地塞米松对肺损伤小鼠肺巨噬细胞TLR4原位表达的影响

目的:探讨地塞米松(DEX)对失血性休克诱导的急性肺损伤小鼠肺巨噬细胞TLR4原位表达的影响.方法:C57BL/6雄性小鼠45只,复制失血性休克诱导的急性肺损伤模型前经鼻分别滴入PBS、PBS+20ug DEX,阴性空白对照组经鼻滴入PBS后仅与予心脏穿刺,分别于0h、1h、2h、4h和6h时取出小鼠的肺组织.通过HE染色法检测肺组织病理,免疫荧光双染检测肺巨噬细胞TLR4表达.结果:失血性休克后6h内肺巨噬细胞TLR4的表达呈上升趋势并于6h时达到峰值,DEX干预组可见显著抑制肺巨噬细胞TLR4表达.结论:地塞米松能显著抑制失血性休克诱导的急性肺损伤小鼠肺巨噬细胞TLR4原位表达,改善肺部病理改变.     

乌司他丁对创伤失血性休克大鼠肺炎症介质及其信号通路miR-146a调控TLR4/NF-κB的影响研究

目的探讨乌司他丁对创伤失血性休克大鼠肺炎症介质及其信号通路miR-146a/TLR4/NF-κB的影响。方法将60只SD大鼠经股动脉放血制作休克模型,采用随机数字表法分为A、B、C三组,每组20只,其中A组不予复苏,B组休克后60 min给予醋酸钠林格液复苏,C组采用醋酸钠林格液联合乌司他丁复苏。采集大鼠复苏后肺组织,对肺组织中miR-146a、TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6以及IL-10的mRNA水平予以检测,采用Western blotting对肺组织中TLR4、NF-κB蛋白相对表达量予以检测,对三组大鼠肺组织病理学变化予以观察。结果与A组、B组相比,C组大鼠miR-146a、IL-4、IL-10 mRNA水平提高,TNF-α、IL-1、IL-6水平下降,差异有统计学意义(P0.05);三组大鼠肺组织TLR4、NF-κB蛋白表达水平相比,C组低于A组、B组,差异有统计学意义(P0.05)。结论乌司他丁能够通过增强miR-146a表达复苏创伤失血性休克大鼠,对TLR4/NF-κB信号通路起到负反馈调控作用,维持促炎因子与抑炎因子平衡,对肺组织具有保护作用。     

Toll样受体4突变对失血性休克致小鼠急性肺损伤的影响

目的：探讨Toll样受体4（TLR4）突变在单纯性失血性休克（无复苏）所致小鼠急性肺损伤（ALI）中的作用及机制。方法：以TLR4基因突变的C3H／HeJ品系及TLR4野生型的CBA品系小鼠为研究对象，每组20只。心脏穿刺复制失血性休克模型，在不同时间点取出肺组织，观察肺组织病理形态变化；通过逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）半定量方法检测肺组织TLR4 mRNA的表达水平；用凝胶电泳迁移（EMSA）法检测肺组织中核因子-kB（NF-kB）的量。结果：失血性休克刺激后，基因突变小鼠肺组织中性粒细胞浸润、红细胞渗出较野生型小鼠明显减轻；基因突变小鼠肺组织TLR4 mRNA表达及NF-kB活性变化不明显，而野生型小鼠TLR4mRNA在2、4和6h表达增加，NF-kB在失血性休克后1和2h活性显著增加。结论：TLR4在失血性休克所致ALI中起重要作用，其突变可减轻失血性休克所致的ALI。     

车祸后失血性休克1例急诊处理体会

1 临床资料 1.1 基本资料患者男性,27岁,山东人,因洒后交通事故致左臂畸形,右耳缺失,头面部多处挫裂流血,具体时间不详,被路人发现后拨打120,由急牧车送至我院抢救.     

米非司酮药物流产后失血性休克2例

由于米非司酮的问世，用药物终止早孕的研究取得突破性进展。用该药终止早孕被公认为是一种安全、有效、方便的非手术终止妊娠的方法。然而药物终止早孕仍然存在着出血多、出血时间长，部分病人有大出血需急诊清宫等问题，故用药后随访的重要性应引起医师的足够重视。我县...     

失血性休克的治疗

失血性休克在外科休克中很常见.多见于大血管破裂,腹部损伤引起的肝、脾破裂,胃、十二指肠出血,门静脉高压症所致的食管、胃底静脉曲张破裂出血等.通常在迅速失血超过全身总血量的20%时.即出现休克.主要表现为中心静脉压(CVP)降低,回心血量减少和一氧化碳(CO)下降所造成的低血压.     

TLR2与TLR4在大肠癌组织中的表达特点

目的 观察Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在大肠癌组织和大肠癌细胞株上的表达特点.方法 采用SP免疫组化法检测70例大肠癌组织和配对癌旁相对正常组织TLR2,TL4的表达,采用免疫荧光流式细胞术检测TLR2,TLR4在大肠癌细胞株Lovo和SW480细胞上表达的平均荧光强度及阳性细胞率.结果 TLR2在大肠癌组织上的表达明显强于癌旁组织(X2=13.629,P=0.003),而TLR4的表达在大肠癌组织与癌旁组织差异元显著性(P＞0.05).根据平均荧光强度及阳性细胞率,TLR2,TLR4在大肠癌细胞株Lovo和SW480上基本无表达.结论 TLR2可能与大肠癌的疾病过程密切相关.     

失血性休克复苏的新进展

目的综述失血性休克液体复苏的研究新进展。方法通过查阅有关文献进行分析总结。结果关于失血性休克复苏液体选择仍存在争议,传统的复苏方法正受到新的复苏方法的挑战。结论目前认为HS、HSD是失血性休克复苏液体较好选择,新的复苏方法—即限制(低压)复苏、延迟复苏和低温复苏正在成为研究热点。     

宫外孕失血性休克患者术后护理观察

目的 探讨宫外孕失血性休克患者的紧急抢救后护理以及护理对手术疗效的影响.方法 选取在该院进行治疗的宫外孕并失血性休克的典型病例22例,对其术后护理措施进行了分析总结.结果 通过及时有效的术后护理后,患者的治愈率提高,恢复速度提升,术后并发症出现率降低,患者的预后得到有效改善.结论 手术后有效的护理是手术成功的重要保障,对提高手术成功几率以及帮助病人恢复等具有重要意义.     

TLR2和TLR4在原因不明复发性流产绒毛和蜕膜中的表达及其意义

目的本实验通过检测原因不明复发性流产(URSA)患者和健康早孕者TLR2和TLR4在子宫绒毛和蜕膜中的表达,及外周血清中TNF-α及IL-10的水平,初步探讨TLR2和TLR4与URSA存在相关性,以及在URSA发生发展中的可能途径。方法前瞻性研究2008~2009年在浙江大学医学院附属妇产科医院和杭州市第一人民医院门诊患者。年龄在25~35周岁,孕龄<12周。将有≥3次自然流产的URSA患者作为研究组;将曾有正常生育史,本次要求行人工流产终止妊娠的早孕健康妇女作为对照组,分别选择20例。免疫组化检测TLR2和TLR4在两组绒毛和蜕膜中的表达;用ELISA法检测血清TNF-α及IL-10的水平,比较是否存在差异性。结果①TLR2在两组绒毛、蜕膜中表达差异无统计学意义(P>0.05);②TLR4在研究组绒毛、蜕膜表达明显增强,有显著统计学意义(P<0.05);③TNF-α在研究组中的水平明显增高,有显著统计学意义(P<0.05);IL-10在两组中的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TLR4可能是通过释放过量的Th1型细胞因子,导致Th1/Th2失衡,从而极可能参与URSA的发病。     

体外循环围手术期单核细胞TLR4表达的动态观察

目的研究体外循环围手术期不同时点Toll样受体4（TLR4）的表达变化。方法选取20例体外循环下心内直视手术病人，分别于麻醉诱导前（T1）、体外循环前（T2）、体外循环后即刻（T3）、体外循环后4h（T4）、体外循环后24h（T5）抽取外周静脉血，分离单核细胞，用逆转录聚合酶联反应（RT—PCR）法检测TLR4的表达变化。结果与术前比较，体外循环前、体外循环结束后即刻单核细胞TLR4的表达下调，体外循环结束后4h表达上调，体外循环结束后24h进一步升高。结论体外循环围手术期，TLR4的表达呈现动态变化，TLR4可能与体外循环术后炎症反应等病理生理有一定关系。     

小鼠TLR4基因的克隆和序列分析

目的:克隆小鼠TLR4基因的全长编码区cDNA并进行序列分析. 方法:利用RT-PCR方法,从Balb/c小鼠脾组织细胞mRNA中扩增TLR4基因全长cDNA,并将其连接到pcDNA3.1( )载体上,进行测序和核酸分析.结果:扩增得到的小鼠TLR4基因cDNA全长2 508 bp,编码536个氨基酸, Blast结果分析表明,该cDNA与基因库中发表的序列(NM021297)具有100%的同源性.结论:获得小鼠TLR4基因的克隆,为进一步研究转基因免疫干预奠定了基础.     

Toll样受体4在乙型肝炎组织及细胞株HepG2/HepG2.2.15内的表达特征

 [目的]探讨Toll样受体4（TLR4）在乙型肝炎组织及细胞株HepG2/HepG2.2.15内的表达特征。[方法]采用免疫组化染色法检测慢性乙型病毒性肝炎（CHB）63例、慢性重型肝炎（CSH）11例及健康对照组10例肝组织TLR4的表达,综合评分法判断结果。常规培养肝癌细胞株HepG2及HepG2.2.15,采用直接免疫荧光流式细胞术（FCM）检测TLR4在细胞上表达的平均荧光强度（MFI）及阳性细胞率。[结果]TLR4在慢性乙型病毒性肝炎及慢性重型肝炎患者肝组织上的表达明显高于健康对照组（P〈0.01）,主要表达于肝细胞胞浆及部分胞膜,在慢性乙型病毒性肝炎中,TLR4的表达强度与肝组织炎症活动度分级（G）呈显著正相关（r=0.632,P〈0.001）。TLR4在肝癌细胞株HepG2.2.15上表达的平均荧光强度及阳性细胞率分别为18.24±8.18、（17.79±9.46）%,明显高于HepG2的2.33±0.41、（1.71±0.77）%（P〈0.001）。[结论]TLR4的表达与乙型病毒性肝炎肝组织的炎症活动密切相关,而乙型肝炎病毒可直接上调细胞TLR4的表达,故TLR4参与了乙型病毒性肝炎发病过程中的免疫反应并极有可能与免疫损伤有关。     

肝纤维化过程中Toll样受体4在肝脏的表达分布及意义

目的动态观察大鼠肝纤维化过程中Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)蛋白在肝脏的表达,探讨TLR4与肝纤维化发生发展的关系。方法以四氯化碳皮下注射复制大鼠肝纤维化模型,设立正常对照组和模型1周组、2周组、4周组、6周组。常规HE染色和天狼猩红胶原染色观察肝脏病变;检测肝组织羟脯氨酸和血浆内毒素含量;免疫组化和Western blot检测TLR4在肝组织中的表达,检测α-SMA观察活化的肝星状细胞(HSCs)。结果与正常对照组比较,CCl4作用2周时,肝组织羟脯氨酸含量开始明显增多(P0.01);模型组各组血浆内毒素含量呈梯度上升(P0.01),且与肝组织羟脯氨酸含量呈显著正相关关系(P0.01);CCl4作用1周后肝组织TLR4的表达即明显增强(P0.01),4周时和6周时有所下降(与2周组相比,P0.05),但仍高于正常对照组(P0.01)。TLR4阳性细胞包括枯否细胞、活化的HSCs及少量的肝细胞和内皮细胞。结论内毒素及其受体TLR4的改变可能在肝纤维化中起重要作用。     

TLR2、TLR4在乙型肝炎病毒转染的HepG2细胞株的表达

目的探讨乙肝病毒全基因组瞬时转染HepG2细胞后，对HBV抗原分泌，病原识别受体Toll样受体2、4（TLR2、4）的表达及细胞增殖的影响。方法已构建pBlueScript—HBV质粒并经测序，转化宿主菌，摇菌后提取质粒，用Sapl酶切，获得HBV 3．2kb基因组，采用脂质体瞬时转染肝癌细胞株HepG2，IMX检测HBV所分泌抗原，台盼蓝计数检测细胞增殖活性，直接免疫荧光流式细胞术（FCM）检测TLR2、4在细胞株上表达的阳性细胞率，并与空白对照绗对比。结果HBsAg利HBeAg的分泌随着转染HBV DNA量的增加而升高，除4μg和6μg组两组间比较的表面抗原外，差异均有显著性意义（P〈0．05）。TLR2、4在转染后均有上调，TLR4在各组间差异显著（P〈0.05），但TLR2只在最大剂量转染组时差异有显著性（P〈0．05）。台盼蓝拒染法示细胞存活随转染剂量的升高而减少（P〈0．05），但4μg和6μg两组间比较无显著意义（P〉0．05）。而各转染剂量组HBsAg和e抗原的分泌及细胞的存活数均与TLR2、4的表达呈显著正相关（P〈0．01）。结论研究结果初步表明乙肝病毒可能直接引起HepG2细胞TLR2、4的上调，而且TLR的上调可能启动了细胞的凋亡或坏死机制，成为HBV损伤细胞的非免疫细胞介导机制。     

乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4的表达及其意义

目的 检测乙肝患者血清标本中TLR2和TLR4的含量,关注其表达特征,探讨其表达的意义.方法 本实验以130例乙肝患者的血清标本作为观察组,60例正常体检成人的血清标本作为对照组,应用酶联免疫吸附实验检测二组中TLR2和TLR4的表达,分析其在不同临床病理特征之间意义及相互关系.结果 乙肝患者血清中TLR2和TLR4的表达明显高于对照组[(85.46±15.46) ng/L vs (28.75±2.35) ng/L;(100.23±23.25) ng/L vs (64.34±4.32) ng/L],血清中TLR2和TLR4的含量与乙肝患者病情的严重程度有关,乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4的表达呈正相关(P=0.021 4,r=0.39).结论 乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4高表达,二者可能具有协同作用.联合检测血清中TLR2和TLR4的含量可能与判断病情的严重程度有关.     

TLR4在胚胎停育蜕膜组织中的表达及其意义

目的 了解TLR4在人早孕及胚胎停育蜕膜组织中的表达差异.方法 选取64例早孕妇女作为研究对象,健康早孕人工流产32例为对照组(A组),胚胎停育(稽留流产)32例,分别留取其宫蜕膜组织.根据其HE病理切片,将胚胎停育者再分成炎症组(B组)及蜕变组(C组)各16例,应用免疫组化(immunohistochemistry,IHC)及免疫印记( Western-Blot,WB)检测TLR4蛋白在蜕膜组织中表达部位及定量差异.结果 TLR4在3组绒毛及蜕膜的合体滋养细胞、细胞滋养细胞、毛细血管内皮细胞的胞浆、蜕膜细胞呈不同程度的阳性染色.胚胎停育炎症组的蜕膜组织TLR4表达高于早孕对照组,蜕变组蜕膜组织TLR4表达低于对照组.结论 TLR4表达在稽留流产发病中具重要作用,母体蜕膜组织TLR4蛋白的平衡对早孕妊娠维持起重要作用.     

TLR4信号转导通路中胞外分子之间的相互作用

细菌脂多糖(LPS)介导的炎症信号主要通过一种跨膜蛋白toll样受体4(toll-likereceptor4,TLR4)传入胞内,引起一系列相应的细胞效应。近年来对该信号通路的研究取得了一些新的进展,本文综述了该信号通路中胞外的主要分子LPS、脂多糖结合蛋白(LBP)、CD14、TLR4和髓样分化蛋白-2(MD-2),及其各分子之间的相互作用。通过这些分子之间的相互作用激活TLR4并触发信号转导。