蛇床子素对口腔癌KB细胞周期进程及凋亡的影响

目的 研究蛇床子素对口腔癌KB细胞周期进程、凋亡的影响。方法 CCK-8法检测KB细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期进程及凋亡率，RT-qPCR法检测细胞c-myc、cyclin A、cyclin D1 mRNA表达，Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态，ELISA法检测细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9活性，Western blot法检测细胞p-JAK2、p-STAT3蛋白表达。结果 与对照组比较，40、80、160μg/mL蛇床子素作用24、48、72 h后，KB细胞增殖抑制率均升高(P<0.05,P<0.01)。与对照组比较，40、80、160μg/mL蛇床子素组作用48 h后，G₀/G₁细胞比例、细胞凋亡率、caspase-3、caspase-8、caspase-9活性均升高(P<0.05,P<0.01),细胞核染色质浓缩现象明显，而c-myc、cyclin A、cyclin D1 mRNA表达和p-JAK2、p-STAT3蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.0...     

消岩汤经Wnt通路抑制肺腺癌A549细胞增殖的机制研究

目的 探讨消岩汤经Wnt通路抑制人肺腺癌A549细胞增殖的可能机制。方法 体外培养A549细胞,加入梯度浓度消岩汤(10、50、100、200、300 g/L)后,采用CCK8法检测A549细胞存活率。通过PCR测定Wnt通路相关基因β-catenin、c-myc、凋亡相关基因bcl-2、caspase-3表达情况;通过荧光素酶报告基因检测反应Wnt通路活性。流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果 消岩汤可以剂量和时间依赖性地抑制A549细胞的增殖,同时消岩汤可以剂量依赖性地显著降低A549细胞中β-catenin、c-myc的表达水平,抑制Wnt通路活性,并通过降低bcl-2表达、增强caspase-3表达来促进了肿瘤细胞凋亡。结论 消岩汤可能通过抑制Wnt信号通路来抑制A549细胞的增殖、促进凋亡。     

汉黄芩素对胃癌细胞SGC7901凋亡、侵袭迁移及Wnt/β-catenin信号通路的影响研究

目的:探讨汉黄芩素对胃癌细胞SGC7901凋亡、侵袭迁移及Wnt/β-连接素(β-catenin)信号通路的影响。方法:常规培养3种常见胃癌细胞株(SGC7901、BGC-823及MKN-45)至对数生长期,采用终浓度0、20、50、100、200μmol/L汉黄芩素处理24、48、72、96 h后采用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞增殖情况,分别采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术、划痕实验及Transwell细胞侵袭实验检测各浓度汉黄芩素作用24、48 h后SGC7901细胞的凋亡率及迁移、侵袭能力,Western blotting检测各浓度汉黄芩素作用48 h后SGC7901细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin及下游靶分子C-myc、细胞周期素D1(Cyclin D1)的蛋白水平。结果:汉黄芩素在20~200μmol/L范围内可呈浓度和时间依赖性抑制SGC7901、BGC-823及MKN-45细胞增殖。与汉黄芩素0μmol/L组比较,各浓度汉黄芩素作用24、48 h后SGC7901细胞凋亡率均升高,迁移距离和穿膜细胞数均降低(P0.05);除汉黄芩素20μmol/L组的β-catenin水平外,其余浓度SGC7901细胞β-catenin、C-myc及Cyclin D1蛋白水平均低于0μmol/L(P0.05),其作用呈量-效关系。结论:汉黄芩素对胃癌细胞的增殖有抑制作用,同时可诱导凋亡和抑制细胞侵袭和迁移,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路激活有关。     

黄芪多糖通过Wnt/β-catenin信号通路促进肝癌细胞凋亡研究

目的探讨黄芪多糖通过Wnt/β-catenin信号通路对人肝癌Hep G2细胞增殖及凋亡的影响。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Hep G2细胞增殖能力和存活率;Annexin V-FITC/PI双染和Caspase-3活性检测细胞凋亡;荧光素酶实验检测黄芪多糖(100、200 mg/L)处理后Hep G2细胞Wnt/β-catenin通路活性改变;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blotting法检测细胞内的β-catenin、c-myc和CyclinD1表达水平。结果与对照组比较,随着黄芪多糖质量浓度的增加和作用时间的延长,Hep G2细胞存活率显著降低(P0.05)。与对照组比较,黄芪多糖100、200mg/L组Hep G2细胞凋亡率显著升高(P0.05);凋亡关键因子Caspase-3的相对活性显著升高(P0.05),cleaved Caspase-3蛋白水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著降低;荧光素酶活性显著降低(P0.05);β-catenin、c-myc和Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01)。结论黄芪多糖通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制凋亡相关基因Bcl-2的表达,促进Hep G2细胞凋亡。     

丹参酮ⅡA对人冠状动脉内皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的?观察丹参酮ⅡA（STS）对缺氧/复氧（H/R）所致人冠状动脉内皮细胞（HCAEC）损伤的保护作用，并探讨其作用机制。方法?将HCAEC分为对照、H/R、STS组。对照组正常培养，H/R、STS组接受H/R干预，STS组采用100μg/mL的STS处理。采用 Hoechst 33258染色测定细胞的凋亡情况，免疫荧光法检测自噬相关蛋白LC3的表达，Western Blot检测内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、Beclin1蛋白、LC3蛋白、糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白GSK-3β、p-GSK-3β、mTOR、p-mTOR的表达。CCK8法测定50、100μg/mL STS对3-甲基腺嘌呤（3-MA）干预H/R组后细胞活性的影响。结果?与对照组比较，H/R组 HCAEC细胞凋亡率、LC3、Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ及p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达升高（P<0.05，P<0.01），eNOS及p-mTOR/mTOR表达降低（P<0.01）；与H/R组比较，STS组LC3、Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ、eNOS及p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达增加（P<0.05，P<0.01），HCAEC细胞凋亡率及p-mTOR/mTOR表达降低（P<0.05，P<0.01）。50、100μg/mL STS均可使3-MA干预后的H/R组HCAEC存活率升高（P<0.05）。结论? STS可能通过调节GSK-3β/mTOR信号通路，抑制内皮细胞凋亡，从而减缓H/R损伤过程中内皮细胞损伤。     

构树总黄酮诱导HepG2细胞凋亡及其机理研究

目的:探讨构树总黄酮诱导HepG2细胞凋亡的机理。方法:采用流式细胞术观察构树总黄酮对HepG2细胞周期、细胞内活性氧(ROS)水平的影响,用qRT-PCR测定c-Myc,p53,bax,bcl-2和caspase-3基因mRNA表达水平的变化。结果:构树总黄酮剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖。62.5μg/ml的构树总黄酮作用24 h,显著抑制HepG2细胞增殖,增加凋亡细胞比例,并将HepG2细胞阻滞于G1期;100μg/ml的构树总黄酮作用24 h,显著上调HepG2细胞p53、bax、caspase-3的mRNA水平,显著下调cMyc、bcl-2的mRNA水平;200μg/ml的构树总黄酮作用HepG2细胞6 h,显著增加细胞内ROS含量。结论:构树总黄酮能调节HepG2细胞c-Myc、p53、bax、bcl-2和caspase-3基因表达,并通过氧化应激,诱导HepG2细胞进入线粒体凋亡途径。     

姜黄素抑制Wnt/β-catenin信号通路诱导乳腺癌细胞凋亡的机制研究

目的研究姜黄素对人乳腺癌细胞株BT549细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法取对数生长期BT549细胞,制成单细胞悬液,计数并接种于96孔培养板,每孔约5 000个细胞,24 h后加浓度分别为0,10,20,40,80μmol/L的姜黄素,培养12,24,48 h后采用MTT实验检测BT549细胞增殖抑制率;分别用0,10,20,40,80μmol/L姜黄素处理细胞,48h后采用TUNEL染色法检测细胞凋亡指数;分别用0,10,20,40,80μmol/L姜黄素处理细胞,48 h后采用Western blot实验检测细胞增殖、凋亡相关蛋白的表达量。结果 MTT结果显示,随培养时间延长,姜黄素0,20,40,60,80μmol/L组BT549细胞增殖抑制率逐渐增高(P均0.05),且同时间点内姜黄素0,20,40,60,80μmol/L组细胞增殖抑制率随剂量增加逐渐增高(P均0.05)。TUNEL染色结果显示,姜黄素0,20,40,60,80μmol/L组BT549细胞凋亡指数随剂量增加逐渐增加(P均0.05)。Western blot实验结果显示,随着姜黄素浓度的增加,总蛋白中β-catenin的表达不受影响(P0.05),而细胞核中β-catenin的表达逐渐减少(P0.05)。结论姜黄素通过Wnt/β-catenin信号传导通路抑制乳腺癌细胞株BT549细胞的增殖和诱导其凋亡,并呈现时间、剂量依赖性。     

褐藻糖胶对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226中Wnt/β-catenin通路的影响研究

目的探讨褐藻糖胶诱导多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226凋亡过程中Wnt/β-catenin通路的变化。方法应用褐藻糖胶诱导多发性骨髓瘤细胞株RPM18226的凋亡,观察多发性骨髓瘤细胞株经10,25,50,100μg/m L浓度褐藻糖胶分别作用24,48,72 h后细胞增殖抑制率。将细胞分为3组:空白组不予药物干预,褐藻糖胶组给予25μg/m L褐藻糖胶培养,Wnt通道抑制剂(DKK-1)组给予DKK-1培养。用Annexin V-FITC/PI双染法检测3组RPMI822细胞凋亡率,通过Western blot方法检测3组β-catenin与c-myc蛋白表达情况。结果随褐藻糖胶浓度的增高和作用时间的延长,细胞增殖抑制率明显增高(P均<0.05)。褐藻糖胶组细胞凋亡率明显高于空白组;褐藻糖胶组和DKK-1组β-catenin和c-myc蛋白表达水平均明显低于空白组(P均<0.05),褐藻糖胶组与DKK-1组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论褐藻糖胶能够诱导多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226发生凋亡,与DKK-1作用相当,并且褐藻糖胶能够有效抑制多发性骨髓瘤细胞株中Wnt/β-catenin通路的活化状态,为有效治疗多发性骨髓瘤患者提供了理论依据。     

芪楼丸通过调控JAK/STAT信号通路对人肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨芪楼丸通过调控JAK/STAT信号通路对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法 40只大鼠随机分为对照组(10 mL/kg生理盐水)和芪楼丸低、中、高剂量组(6.75、13.5、27 g/kg芪楼丸浸膏),各组连续干预5 d,腹主动脉取血制备含药血清。取对数生长期人肝癌HepG2细胞，分别给予各组芪楼丸含药血清干预24、48、72 h。采用CCK8法检测细胞增殖抑制情况，Annexin V-FITC/PI双染流式细胞法检测细胞凋亡情况，ELISA法检测细胞Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9水平，RT-qPCR法检测细胞Bax、Bcl-2 mRNA表达，Western blot法检测细胞JAK2、STAT3、STAT5、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达。结果 与对照组比较，芪楼丸含药血清能抑制HepG2细胞增殖(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.01),细胞中Bax、caspase-3、caspase-9水平和Bax mRNA表达均升高(P<0.01),Bcl-2水平、Bcl-2 mRNA表达和JAK2、STAT3、p-JA...     

灰树花多糖对宫颈癌细胞增殖和转移的影响及机制

目的探讨灰树花多糖对宫颈癌Caski细胞增殖、凋亡、侵袭迁移及PI3K/AKT(磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B)信号通路的影响。方法 50、100、200μg/mL灰树花多糖处理Caski细胞48 h,通过MTT比色法、Transwell小室及Annexin V-FITC/PI双染法分别检测细胞增殖、侵袭迁移及凋亡率,Western blot检测AKT、p-AKT、PCNA(增殖细胞核抗原)、Cleaved caspase-3(裂解的半胱天冬酶3)和E-cadherin蛋白(上皮钙黏蛋白)表达。使用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002(10μmol/L)单独或联合灰树花多糖(10μmol/L LY294002和200μg/mL灰树花多糖)处理Caski细胞48 h,检测各组细胞增殖、侵袭迁移、凋亡及AKT、p-AKT、PCNA、Cleaved caspase-3和E-cadherin蛋白表达。结果随着灰树花多糖质量浓度增加细胞增殖、侵袭和迁移能力降低,凋亡率升高,p-AKT和PCNA表达降低,Cleaved caspase-3和E-cadherin表达升高(P0.05)。LY294002可增强灰树花多糖对Caski细胞增殖、侵袭迁移、凋亡及p-AKT、PCNA、Cleaved caspase-3和E-cadherin表达的影响。结论灰树花多糖可通过阻断PI3K/AKT信号通路抑制宫颈癌Caski细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。     

健脾消癌方对人结肠癌HCT116细胞周期、凋亡及Wnt/β-catenin信号通路相关因子的影响

目的观察健脾消癌方对Wnt/β-catenin信号通路相关因子及人结肠癌HCT116细胞周期、凋亡的影响,探讨其抗大肠癌复发转移的作用机制。方法将对数生长期的HCT116细胞分为空白组、生理盐水组、5-Fu组及健脾消癌方低、中、高剂量组,分别干预48 h,收集细胞,采用流式细胞术检测细胞周期、凋亡,Western blot检测细胞核内β-catenin蛋白表达,PCR检测c-myc、cyclinD1 mRNA表达。结果与空白组及生理盐水组比较,健脾消癌方各剂量组HCT116细胞凋亡比例、G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低,且其细胞核内β-catenin蛋白表达降低,c-myc、cyclinD1 mRNA表达降低,尤以健脾消癌方高剂量组明显,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论健脾消癌方可促进人结肠癌HCT116细胞凋亡并将其细胞周期阻滞,其机制可能与调节Wnt/β-catenin信号通路有关。     

人参皂苷Rg3联合紫杉醇抑制人肝癌细胞HepG2增殖和对裸鼠移植瘤模型的作用机制研究

目的:探究人参皂苷Rg3联合紫杉醇抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,抑制裸鼠移植瘤体内肝脏肿瘤的增长及促进凋亡的作用。方法:体外实验,采用MTT法检测人参皂苷Rg3联合紫杉醇对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用;体内实验,构建人肝癌HepG2细胞裸鼠移植瘤动物模型,随机分为人参皂苷Rg3组,GS-Rg3:10 mg/(kg·d)灌胃,紫杉醇组,Taxol:10 mg/kg腹腔注射,每周2次,联合组,GS-Rg3+Taxol,给药剂量和方法同上,对照组,灌胃给与等体积生理盐水,共4组,每组10只。连续给药3周,给药结束后颈椎脱臼处死,计算分析各实验组的肿瘤抑制率;WB法检测凋亡蛋白caspase-3、bac-2/bax的表达情况。结果:体外实验结果示,与24 h处理组比较,紫杉醇联合人参皂苷Rg3(30、60μg/mL)在48 h、72 h后对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用显著升高(P<0.05);与48 h处理组比较,紫杉醇联合人参皂苷Rg3(30、60、120μg/mL)在72 h后对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用显著升高(P<0.05)。体内试验结果示,给药14 d后...     

裙带菜多糖诱导人食管癌细胞TE-13凋亡的实验研究

目的探讨裙带菜多糖诱导人食管癌细胞TE-13凋亡的作用及其机制。方法采用MTT法分析裙带菜多糖(25、50、100μg/mL)分别作用24、48、72 h后对TE-13细胞增殖的抑制作用;用透射电镜观察25、50、100μg/mL裙带菜多糖分别作用48 h后细胞的凋亡结构变化;用流式细胞术分析TE-13细胞的凋亡率和检测Sur-vivin蛋白的表达水平。结果不同质量浓度的裙带菜多糖均可明显抑制食管癌TE-13细胞的增殖(P0.05),其抑制作用呈质量浓度依赖性,作用24 h后的IC50为44.8μg/mL。不同质量浓度裙带菜多糖作用48 h后,均可诱导TE-13细胞凋亡,100μg/mL裙带菜多糖可诱导TE-13细胞凋亡率达70.51%,导致TE-13细胞发生凋亡特征性超微结构改变,并使TE-13细胞Survivin蛋白表达水平明显降低(P0.01)。结论裙带菜多糖可抑制TE-13细胞增殖,诱导细胞凋亡,该作用与下调细胞Survivin蛋白表达有关。     

桑根白皮素调控人结肠癌HCT116细胞周期阻滞及其抑制细胞增殖的体外研究

目的观察中药提取物桑根白皮素对结肠癌HCT116细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡的影响,探讨其相关机制。方法体外以不同浓度桑根白皮素作用于HCT116细胞72 h,CCK-8法检测细胞增殖,计算细胞生长抑制率和IC50,取25.4μmol/L和50.8μmol/L桑根白皮素作用于HCT116细胞24、48、72 h,CCK-8法检测细胞增殖,镜下观测细胞形态并摄图;25.4μmol/L桑根白皮素作用于细胞24 h后,流式细胞仪检测细胞周期分布,荧光显微镜下TUNEL法原位检测细胞凋亡;Western blot检测药物干预后β-catenin通路蛋白和细胞周期蛋白的表达变化。结果桑根白皮素对HCT116细胞增殖的抑制作用呈浓度/时间依赖性,72 h IC50为25.4μmol/L;桑根白皮素阻滞HCT116细胞周期于G0/G1期和G2/M期,对细胞凋亡无明显诱导作用;桑根白皮素显著降低β-catenin通路相关蛋白β-catenin、c-Myc及细胞周期调控蛋白cyclin D1、cyclin B1的表达。结论桑根白皮素可阻滞HCT116细胞周期,抑制细胞增殖,其机制可能是通过下调β-catenin通路活性,并抑制细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin B1表达实现的。     

芒果苷对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响

目的探讨芒果苷在体外的降糖效果及对胰岛素传导关键信号蛋白磷酸化蛋白激酶B[p-AKT(Thr308)]、磷酸化糖原合成激酶3β[p-GSK-3β(Ser9)]、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPKα)、葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)表达的影响。方法培养HepG2细胞,用CCK-8法检测芒果苷对HepG2细胞增殖的影响;采用浓度为1×10^-6 mol/L的胰岛素刺激细胞36 h建立胰岛素抵抗模型;用葡萄糖检测试剂盒检测芒果苷对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响,用western blot法探讨其可能的作用机制。结果芒果苷浓度在>125μg/mL浓度后对HepG2细胞生长有抑制作用,故采用浓度为60、30、15μg/mL的芒果苷进行葡萄糖消耗实验,发现实验组与模型组比较,葡萄糖消耗量明显增加且具有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。western blot结果表明,与正常组比较,模型组p-AKT(Thr308)、p-GSK-3β(Ser9)、AMPKα、GLUT2蛋白表达明显降低且存在显著性差异(P<0.05);与模型组比较,实验组蛋白表达均明显增加,且高剂量组均存在显著性差异(P<0.01,P<0.05),低剂量组除GLUT2蛋白表达具有显著性差异(P<0.05),其他蛋白虽有增加但无统计学意义。结论芒果苷对HepG2细胞胰岛素抵抗有改善作用,其作用机制可能是通过调控p-AKT(Thr308)、p-GSK-3β(Ser9)、AMPKα及GLUT2等蛋白的表达来改善2型糖尿病的胰岛素抵抗。     

茯苓多糖调控NLRP3/细胞焦亡途径对HepG2肝癌细胞的抑制作用及机制

目的 通过观察茯苓多糖调控NLRP3介导细胞焦亡对HepG2肝癌细胞抑制作用,探讨茯苓多糖防治肝癌的作用机制。方法 将HepG2肝癌细胞分为对照组、茯苓多糖组(800μg/mL)、MCC950组(1μmol/L)、MCC950+茯苓多糖组(800μg/mL+1μg/mL)。CCK-8法检测茯苓多糖对肝癌HepG2细胞的抑制率并筛选药物浓度;划痕实验检测细胞迁移能力;荧光实时定量PCR法检测HepG2细胞NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1βmRNA转录水平;Western Blot检测HepG2细胞NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白表达情况;免疫荧光检测各组细胞Caspase-1的表达情况。结果 与对照组相比,茯苓多糖组对细胞有明显抑制作用,且800μg/mL茯苓多糖干预48 h后,细胞抑制效果最好;NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-1βmRNA表达显著增高(P<0.05);NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达显著增高(P<0.05);且促进Caspase-1入核表达。...     

雷公藤多苷通过Wnt/β-catenin缓解IL-1β诱导的软骨细胞损伤

目的探究雷公藤多苷对IL-1β诱导的软骨细胞损伤的作用及其潜在的分子机制。方法密度梯度分离法分离SD大鼠软骨细胞。软骨细胞随机分为对照组、模型组、雷公藤多苷组(10、50μg/mL雷公藤多苷)、 LiCl组(50μg/mL雷公藤多苷+20 mmol/L LiCl),加入10 ng/mL IL-1β诱导软骨细胞24 h,各给药组加入相应药物继续处理24 h。CCK-8检测细胞存活率,试剂盒检测LDH释放量及GAG水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,ELISA检测细胞培养上清液中COX-2、iNOS水平,RT-PCR检测MMP13、Acan、Sox-9 mRNA表达,Western blot检测Wnt通路Wnt3a和β-catenin蛋白的表达。结果雷公藤多苷单独作用对软骨细胞存活率及LDH释放无影响。与对照组比较,模型组细胞存活率降低,LDH释放量增加,细胞凋亡率增加,GAG水平及Acan、Sox-9 mRNA表达降低,COX-2、iNOS水平及MMP13 mRNA表达升高(P<0.05);经雷公藤多苷(50μg/mL)干预后,细胞存活率升高、LDH释放量降低,细胞凋亡率降低,GAG水平...     

宝藿苷-Ⅰ对人食管癌细胞Eca-109 Wnt/β-catenin信号转导通路的影响

目的研究香加皮中提取的宝藿苷-Ⅰ对人食管癌细胞Eca-109的抑制作用及其对Wnt/β-catenin信号转导通路的影响。方法 RT-PCR技术检测不同质量浓度宝藿苷-Ⅰ作用48 h后,细胞β-catenin、Cyclin D1、Survivin m RNA表达的变化,采用流式细胞术分析Eca-109细胞β-catenin、Cyclin D1、Survivin蛋白的表达。结果宝藿苷-I(25、50μg/mL)作用48 h后,Eca-109细胞β-catenin、Cyclin D1、Survivin mRNA及蛋白表达水平明显下降(P<0.01),12.5μg/mL处理组细胞的β-catenin、Cyclin D1、Survivin mRNA及其蛋白表达水平与对照组相比无显著差异。结论宝藿苷-I可能通过下调β-catenin、Cyclin D1、Survivin mRNA及其蛋白表达,影响Wnt/β-catenin信号转导通路,发挥抑制Eca-109细胞增殖作用。     

小檗碱和Wnt/β-catenin信号通路抑制剂对胃癌细胞MKN45增殖凋亡及糖代谢影响研究

目的:探讨小檗碱和Wnt/β-catenin信号通路抑制剂对胃癌细胞MKN45增殖、凋亡和糖代谢的影响。方法:用不同浓度的小檗碱处理MKN45细胞,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性并计算半数抑制浓度(IC_(50)),分别采用24μmol/L的小檗碱(小檗碱组)、Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535(FH535组)以及24μmol/L的小檗碱和FH535联合作用(联合组)MKN45细胞,MTT检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞糖代谢指标己糖激酶、丙酮酸激酶相对活性和培养液上清中乳酸相对含量,Western blot法检测细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)水平。结果:与未使用小檗碱作用的MKN45细胞比较,小檗碱可降低MKN45细胞的吸光度值且呈剂量依赖性,IC_(50)值为(24.38±2.81)μmol/L,因此选用24μmol/L的小檗碱用于后续实验。与对照组比较,小檗碱组、FH535组、联合组细胞A值均显著降低,细胞凋亡率均显著升高,丙酮酸激酶、己糖激酶及乳酸相对含量均显著降低,β-catenin和c-myc蛋白表达水平显著降低,Cleaved Caspase-3蛋白表达水平显著升高,且联合组的各检测指标均较小檗碱组和FH535组变化明显。结论:小檗碱和Wnt/β-catenin信号通路抑制剂均能够抑制MKN45细胞增殖和糖酵解并诱导其凋亡,且二者具有协同作用。     

冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭的抑制作用及细胞Wnt2/β-catenin表达的影响

目的:探讨冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭的抑制作用及细胞Wnt2/β-catenin表达的影响。方法:培养人肝癌SMMC-7721细胞,实验分为阴性对照组,冬凌草甲素低剂量组(10μmol/L),冬凌草甲素中剂量组(20μmol/L),冬凌草甲素高剂量组(40μmol/L)。MTT检测肝癌细胞存活率;流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡;RT-PCR检测肝癌细胞Wnt2、β-catenin mRNA的表达;Western Blot检测肝癌细胞内Wnt2、β-catenin蛋白的表达。结果:冬凌草甲素进行剂量干预后,肝癌细胞存活率显著降低(P0.05)。冬凌草甲素以20μmol/L的浓度进行干预后,人肝癌SMMC-7721细胞凋亡高于阴性对照组(P0.05),冬凌草甲素浓度40μmol/L时,人肝癌SMMC-7721细胞凋亡显著高于阴性对照组(P0.01)。冬凌草甲素干预肝癌细胞后,显著降低肝癌细胞内Wnt2、β-catenin mRNA的表达(P0.05)。同时,冬凌草甲素干预后,肝癌细胞内Wnt2、β-catenin蛋白的表达也得到显著降低(P0.05)。结论:冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制Wnt2/β-catenin经典通路上的Wnt2、β-catenin的表达有关。