蕲蛇Ⅱ型胶原蛋白的提取和鉴定表征

该研究通过限制性胃蛋白酶酶解法提取蕲蛇中Ⅱ型胶原蛋白(type Ⅱ collagen,CⅡ),并采用离子交换色谱法对其进行纯化,所得蛋白通过SDS-PAGE凝胶电泳、紫外分光光度法、红外吸收光谱法和质谱法进行表征鉴定,结果显示,蕲蛇CⅡ相对分子质量约为130 kDa,其紫外吸收峰约为223 nm;红外图谱中在1 200~1 450 cm^-1具有特征吸收,表明蕲蛇CⅡ中有特征序列Gly-X-Y肽段,存在三股螺旋结构。通过对蕲蛇CⅡ与牛CⅡ进行蛋白质肽段质谱图分析对照后发现,两者具有相似肽段和CⅡ结构特征。以上鉴定表征结果证明采用酶解法提取蛋白为蕲蛇CⅡ,可为蕲蛇药材CⅡ的进一步药理研究提供实验基础。     

蕲蛇Ⅱ型胶原蛋白对CIA大鼠的治疗作用

目的：研究蕲蛇Ⅱ型胶原蛋白（CⅡ）对胶原诱导性关节炎（collageninducedarthritis,CIA）模型大鼠的治疗作用,观察其治疗效果并探讨其作用机制。方法：90只Wistar大鼠除空白组外均采用牛CⅡ建立CIA模型并进行随机性分组,分为模型组、牛CⅡ组、蕲蛇水提液高、中、低剂量组、蕲蛇CⅡ高、中、低剂量组,每组10只。造模后第11d开始给药,期间采用容积法测量关节肿胀程度,连续给药20d后观察大鼠踝关节病理改变并采用流式细胞术检测大鼠外周血中CD4＋T细胞、CD8＋T细胞亚群水平。结果：与模型组相比,蕲蛇高、中剂量组、蕲蛇CⅡ高、中剂量组和牛CⅡ组均能显著降低CIA大鼠右后足跖肿胀程度、CD4＋T细胞水平,改善大鼠踝关节病理形态,其中蕲蛇CⅡ中剂量组和牛CⅡ组还能显著降低CD4＋/CD8＋比值（P〈0.05）。结论：蕲蛇水提液及蕲蛇CⅡ提取物对CIA大鼠关节炎症均有一定的治疗作用,其治疗机理可能是通过主动免疫抑制降低机体亢进的免疫应答实现的。     

灯盏花素海藻酸钙凝胶小球的制备

目的考察灯盏花素海藻酸钙凝胶小球的制备工艺和最优处方。方法利用滴加法制备凝胶小球,在单因素考察的基础上采用正交设计筛选最优处方。结果最优处方为海藻酸钠质量分数为2.5%,海藻酸钠与药物的比例为1∶1,氯化钙浓度为0.3mol/L。优化处方制备的凝胶小球大小均匀,载药量均匀,包封率和体外释放度具有良好的重现性。结论利用滴加法制备灯盏花素海藻酸钙凝胶小球方法简单。     

前列康宁胶囊制备工艺的优选

目的：优选前列康宁胶囊制备工艺。方法：以浸膏得率，丹参酮ⅡA提取转移率为指标，应用正交试验优选回流提取工艺。结果：最佳提取工艺为A3B2C3，即加药材6倍量的90％乙醇回流提取3h，共提取1次。结论：优选的制备工艺稳定可行。     

活血降脂胶囊制备工艺的研究

目的：优选活血降脂胶囊制备工艺。方法：以浸膏得率，丹参酮ⅡA提取转移率为指标，应用正交试验优选回流提取工艺。结果：水蛭粉碎为120目细粉入药。最佳提取工艺为A3B2C3，即加药材6倍量的90％乙醇回流提取3小时，共提取1次。结论：优选的制备工艺稳定可行。     

前列康宁胶囊制备工艺的优选

目的 :优选前列康宁胶囊制备工艺。方法 :以浸膏得率 ,丹参酮ⅡA 提取转移率为指标 ,应用正交试验优选回流提取工艺。结果 :最佳提取工艺为A3 B2 C3 ,即加药材 6倍量的 90 %乙醇回流提取 3h ,共提取 1次。结论 :优选的制备工艺稳定可行     

活血降脂胶囊制备工艺的研究

目的 :优选活血降脂胶囊制备工艺。方法 :以浸膏得率 ,丹参酮ⅡA 提取转移率为指标 ,应用正交试验优选回流提取工艺。结果 :水蛭粉碎为 12 0目细粉入药。最佳提取工艺为A3 B2 C3 ,即加药材 6倍量的 90 %乙醇回流提取 3小时 ,共提取 1次。结论 :优选的制备工艺稳定可行。     

丹参酮ⅡA纳米囊的制备及其性能评价

目的制备丹参酮ⅡA纳米囊,并评价其性能。方法采用乳化-溶剂挥发法制备丹参酮ⅡA纳米囊,以包封率为指标,单因素试验结合正交试验优化制备工艺与处方,并评价纳米囊的粒径形态。结果以乙酸乙酯-水(1∶2)、0.5 mL司盘-80、丹参酮ⅡA-壳聚糖(1∶5)、乙醇0.4 mL为最佳处方,在温度为50℃,搅拌速度为300 r/min条件下乳化,然后超声30 s,即得纳米囊。所得纳米囊外观圆整,平均粒径(172±10)nm,包封率高达73.2%。结论乳化-溶剂挥发法适用于制备丹参酮ⅡA纳米囊,且工艺稳定。     

旱莲胶囊的制备工艺研究

目的研究旱莲胶囊的生产工艺,以便制备质量稳定的制剂。方法以本制剂中补骨脂素的含量为指标,用正交试验优选提取工艺,以干浸膏作为考察指标。结果补骨脂素含量高、稳定性好。结论用水提和醇提制备的胶囊剂质量稳定、临床疗效好。     

消斑康肤胶囊制备工艺的优选

目的:优选消斑康肤胶囊制备工艺。方法:以浸膏得率,丹参酮ⅡA提取转移率为指标,应用正交试验优选回流提取工艺。结果:最佳提取工艺为A3B2C3,即加药材6倍量的90%乙醇回流提取3 h,共提取1次。结论:优选的制备工艺稳定可行。     

清痹胶囊对Ⅱ型胶原蛋白诱导关节炎模型大鼠的影响

目的:观察清痹胶囊对Ⅱ型胶原蛋白诱导的关节炎模型大鼠的影响。方法:Ⅱ型胶原蛋白注射法诱导关节炎模型,随机分为模型组,清痹胶囊大、中、小剂量组,阳性药组,并设空白组。观察大鼠体质量变化及关节肿胀情况,记录关节炎评分。结果:清痹胶囊中剂量组能显著增加模型大鼠的体质量,药后4周能显著抑制模型大鼠的关节肿胀,各剂量组药后5周都能显著抑制模型大鼠的关节肿胀。清痹胶囊中、小剂量组能显著改善模型大鼠踝关节组织病理学变化。结论:清痹胶囊对Ⅱ型胶原蛋白诱导的关节炎模型大鼠病理改变有明显改善作用。     

用正交试验法探讨中风胶囊中芍药甙的制备工艺

本文用正交试验法优选“中风胶囊”中芍药甙的制备工艺。结果表明，芍药甙的最佳提取工艺是：赤芍以７０％乙醇浸泡后进行单独回流提取２次，每次１ｈ，提取物减压８５℃烘干。芍药甙含量２．９％。     

复方补血胶囊的制备工艺研究

以黄芪甲甙含量和出膏率为指标，采用正交试验设计对复方补血胶囊的制备工艺进行优选。结果表明，最佳制备工艺为：加水量为方药重的12倍，煎煮2次，沸煮3．5h。（第一次沸煮2．0h，第二次沸煮1．5h。）     

宁参胶囊制备工艺的研究

以天门冬酰胺含量、浸膏得率为指标，对七种提取方法进行了考察，确定了宁参胶囊制备工艺路线；并经正交实验优选了制备工艺条件。结果表明，以１２倍的水为溶媒，煎煮１ｈ并只煎１次的制备工艺为最佳。     

反相HPLC法测定苏斯-12胶囊中胡黄连苷Ⅱ的含量

目的：建立反相高效液相色谱法测定苏斯-12胶囊中胡黄连苷Ⅱ含量的方法。方法：选用KromasiL C18柱（4.6×250mm）及DiamonsiL C18柱（4.6×250mm）流动相：乙睛-1%冰醋酸溶液（4：86）,紫外检测波长为275nm,柱温40℃对胡黄连苷Ⅱ行含量测定。结果：黄连苷Ⅱ在0.1431μg～0.8586μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。r=0.999505（n=6）,平均回收率为98.79%,RSD为1.86%。结论：本法简便、可靠,可作为该药的质量控制方法,也可为含胡黄连类蒙成药制剂的定量作参考。     

不同交联方法制备的鹿茸多肽-胶原蛋白/壳聚糖复合材料对成骨细胞增殖的影响

目的： 检测不同交联方法制备的鹿茸多肽-胶原蛋白/壳聚糖复合材料的结构并考察其对成骨细胞增殖的影响。 方法： 将胶原蛋白溶液和壳聚糖溶液（9：1）充分混匀,分别采用真空干热交联法和0.25%戊二醛交联法制备含鹿茸多肽（1.0 mg·L^-1）的复合材料。通过扫描电镜观察复合材料的空间构象,MTT试验检测不同交联法制备的复合材料对成骨细胞hFOB1.19增殖及碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。 结果： 干热交联复合材料的结构仍处于不均匀分布状态,但孔径明显减小;而戊二醛交联复合材料呈规则的层状皱褶结构,支架内部孔径变大,且主要以片状结构为主。交联的复合材料组能促进成骨细胞增殖,显著优于对照组和复合材料组,戊二醛交联组对成骨细胞的增殖促进作用优于干热交联组。交联后的鹿茸多肽-胶原蛋白/壳聚糖复合材料能有效地提高成骨细胞ALP活性。 结论： 戊二醛交联法能有效提高鹿茸多肽-胶原蛋白/壳聚糖复合材料的性能,促进成骨细胞增殖和ALP酶活性升高。     

两亲性纳米胶束聚乙二醇接枝壳聚糖偶联脱氧胆酸-姜黄素的制备与评价

目的 合成聚乙二醇接枝壳聚糖偶联脱氧胆酸(mPEG-CS-DA)纳米载药系统,并以姜黄素(Cur)为模型药物,构建两亲性纳米胶束,并对其进行理化表征。方法 采用两步反应合成mPEG-CS-DA,分别用IR、¹H-NMR等技术对其结构进行表征,用差示扫描量热法(DSC)对其物理性质进行分析,并考察其在不同溶剂中的溶解性能。筛选mPEG-CS-DA-Cur纳米胶束制备方法,并测定其包封率、载药量、粒径分布及体外释放度。结果 以透析法制备的载药纳米胶束具有较高的包封率,较小的平均粒径和无残留溶剂的特点。mPEG-CS-DA-Cur的载药量为(12.11±1.52)%,包封率为(89.37±4.12)%,平均粒径为161.4 nm,分布均匀,胶束中药物体外释放缓慢、稳定。结论 研究合成了1种新型的两亲性壳聚糖衍生物,是1种良好的胶束载体材料,对难溶性药物Cur具有很好的包封率和载药量,为后续药物进行靶向性研究提供了一定的基础。     

乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白对大鼠佐剂型关节炎滑膜细胞因子的作用

目的:观察乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白(tyPe Ⅱ collagen,CⅡ)对大鼠佐剂型关节炎(adjuvant arthritis,AA)滑膜细胞因子的作用.方法:限制性胃蛋白酶降解法提取乌梢蛇CⅡ,SDS-PAGE凝胶电泳法和紫外分光光度计法鉴定;采用完全弗氏佐剂(complete Freud′s adjuvant,CFA)足垫皮下注射诱导AA大鼠模型;收集滑膜细胞上清液,L929细胞毒性法检测滑膜细胞上清液中TNF-α生物活性,MTT法检测滑膜细胞上清液中IL-1β生物活性;ELISA法检测滑膜细胞上清液细胞因子水平.结果:提取的CⅡ分子量约为118kD～120 kD,紫外光谱吸收仪测定提取的CⅡ吸收峰为230nm,均与标准的牛鼻中隔CⅡ相符;乌梢蛇CⅡ各剂量组体外对滑膜细胞上清液TNF-α和IL-1β活性没有直接作用;乌梢蛇CⅡ中剂量组可抑制AA大鼠的滑膜细胞和派氏淋巴结共培体系上清液TNF-α和IL-1β活性(P＜0.01),乌梢蛇CⅡ低、高剂量可抑制AA大鼠的滑膜细胞和派氏淋巴结(PP)共培体系上清液IL-1β活性(P＜0.05);灌服乌梢蛇CⅡ低、中剂量组与模型组比较,TNF-α活性下降(P＜0.05);中剂量组与模型组比较,IL-1β活性下降(P＜0.05);模型组与空白对照组比较,滑膜上清液TNF-α和IL-1β水平显著升高(P＜0.01);乌梢蛇CⅡ中、高剂量组与模型组比较,均能抑制滑膜上清液TNF-α和IL-1β水平(P＜0.01);乌梢蛇CⅡ低剂量组能显著抑制滑膜上清液IL-1β水平(P＜0.01);乌梢蛇CⅡ中剂量能显著升高滑膜上清液TGF-β(P＜0.01);结论:乌梢蛇CⅡ体外对滑膜细胞炎症因子无直接作用,灌服乌梢蛇CⅡ可以抑制滑膜细胞炎症因子的水平和活性.     

正交试验法改进胃炎康胶囊的制备工艺

目的 优选胃炎康胶囊的提取工艺。方法 采用正交设计法,以浸膏得率和芍药苷转移率为指标,优选 胃炎康胶囊的提取工艺。结果 最佳提取工艺为A2B2C2,即用8倍量的70％乙醇,加热回流提取2次,2 h／次。结论 优 选得到的工艺稳定可行。     

不同针刺方式对早期膝骨关节炎兔模型软骨细胞及Ⅱ型胶原蛋白代谢的影响

目的:探索针刀、电针治疗对早期膝骨关节炎(KOA)兔模型关节软骨细胞结构及Ⅱ型胶原的表达情况。方法:30只新西兰兔按体质量随机分为空白组(6只)及KOA造模组(24只),KOA造模组应用改良Videman法制动4周建立早期KOA兔模型。干预结束后,对兔股骨内侧髁软骨进行免疫荧光双标染色(激光共聚焦显微镜观察),应用ELISA法检测兔血清、关节液CTX-2的含量。结果:(1)治疗后针刀组、电针组血清(P=0.091,P=0.657)、关节液(P=0.066,P=0.032)CTX-2含量降低。(2)治疗后针刀组、电针组细胞核(P=0.058,P=0.051)、F-actin骨架蛋白(P=0.184,P=0.220)和Ⅱ型胶原(P=0.168,P=0.236)IOD表达降低,但差异无统计学意义。结论:针刀、电针对早期KOA兔模型膝关节软骨细胞及Ⅱ型胶原蛋白代谢具有一定保护作用,但效果不如塞来昔布。