兔抗人sCR1抗体制备及临床初步应用

目的原核表达人sCR1分子胞外区,制备多克隆抗体,建立双抗体夹心ELISA法。方法提取人总RNA进行RT-PCR扩增合成cDNA,以cDNA为模板,构建重组表达质粒pET28a-sCR1,转化大肠埃希菌,用IPTG诱导表达重组人sCR1融合蛋白,以其免疫家兔制备抗血清。经纯化并鉴定特异性后建立双抗体夹心ELISA法检测血清中sCR1水平,探讨其对慢性病毒性肝炎及活动性SLE患者的诊断价值。结果研制的兔抗人sCR1抗体ELISA法效价为125 000,纯度和特异性较好。30例健康献血者血清中sCR1为(39.8±7.9)ng/ml;22例慢性病毒性肝炎患者为(48.5±24.7)ng/ml;9例活动性SLE患者为(36.3±17.6)ng/ml。结论制备的兔抗人sCR1抗体效价及特异性较好,用其建立的双抗体夹心ELISA法有望用于临床血清学的诊断。     

兔抗凋亡诱导因子多克隆抗体的制备、纯化与鉴定

背景:凋亡诱导因子是存在于线粒体膜间隙中的黄素蛋白,它不仅具有氧化还原和电子传递功能,还具有促细胞凋亡功能,从而在维持细胞正常生理活动中具有重要作用.目的:制备抗凋亡诱导因子多克隆抗体并进行特性鉴定.设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-09/2008-08在新乡医学院免疫学研究中心完成.材料:新两兰大白兔雌性2只.体质量1.9～2.1 kg;JurkatE6-1细胞系购自美国ATCC公司.食管癌组织取自新乡医学院普通外科手术患者.抗原肽-KLH由上海华大天源生物科技公司合成.CNBr活化的Sepharose4B购自美国Pharmacia公司.方法:利用美国过敏和感染疾病研究所(NIAID)主办的抗原表位分析网站(http://beta.immuneepitope.org/home.php)的在线软件对凋亡诱导因子蛋白的氨基酸序列进行分析设计凋亡诱导因子抗原肽,制备多克隆抗体并纯化.主要观察指标:采用间接ELISA、Western blot、免疫组织化学3种方法对获得的多克隆抗体进行特性鉴定.结果:间接ELISA法检测显示,血清抗凋亡诱导因子抗体的效价达到1:128000.Western blot结果显示,存在Mr67000条带.免疫组织化学检测结果显示,在食管癌细胞的胞质中有棕黄色的阳性颗粒存在,说明此抗体也可以用于免疫组织化学染色.结论:实验获得了高效价的特异性的抗凋亡诱导因子抗体.     

鼠抗人肥大细胞类糜蛋白酶N端片段抗体的制备与鉴定

目的:在大肠杆菌中表达人肥大细胞类糜蛋白酶(hMCC)N端片段(hMCC-N),并制备其鼠源性多克隆抗体。方法:通过PCR法扩增hMCC-N端基因片段,将其克隆至pMAL-c2x原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白的表达,通过Amylose树脂亲和层析纯化目的蛋白,以纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备鼠抗hMCC-N端片段多克隆抗体,并以间接ELISA测定抗体效价,以Westernblot鉴定抗体的特异性。结果:PCR扩增得到360bp的hMCC-N端基因片段,克隆入表达载体pMAL-c2x,构建了与标签蛋白麦芽糖结合蛋白基因融合表达载体pMAL-c2x/hMCC-N,融合蛋白在大肠杆菌中得到了稳定表达,并经亲和层析,纯化出可溶性的重组蛋白,用其免疫小鼠,获取了鼠抗hMCC-N端片段的多克隆抗体,ELISA结果显示效价达1∶12800,Westernblot分析表明该抗体能特异结合hMCC。结论:成功地制备了效价高、特异性较强鼠抗hMCC-N端片段抗体,为进一步建立hMCC的ELISA检测方法打下了良好的基础。     

抗人S100A7抗体的制备

目的 制备兔抗人S100A7（hS100A7）多克隆抗体。方法制备原核表达重组人S100A7,用纯化的hs100A7为免疫原免疫新西兰大白兔,制备兔抗人S100A7抗体,并以问接ELISA测定抗体效价,以Westernblot和免疫组织化学法鉴定抗体的特异性。结果成功制备了重组人S100A7及其抗体,ELISA结果显示抗体效价达1：16000,Western blot和组织化学法分析表明该抗体能特异结合hS100A7。结论以纯化的重组人S100A7为免疫原,成功地制备了效价高、特异性强的兔抗人S100A7抗体。     

抗卵巢上皮癌单克隆抗体的制备和鉴定

以人的浆液性卵巢上皮癌细胞系ＨＯ－８９１０为抗原，制备分泌抗卵巢癌单克隆抗体的杂交瘤，经间接免疫荧光组化鉴定证实。制备的单克隆抗体ＯＣ１Ｃ３与ＨＯ－８９１０呈强阳性反应，与其他肿细胞系则无反应或反应极弱。在冰冻切片中，单克隆抗体ＯＣ１Ｃ３与卵巢恶性肿瘤呈强阳性反应（７／８），与绒癌有部分交叉反应（１／２），与正常卵巢和胚胎组织无反应。结果表明ＯＣ１Ｃ３是卵巢恶性肿瘤的一种特异性抗原的单克隆抗体。为     

免抗凋亡诱导因子多克隆抗体的制备、纯化与鉴定

背景：凋亡诱导因子是存在于线粒体膜间隙中的黄素蛋白，它不仅具有氧化还原和电子传递功能，还具有促细胞凋亡功能，从而在维持细胞正常生理活动中具有重要作用。目的：制备抗凋亡诱导因子多克隆抗体并进行特性鉴定。设计、时间及地点：单一样本观察，于200609／200808在新乡医学院免疫学研究中一心完成。材料：新西兰大白兔雌性2只，体质量1．9-2．1kg；JurkatE6-1细胞系购自美国ATCC公司。食管癌组织取自新乡医学院普通外科手术患者。抗原肽KLH由上海华大天源生物科技公司合成。CNBr活化的Sepharose4B购自美国Pharmacia公司。方法：利用美国过敏和感染疾病研究所（NIAID）主办的抗原袁位分析网站（http：／／beta．immuneepitope．org／home．php）的在线软件对凋亡诱导因子蛋白的氨基酸序列进行分析设计凋亡诱导因子抗原肽，制备多克隆抗体并纯化。主要观察指标：采用间接ELISA、Westernblot、免疫组织化学3种方法对获得的多克隆抗体进行特性鉴定。结果：间接EUSA法检测显示，血清抗凋亡诱导因子抗体的效价达到1：128000。Westernblot结果显示，存在Mr67000条带。免疫组织化学检测结果显示，在食管癌细胞的胞质中有棕黄色的阳性颗粒存在，说明此抗体也可以用于免疫组织化学染色。结论：实验获得了高效价的特异性的抗凋亡诱导因子抗体。     

用基因免疫方法制备小鼠抗人OAT1多克隆抗体

[目的]用基因免疫方法制备小鼠抗人有机阴离子转运蛋白1(hOAT1)多克隆抗体.[方法]提取人肾组织总RNA,用RT-PCR方法扩增hOAT1基因中免疫源性较强的细胞内亲水序列片段,克隆到载体pBQAP-TT中,鉴定正确后用基因枪与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi-FIT3L同时免疫小鼠,12周后ELISA方法测定血清抗体滴度,鉴定抗体的特异性和定位表达.[结果]扩增出207 bp的hOAT1细胞内亲水序列片段,构建的基因免疫载体经酶切及序列分析鉴定正确.Western blot结果显示小鼠抗hOAT1多克隆抗体识别人肾皮质膜蛋白55 kD的hOAT1.免疫组化结果提示hOAT1定位表达在人近端肾小管上皮细胞基底侧细胞膜.[结论]用基因免疫的方法可以成功制备高滴度和特异性抗hOAT1多克隆抗体.     

抗PD-1抗体和抗PD-L1抗体临床使用的护理

分析30例使用过抗PD-1的抗体及抗PD-L1抗体病人的临床资料,并结合国内外文献,分享临床工作中使用抗PD-1的抗体及抗PD-L1抗体的护理。     

特异性抗人cyclin D1人源单链抗体的筛选

目的 从噬菌体抗体库中筛选人源性抗人cyclinD1蛋白的单链抗体并进行鉴定.方法 以原核表达并用Ni-NTA Agarose纯化的重组人cyclinD1蛋白为抗原,通过"吸附-洗脱-扩增"淘选过程从噬菌体抗体库中筛选特异性抗人cyclinD1蛋白的单链抗体,通过ELISA方法对获得抗体的特异性和结合活性进行分析鉴定.结果 经过4轮筛选,获得7株能与人cyclinD1蛋白结合的阳性克隆,其中3株噬菌体的可溶性表达单链抗体能与人cyclinD1蛋白有特异性结合活性.结论 利用噬菌体抗体库技术可以不经免疫过程制备出特异性的人源性抗人cyclinD1抗体.     

RhoE在乳腺癌中的表达及与KiSS-1的相关性

目的 研究分析RhoE 在乳腺癌中的表达与KiSS-1 和临床病理参数的关系, 探讨乳腺癌生长、侵袭和转移的分子机制.方法 采用免疫组织化学方法检测106 例乳腺癌组织中RhoE 和KiSS-1 的表达情况,分析RhoE 和KiSS-1 与乳腺癌临床病理特征的关系及二者的相关性.结果 RhoE 和KiSS-1 在乳腺癌组织中的表达与有无淋巴结转移和临床分期有关(P ＜0.05),与患者年龄、绝经期、肿瘤T 分期、M 分期无关(P ＞0.05).伴随着淋巴结转移和临床分期的增加,癌组织中RhoE和KiSS-1 的表达显著下调或缺失,差异有统计学意义(P ＜0.05).随着乳腺癌组织分化程度的降低,RhoE 的表达下调或缺失,差异有统计学意义(P ＜0.05);但与KiSS-1 的表达则无关,差异无统计学意义(P ＞0.05).乳腺癌组织中RhoE 和KiSS-1的表达呈正相关(r ＝0.682,P ＜0.05).结论 RhoE和KiSS-1 的表达与乳腺癌临床分期和淋巴结的转移相关,RhoE 同时还和乳腺癌的组织分化程度相关.其相互作用在乳腺癌细胞的增殖、侵袭和转移中起重要作用,RhoE 可能作为一种肿瘤调节蛋白发挥重要调节作用.     

KiSS-1基因对膀胱癌细胞系T24生物学行为影响的研究

目的 探讨肿瘤转移抑制基因KiSS-1对膀胱癌细胞T24的生物学影响.方法 将构建好的含771 bp大小的基因片段的真核表达质粒pcDNA3.1(+)/KiSS-1及空载体pcDNA3.1(+)用阳离子脂质体介导采用基因转染技术转染膀胱癌细胞T24,观察KiSS-1mRNA的表达、细胞生长能力、增殖情况及细胞侵袭力的变化.结果 pcDNA3.1(+)/KiSS-1 成功转染T24细胞,KiSS-1 mRNA 表达阳性,而正常细胞和空载体组为阴性;转染目的基因后细胞生长曲线、平板克隆形成率与正常细胞及转染空质粒细胞组无显著性差异( P＞0.05);转染目的基因后的细胞组穿透Millicell-PCF膜的细胞数较转染空质粒组及正常细胞组明显减少( P＜0.05),细胞侵袭能力明显下降(P＜0.05).结论 KiSS-1基因对膀胱癌细胞T24的生长、增殖无影响,但可抑制其侵袭力.     

抗HCCR单克隆抗体的制备及其鉴定

目的制备抗人宫颈癌癌基因（HCCR）单克隆抗体（mAb）,并进行鉴定。方法以HCCR重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,常规筛选杂交瘤细胞。腹水诱导法制备抗人HCCR单克隆抗体,并经蛋白A亲合层析进行纯化。用Western blot和免疫荧光等方法检测HCCR mAb的特异性。用纯化HCCR蛋白进行包被,建立间接ELISA方法,检测系列稀释的HCCR mAb,确定其灵敏度。结果筛选出2株分泌抗人HCCR mAb的杂交瘤细胞株。Western blot结果表明抗人HCCR抗体能与HCCR蛋白特异性结合,免疫荧光结果显示肝癌HepG2细胞中胞浆和胞膜均呈阳性染色。间接ELISA方法检测HCCR mAb的灵敏度可达到1μg/L。结论成功制备并鉴定了特异性抗人HCCR mAb的杂交瘤细胞株,为进一步深入研究HCCR的生物学特征和临床应用打下基础。     

重组人胱抑素C及其多克隆抗体的制备

目的探讨重组人胱抑素C（Cys C）及其多克隆抗体的制备。方法根据大肠埃希菌编码蛋白的特性设计Cys C编码基因序列,人工合成目的基因,并将其在大肠埃希菌中表达,目的蛋白经亲和层析纯化后免疫新西兰大白兔;采用Western blot和酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测兔血清重组人Cys C及其多克隆抗体。结果制备的重组人Cys C纯度达90%以上,抗重组人Cys C抗体具有很好的结合效价和特异性。结论制备的重组人Cys C及其抗体可用于进一步的实验研究和临床应用。     

白念珠菌CDRl和CDR2多克隆抗体制备及鉴定

目的：制备特异性白念珠菌外排泵（CaCDRl和CaCDR2）的多克隆抗体,为研究CaCDRl和CaCDR2在介导白念珠菌耐药中的作用奠定基础。方法：利用Pfam网络预测程序和Blastn、Blastx程序设计引物．采用PCR法获得白念珠菌SC5314基因组上486bp长度的CDRl和CDR2目的基因,并将其克隆入pET-28a（＋）质粒,构建重组表达质粒后,转化人大肠埃希菌BL21宿主菌内,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导下表达6xHis融合蛋白;经镍柱纯化蛋白后,免疫新西兰兔,制备兔抗多克隆抗体。用ELISA及蛋白印迹法检测该抗体的效价和特异性。结果：ELISA法检测所制备抗体的效价最终定为1：12800,工作浓度定为1：800;蛋白印迹法检测结果显示,抗体能与CaCDRl及CaCDR2蛋白特异性结合。结论：成功获得具有较高效价和良好特异性的CaCDRl、CaCDR2多克隆抗体．可用于白念珠菌CaCDRl、CaCDR2蛋白水平的鉴定。     

抗人非小细胞肺癌单克隆抗体的制备及鉴定

摘要：目的：制备抗人非小细胞肺癌（NSCLC）的单克隆抗体(McAb),并对其生物学特性及特异性进行鉴定。 方法：以人肺腺癌细胞株SPC-A1为抗原,免疫BALB/c小鼠,常规细胞融合,间接细胞ELISA法筛选阳性细胞克隆;多种细胞间接ELISA及间接免疫荧光法鉴定其特异性;western blot分析其特异性结合抗原的相对分子量;免疫组化染色分析单抗的组织特异性。 结果：得到1株高效价的、稳定分泌IgG1抗人NSCLC单抗的细胞株（NJ488-1）,纯化后效价为2×10⁶;间接细胞ELISA 及间接免疫荧光法证实NJ488-1能特异地识别肺癌细胞系,其识别抗原定位于SPC-A1细胞胞浆区;western blot显示NJ488-1特异性结合的抗原相对分子量(Mr)为70 000左右;免疫组化结果表明NJ488-1与NSCLC组织有强阳性反应。 结论:成功地制备并鉴定了抗人NSCLC单抗NJ488-1,为肺癌的进一步研究及NJ488-1的临床应用奠定了基础。     

抗精子抗体与抗心磷脂抗体在不孕女性患者诊断中的价值

目的探讨抗心磷脂抗体（ACA）和抗精子抗体（AsAb）在女性不孕诊断中的价值。方法选取2012年1～12月湖南省妇幼保健院确诊为不孕症的200例女性患者及健康体检者100例,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测2组血清抗精子抗体（AsAb）、抗心磷脂抗体（ACA）并比较不孕症组与对照组2项抗体的阳性率。结果血清2项生殖免疫性抗体阳性者79例,阳性率39．5％;不孕患者组AsAb阳性率25．5％（51／200）与健康对照组AsAb阳性率1％（1／100）比较,差异有统计学意义（P=0．000）;不孕患者组AcA阳性率为24％（48／200）与健康对照组AcA阳性率1％（1／100）比较,差异有统计学意义（P=0．000）。AsAb-IgG、AsAb-IgM、AsAb-IgA和ACA-IgM、ACA-IgG阳性率与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）;ACA-IgA阳性率与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;AsAb-IgM和ACA-IgG在不孕不育组内与其他类型抗体阳性率比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。AsAb、ACA阳性率在不同年龄段间与对照组比较,3组差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论AsAb、ACA是引起不孕不育的重要的免疫因素,且AsAb-IgM和ACA-IgG与女性不孕不育的关系更加紧密。这些抗体对不同年龄人群的不孕不育患者均有影响,因此AsAb、ACA的检测对免疫性因素引起不孕不育患者的诊断和治疗具有临床价值。     

卵巢癌患者外周血单个核细胞SULT1A1、ICAM5基因单核苷酸多态性的研究

目的探讨硫酸基转移酶（sulfob-ansfer踮e,SULT）1A1、细胞间粘附分子（IcAM5）基因多态性与女性卵巢癌易感性的关系。方法采外周血DNA后用等位基因特异性扩增法（allelespecificamplification,ASA）检测淄博市92例正常对照者和97例卵巢癌患者SULTIA1、ICAM5基因多态性分布,分别比较正常组和病例组各种基因型分布频率的差异,并进行统计学分析。结果（1）SULT1A1Arg／Arg、Arg／His、His／His三种基因型分布在对照组和病例组之间的差异无显著意义（P=0．082）;但与Arg／Arg基因型相比,Arg／His、His／ms危险度呈增加趋势（P=0．035）;病例组和对照组His等位基因频率差异有统计学意义．（2）ICAM5基因各基因型分布频率在病例组和对照组问的差异无显著意义（P=0．927）。结论SULT1A1His等位基因与汉族女性卵巢癌的发生相关,可能成为卵巢癌早期基因诊断的一个指标。