慢性移植物抗宿主病狼疮样肾炎小鼠模型的建立及免疫病理学鉴定

对慢性移植物抗宿主病狼疮样肾炎小鼠模型进行免疫学、血清学及肾脏病理损伤鉴定。以考察该模型作为系统性红斑狼疮(SLE)疾病模型的可靠性。将亲代雌性BALB/c小鼠脾脏细胞悬液经尾静脉注射(C57BL/J6×BALB/c)F1代小鼠,每隔3d注射1次,共4次。建模第7d,采用免疫荧光及流式细胞仪分析小鼠脾脏中抗原提呈细胞(APC)及抗体形成细胞的百分率。每隔2周检测血清中anti-dsDNA抗体及ANA;每隔4周检测尿蛋白含量的动态变化;建模12周终止实验,取肾脏组织作HE染色观察病理改变,直接免疫荧光法检测免疫复合物(IC)沉积以及透射电镜观察肾小球超微结构变化。流式细胞术的分析结果显示,造模后7d脾脏中膜型CD11b+、CD11c+及Gr1+细胞的百分率较对照组明显升高(P0.05),同时抗体形成细胞B220+表面CD21、CD23、CD80及CD86分子的表达均上调(P0.05);建模2周时,血清anti-dsDNA抗体出现阳性,4周时ANA出现阳性;12周时80%的小鼠存在蛋白尿,蛋白含量++~++++;肾小球体积增大并有大量炎性细胞浸润;肾脏IC沉积;透射电镜下可见肾基底膜节段性增厚,脏层上皮细胞和基底膜之间存在大量的电子致密物。慢性移植物抗宿主病小鼠狼疮样肾炎模型具有人类SLE相似的免疫细胞异常活化及肾脏病理损伤的特征性表现,用于相关研究具有可靠性。     

B7-1人-鼠嵌合抗体对小鼠狼疮样肾炎模型的免疫干预效应

目的:在运用化学法建立小鼠狼疮样肾炎模型并对其进行生物学鉴定的基础上,探讨B7-1人-鼠嵌合抗体阻断B7/D28信号通路对小鼠狼疮样肾炎模型病理损伤的逆转效应。方法:取6周龄雌性C57BL/6J小鼠,予一次性腹腔注射Pristane 0.5ml/只,每月定期检测小鼠的尿蛋白、ANA及肾脏病理学改变。取尿蛋白含量达到++,ANA荧光强度达到++的小鼠随机分为3组,每组5只。抗体干预组用B7-1人-鼠嵌合抗体经眼眶静脉序贯给药,阳性对照组注射免疫抑制剂CTX,阴性对照组注射人同型Ig G。每月定期检测尿蛋白及ANA,干预至3个月时,处死小鼠,取肾脏进行HE染色分析,免疫复合物(IC)检测及透射电镜观察。结果:Pristane诱导至4个月时,80%的小鼠尿蛋白含量达到+~+++,血清ANA荧光强度为++~+++,出现尿蛋白及ANA的小鼠,其肾小球炎性细胞侵润,肾小管上皮样细胞可见水肿样变性、血管充血明显,纤维组织增生。抗体干预后,尿蛋白逐渐由++~+++降为±~++,ANA由++~+++降为+~++。与阴性对照组比较具有统计学差异(P0.01)。肾脏HE染色分析的结果显示,抗体干预组肾小球炎性细胞侵润及肾小管充血等表现均得到明显改善。免疫荧光染色可见抗体干预组抗原抗体复合物(IC)的荧光强度明显减弱。经透射电镜观察,抗体干预组与阴性对照组相比,肾小球的电子致密物沉积减少,基底膜厚度趋于均匀。结论:B7-1抗体通过抑制B7-1/CD28信号通路下调机体的免疫应答,减少自身抗体的产生,对自身免疫造成的病理损伤具有逆转作用。     

Pristane诱导小鼠系统性红班狼疮动物模型的研究

目的:建立pristane诱导的系统性红斑狼疮(SLE)小鼠模型,并对该小鼠模型的发病机制进行初步的探讨。方法:6-8周龄雌性BALB/c小鼠单次腹腔注射pristane0.5mL,对照组单次腹腔注射PBS0.5mL,注射前及注射后每2周行流式细胞术(FCM)检测外周血中IFN-α分泌细胞(CD11b+Ly6Chigh)的比例及细胞活化状态B220+Aβ1dhigh),ELISA检测血清中自身抗体(anti-dsDNA,anti-smRNP,anti-ribosomalP0)的含量。至6个月处死动物,FCM检测腹腔细胞中IFN-α分泌细胞(CD11b+Ly6Chigh)的比例和脾脏中细胞的活化(B220,Aβ1d),采用直接免疫荧光法标记小鼠肾脏免疫球蛋白复合物及H&E染色评估小鼠肾脏免疫复合物的沉积及损伤情况。结果:小鼠腹腔注射pristane第2个月开始血清总IgG升高,第3个月起出现自身抗体阳性,到个6月时达到最高,并维持高水平至被处死;Pristane处理6个月后,Pristane处理组小鼠出现关节炎症状,肾脏免疫复合物的大量沉积和明显肾脏损伤。Pristane注射2周起,小鼠外周血中IFN-α分泌细胞(CD11b+Ly6Chigh)的比例明显高于PBS注射组,小鼠腹腔细胞中IFN-α分泌细胞的比例也明显升高;同时外周血和脾细胞中B细胞表面MHCII分子Aβ1d的平均荧光强度(MFI)均高于对照组,表明pristane处理组小鼠中B细胞发生了显著活化。结论:BALB/c小鼠腹腔注射pristane可诱导构建小鼠SLE模型,其SLE的发病可能与IFN-α的持续分泌导致B细胞的异常活化有关。该模型的建立为进一步研究SLE的发病机制提供了良好的动物模型。     

BET蛋白抑制剂JQ1对MRL/lpr狼疮小鼠外周B细胞分化的影响北大核心CSCD

目的:探讨BET蛋白抑制剂JQ1对MRL/lpr狼疮小鼠外周B细胞分化的影响及其治疗作用。方法:12周龄MRL/lpr小鼠分别腹腔注射JQ150 mg/(kg·d)或10%DMSO;每2周检测24 h尿蛋白定量;6周后检测血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、补体C3、补体C4、抗ds-DNA抗体、ANA及IgG、IgG1、IgG2a、IgM等免疫球蛋白水平;PAS染色观察肾脏组织病理学改变,免疫荧光染色观察IgG和C3免疫复合物沉积情况。利用流式细胞术检测小鼠B细胞各亚群细胞的比例;RT-qPCR检测脾脏prdm1 mRNA表达水平。结果:与DMSO组相比,JQ1治疗组小鼠24 h尿蛋白定量显著减少,血清BUN、Cr水平明显降低,补体C3、C4水平明显升高,抗ds-DNA抗体、ANA以及IgG、IgG1、IgG2a和IgM等免疫球蛋白水平明显降低;此外,JQ1治疗组小鼠肾小球、肾血管的病理损害程度均明显减轻,肾脏IgG和C3免疫复合物沉积显著减少。同时,JQ1治疗组小鼠脾脏、淋巴结、外周血B细胞中浆细胞和记忆B细胞亚群的比例显著下降;JQ1治疗亦显著抑制狼疮小鼠B细胞内调节浆细胞分化的关键转录因子prdm1 mRNA表达。结论:BET蛋白抑制剂JQ1对MRL/lpr狼疮小鼠具有显著的治疗作用,通过抑制Blimp1表达进而调节浆细胞分化可能是其发挥治疗作用的机制之一。BET蛋白可能是SLE治疗的新靶标。     

B7-1抗体阻断B7/CD28信号通路对Pristane肾病的治疗作用

目的:探讨B7-1抗体阻断B7-1/CD28信号通路对小鼠Pristane肾病的治疗作用。方法:将8周龄雌性C57BL/J6小鼠随机分为3组,正常对照组予生理盐水0.5ml/只,造模组与治疗组予Pristane0.5ml/只后,分别予鼠同型IgG抗体(造模组)或鼠抗人B7-1抗体(治疗组)200μg/只,第10天分别检测局部淋巴结和脾脏中吞噬细胞、树突状细胞的活化及脾脏B细胞表面活化分子的变化;每月定期检测血清中抗核抗体(ANA)及尿蛋白,七个月后处死动物HE染色观测肾脏病理变化和冰冻切片直接免疫荧光法观察免疫复合物(IC)的沉积情况。结果:第10天,相对于正常对照组、治疗组和造模组小鼠局部淋巴结和脾脏中吞噬细胞、树突状细胞均有不同程度的活化,治疗组活化程度明显低于造模组(P0.05),脾脏B细胞表面CD21、CD40、CD86等分子上调程度低于造模组(P0.05);4个月后治疗组和造模组小鼠血清均检测到ANA,但治疗组的血清抗体滴度较造模组低(P0.05);治疗组7个月后,尿蛋白含量低于造模组,肾脏HE结果显示治疗组小鼠肾脏病理改变轻于造模组,直接免疫荧光检测可见治疗组免疫复合物荧光强度弱于造模组,正常对照组小鼠肾脏没有明显的病理改变。结论:鼠抗人B7-1抗体对Pristane肾病具有一定的治疗效果。     

活性染色质诱导抗核抗体生成及肾损伤

系统性红斑狼疮 (SLE )的病因和诱导抗核抗体 (ANA )生成的激发原迄今不明。本实验试图用ConA活化淋巴细胞的染色质免疫同系BALB/c小鼠 ,寻找诱导ANA生成的真正免疫原 ,阐明SLE发生的激发原是自身活化细胞的核成分 ,而且证明它所诱导的ANA具有致病性。从ConA活化的脾细胞中提取染色质 ,然后免疫同系BALB/c小鼠 ,用ELISA方法测定IgG类抗双链DNA (dsDNA )、抗组蛋白抗体 ,用免疫荧光法检测抗核抗体核型和免疫复合物沉积 ,用免疫印迹法测定抗核抗体谱 ,在光镜下检测肾损伤及电镜下检测肾小球沉积物 ,用考马斯亮蓝法检测尿蛋白含量。结果显示 ,活性染色质能诱导IgG类抗dsDNA、抗组蛋白等多种抗核抗体生成 ,且肾小球有显著免疫复合物沉积和蛋白尿形成。该实验表明 ,活化淋巴细胞的染色质是诱导SLE发生的真正自身免疫原。     

核自身抗原精子蛋白(NASP)基因突变加重诱导型狼疮模型小鼠自身免疫应答

目的制备诱导型狼疮模型小鼠,探讨核自身抗原精子蛋白(NASP)基因突变对诱导型系统性红斑狼疮(SLE)模型小鼠自身免疫应答的影响。方法 3月龄野生型B6(B6-WT)小鼠为对照组、 NASP基因突变B6(B6-NASP~M)小鼠为实验组。用伴刀豆球蛋白A(ConA)活化小鼠的脾脏淋巴细胞,提取其DNA为自身抗原,分别免疫B6-WT小鼠和B6-NASP~M小鼠3次。ELISA检测血清抗双链DNA(dsDNA)IgG水平, HE染色检测肾脏病变情况,免疫荧光组织化学染色检测肾组织IgG和补体C3的沉积情况。流式细胞术比较B6-WT小鼠和B6-NASP~M小鼠的脾脏淋巴细胞亚群变化,从而探讨NASP基因突变影响小鼠免疫应答的机制。结果与B6-WT小鼠相比, B6-NASP~M小鼠体质量、肾脏指数和脾脏指数均无明显变化,其血清抗dsDNA IgG水平明显升高,肾小球细胞增生明显、 IgG以及C3的沉积增加。脾脏CD3~+ T细胞、自然杀伤(NK)细胞比例降低、 CD19~+B细胞、调节性B细胞(Breg)比例增加。结论 NASP基因突变促进小鼠产生更高水平的抗dsDNA IgG,促进肾脏肾小球内细胞增生、 IgG及C3的沉积,并改变小鼠脾脏的免疫细胞的比例,加重狼疮模型小鼠的自身免疫应答。     

活性DNA诱导小鼠SLE样综合征的量效关系及其特点

目的：研究活性DNA的剂量与其诱导小鼠SLE样综合征的关系，并对其特点进行全面研究。方法：从ConA活化的小鼠脾淋巴细胞中提取DNA，以不同剂量的活性DNA免疫同系小鼠，用ELISA方法测定IgG类抗dsDNA、抗组蛋白抗体的动态变化以及产生抗体的亚型，用免疫荧光检测抗核抗体核型和肾脏免疫复合物沉积。结果：10μg活性DNA能100％诱导抗dsDNA、抗组蛋白抗体生成，诱导的抗体以IgGI类为主，且小鼠肾脏存在大量免疫复合物沉积。5μg活性DNA诱导小鼠ANA阳性率为25％。结论：10μg活性DNA即可诱导小鼠SLE样综合征，主要诱导自身体液免疫应答。     

肾小管上皮细胞表达共刺激分子B7-DC并抑制CD4+T细胞活化

目的 探讨肾小管上皮细胞(TECs)表达B7-DC及其对T细胞活化的调节作用.方法 免疫组化检测肾穿刺标本B7-DC表达;流式细胞术分析人及小鼠肾小管上皮细胞B7-DC的表达变化;使用TECs/CD4 T共培养分析TECs表达的B7-DC对CD4 T细胞活化的影响.结果 慢性肾小球肾炎、狼疮性肾炎、小管间质性.肾炎等肾活检组织中发现B7-DC显著表达于肾小管.IFN-γ、TNF-a等炎症因子可诱导体外.肾小管上皮细胞表达137-DC.共培养试验发现阻断B7-DC信号可增强CD4 T细胞分泌细胞因子IFN-γ及IL-2并促进CD4 T细胞表达CD69.结论 肾小管上皮细胞表达B7-DC并可显著下调CD4 T细胞活化,在多种慢性肾脏疾病发展中可能发挥重要作用.     

活化淋巴细胞与慢性GVHR诱导的SLE样小鼠模型的比较

目的 :将本室建立的用活化淋巴细胞诱导的系统性红斑狼疮 (SLE)样小鼠模型与国际上公认的用慢性GVHR诱导的SLE样小鼠模型进行比较 ,进一步探索SLE的发病机理。方法 :分别将亲代Balb c小鼠淋巴细胞经静脉和用ConA活化的(Balb c×C5 7BL 6 )F1代小鼠淋巴细胞经皮下途径输入F1代小鼠 ,用ELISA测定IgG类抗dsDNA抗体和抗组蛋白抗体 ,用免疫荧光法检测抗核抗体 (ANA)荧光核型和肾小球内免疫复合物沉积 ,用免疫印迹法检测抗可溶性核抗原 (ENA)抗体。结果 :亲代淋巴细胞免疫F1代小鼠所致的慢性GVHR和活化F1代小鼠淋巴细胞均可诱导F1代小鼠产生高滴度的抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体等ANA ,并且肾脏都有明显的IgG类免疫复合物沉积。但亲代淋巴细胞免疫组ANA核型以颗粒型、核仁型为主 ,ENA多肽谱多在 32、47、6 7kD处显色 ;而活化淋巴细胞免疫组以胞浆型、周边型、均质型为主 ,ENA多肽谱在 2 8、47、6 7kD处显色。结论 :这 2种方法均可诱导出SLE样综合征 ,但其抗核抗体谱有所不同。     

ICAM-1 参与系统性红斑狼疮中免疫球蛋白产生的实验研究

目的:探讨ICAM-1在系统性红斑狼疮(SLE)免疫球蛋白产生中的作用。方法:流式细胞术检测分析SLE患者、健康者、anti-CD3 Ab/IFN-α刺激健康者CD4~+T细胞及Pristane诱导的狼疮样小鼠及对照鼠中CD4~+T细胞的活化表型;分选获得Pristane处理小鼠来源的CD4~+T细胞和B细胞,并于体外交叉共培养,加入ICAM-1阻断抗体或同型对照抗体,ELISA检测培养上清中IgG和IgM水平。结果:SLE患者及anti-CD3 Ab/IFN-α刺激健康者CD4~+T细胞表达HLA-DR,CD69和ICOS等分子的细胞比例明显高于对照组。Pristane诱导的狼疮样小鼠CD4~+T细胞的活化程度也显著高于对照;Pristane诱导的狼疮样小鼠血清中抗snRNP和抗dsDNA自身抗体水平显著高于对照组;Pristane处理小鼠来源的活化CD4~+T细胞与B细胞共培养可以促进B细胞产生IgM和IgG。而经抗ICAM-1抗体阻断处理的培养上清中IgM含量低于对照组,而IgG含量显著高于对照组。结论:Pristane来源的活化CD4~+T细胞可促进B细胞分化,ICAM-1分子可能在B细胞分化早期发挥作用,但不利于IgM型向IgG型的类别转换,为ICAM-1在SLE中抗体类别转化的分子机制提供新的理论依据。     

选择性Caspase-1抑制剂对BXSB狼疮性肾炎小鼠治疗作用研究

目的研究特异性Caspase-1抑制剂对狼疮性肾炎（LN）的治疗作用及其作用机制.方法应用特异性Caspase-1抑制剂AC-YVAD-CMK处理LN模型BXSB小鼠4周,然后观察此潜在药物对该模型尿蛋白浓度、肾功能和血清自身抗体水平以及肾脏病理形态学的影响,继之检测它对肾脏局部及全身系统Caspase-1活性以及其下游细胞因子IL-18和IFN-γ表达的影响.结果未治疗LN模型血清肌酐（Scr）、血清抗ds-DNA抗体水平以及尿蛋白浓度显著升高（P均＜0.05）;肾小球IgG沉积及肾小球病理损伤程度显著较对照小鼠严重（P均＜0.005）;肾脏及脾脏Caspase-1活性显著升高（P＜0.01）,成熟形式IL-18蛋白表达升高（P＜0.001）,IFN-γmRNA表达显著上调（P＜0.05）;血清IFN-γ水平也显著升高（P＜0.01）.ICE抑制剂处理后Scr、抗ds-DNA抗体水平及尿蛋白浓度显著回降（P＜0.05）;肾小球病理损伤较未处理组显著减轻（P＜0.05）,但肾小球IgG沉积差异无统计学意义（P＞0.05）;肾脏及脾脏Caspase-1活性、成熟IL-18蛋白表达和IFN-γ mRNA表达均有不同程度回降（P均＜0.05）,血清IFN-γ水平也显著回降（P＜0.05）.结论选择性Caspase-1抑制剂对LN肾损伤具有良好的保护作用,抑制Caspase-1活性,进而抑制IL-18等细胞因子的活化和下游因子IFN-γ等的表达是其主要作用机制.     

组蛋白诱导抗核抗体产生及其对肾脏损害

目的 寻找系统性红斑狼疮中诱导抗核抗体（ANA）生成的真正的自身核成分免疫原。方法 从Con A活化的脾淋巴细胞中提取组蛋白免疫同系BALB／c小鼠,ELISA方法测定IgG类抗组蛋白、抗dsDNA抗体,免疫荧光法检测抗核抗体核型和免疫复合物在肾小球内的沉积,免疫印迹法测定抗可溶性核抗原抗体,考马斯亮蓝法检测尿蛋白含量,光镜下观察肾脏形态变化,电镜下观察肾小球电子致密物。结果 活性组蛋白诱导IgG类抗组蛋白、抗dsDNA等多种抗核抗体生成,且诱发同系小鼠产生SLE样肾脏病理变化。结论 活性组蛋白是诱发抗核抗体生成、造成肾损害的免疫原之一。     

CTLA-4Ig对B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠脾脏Th17和Treg细胞表达的影响与其对小鼠狼疮样病征干预作用的相关性研究

目的:初步探讨B7阻断剂CD28与细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA-4Ig)对B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠脾脏Th17和调节性T细胞(Treg细胞)表达的影响与其对小鼠狼疮样病征干预作用之间的相关性。方法:将4个月龄大小雌性B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠16只,随机分为观察组(Ⅰ组)和对照组(Ⅱ组),分别静脉注射CTLA-4Ig及等量PBS,检测小鼠干预前后24 h尿蛋白、ANA抗体、ds-DNA抗体及干预结束2周后血清IL-17A、脾脏中Th17细胞和Treg细胞百分比。结果:末次干预2周后Ⅰ组的24 h尿蛋白、血清ANA及ds-DNA较Ⅱ组下降均有统计学意义(均P0.05)。末次干预2周后Ⅰ组血清中IL-17A、脾脏Th17细胞比例均较Ⅱ组低,而脾脏的Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的比例高于Ⅱ组,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论:CTLA4-Ig具有减轻B6.MRL-Faslpr/J狼疮鼠狼疮样病征的作用;上调Treg细胞、下调Th17细胞可能是CTLA-4Ig减轻B6.MRL-Faslpr/J狼疮鼠狼疮样病征的重要机制之一。     

根皮素调控NF-κB对MRL/lpr狼疮性肾炎小鼠的保护作用

目的:观察根皮素对狼疮性肾炎的作用及机制。方法:用根皮素治疗MRL/lpr小鼠8周,然后分析肾功能和肾脏病理学。检测根皮素治疗后的抗ds DNA抗体的水平和免疫复合物的沉积。检测MRL/lpr小鼠的巨噬细胞浸润,NF-κB活化,NLRP3炎性体激活和炎性细胞因子TNF-α的产生。结果:用根皮素治疗的MRL/lpr小鼠显示肾脏损害明显减轻。根皮素处理的小鼠血清抗ds DNA抗体水平和免疫复合物沉积显著下降。根皮素抑制MRL/lpr小鼠中的NF-κB活化和TNF-α产生,同时抑制CCL2产生和巨噬细胞浸润,以及NLRP3炎性体的激活和IL-1β产生。根皮素能够显著降低狼疮性肾炎患者血清中IL-1β和TNF-α的水平。结论:根皮素通过抑制NF-κB活化和NLRP3炎症小体在狼疮性肾炎中发挥保护作用。     

MRL/lpr狼疮小鼠肾脏明胶酶表达随增龄变化及意义

目的 观察不同周龄MBL/lpr狼疮小鼠肾脏明胶酶的表达及其随增龄而发生的活性变化及意义。方法 取8、16与24周龄RMRL/lpr狼疮小鼠的肾组织进行常规病理检测。利用含有放射自显影的成像乳胶对冷冻肾组织切片进行原位明胶酶活性的检测;利用免疫组织化学检测肾脏明胶酶A与明胶酶B的酶B的蛋白表达变化,十二氨基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PACE）明胶酶谱法检测肾脏明胶酶A、B的活性变化。结果 8周龄狼疮小鼠肾组织吵仅在血管处检测到明胶酶的活性;16与24周龄狼疮小鼠肾小球内明胶酶的净活性明显增加。在肾小球以及肾小管间质上也可检测到明胶酶的活性,乙二胺四乙酸（EDTA）能够抑制肾脏明胶酶的活性,免疫组织化学与SDS-PAGE明胶酶谱法结果显示其肾组织中明胶酶A与明胶酶B的蛋白质表达及活性均明显增加。结论 明胶酶A、B在自发性狼疮小鼠肾炎中的表达及活化随增龄均明显增加,活化态的明胶酶可能在狼疮性肾炎细胞外基质重塑中发挥重要的作用。     

糖皮质激素对BXSB狼疮小鼠肾组织fractalkine/CX3CR1表达的影响

目的：研究BXSB狼疮小鼠肾组织趋化因子fractalkine及其受体CX3CR1的表达以及给予泼尼松治疗后的改变,探讨两者在狼疮肾炎发病机制中的可能作用。方法：12 周龄雄性BXSB狼疮小鼠随机分成泼尼松治疗组（n=6）和实验对照组（n=6）;另取同周龄雄性C57BL/6J小鼠6只作为正常对照组。正常对照组和实验对照组小鼠每天给予0.5 mL生理盐水灌胃;泼尼松治疗组小鼠每天给予0.18 mg/20 g BW的泼尼松溶于0.5 mL生理盐水灌胃。持续10周结束实验。应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western印迹检测小鼠肾组织fractalkine和CX3CR1 mRNA和蛋白的表达,并检测小鼠实验室指标以及肾脏组织病理学的变化。结果： BXSB狼疮小鼠肾组织fractalkine以及CX3CR1 mRNA和蛋白表达均较C57BL/6J小鼠明显增高,而经过泼尼松治疗后的BXSB小鼠两者的表达均较未治疗组（实验对照组）明显下降,同时伴有血清免疫球蛋白G（IgG）、IgM、血清抗双链脱氧核糖核酸（dsDNA）抗体水平以及血尿素氮（BUN）、血肌酐（SCr）水平的明显改善,尿蛋白减少;肾小球内免疫复合物沉积和肾脏组织病理学改变亦显著减轻。结论： 实验结果提示fractalkine/CX3CR1可能参与了小鼠狼疮肾炎的发病机制,且糖皮质激素可能通过抑制肾脏fractalkine的表达而发挥其治疗效应。     

狼疮样肾炎小鼠脾、肾组织中钙调磷酸酶活性的检测及其意义

为检测狼疮样肾炎小鼠脾、肾组织中钙调磷酸酶 (CaN )活性 ,以探讨其与肾炎小鼠肾组织RANTES表达及肾组织病理改变的关系。采用慢性移植物抗宿主小鼠 (GVHD )狼疮样肾炎模型 ,CaN活性检测采用发色底物法。结果 :(1) 12周模型组肾小球硬化指数及小管间质损伤总积分显著高于 8周模型组 (P <0 0 1) ;(2 ) 12周模型组RANTES蛋白及mRNA表达显著高于 8周模型组 (P <0 0 1) ,FK5 0 6显著抑制狼疮样肾炎小鼠肾组织RANTES蛋白及mRNA表达 ;(3)模型组脾、肾组织中CaN活性显著增强 ,与正常对照组脾、肾组织CaN活性有显著差异 (P <0 0 1) ,FK5 0 6组中CaN活性显著下降 (P <0 0 5 ) ;(4 )狼疮样肾炎小鼠脾组织中CaN活性与血清抗dsDNA抗体水平呈正相关关系 (r1=0 92 5 ,P <0 0 1) ;(5 )狼疮样肾炎小鼠肾组织中CaN活性与肾小球硬化指数及小管间质损伤总积分呈正相关关系 (r2 =0 6 2 6 ,P <0 0 1;r3 =0 772 ,P <0 0 5 ) ,与RANTES蛋白阳性小管数呈正相关关系 (r4=0 6 2 5 ,P <0 0 5 ) ,狼疮样肾炎小鼠肾组织中CaN活性与RANTESmRNA表达呈正相关关系 (r5=0 714 ,P <0 0 5 )。表明狼疮样肾炎小鼠脾细胞存在CaN异常活化 ,肾组织中异常活化的CaN参与了肾脏病理损伤     

体外CD134L单抗或CTLA4Ig对狼疮样BXSB小鼠脾细胞分泌IL-6、IFN-γ及自身抗体的影响

目的:探讨体外CD134L单抗或CTLA4Ig对狼疮样BXSB小鼠脾细胞分泌IL-6、IFN-γ及自身抗体的影响。方法:采用未经治疗的狼疮样BXSB小鼠模型,应用CD134L单抗和/或CTLA4Ig体外特异性阻断CD134-CD134L或B7-CD28通路后,用MTT法测定分裂原刀豆蛋白A(ConA)诱导的脾淋巴细胞增殖反应和用ELISA方法测定ConA诱导的脾细胞培养上清液中IL-6、IFN-γ和抗ds-DNA抗体的表达水平,并与经中药狼疮方或强的松治疗的狼疮样BXSB小鼠模型进行比较。结果: (1)在单纯培养或经ConA刺激后培养,相比于正常对照鼠,狼疮样小鼠脾淋巴细胞都表现有增殖反应性的显著增高,IFN-γ、 IL-6蛋白量的增高和抗ds-DNA抗体的过度分泌。(2)经强的松或中药狼疮方体内治疗后,狼疮样小鼠脾淋巴细胞体外培养的增殖反应性及IFN-γ、IL-6的分泌都受到明显抑制,抗ds-DNA抗体的产生也明显减少。(3)体外单独应用CD134L单抗或 CTLA4Ig特异性阻断CD134-CD134L或B7-CD28共刺激信号通路,同样可以显著抑制体外培养的狼疮样小鼠脾淋巴细胞的增殖反应及IFN-γ、IL-6的分泌,并可明显减少抗ds-DNA抗体的产生,但它们的抑制作用比强的松、中药狼疮方体内治疗狼疮样小鼠时所表现出的类似效应要弱。(4)联合CD134L单抗和CTLA4Ig,则治疗作用显著提高,其抑制脾淋巴细胞的增殖反应及 IFN-γ、IL-6的分泌,抗ds-DNA抗体产生的作用都优于中药狼疮方的体内治疗效果,而与强的松的体内治疗效应相当。结论: CD134-CD134L可以提供独立的、非B7-CD28依赖的,另一种驱动抗原特异性T细胞增殖的协同刺激通路。同时阻断B7与 CD28、CD134L与CD134间的相互作用,使自身反应性T淋巴细胞的活化和增殖受到快速而最大限度的抑制,对治疗SLE等自身免疫性疾病可能是一种较理想的免疫干预模式。     

体外CDl34L单抗或CTLA4Ig对狼疮样BXSB小鼠脾细胞分泌IL-6、IFN-γ及自身抗体的影响

目的：探讨体外CD134L单抗或CTLA4Ig对狼疮样BXSB小鼠脾细胞分泌IL-6、IFN-γ及自身抗体的影响。方法：采用未经治疗的狼疮样BXSB小鼠模型，应用CDl34L单抗和／或CTLA4Ig体外特异性阻断CDl34-CDl34L或B7-CD28通路后，用MTT法测定分裂原刀豆蛋白A（ConA）诱导的脾淋巴细胞增殖反应和用ELISA方法测定ConA诱导的脾细胞培养上清液中IL-6、IFN-γ和抗ds-DNA抗体的表达水平，并与经中药狼疮方或强的松治疗的狼疮样BXSB小鼠模型进行比较。结果：（1）在单纯培养或经ConA刺激后培养，相比于正常对照鼠，狼疮样小鼠脾淋巴细胞都表现有增殖反应性的显著增高，IFN-γ、IL-6蛋白量的增高和抗ds-DNA抗体的过度分泌。（2）经强的松或中药狼疮方体内治疗后，狼疮样小鼠脾淋巴细胞体外培养的增殖反应性及IFN-γ、IL-6的分泌都受到明显抑制，抗ds-DNA抗体的产生也明显减少。（3）体外单独应用CD134L单抗或CTLA41g特异性阻断CD134-CD134L或B7-CD28共刺激信号通路，同样可以显著抑制体外培养的狼疮样小鼠脾淋巴细胞的增殖反应及IFN-γ、IL-6的分泌，并可明显减少抗ds-DNA抗体的产生，但它们的抑制作用比强的松、中药狼疮方体内治疗狼疮样小鼠时所表现出的类似效应要弱。（4）联合CD134L单抗和CTLA4Ig，则治疗作用显著提高，其抑制脾淋巴细胞的增殖反应及IFN-γ、IL-6的分泌，抗ds-DNA抗体产生的作用都优于中药狼疮方的体内治疗效果，而与强的松的体内治疗效应相当。结论：CD134-CD134L可以提供独立的、非B7-CD28依赖的，另一种驱动抗原特异性T细胞增殖的协同刺激通路。同时阻断B7与CD28、CD134L与CD134间的相互作用，使自身反应性T淋巴细胞的活化和增殖受到快速而最大限度的抑制，对治疗SLE等自身免疫性疾病可能是一种较理想的免疫干预模式。