PCR-荧光探针法检测分枝杆菌的临床应用价值

目的 比较PCR-荧光探针法和改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的一致性,探讨两种方法在临床上的应用价值.方法 应用PCR-荧光探针法检测69例改良罗氏培养阳性的分枝杆菌核酸,比较两种方法检测结果的一致率;两种方法检测结果不一致样本进行测序验证,以测序结果作为金标准,分析两种方法检测结果的正确率及不一致的可能原因.结果 两种方法检测总一致率为89.9%,结核分枝杆菌检测一致率为87.5%,非结核分枝杆菌检测一致率为90.6%.PCR-荧光探针法和改良罗氏培养法共有7例检测结果不一致,与测序结果比对后,改良罗氏培养法检测的正确率为94.2%,PCR-荧光探针法检测的正确率为92.8%.结论 操作简单、快速,灵敏的PCR-荧光探针法与作为传统金标准的改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的一致性良好、正确率高,可作为临床分枝杆菌感染诊断的重要检测手段.     

纳米孔测序检测痰液样本在肺结核诊断中的应用

目的 探讨纳米孔测序检测痰液样本对肺结核的诊断价值。方法 收集2021年10月至2023年8月在南宁市第四人民医院接受诊疗的75例疑似肺结核患者为研究对象,以临床综合诊断为标准,最终诊断为肺结核的68例患者为病例组,7例未诊断为肺结核的患者为对照组。收集患者痰液样本,进行纳米孔测序、抗酸染色涂片、结核分枝杆菌（TB）-DNA检测、基因结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增（gene Xpert MTB/RIF,简称X-pert）和分枝杆菌固体培养。结果 纳米孔测序的灵敏度（52.90%）、阴性预测值（17.90%）、准确率（57.33%）、Kappa系数（0.174）及曲线下面积（area under the curve,AUC）值（0.77,95%CI:0.64～0.89）显著优于其余4种病原学检测手段。结论 纳米孔测序检测痰液样本对肺结核的诊断能力优于抗酸染色涂片、TB-DNA检测、X-pert、分枝杆菌固体培养等传统病原学检测,但其与其他几种检测方法一样,单独使用时仍然存在漏诊率较高,诊断结果与实际结果的一致性较低的不足,因此应结合临床特征、影像学检查及实验室检测进行综合诊...     

国产HBeAg定量测定试剂的质量评价

摘要:目的：评价新开发的HBeAg时间分辨荧光免疫分析法(TrFIA）定量测定试剂在临床标本检测中的分析性能。 方法：用考核试剂（广州达瑞公司）和对照试剂（意大利DiaSorin S.p.A公司）检测对1 043例血清标本,并进行符合率、一致性、相关性等指标的统计分析。对差异样本用复核试剂（Roche公司）进行复核。 结果：1 043例标本用考核试剂与对照试剂检测结果的阳性符合率为98.8%,阴性符合率为100%,一致性检验Kappa值为0.986（P<0.05）,相关系数r=0.920,P＜0.01。对7个结果不一致样本进行重复试验及复核试验结果表明,其中2个差异样本重复试验结果仍为阴性,但复核试剂结果为阳性,另5个差异样本的重复试验结果与复核试剂判定结果一致,均为阳性。 结论：新开发的试剂与临床已在使用的试剂检测相关性良好,但是在对单个样本检测时由于方法学的原因,与化学发光法比较不具有检测速度和成本的优势。     

DNA芯片检测分枝杆菌的临床应用价值

目的：比较DNA-微阵列芯片法和改良罗氏法检测结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的一致性,探讨DNA-微阵列芯片法在临床上的应用价值。方法应用DNA-微阵列芯片法检测64例改良罗氏法阳性的分枝杆菌核酸,比较两种方法检测结果的一致率;两种方法检测结果不一致样本进行测序验证,以测序结果作为金标准,分析两种方法检测结果的正确率及不一致的可能原因。结果两种方法检测总一致率为93.8%,结核分枝杆菌检测一致率为87.5%,非结核分枝杆菌检测一致率为95.8%。DNA-微阵列芯片法和改良罗氏法共有4例检测结果不一致,与测序结果比对后,改良罗氏法区分结核和非结核的正确率为96.9%;DNA-微阵列芯片法正确率为93.8%,且能鉴定出7种常见分枝杆菌。结论 DNA-微阵列芯片法与作为传统金标准的改良罗氏法检测结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的一致性好、正确率高。操作简单、快速、灵敏、并且能鉴定出常见分枝杆菌,DNA-微阵列芯片法可作为临床分枝杆菌感染诊断的重要检测手段。     

乙型肝炎病毒耐药突变的焦磷酸测序与Sanger双脱氧链终止法检测试剂的比对及临床应用

目的:将检测乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)耐药突变位点的焦磷酸测序检测试剂与Sanger双脱氧链终止法(Sanger测序法,简称Sanger法)检测试剂进行临床比对,为临床诊断和个体化治疗提供参考。方法:分别用研制的焦磷酸测序检测试剂与Sanger法检测试剂检测415份临床慢性乙型肝炎(乙肝)患者的血清样本及30例对照血清样本,并与Sanger法检测试剂比对,计算焦磷酸测序检测试剂的特异度、灵敏度及总符合率,计算Kappa值,比较2种试剂检测结果的一致性。结果:与经典的Sanger法检测试剂比对,焦磷酸测序检测试剂的特异度为100%,灵敏度为99.82%,一致率为99.86%,受试者工作特征曲线下面积为0.999 4,两者间具有较强的一致性。结论:焦磷酸测序检测试剂适合于临床对HBV样本进行耐药性诊断,其特异度、灵敏度与Sanger测序法一致性较强,且具有检测速度快、操作方便、测序成本低等优点,能更快地对临床乙肝患者提供用药指导建议,具有良好的临床应用前景。     

结核感染T淋巴细胞斑点实验临床检测分析

目的探讨结核感染T淋巴细胞斑点实验(T-SPOT.TB)在临床检测结核病中的应用价值。方法利用T-SPOT.TB方法检测结核疑似患者,进行科室分布分析,同时与抗酸杆菌涂片、结核抗体实验、结核分枝杆菌DNA检测进行对比。结果 317例结核疑似患者中,76例T-SPOT.TB阳性,阳性率24.0%。潜伏性结核筛查科室阳性率为9.1%～25%;肺结核及肺外结核检测诊断中,阳性率为20.7%～66.7%。与其它实验室检测方法对比,T-SPOT.TB方法具有明显优势。结论 T-SPOT.TB是灵敏和特异的快速检测结核分枝杆菌感染的方法,在结核疑似患者筛查与诊断中具有较大临床应用价值。     

某国产HIV-1核酸定量检测试剂盒的应用性能评估

目的：对某国产人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）的临床应用性能进行评估。方法收集不同H IV感染状态人群的血液样品共计247例,分别使用 H IV-1被评估试剂与已被SFDA批准的对照试剂进行临床检验平行对比。比较两种方法之间的相关性和一致性。对比不符样本用国际公认的Roche公司生产的 HIV-1病毒载量检测试剂进行复核。结果共检测247例样本,被评估试剂与对照试剂检测结果一致的样本有233例,检测结果不一致的样本有14例（其中8例阴阳性结果不一致、6例定量结果对数值差异大于1）,14例不符样本用复核试剂检测确认后,均与被评估试剂检测结果一致。以复核试剂检测结果最终判断：被评估试剂的一致率为100．00％。对177例被评估试剂与对照试剂定量线性范围内样本进行统计分析,定量相关性为0．9671。结论被评估试剂与已上市的国内同类产品在检测功能上具有等效性,被评估试剂灵敏度、定量准确性与Roche检测结果一致性相近,高于对照试剂。     

新型B族链球菌胶体金免疫层析试纸条的临床应用评价

目的 探讨新型B族链球菌(GBS)胶体金免疫层析试纸条的临床检测效果。方法 选取202份女性的阴道或宫颈棉拭子标本,采用新型检测试剂与对照试剂作对比,进行临床应用评价。结果 新型试剂最低检出浓度为10⁵ CFU/ml,5～8 min内即可观察结果; 与对照试剂相比,考核试剂灵敏度更好,显色时间更短; 检测的202份临床标本中,与对照试剂相比,197例样本检测结果一致,其余5例样本检测结果不符,阳性符合率达97.5%,阴性符合率达97.54%,总符合率为97.52%,Kappa值0.948,一致性分析表明新型试剂与对照试剂具有很好的一致性。结论 该新型试剂能有效的辅助诊断B族链球菌感染,具有较高的临床应用价值。     

两种结核感染T细胞检测试剂盒性能评估

目的评估外周血结核分枝杆菌感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)两种试剂盒的检测性能。方法以英国Oxford Immunotec公司的T-SPOT.TB产品为参比试剂,以北京同生时代生物技术有限公司生产的TS-SPOT.TB产品为考核试剂。用两种试剂盒同时检测458份血液标本,其中临床标本408份来自金域集团5家连锁检验中心,体检标本50份来自金域体检中心,评估考核试剂与参比试剂的一致性。结果两种试剂的检测结果总一致率为98.03%(Kappa=0.96),其中,广州金域检验中心一致率为96.43%(Kappa=0.93);杭州金域检验中心一致率为97.73%(Kappa=0.95);福州金域检验中心一致率为98.44%(Kappa=0.97);成都金域检验中心一致率为98.75%(Kappa=0.97);沈阳金域检验中心一致率为100.00%(Kappa=1.00);金域体检中心两种试剂检测结果一致率达98.00%。结论国产考核试剂与进口参比试剂检测性能相当,国产试剂成本相对较低,对基层医院广泛开展结核病筛查及预防有较好的应用价值。     

鼻咽拭子中鼻病毒三种检测方法比较分析

目的 比较三种检测方法(病毒分离培养鉴定法、核酸序列测定法和PCR-荧光探针法)检测鼻咽拭子标本中鼻病毒(HRV)的可靠性。方法 采用盲法、对比试验设计。根据纳入标准和排除标准入组220例鼻咽拭子标本,分别用病毒分离培养鉴定法、核酸序列测定法和PCR-荧光探针法进行盲法检测,以评价三种检测方法的临床应用性能。结果 本次试验入组的220例鼻咽拭子样本中,病毒分离培养鉴定法检测结果为阳性的样本20例,核酸序列测定法检测结果为阳性的样本32例,PCR-荧光探针法检测结果为阳性的样本35例。与病毒分离培养相比,PCR-荧光探针法检测阳性符合率为100.00%,阴性符合率为92.50%,总符合率为93.18%;PCR-荧光探针法与病毒分离培养鉴定法检测结果一致性一般(kappa=0.692),与核酸序列测定法检测结果一致性较好(kappa=0.947)。结论 PCR-荧光探针法检测鼻咽拭子标本中的HRV可靠、准确、安全、简便、稳定,具有较高的临床应用价值。     

焦磷酸测序技术检测耐多药结核分枝杆菌

目的利用焦磷酸测序技术,建立结核分枝杆菌菌株耐多药检测方法,并与Bactec MGIT 960药敏法进行比较。方法设计rpoB、katG基因PCR扩增引物和焦磷酸测序引物,建立结核分枝杆菌菌株焦磷酸测序检测方法。利用新确立的焦磷酸测序法检测202株临床分离的耐多药结核分枝杆菌的利福平、异烟肼耐药性。结果与BACTEC MGIT 960法检测药物耐药性结果比较,焦磷酸测序检测多耐药结核分枝杆菌临床分离株的敏感性与特异性为72.8%[95%可信区间(confidence in-terval,CI):66.3%~78.4%]及90.0%(95%CI:80.1%~95.1%)。结论新确立的焦磷酸测序技术可快速检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼的耐药性,其可作为耐多药结核分枝杆菌药敏有效的检测工具。     

酶联免疫斑点技术和分枝杆菌改良罗氏固体培养法在肺结核辅助诊断中的价值

目的评价酶联免疫斑点技术(ELISPOT)和分枝杆菌改良罗氏固体培养法在肺结核辅助诊断中的应用价值。方法收集临床疑似肺结核的214例患者的血液和痰液,用ELISPOT技术(T-SPOT.TB试剂)分析血液标本中结核分枝杆菌特异性致敏T细胞的γ-干扰素释放情况;用酸性改良罗氏培养基进行痰液的分枝杆菌分离培养;用PNB固体培养法进行菌种初步鉴定,确定为结核复合群。比较两种方法在肺结核辅助诊断中的符合率和诊断效能。结果两种方法的阳性检出率差异无统计学意义(χ2=1.58,P=0.21),两法符合率为85.5%(183/214)。以临床确诊肺结核为金标准,固体培养法的敏感性为98.2%,特异性为100%,阳性预测值为100%,阴性预测值为98.1%,约登指数为0.98;T-SPOT.TB法敏感性为89.2%,特异性为83.5%,阳性预测值为85.3%,阴性预测值为87.8%,约登指数为0.73。结论 ELISPOT检测(T-SPOT.TB)对肺结核的诊断效能较好,检测周期较分枝杆菌固体培养方法短,在肺结核感染快速诊断和早期筛查中具有广泛应用前景。     

Xpert MTB/RIF检测痰标本结核分枝杆菌与利福平耐受性的临床应用研究

目的分析Xpert MTB/RIF方法用于临床快速检测结核分枝杆菌(MTB)与利福平耐受性的临床意义。方法收集2015年1-12月在惠州市结核病防治研究所及5个县区医院结核科就诊的肺结核患者痰标本552例,进行涂片镜检、Xpert MTB/RIF核酸检测和改良罗氏培养,并对培养阳性者进行药敏实验。评价各种方法 MTB检测灵敏度与特异度,对比传统药敏方法和Xpert MTB/RIF检测利福平耐药性的结果并分析。结果 Xpert MTB/RIF与改良罗氏培养法对MTB检测结果相比,敏感度95.3%、特异度93.1%;耐药性对比结果中,所有阳性标本中利福平耐药的敏感度82.1%,特异度97.8%;Xpert MTB/RIF检测MTB分级与改良罗氏培养分级一致性分析中,kappa=0.688,提示两者结果具有良好的一致性。结论 Xpert MTB/RIF可用于临床早期快速检测结核分枝杆菌与利福平耐药检测的筛查,有利于临床快速决策。     

利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术检测333例肺结核患者痰标本的结果分析

目的探讨采用利福平(RFP)耐药实时荧光定量核酸扩增技术(Xpert MTB/RIF)检测肺结核患者痰标本的结果并进行分析。方法选择2015年1~12月该所就诊的肺结核患者痰标本333例,分别进行抗酸染色涂片镜检、Xpert MTB/RIF、传统罗氏培养法检测,使用Xpert MTB/RIF检测痰标本的结核分枝杆菌(MTB)和RFP耐药的敏感度和特异度,并与传统罗氏培养法检测结果进行一致性比较。结果 Xpert MTB/RIF检测MTB的敏感度为93.6%,特异度为92.0%,2种方法进行Kappa检验,Kappa=0.82,具有良好的一致性;RFP耐药的敏感度和特异度分别为78.6%和93.4%,2种方法的Kappa=0.78,具有良好的一致性。结论应用Xpert MTB/RIF检测肺结核患者痰标本,检测速度快,准确性高,快速获得患者是否耐药的结果,可指导临床准确用药,值得临床应用和推广。     

胶体金法快速检测结核分枝杆菌复合群的效果分析

目的研究分析胶体金法快速检测结核分枝杆菌复合群的效果。方法选择分枝杆菌标准菌株15株和临床菌株435株进行比较研究,通过免疫色谱法试剂盒以及传统生化法鉴定非结核分枝杆菌与结核分枝杆菌复合群。结果将传统生化法作为金标准,结果显示胶体金法检测结核分枝杆菌复合群的灵敏度为98.5%,特异度为99.4%,阳性预期值为99.6%,阴性预期值为97.7%。免疫色谱法试剂盒检测结核分枝杆菌复合群的灵敏度为98.5%,特异度为100.0%,阳性预期值为100.0%,阴性预期值为97.7%;和传统的生化方法进行比较发现,两种检测方法均具有较高的一致性。结论胶体金法在临床实验室具有较高的应用价值,可快速鉴定结核分枝杆菌复合群。     

三种化学发光法检测新型冠状病毒（SARS-CoV-2）抗体试剂盒的临床应用评价

目的 评价三种新型冠状病毒（SARS-CoV-2）抗体化学发光试剂盒的检测性能,研究SARS-CoV-2 抗体检测的临床应用价值。方法 采用37 例临床确诊新型冠状病毒肺炎（COVID-19）患者恢复期血清样本和100 例对照患者血清样本,对三个不同厂家的化学发光新型冠状病毒抗体检测试剂盒进行评估。绘制ROC 曲线分析三种试剂的检测性能。利用Kappa 统计分析三种试剂的检测一致性。结果 对于IgM 抗体检测,试剂A 和试剂B 具有非常好的检测性能,尤其是试剂B 性能最优,临床敏感度为56.76%,临床特异度为99%;对于IgG 抗体检测,三种试剂均具有非常好的检测性能,三种试剂的临床特异度均为97.00%,而试剂C 的临床敏感度最高,为97.29%。对于IgM 抗体检测,试剂A 与试剂B 检测结果具有中度一致性（Kappa=0.508,P<0.05）,试剂C 与试剂B 检测结果仅具有微弱一致性（Kappa=0.065,P ≥ 0.05）;对于IgG 抗体检测,试剂A 与试剂C 检测结果具有高度一致性（Kappa=0.654,P<0.05）,试剂A 与试剂B 检测结果为弱一致性（Kappa=0.102,P ≥ 0.05）。结论 三种化学发光法SARS-CoV-2 IgM 和IgG 抗体检测试剂盒均具有一定的临床敏感度和特异度,但各厂家产品的检出一致性相差较大,因此产品性能的标准化和工艺标准化亟待解决。     

应用MTD试剂盒对结核分枝杆菌复合群进行快速检测的评价

目的应用结核分枝杆菌直接检测（MTD）试剂盒对临床痰液样本及分离的结核分枝杆菌复合群，进行检出率和常规菌型鉴定法符合率的比较和评价。方法将10株标准菌种（其中1株为H37Rv、9株为非结核分枝杆菌）、94株临床分离菌株（其中48株经常规生化方法分型鉴定为结核分枝杆菌，46株分型法鉴定为非结核分枝杆菌）和40份临床痰标本分别用法国生物梅里埃公司生产的AMPLIFIED—MTD试剂盒进行检测。结果结核分枝杆菌复合群检测均呈阳性，非结核分枝杆菌检测均呈阴性，符合率均达到100％。临床痰标本用MTD检测的阳性检出率为65％（26／40），明显高于直接涂片法的12％（5／40）、培养方法的12％（5／40）、集菌涂片法的25％（10／40）。结论MTD试验是一套新的生物学检测技术，具有快速、灵敏的特点。     

基因芯片技术在分枝杆菌菌种鉴定和结核耐药性检测中的应用及评价

目的探讨基因芯片技术在结核病快速诊疗中的应用价值。方法对抗酸染色涂片阳性的肺结核患者痰标本同时进行基因芯片菌种鉴定和BACTEC MGIT 960培养,对结核阳性的样本分别用以上两种方法检测利福平和异烟肼的耐药性。以培养法为参考方法,评价基因芯片法菌种鉴定和耐药检测的敏感度、特异度和符合率。采用Kappa检验分析两种方法的一致性。结果 656例涂片阳性的患者中,两种方法各检出非结核分枝杆菌21例,符合率为100%。耐药性检测发现,基因芯片对利福平的敏感度为87.8%(86/98),特异度为96.0%(410/427),符合率为94.5%(496/525),Kappa值为0.84,P0.05;对异烟肼的敏感度为81.9%(96/116),特异度为91.7%(375/409),符合率为89.5%(470/525),Kappa值为0.71,P0.05;两种药物药敏结果总符合率为92.0%(966/1 050)。结论基因芯片技术能够准确地筛选出非结核分枝杆菌;对利福平和异烟肼耐药性检测与培养法有很好的符合率和高度一致性,而且能够快速、准确地检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性,在结核病的快速诊疗领域具有广阔的应用前景。     

一种新型肠道病毒核酸检测试剂的初步评价

目的评价新型磁珠法肠道病毒核酸检测试剂(以下简称"磁珠法试剂")的灵敏度和精密度。方法对204份标本分别用磁珠法试剂和Trizol法试剂进行肠道病毒RNA定性检测,评价其一致性和等效性,并比较两种试剂的灵敏度和精密度。结果磁珠法试剂与Trizol法试剂的阳性符合率为97.58%,阴性符合率为100.00%,总符合率为98.53%,Kappa值为0.969 4。磁珠法试剂的灵敏度高于Trizol法试剂。对两个中、低浓度标本各重复检测10次,磁珠法试剂的变异系数(CV)为0.84%、0.96%,Trizol法试剂为2.01%、1.43%。结论新型磁珠法试剂盒与Trizol法试剂盒具有较高的一致性,其灵敏度、精密度优于Trizol法试剂盒,可以用于临床肠道病毒核酸检测。     

基因芯片技术在分枝杆菌菌种鉴定和耐药性分析中的应用

目的探讨基因芯片技术在分枝杆菌菌种鉴定和耐药性分析中的应用价值。方法收集2014年1月—2016年12月宜昌市第三人民医院抗酸染色镜检阳性的肺结核患者痰样本680例,同时采用基因芯片法和培养法进行菌种鉴定,对被鉴定为结核分枝杆菌(MTB)复合群的样本分别再采用以上2种方法检测MTB对利福平和异烟肼的耐药性。以培养法作为参考方法,评价基因芯片法菌种鉴定的符合率。以药物敏感性试验结果为金标准,计算基因芯片法MTB耐药检测的敏感性、特异性和符合率,并比较其与金标准的一致性。结果基因芯片法检出31例非结核分枝杆菌(NTM),培养法检出32例NTM,符合率为96.88%。与药物敏感性试验相比,基因芯片法检测MTB对利福平耐药性的敏感性为89.81%,特异性为93.55%,符合率为92.80%,Kappa值为0.82,P0.05;检测MTB对异烟肼耐药性的敏感性为83.06%,特异性为91.39%,符合率为89.48%,Kappa值为0.73,P0.05。结论基因芯片法能够准确地筛选出NTM,在结核病诊断和耐药监测中敏感性和特异性较高,与传统培养法及药物敏感性试验有很好的一致性,且更高效、快捷、安全,具有较大的应用价值。