清VEGFI、GF-1水平显著高于乳腺良性疾病组和正常对照组（6.70±0.52,4.78±0.51,4.24±0.49;4.98±0.55,3.01±0.54,2.87±0.52）,PRL水平显著高于正常对照组（3.26±1.03,2.44±1.48,P〈0.05）;PR阳性者IGF-1水平显著低于PR阴性者（t=3.267,P=0.016）,ER阳性者IGF-1显著低于ER阴性者（t=2.954,P=0.028）。C-erbB-2阳性者E2、PRL水平显著高于C-erbB-2阴性者（t=2.768,P=0.009;t=2.072,P=0.047）;HGH显著低于阴性者（t=2.974,P=0.005）。淋巴结非转移者E2水平显著高于转移者（t=2.437,P=0.028）;转移者CEA显著高于非转移组（t=2.352,P=0.036）。结论血清VEGF和IGF-1可以作为乳腺癌肿瘤生物学标志物。高水平IGF-1可能意味着治疗效果差、有淋巴结的转移。激素水平在肿瘤的发生发展中可能有作用。肿瘤标志物CEA对肿瘤的转移可能有预测的价值。     

胃肠道间质瘤表达IGF-1R和IGF-1的临床分析

目的:探讨胃肠道间质瘤(GISTs)中胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)与IGF-1蛋白表达情况及临床表现。方法:选取2015年7月~2016年7月我院收治的66例GISTs患者为研究对象,采用RT-PCR技术法检测患者IGF-1R与IGF-1的表达情况,根据临床资料进行统计分析。结果:66例患者中,36例IGF-1R呈阳性表达,30例IGF-1呈阳性表达;IGF-1R与IGF-1的蛋白表达情况与性别、年龄、肿瘤位置、直径及组织学分型没有直接关系(P0.05),但与肿瘤NIH分级(肿瘤大小、核分裂数)、肿瘤黏膜受侵和侵袭转移呈正相关(P0.05)。结论:IGF-1可能在GISTs发生中发挥作用,是判断GISTs良恶性的潜在依据,而IGF-1R可影响IGF-1在GISTs中的表达。     

高血压及高血压合并高脂血症患者血清IGF-1、IR关系探讨

目的探讨高血压及高血压合并高脂血症患者血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、胰岛素抵抗指数(IR)之间的关系.方法采用放射免疫方法检测39例高血压患者、36例高血压合并高脂血症患者及50例健康对照者血清IGF-1、胰岛素(INS)水平,并计算IR值进行比较分析.结果高血压及高血压合并高脂血症患者血清IGF-1含量均低于正常对照组(P＜0.05);INS高于正常对照组(P＜0.05);IR高于正常对照组(P＜0.01).结论高血压及高血压合并高脂血症患者血清IGF-1水平降低与胰岛素抵抗有着密切关系.两组患者存在着不同程度的动脉硬化可能导致血清IGF-1含量下降.     

脑出血患者血清中胰岛素、IGF-1含量变化及其相关性分析

目的检测急性脑出血患者血清中胰岛素样生长因子－１（ＩＧＦ—１）及胰岛素的含量并研究其临床价值。方法用放射免疫分析法测定脑出血患者（Ａ组）及正常人（Ｂ组）血清中ＩＧＦ—１及胰岛素的含量。结果脑出血患者血清中ＩＧＦ—１含量明显低于对照组（Ｐ ＜０．０１）,胰岛素含量明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）,二者呈负相关（Ｐ＜０ ０５）。结论脑出血患者急性期测ＩＧＦ－１、胰岛素含量可以提示预后。     

改进的PCR在抑癌基因启动子CpG岛甲基化检测中的应用

目的改进聚合酶链反应(PCR),并检验改进后的方法在甲基化检测中的可行性。方法培养人乳腺癌细胞株MCF-7,提取基因组DNA,利用亚硫酸氢盐测序法,用常规、降落及改进PCR分别扩增,比较扩增效果,PCR产物纯化回收后,TA克隆入载体pGEM-T,转化大肠杆菌(E.coliDH5α),筛选阳性克隆,经PCR扩增鉴定后获得阳性重组质粒,测序比对。结果改进后PCR与常规、降落PCR相比,扩增效率增高,二聚体及非特异性扩增减少;测序结果显示,MCF-7细胞基因组DNA中,RASSF lA基因启动子CpG岛是高甲基化的,E-cadherin基因启动子CpG岛未呈现高甲基化状态。结论改进后方法提高了以PCR为基础的甲基化分析的可行性,更适用于基因甲基化状态的检测,并为扩增富含CG的基因启动子区域提供参考。     

改进的PCR在抑癌基因启动子CpG岛甲基化检测中的应用

目的改进聚合酶链反应（PCR）,并检验改进后的方法在甲基化检测中的可行性。方法培养人乳腺癌细胞株MCF-7,提取基因组DNA,利用亚硫酸氢盐测序法,用常规、降落及改进PCR分别扩增,比较扩增效果,PCR产物纯化回收后,TA克隆入载体pGEM-T,转化大肠杆菌（E．coli DH5α）,筛选阳性克降,经PCR扩增鉴定后获得阳性重组质粒,测序比对。结果改进后PCR与常规、降落PCR相比,扩增效率增高,二聚体及非特异性扩增减少;测序结果显示,MCF-7细胞基因组DNA中,RASSFIA基因启动子CpG岛是高甲基化的,E-cadherin基因启动子CpG岛末呈现高甲基化状态。结论改进后方法提高了以PCR为基础的甲基化分析的可行性,更适用于基因甲基化状态的检测,并为扩增富含CG的基因启动子区域提供参考。     

恶性血液病患者mdr1基因启动子区甲基化状态及其与表达的关系

为了探讨多药耐药 (mdr1)基因启动子区的甲基化状态及其与表达的关系 ,采用甲基化敏感的HpaⅡ酶切结合竞争性定量PCR检测 5 4例急性白血病 (AL)和 9例多发性骨髓瘤 (MM)患者mdr1基因启动子区位于转录起始点上游 - 110和 - 5 0bp处两个CCGG位点 (I区和Ⅱ区 )的甲基化率 ;半定量RT PCR检测mdr1基因的表达水平。结果显示I区、Ⅱ区及总甲基化率均与表达呈负相关 ,I区比Ⅱ区相关密切 (r分别为 - 0 .6 4和 - 0 .4 0 )。低甲基化组(n=36 )mdr1高表达率显著增高 (P <0 .0 0 1)。与化疗敏感组 (n =8)相比 ,耐药组 (n=16 )I区 (P =0 0 5 )、Ⅱ区 (P <0 .0 5 )和总甲基化率 (P <0 .0 5 )均减低。与未化疗组 (n =36 )相比 ,化疗后组 (n =14 )I区和总甲基化率均减低 (P <0 .0 5 ) ,Ⅱ区甲基化率也减低 ,但无统计学意义 (P >0 .0 5 )。化疗后组随甲基化率减低 ,mdr1表达升高 ,但尚无统计学意义 (P =0 .0 6 )。结论 :AL和MM患者骨髓mdr1基因表达水平与基因转录起始点上游 - 110和- 5 0处两个CCGG位点的甲基化程度呈负相关 ,且与 - 110处关系更密切。化疗后及耐药病人mdr1基因甲基化水平相对降低。化疗后mdr1基因表达增高与其甲基化水平降低有关。