C-肽时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的研制血清C-肽的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)试剂盒。方法采用双抗体夹心法建立C-肽TRFIA试剂盒,并进行方法学评价。结果C-肽可测量范围为0.4~20 ng/mL;分析敏感性为0.23 ng/mL;分析批内、批间精密度分别为7.99%、11.97%;C-肽回收率为99.57%;与胰岛素和胰岛素原无交叉反应。稳定性试验表明,试剂可以贮存在4℃稳定9个月,37℃稳定7 d;该试剂盒测试200份正常人血清样本,其参考范围为0.358~3.590 ng/mL;收集122份血清样本,用该试剂盒与国外其他方法的同类试剂盒同时检测,其相关系数为0.9432,线性方程为Y=0.9854X+0.5063。结论C-肽TRFIA试剂盒各项指标均达到临床检测要求,适合临床推广使用。     

人C肽时间分辨免疫荧光分析试剂盒的研制

目的研制人C肽(C peptide)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒。方法采用双抗体夹心一步法建立C肽TRFIA试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果试剂盒的可测范围为0.5～22ng/ml,灵敏度为0.045ng/ml,批内、批间的变异系数(CV)分别为4.1%～6.7%和5.4%～6.8%;与胰岛素无交叉反应,与胰岛素原的交叉反应率为9.0%。30份血样用本试剂盒与国外同类试剂盒同时检测,其相关系数为0.992。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

时间分辨荧光免疫法和电化学发光法检测AFP的比较

目的对时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA法）国产试剂盒与电化学发光免疫分析法（ECLIA法）检测血清AFP作比较分析。了解两种方法特点。方法分别采用国产TRFIA法试剂盒与ECLIA法检测正常人50例、肝癌患者40例血清AFP的含量;用高、中、低3种浓度AFP标准品采用两种方法进行批内测定,n=10,观察重复性,所得结果计算CV值：将高值标准品血清（250ng／ml）按1：1比例加入每份正常对照组血清中,肝癌组病人血清与生理盐水按1：1稀释后再按1：1比例加入高值标准品血清（250ng／ml）,每份检测2次（TRFIA法）取平均值,计算回收率。结果肝癌组AFP值（TRFIA法：558±319．10ng／ml;ECLIA法：552．31±302．67ng／ml）明显高于正常组（TRFIA法：6．51±5．42ng／ml;ECLIA法：6．32±5．14ng／m）（P〈0．05）,两种方法结果无显著差异（P〉0．05）,其相关系数为0．9150,测定结果呈正相关。高、中、低3种浓度标准品的重复性试验TRFIA法与ECLIA批内变异系数分别低于7．9％和3．1％,后者优于前者,两种方法略有不同,无明显差异（P〉0．05）。回收试验结果,TRFIA法回收率在92．3％～103．9％。结论国产TRFIA法试剂盒和ECLIA法检测AFP相比较具有良好的相关性。灵敏度和稳定性也较好．可应用于临床血清AFP检测。     

双标记前列腺特异性抗原时间分辨荧光免疫分析试剂盒研究

目的研制钐（Sm）标记检测总前列腺特异性抗原（tPSA）及铕（Eu）标记检测游离前列腺特异性抗原（fPSA）的双标记时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）试剂盒。方法以抗PSA单克隆抗体101^#包被96孔微孔板，用Sm^3＋标记抗tPSA单克隆抗体102^#、Eu^3＋标记抗fPSA单克隆抗体201^#，采用双抗体夹心法建立t／fPSA双标记TRFIA。标准曲线由TRFIA检测仪自带的Log-Log_B函数处理。结果tPSA批内和批间变异系数（CV）分别为2．38％和3．91％，最低检测下限0．02μg／L，可测范围为0．02～250μg／L，回收率为101．3％；fPSA批内和批间CV分别为3．16％和3．34％，最低检测下限0．05μg／L，可测范围为0．05～250μg／L，回收率为103．2％。t／fPSA TRFIA试剂盒测定健康组、前列腺良性疾病组和前列腺癌组（Pca）的tPSA平均值为1．4μg/L、4．3μg/L、14．2μg/L，fPSA平均值为0．3μg/L、1．5μg/L、6．2μg/L。tPSA3．6μg/L、f／tPSA〈0．21为Pca与良性疾病的鉴别阈值。自制试剂盒与PE公司进口试剂盒同时测定血清样本，二者tPSA与fPSA的相关系数分别为0．99和Q97。结论自制t／fPSA TRFIA试剂盒的各项指标均达到临床检测要求，可替代国外同类产品。     

两种免疫分析法检测甲胎蛋白在原发性肝癌诊断中的价值

目的分别用时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）和化学发光免疫分析（CLIA）法检测血清甲胎蛋白（AFP）浓度,比较两种检测方法对原发性肝癌（PHC）诊断的临床应用价值。方法选择门诊和住院期闻确诊的PHC患者114例和肝良性病变患者126例,分别用TRFIA和CLIA法检测受试者血清AFP浓度,并进行工作特征（receiver operating characteristic curves,ROC）曲线分析。结果以健康对照组95％可信区间为医学正常值范围,TRFIA法和CLIA法诊断肝癌的临床界限值分别为7．31ng／mL和24,17ng／mL。TRFIA诊断肝癌的灵敏度为46．9％,特异性为93．4％,诊断准确率为79．2％。CLIA法的灵敏度为41．2％,特异性为91．6％,诊断准确率为65．8％。两种检测方法ROC曲线下面积分别为0．761（TRFIA）和0．682（CLIA）。结论TRFIA和CLIA法都可以满足临床AFP检测需要,但TRFIA法优于CLIA法。     

TRFIA全血降钙素原检测试剂盒的性能评价

目的评价时间分辨免疫荧光法(TRFIA)全血降钙素原(PCT)检测试剂盒的分析性能。方法采用AQT90FLEX免疫分析仪,以TRFIA检测全血PCT,评价该方法精密度、检测下限、功能敏感度、线性范围、干扰试验、携带污染率、方法比对和参考区间等性能指标;将其与罗氏cobas 6000电化学发光分析仪PCT检测试剂盒进行比较。结果 TRFIA批内变异系数(CV)小于5.5%,批间CV小于6.0%,检测下限为0.03ng/mL,功能敏感度为0.11ng/mL,线性范围0.072~100.000ng/mL,干扰物对PCT检测无明显影响(干扰小于或等于±10%),携带污染小于0.25ng/mL,参考区间为0.081~0.120ng/mL。其与罗氏cobas 6000电化学发光分析仪PCT检测试剂盒有良好的相关性(R2=0.995 3)。结论采用TRFIA的AQT90FLEX免疫分析仪PCT检测试剂盒敏感度高,精密度好,线性范围宽,与罗氏cobas 6000电化学发光分析仪PCT检测试剂盒有良好的相关性,快速便捷,能更好地适用临床即时检验。     

化学发光免疫分析法检测肝纤维化血清标志物的性能评价

目的：验证某化学发光免疫分析系统检测透明质酸（HA ）、层粘连蛋白（LN ）、Ⅲ型前胶原 N端肽（PⅢP N-P）、Ⅳ型胶原（C-Ⅳ）的分析性能。方法参照相关标准文件中的方法,分别对精密度、加样针携带污染率、准确度、线性范围和参考区间进行验证。结果批内精密度验证结果显示,HA低值为3．38％,高值为1．00％;LN低值为4．42％,高值为0．78％;PⅢP N-P低值为4．39％,高值为0．35％;C-Ⅳ低值为4．42％,高值为0．40％。批间精密度验证结果显示,HA低值为4．49％,高值为3．86％;LN为低值为5．68％,高值为3．60％;PⅢP N-P低值为5．98％,高值为4．05％;C-Ⅳ低值为5．44％,高值为3．53％。加样针携带污染率验证结果显示,HA为0．99‰, LN为-0．41‰,PⅢP N-P为0．28‰,C-Ⅳ为0．53‰。各指标质控品实测值与靶值的相对偏差分别为HA 0．45％、LN -1．65％、PⅢP N-P -0．24％、C-Ⅳ-0．70％。线性范围验证结果显示,HA为12．84～1897．76 ng/mL ,LN为20．98～960．59 ng/mL ,PⅢP N-P为10．72～1923．48 ng/mL ,C-Ⅳ为11．85～1964．49 ng/mL。参考区间验证结果为HA＜100 ng/mL、LN＜50 ng/mL、PⅢP N-P＜30 ng/mL、C-Ⅳ＜30 ng/mL。结论该化学发光免疫分析系统检测HA、LN、PⅢP N-P、C-Ⅳ的主要分析性能指标达到预期要求,厂家提供的参考区间可以接受。     

重症患儿低C肽水平变化及其临床意义北大核心CSCD

目的：分析重症患儿血清C肽下降与病情危重度的关系。方法以2012－11-2013－06入住湖南省儿童医院儿科重症监护室（ PICU）且血清C肽下降的256例重症患儿为研究对象（C肽＜0．78 ng／mL）,C肽0．39-0．78 ng／mL为轻度降低组（n＝174）,C肽＜0．39 ng／mL为重度降低组（ n＝82）。监测入住PICU 24 h内、3 d、7 d的C肽、胰岛素和血糖,入院时检测电解质、白细胞、降钙素原、乳酸、红细胞压积、心肌酶、淀粉酶、肝肾功能相关指标及胰腺超声等,并记录与病情危重度及预后相关的指标。结果①低C肽患儿入院后C肽水平呈上升趋势,第3天稍高于正常,第7天恢复正常范围;②低C肽患儿入院后第3天胰岛素和血糖均升高并仍稍高于正常,第7天恢复正常范围;③C肽水平与WBC、PCT、乳酸呈负相关,与Ca2＋、氧合指数呈正相关（P＜0．01）;④C肽重度降低组白蛋白水平、小儿危重病例评分（PCIS）评分低于轻度降低组, ALT、AST、LDH和CK－MB水平高于轻度降低组（P＜0．05）;⑤C肽重度降低组PCIS评分低于轻度降低组（P＜0．05）;⑥死亡患儿中7例合并胰腺损伤,其平均C肽水平为（0．34±0．12）ng／mL。结论 C肽降低与炎症反应、缺血、缺氧等因素相关,重症患儿低C肽水平与胰腺损伤、病情严重程度、器官功能障碍和预后有一定关系。     

游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的研制一种游离三碘甲状腺原氨酸（free triiodothyronine,FT3）时间分辨荧光免疫分析（time-resolved fuoroimmunoassay,TRFIA）试剂盒。方法采用直接竞争法建立游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）检测TRFIA试剂盒（固相包被T3-复合物,与样本中的FT3竞争结合DTTA-Eu3＋标记的T3单克隆抗体）,并对试剂盒各项指标进行评价。结果该试剂盒的有效检测浓度范围为1.5~70 pmol/L,分析灵敏度为不高于0.7 pmol/L,批内、批间的不精密度分别不高于8.2%与10.5%。与T4、FT4、反T3、反T4交叉反应率分别为：〈0.01%、0.11%、〈0.01%、〈0.01%。稳定性试验表明试剂可以在2~8℃稳定一年,37℃稳定7d。用该试剂盒对500份正常人血清标本进行测试,统计该试剂盒的正常参考值范围是3.2~6.5 pmol/L。156份血清标本用本试剂盒与国外某知名品牌化学发光法试剂盒同时检测,其相关系数为0.992。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可考虑作为国外化学发光法同类产品试剂盒的替代产品。     

可溶性人细胞分化抗原28分子酶联免疫试剂盒的研制及应用

目的研制灵敏、特异和稳定的可溶性人细胞分化抗原28（sCD28）酶联检测试剂盒，并探讨其临床应用意义。方法取识别不同抗原位点的单抗8G8和2D5分别作为包被单抗和检测单抗，建立双单抗夹心-sCD28酶联免疫检测法（sCD28-ELISA），并绘制标准工作曲线。同时，测定36名健康人、23例系统性红斑狼疮（SLE）、38例类风湿性关节炎（RA）和62例Grave病患者血清中sCD28含量。结果研制的sCD28试剂盒最低检测下限为0．3ng／ml，具有良好线性关系的检测范围是0．5～16．0ng／ml；8G8单抗包被测定板后置4℃冰箱保存180d，加入可溶性CD28-Ig重组蛋白的回收率在93％～109％之间。SLE、RA和Grave病患者血清中sCD28含量分别为0．9～7．3ng／ml、0．3～6．8ng／ml、0．2～3．5ng／ml，明显高于健康人（0～1．1ng／ml，P〈0．01）。结论自制的sCD28试剂盒，能准确测定样本中sCD28含量，可为sCD28分子基础研究和临床疾病辅助诊断、疗效评估及预后判断提供有价值的生物学参数，具有良好应用前景。     

游离甲状腺素时间分辨荧光免疫试剂盒的研制

目的研制一种人游离甲状腺素(FT4)时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)试剂盒。方法采用直接竞争法建立FT4检测方法(固相包被T4-复合物,与样本中的FT4竞争结合Eu标记的T4单克隆抗体),并对该试剂盒各项性能指标进行评价。结果该试剂盒的分析灵敏度为不高于2.0pmol/L,工作范围为2.0～120.0pmol/L。分析内变异系数为4.4%～5.7%、分析间变异系数为6.5%～8.2%,其总变异系数小于9.0%。与T3、FT3、rT3和rT4的交叉反应率分别为:1.12%、0.34%、0.56%和1.51%。稳定性试验表明该试剂盒可以在2～8℃稳定1年,37℃稳定7d。用该试剂盒对500份健康人血清标本进行测试,统计该试剂盒的正常参考值范围是11.5～22.7pmol/L。200份血清标本用本试剂盒与国外的化学发光试剂盒同时检测FT4,其相关系数为0.993。结论该试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外化学发光法的同类产品试剂盒。     

抗弓形虫IgM抗体时间分辨荧光免疫分析法的建立及初步应用

目的采用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)建立高灵敏的抗弓形虫(TOX)IgM抗体的检测方法。方法采用二抗间接法建立抗TOX IgM抗体的TRFIA。结果方法的批内和批间变异系数(CV)分别为1.9%和3.8%,敏感性为0.4 U/mL,可测范围为0.4~200 U/mL,20%、50%和80%的有效剂量(ED20、ED50和ED80)分别为36.3、88.2和147.8 U/mL。检测健康体检人员的血清,标本的测定值为(5.3±2.3)U/mL,建议阳性阈值为10 U/mL。结论抗TOX IgM抗体的TRFIA敏感性高、稳定性好,在优生优育及器官移植上具有很好的应用前景。     

乙型肝炎两对半和HBVDNA定量检测的临床应用

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）免疫标志物（HBV-M）与HBVDNA之间的相互关系，为临床诊断、治疗乙型肝炎提供有价值的判断标准。方法用时间分辨荧光免疫法（TRFIA）定量检测HBV-M，并与荧光定量聚合酶链反应检测HBVDNA相比较。结果105例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎e抗体（抗-HBe）、乙型肝炎核心抗体（抗—HBc）均为阳性；85例HBsAg、HBeAg、抗-HBc均为阳性；34例乙型肝炎病毒抗体（抗-HBs）、抗-HBe、抗HBc阳性组中HBVDNA的检出率分别为65．7％、95．5％和11．7％。以HBsAg含量为100ng／mL作为HBV复制的诊断限，其特异性和敏感性分别是70．0％和84．0％。结论TRFIA定量检测HBV-M灵敏度高、特异性强、操作简便，无放射性污染，是一种较好的HBV-M测定方法，在实验室不具备HBVDNA定量测定的条件下，选择TRFIA进行乙型肝炎两对半定量检测也是一种较好的方法。     

Sm~(3+)标记抗心磷脂抗体IgM时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的建立高灵敏度、宽量程的定量检测患者血清中的抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,ACA)IgG的Sm3+标记时间分辨荧光免疫分析方法。方法采用ACA抗原(心磷脂+β2糖蛋白I)和兔抗人IgM抗体分别作为固相抗原和钐标记抗体,如果样本中存在ACA抗体,则形成ACA抗原-ACA抗体-钐标记兔抗人IgM抗体复合物,加入解离增强液解离铕离子,检测荧光强度,样本中ACA-IgM抗体含量与荧光强度成正比;对建立的时间分辨荧光免疫(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)法检测ACA抗体的线性范围、精密度、检测范围进行分析;对25例ACA-IgM抗体阳性血清标本分别利用TRFIA及ELISA法检测ACA-IgM抗体,分析其相关性;收集50例健康献血者,利用TRFIA检测其血清中的ACA-Ig抗体,计算临床特异度。结果利用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,TRFIA法检测高、中、低3种浓度混合血清的批内(n=20)精密度分别为2.39%、3.26%和3.94%,批间(n=8)精密度分别为2.92%、3.73%和4.35%;方法的灵敏度为0.1 MPL U/ml;TRFIA法检测健康献血者,临床特异度为98%;TRFIA与ELISA 2种方法检测结果的一致性检验采用相关性分析,相关系数为0.956;将1份ACA-IgM抗体强阳性的血清标本从2483 MPL U/L倍比稀释至0.151 MPL U/L,ELISA方法较好的线性范围在4.85-310.4MPL U/L,而TRFIA方法在0.151-2483MPL U/L都有较好的线性。结论首次建立稳定的高灵敏度和宽检测范围的TRFIA法检测人血清中的ACA-IgM抗体,对早期诊断自身免疫性疾病及监测疗效具有重要意义,该方法以其优势有望在各检验科室得以普遍应用。     

基于磁微粒化学发光法的sST2检测性能验证

目的 对磁微粒化学发光法检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)进行性能验证,评价该方法的稳定性与可靠性.方法 采用基于磁微粒化学发光法的试剂盒,对患者及健康人群的血清及厂家提供的质控物质进行检测并对该方法进行性能评价.结果 经试验检测,该方法的精密度(血清:低值及高值CV分别为2.2％及2.3％、质控品:低值及高...     

甲状腺过氧化物酶抗体间接时间分辨荧光免疫分析法的建立及临床应用

目的建立甲状腺过氧化物酶（TPO）抗体间接时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）。方法用TPO抗原包板,用铕（Eu^3＋）标记兔抗人IgG做标记物,建立检测人血清TPO抗体的间接TRFIA。结果TPO抗体-TRFIA的敏感性为1.0 IU/mL;线性范围达1 000 IU/mL;批内变异系数（CV）为3.1%-3.6%,批间CV为3.3%-3.6%;平均回收率为98.89%;与电化学发光分析法（ECLIA）比对,相关系数达0.983 2;与临床诊断高度相关。结论本研究建立的TPO抗体-TRFIA是一个高灵敏和可靠的检测方法,有助于甲状腺疾病的临床诊断。