桑寄生提取物联合miR-375对骨关节炎软骨细胞活力和凋亡的影响

目的:研究桑寄生提取物(SJS)联合微小RNA-375(miR-375)对骨关节炎软骨细胞活力和凋亡的影响及其作用机制。方法:将人原代骨性关节软骨细胞RPOC分为对照组(control)组、白细胞介素1β(IL-1β)组、IL-1β+SJS低剂量(SJS-L)组、IL-1β+SJS中剂量(SJS-M)组、IL-1β+SJS高剂量(SJS-H)组、IL-1β+anti-miR-NC组、IL-1β+anti-miR-375组、IL-1β+SJS-H+miR-NC组、IL-1β+SJS-H+miR-375组。MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,qPCR检测miR-375的表达,Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、P21、Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白的水平。结果:与control组比较,IL-1β组的RPOC活力(24 h、48 h和72 h)及cyclin D1和Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0. 05),而P21、Bax和caspase-3蛋白的水平、细胞凋亡率及miR-375表达量均显著升高(P<0. 05)。与IL-1...     

超声对软骨细胞凋亡、caspase-8和caspase-3表达的影响

背景：超声治疗能够缓解疼痛,改善膝骨关节炎患者的运动功能,但目前关于超声治疗的文献缺乏一致性。 目的：进一步验证超声治疗的膝骨关节炎有效性。 方法：24 只兔子随机分为3组,正常组不干预;模型组兔行前交叉韧带离断诱导膝骨关节炎,不接受任何治疗;超声组兔建模后接受超声波治疗10 min/次,1次/d,0.3 W/cm2,1 MHz,共治疗10次。采用苏木精-伊红染色进行兔关节软骨组织学观察,运用免疫印迹和 RT-PCR技术检测兔软骨中的caspases3和caspases8 的表达,TUNEL技术检测兔膝骨关节软骨细胞凋亡率。 结果与结论：正常兔软骨组织软骨细胞呈柱状整齐的排列,模型中软骨层变薄,软骨细胞排列无序而少。超声治疗后软骨细胞重新排列,趋于整齐,细胞数增加。模型组为膝骨关节炎模型;与正常组比较,模型组和超声组改良Mankin 评分较高,模型组和超声组软骨细胞凋亡指数更高,模型组高于超声组。与正常组比较,模型组和超声组caspase-3 和caspase-8表达较高,超声治疗后两项指标表达下降。结果表明,超声可以改善软骨组织结构、降低caspase-3、caspase -8的表达,降低软骨细胞凋亡。提示超声治疗膝骨关节炎是有效的。     

NLRP2-caspase-1 炎性小体在脑缺血损伤中的表达量及作用

目的:探究NOD样受体家族蛋白2-含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(NLRP2-caspase-1)炎性小体与脑缺血损伤的关系及作用机制。方法:荧光定量PCR(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western blot)检测氧糖剥夺损伤的星形胶质细胞中NLRP2基因的表达;采用小RNA干扰(siRNA)技术沉默NLRP2的表达,将其分为对照组、模型组、空载体组、siRNA NLRP2组,RT-PCR和Western blot观察转染后细胞中NLRP2的表达量;流式细胞术检测细胞的凋亡,Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)、白细胞介素-1β(IL-1β)、核转录因子k B(NF-κB) p65、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase-1)、caspase-1前体(Pro-caspase-1)、磷酸化p65(pp65)蛋白水平。结果:结果显示,氧糖剥夺损伤的星形胶质细胞中NLRP2基因的表达量显著增加(P0. 05),促进细胞凋亡(P0. 05),显著降低Bcl-2蛋白水平(P0. 05),显著增加Bax、caspase-3蛋白水平(P0. 05)。沉默NLRP2表达较模型组显著抑制细胞的凋亡(P0. 05),上调Bcl-2蛋白水平(P0. 05),下调Bax、caspase-3蛋白水平(P0. 05); siRNA NLRP2组细胞中caspase-1、IL-1β、P65、p-P65蛋白显著低于模型组(P0. 05)。结论:NLRP2在氧糖剥夺损伤的星形胶质细胞中显著上调,可能通过调控细胞的炎症反应、凋亡信号通路以及NF-κB信号通路参与脑缺血损伤神经细胞的凋亡。     

大黄素可通过抑制NLRP3炎性小体活化减轻哮喘小鼠的炎症反应

目的探讨大黄素对哮喘小鼠炎症反应及对肺组织中NOD样受体蛋白结构域相关蛋白3(NODlike receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)、凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)和胱冬肽-1(caspase-1)表达的影响。方法 36只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组、哮喘组和大黄素组。以卵蛋白为致敏原制备哮喘小鼠模型。收集肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数和分类计数,ELISA方法检测BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)与白介素-4(IL-4)水平。HE染色观察小鼠肺组织病理学改变。Western-blot检测各组小鼠肺组织中NLRP3、ASC和caspase-1的表达。结果大黄素能减少BALF中炎性细胞总数和嗜酸性粒细胞,降低BALF中TNF-α、IL-1β与IL-4含量,减轻肺组织炎性反应。Western-blot结果显示,哮喘组小鼠肺组织NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达显著高于对照组(P0.01);与哮喘组比较,大黄素组小鼠肺组织NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达显著降低(P0.01)。结论大黄素可通过抑制NLRP3炎性小体活化减轻哮喘小鼠的炎症反应。     

右美托咪定通过Akt/m TOR自噬通路介导NLRP3炎症小体失活而减轻脓毒症大鼠肠损伤

目的:探讨右美托咪定(DEX)是否通过蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)自噬通路介导核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体失活从而减轻脓毒症大鼠肠损伤。方法:随机数字法对50只大鼠分组:假手术组、模型组、DEX组(0、3和6 h腹腔注射10μg/kg DEX)、DEX+NVP-BEZ235组(在DEX组基础上腹腔注射30 mg/kg NVP-BEZ235)及DEX+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(在DEX组基础上腹腔注射15 mg/kg 3-MA),每组10只。除假手术组外,其余各组盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症大鼠模型,建模后给药。HE染色观察肠道组织形态,对结肠标本进行结肠大体形态损伤指数(CMDI)评分;ELISA检测血清中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;免疫组化检测肠道组织中自噬相关蛋白beclin-1和LC3-II蛋白水平;Western blot检测肠道组织中Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、NLRP3、含caspase募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1及其前体pro-caspase-1的蛋白水平。结果:模型组大鼠肠道组织完整性被破坏,细胞脱落和炎症浸润现象明显;DEX组大鼠肠道组织完整,仅出现部分细胞脱落和炎症浸润现象;DEX+NVP-BEZ235组和DEX+3-MA组大鼠肠道完整性被破坏,细胞脱落和炎症浸润明显。与假手术组相比,模型组大鼠CMDI评分,血清中IL-1β和TNF-α水平,肠道组织中beclin-1和LC3-II蛋白阳性率,p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、NLRP3、ASC和caspase-1/pro-caspase-1蛋白水平升高(P0.05);与模型组相比,DEX组大鼠CMDI评分,血清中IL-1β和TNF-α水平,肠道组织中NLRP3、ASC和caspase-1/pro-caspase-1蛋白水平降低(P0.05),肠道组织中beclin-1和LC3-II蛋白阳性率及p-Akt/Akt和pmTOR/mTOR蛋白水平升高(P0.05);与DEX组相比,DEX+NVP-BEZ235组和DEX+3-MA组血清中IL-1β和TNF-α水平及肠道组织中NLRP3、ASC和caspase-1/pro-caspase-1蛋白水平升高(P0.05),肠道组织中beclin-1和LC3-II蛋白阳性率及p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR蛋白水平降低(P0.05)。结论:DEX能够通过激活Akt/mTOR通路促进自噬而介导NLRP3炎症小体失活,从而减轻脓毒症大鼠肠损伤。     

慢性间歇性低氧激活NLRP1炎性小体引起小鼠肝损伤

目的 探讨慢性间歇性低氧(CIH)是否能激活含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白1(NLRP1)炎性小体引起肝损伤。方法 将C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、 CIH组。CIH组小鼠放入CIH仓进行造模(每天8 h,连续4周)。造模后,采用HE染色观察肝组织细胞形态、试剂盒检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,二氢乙啶(DHE)标记检测肝组织活性氧(ROS)的水平,免疫组织化学染色法检测小鼠肝组织NLRP1、含胱天蛋白酶激活和募集结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和胱天蛋白酶1(caspase-1)的表达和定位,Western blot法检测小鼠肝组织中NLRP1、 ASC、 caspase-1、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的蛋白表达,ELISA检测小鼠血清IL-1β、 TNF-α水平。结果与对照组相比,CIH组肝细胞病变明显,细胞出现破裂、坏死、炎症细胞聚集,ALT、 AST、 ROS、 IL-1β和TNF-α水平显著升高;NLRP1、 ASC、caspase-1、IL-1β和TNF-α的蛋白表达升高。结...     

人白细胞介素1β通过线粒体途径激活caspase-3诱导A375-S2细胞凋亡

目的研究人白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)体外诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的机制。方法通过Hoechst33258荧光染色,观察A375-S2细胞在IL-1β作用下的形态学变化。使用琼脂糖凝胶电泳法检测IL-1β对细胞DNA降解的影响。应用caspase活力测定法检测IL-1β对caspase-3活力的影响。利用Westernblot方法检测IL-1β对caspase-3底物的降解以及对细胞内Bcl-2家族和AIF蛋白表达的调节作用。结果IL-1β(1nmol/L)能够诱导A375-S2细胞凋亡,72h时细胞体变小,细胞核呈现固缩、断裂,并出现因凋亡引起的DNA梯状条带。IL-1β诱导细胞凋亡过程中,caspase-3的活力升高,其两种底物PARP和ICAD均发生降解,线粒体中抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL的表达减少,促凋亡蛋白Bax的表达增加。凋亡诱导因子AIF蛋白的表达也有所增加。结论IL-1β通过激活caspase-3降解其底物,激活AIF,并上调线粒体内Bax/Bcl-2和Bax/Bcl-xL的表达比例诱导A375-S2细胞凋亡。     

X线辐照激活NLRP3炎性体引起损伤肺组织细胞焦亡(pyroptosis)北大核心CSCD

目的建立放射性肺损伤模型,研究胱天蛋白酶1(caspase-1)依赖的程序性细胞死亡即细胞焦亡(pyroptosis)在放射性肺炎发病机制中的作用。方法 BALB/c小鼠胸腔15 Gy X线辐照5 d,处死小鼠。HE染色观察肺组织形态变化,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测辐照后肺组织细胞凋亡情况,Western blot法检测肺组织γ组蛋白2AX(γ-H2AX)、抗原KI-67(ki67)、含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)、caspase-1和含CARD结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC/TMS-1)的表达情况,实时荧光定量PCR检测肺组织白细胞介素6(IL-6)、IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)、caspase-1、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18的m RNA水平,采用免疫组织化学染色检测肺组织NLRP3、caspase-1和TMS1的表达情况,使用caspase-1活性检测试剂盒检测caspase-1活性;ELISA检测血清IL-1β和IL-18水平。结果辐照后小鼠肺泡壁毛细血管扩张充血,炎性细胞浸润,肺泡壁增厚;肺组织细胞TUNEL染色阳性指数升高,γ-H2AX和ki67的表达增强,提示细胞DNA遭到破坏且细胞增殖活性降低;肺组织细胞中IL-6、IL-8、TNF-α和MCP-1 m RNA水平增加;血清IL-1β和IL-18水平增加,肺组织NLRP3、caspase-1、ASC/TMS-1表达水平增加,caspase-1活性增强。结论辐照后,激活小鼠肺组织NLRP3炎性体诱导肺组织的细胞发生pyroptosis。     

TRIM31 过表达改善脂多糖诱导下神经细胞的炎症损伤

目的:探讨E3泛素连接酶31(TRIM31)对LPS诱导PC12细胞炎症性损伤的保护作用和机制。方法:用不同浓度LPS处理PC12细胞24 h,MTT法检测细胞增殖活性,Western blot检测LPS最佳浓度处理后PC12细胞TRIM蛋白表达水平。将TRIM31过表达质粒(pcDNA3.1-TRIM31)及其阴性对照质粒(pcDNA3.1-NC)转染至PC12细胞,qRT-PCR和Western blot检测细胞TRIM31 mRNA和蛋白表达水平。PC12细胞分为对照组(Control)、LPS组、LPS+NC组和LPS+TRIM31组,分组干预后,ELISA检测细胞上清IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-18含量,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫荧光检测NLRP3蛋白表达,qRT-PCR检测NLRP3、caspase-1 mRNA表达,Western blot检测NLRP3、caspase-1、Cleaved-caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:LPS剂量增加,PC12细胞增殖活性逐渐降低(P0.05),LPS处理可降低PC12细胞TRIM31蛋白表达水平(P0.01),TRIM31过表达,PC12细胞TRIM31 mRNA和蛋白表达水平显著提高(P0.05)。与Control组相比,LPS组细胞上清中IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-18含量、细胞凋亡率及细胞Cleaved-caspase-3和Bax蛋白水平显著提高(P0.05),Bcl-2和TRIM31蛋白水平显著降低(P0.05),NLRP3蛋白荧光强度及NLRP3、caspase-1 mRNA和蛋白表达水平显著提高(P0.05);与LPS组相比,LPS+TRIM31组细胞上清中IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-18含量、细胞凋亡率及细胞Cleaved-caspase-3和Bax蛋白水平显著降低(P0.05),Bcl-2蛋白水平显著提高(P0.05),NLRP3荧光强度及NLRP3、caspase-1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论:过表达TRIM31能通过抑制NLRP3炎症小体活化,改善LPS诱导的PC12细胞炎症损伤。     

低能量体外冲击波对兔膝骨关节炎软骨细胞修复和重塑能力的影响

目的研究低能量体外冲击波(ESW)对兔膝骨关节炎软骨细胞刺激作用。方法清洁级健康5月龄30只大白兔,体质量2.0~2.8 kg。随机分为研究组、模型组与对照组,各10只。研究组与模型组采用石膏固定6周成功建立膝骨关节炎模型,对照组未建模;其中研究组采用0.1 m J/mm2 ESW治疗1 000次,余2组不采用任何干预措施。进行组织病理检查,做Moran评分、Mankin法评分,实验室测定基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-3、MMP-13基因表达和白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平。结果 4周后,研究组兔膝骨关节软骨变薄,表面见少量疏松纤维组织,软骨表面部分修复;模型组兔膝骨关节呈典型关节炎改变;对照组兔膝骨关节光滑,软骨结构清晰。与对照组比较,研究组和模型组Moran评分明显降低,Mankin法评分和软骨细胞凋亡率明显增高,软骨MMP-1、MMP-3、MMP-13基因表达水平均明显升高,关节滑液IL-1β、TNF-α水平明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。研究组膝骨关节Moran评分明显高于模型组,Mankin法评分和软骨细胞凋亡率明显低于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。研究组软骨MMP-1、MMP-3、MMP-13基因表达水平均明显低于模型组,关节滑液IL-1β、TNF-α水平明显低于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论低能量体外冲击波通过降低软骨MMP与关节滑液炎性因子水平,从而改善兔膝骨关节炎软骨细胞修复能力和重塑作用,值得临床推广应用。     

电针治疗联合甲氨蝶呤对类风湿关节炎大鼠JAK-STAT信号通路及VEGF表达的影响

目的探讨电针治疗联合甲氨蝶呤对胶原诱导性(CIA)类风湿关节炎大鼠的治疗作用及其机制。方法采用弗氏佐剂与牛Ⅱ型胶原皮下注射复制CIA大鼠模型,并将60只大鼠随机分为对照组、模型组、甲氨蝶呤组、电针组和联合治疗组。在各组大鼠治疗12周后,采用Pelletier评分和Mankin评分对大鼠大体和组织学改变进行评分;ELISA法检测血清中TNF-α、IL-6的水平;RT-PCR检测软骨细胞Ⅱ型胶原m RNA水平,TUNNEL法测定软骨细胞凋亡率,RT-PCR、Western blot和免疫组化检测软骨中JAk-3、STAT-3、VEGF的表达量。结果模型组Pelletier和Mankin评分、软骨细胞凋亡率、血清中IL-6、TNF-α的水平、软骨中JAk-3、STAT-3、VEGF表达量较对照组均明显增高(P<0.05),软骨细胞Ⅱ型胶原m RNA表达水平较对照组明显降低(P<0.05)。甲氨蝶呤组、电针组和联合治疗组Pelletier和Mankin评分、软骨细胞凋亡率、血清中IL-6、TNF-α的水平、软骨中JAk-3、STAT-3、VEGF表达量较模型组均明显降低(P<0.05);其中联合治疗组较甲氨蝶呤组和电针组降低更明显(P<0.05);电针组与甲氨蝶呤组比较无统计学差异(P>0.05)。甲氨蝶呤组、电针组和联合治疗组软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA表达水平较模型组均明显升高(P<0.05);其中联合治疗组较甲氨蝶呤组和电针治疗组升高更明显(P<0.05);电针组与甲氨蝶呤组比较无统计学差异(P>0.05)。结论电针治疗类风湿关节炎疗效明确,联合甲氨蝶呤治疗作用更佳,其作用机制可能与抑制JAK-STAT信号通路和VEGF的表达有关。     

基于NLRP3信号通路探讨活血通脉颗粒对急性心肌梗死大鼠免疫炎症紊乱的干预作用

目的探讨活血通脉颗粒对急性心肌梗死(AMI)大鼠在免疫炎症紊乱的干预作用。方法大鼠42只随机选6只为空白对照组,其余36只大鼠AMI造模。建模后存活大鼠30只随机分成5组,阳性药物对照组,AMI组,活血通脉颗粒低、中、高剂量组,每组6只。空白对照组、AMI组每天灌胃生理盐水,阳性药物对照组184 mg/(kg·d)灌胃辛伐他汀,活血通脉颗粒低、中、高剂量组按生药2.7、5.4、10.8 g/(kg·d)灌胃,每日1次,连续28d。同时建立人H9C2心肌细胞缺氧模型,缺氧处理21 h,加药处理。HE染色观察心肌组织形态学变化;MTS检测心肌细胞活力变化;ELISA检测心肌组织和心肌细胞中IL-1β、TNF-α水平;q RT-PCR检测心肌组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、接头蛋白ASC(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase-1)m RNA水平;蛋白免疫印迹检测心肌组织中NLRP3、ASC、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶酶原(pro-caspase-1)、caspase-1蛋白水平。结果大鼠和人心肌细胞模型中,AMI组心肌细胞破坏、死亡严重,形态及结构损害严重。随着活血通脉颗粒剂量的增加,心肌细胞坏死现象减弱,逐渐恢复形态。大鼠模型中,与空白对照组相比,AMI组心肌组织中IL-1β、TNF-α、NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA和蛋白、pro-caspase-1蛋白表达量升高(P 0.05)。与AMI组相比,活血通脉颗粒低剂量组心肌组织中ASC、pro-caspase-1、caspase-1蛋白表达量降低;活血通脉颗粒中、高剂量组心肌组织中IL-1β、NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA和蛋白、pro-caspase-1蛋白表达量降低,并呈剂量依赖效应(P 0.05)。人心肌细胞中加药6 h时IL-1β、TNF-α的变化与大鼠模型中类似。结论活血通脉颗粒可能通过减弱NLRP3信号通路、抑制促炎因子表达,实现对AMI大鼠的保护作用。     

原花青素减轻TCP磨损颗粒诱导的骨细胞氧化损伤

目的:研究原花青素(PC)对磷酸三钙(TCP)磨损颗粒诱导的骨细胞氧化损伤的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:将TCP磨损颗粒(0.1 g/L)与小鼠长骨MLO-Y4骨细胞共孵育构建骨细胞体外损伤模型,实验分为4组:正常对照(control)组、TCP组、PC(10μmol/L)组和PC(50μmol/L)组。应用Calcein-AM染色和MTT等方法检测骨细胞活力;ELISA检测细胞培养上清液中牙本质基质蛋白1(DMP-1)、骨硬化蛋白(SOST)及白细胞介素1β(IL-1β)水平;流式细胞术定量分析骨细胞凋亡情况;化学比色法检测骨细胞中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,以及细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)释放量;Western blot法检测骨细胞中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、含CARD的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、cleaved caspase-1和IL-1β蛋白水平的变化。结果:与control组比较,TCP组MLO-Y4细胞的损伤、凋亡率及MDA含量显著增加(P0.05),SOD活性显著降低(P0.05),NLRP3、ASC、cleaved caspase-1和IL-1β蛋白水平显著上调,上清液中IL-1β和LDH的水平明显增加(P0.05);与TCP组比较,PC组MLO-Y4细胞的损伤明显减轻,凋亡率显著降低(P0.05),NLRP3、ASC、cleaved caspase-1和IL-1β的蛋白水平显著下调(P0.05),IL-1β和LDH水平明显降低(P0.05)。结论:PC可明显抑制TCP磨损颗粒诱导的骨细胞氧化损伤,其机制可能与减轻NLRP3炎症小体的活化和细胞焦亡相关。     

氨基胍对大鼠局灶性脑缺血损伤后TNF-α、IL-1β及细胞凋亡的作用

目的： 观察氨基胍（AG）对局灶性脑缺血损伤后炎症因子和神经细胞凋亡的作用，探讨AG保护脑缺血损伤组织的作用机制。方法： 健康雄性SD大鼠30只，体重250-280 g，随机分为3组：假手术组（SH组）、缺血组（IS组）、AG治疗组（AG组），每组10只。IS、AG组采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血损伤模型。AG组每次腹腔注射AG 100 mg/kg,每日2次，连续3 d。IS组给予等量的生理盐水。将大鼠断头取脑，采用免疫组化法检测脑组织中TNF-α表达变化，放免法检测IL-1β水平变化，流式细胞仪测定脑组织神经元凋亡率、Bcl-2蛋白、Bax蛋白表达及Bcl-2蛋白与Bax蛋白比值（Bcl-2/Bax）。结果： IS组脑缺血灶范围内TNF-α表达明显强于SH组，IL-1β水平显著高于SH组，神经凋亡率及Bax蛋白表达高于SH组，Bcl-2/Bax低于SH组；AG组脑缺血灶范围内TNF-α表达明显低于IS组，IL-1β水平显著低于IS组，神经凋亡率低于IS组，Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax高于IS组，Bax蛋白表达低于IS组 。结论： AG通过抑制TNF-α和IL-1β的升高，增加Bcl-2蛋白表达，降低Bax蛋白表达，调节Bcl-2/Bax平衡，对脑缺血大鼠脑神经元产生一定程度的保护作用。     

Caspase-1通过炎症小体激活MPTP诱导的PD小鼠神经炎症反应的相关研究北大核心CSCD

目的NOD样受体热蛋白结构域3（NLRP3）-含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1（caspase-1）炎症小体在1-甲基,4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）诱导的帕金森病（PD）小鼠神经损伤中的作用及机制。方法将小鼠随机分为模型组和对照组,模型组腹腔注射MPTP溶液（30 mg·kg－1·d－1）,制备PD模型,对照组给予等量生理盐水;爬杆试验和悬挂试验观察小鼠行为学变化;免疫印迹试验（Western blot）检测小鼠中脑组织中炎症小体的含量。将体外培养的人源性神经母细胞SH-SY5Y随机分为对照组、无义组、siRNA NLRP3组、1-甲基-4-苯基吡啶（MPP＋）组、siRNA＋MPP＋组;采用脂质体转染的方法,将siRNA-NLRP3转染至人源性神经母细胞SH-SY5Y中,加入MPP＋孵育细胞48 h,体外观察NLRP3炎症小体对神经细胞的保护作用。噻唑蓝法（MTT）检测细胞活力的变化,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,Western blot检测NLRP3、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved caspase-3）的蛋白质水平。结果与对照组相比,模型组小鼠从木杆顶端爬至底端所耗时间显著增加（P〈0.05）,悬挂得分显著降低（P〈0.05）,中脑黑质部中NLRP3炎症小体、IL-1β、Pro-IL-1β以及caspase-1的表达量显著增加（P〈0.05）。与MPP＋组相比,体外转染siRNA-NLRP3的可显著降低MPP＋介导的SH-SY5Y细胞中NLRP3蛋白的水平（P〈0.05）,提高细胞的活力（P〈0.05）,抑制其凋亡（P〈0.05）,促进Bcl-2蛋白表达（P〈0.05）,显著抑制cleaved caspase-3、Bax的蛋白表达。结论NLRP3-caspase-1炎症小体在PD神经损伤过程中发挥重要作用;体外抑制NLRP3表达可显著增强SH-SY5Y细胞的活力,抑制其凋亡,可能通过调控线粒体凋亡信号通路对神经细胞发挥保护作用,为PD的临床治疗提供新的药物靶点。     

金骨莲灌胃对兔骨关节炎模型软骨细胞凋亡相关蛋白表达的影响

文题释义： 细胞凋亡：为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主有序的死亡。与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等作用，是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。 P-p38蛋白：磷酸化p38蛋白，存在于P38MAPK信号通路中，该通路是丝裂原活化蛋白激酶的亚类之一，该通路中的特异性p38蛋白经过磷酸化级联反应直接磷酸化，从而被激活并具备生物活性，存在于软骨组织中，可反映骨关节炎严重程度。 背景：金骨莲胶囊为传统的苗药组方，其成分主要包含金铁锁、汉桃叶等成分，既往研究表明该药物具有软骨保护作用，但对其软骨保护的机制还不清楚。 目的：探讨金骨莲灌胃治疗骨关节炎的可能机制。 方法：从40只家兔中随机挑选10只作为空白对照组，余下的30只家兔以改良Hulth法在兔右侧后膝建立骨关节炎模型，并随机分为骨关节炎模型组(10只)、金骨莲灌胃组(10只)，p38抑制剂组(10只)。建模7 d后，金骨莲灌胃组给予金骨莲与双蒸水混合液10 mL灌胃[57.5 mg/(kg·d)]；p38抑制剂组给予兔右侧后膝关节腔注射10 μmol/L p38抑制剂(SB203580)0.5 mL，每周1次；空白对照组及骨关节炎模型组仅灌服等量双蒸水，1次/d，干预8周后处死动物取右侧后膝关节股骨髁及胫骨平台。采用Pelletier评分评估软骨损伤情况；苏木精-伊红染色、番红O染色及Mankin评分评估软骨退变情况；Western blot检测软骨组织中P-p38及Cleaved Caspase-3蛋白的表达；实时荧光定量PCR检测各组软骨组织中Bcl-2、Bax mRNA表达。 结果与结论：①金骨莲灌胃组Pelletier评分及Mankin评分较骨关节炎模型组及p38抑制剂组明显降低(P < 0.05)；②金骨莲灌胃组软骨组织中Bax mRNA、Cleaved Caspase-3蛋白表达较骨关节炎模型组及p38抑制剂组明显降低(P < 0.05)；③金骨莲灌胃组Bcl-2 mRNA的表达较骨关节炎模型组及p38抑制剂组均明显升高(P < 0.05)；④金骨莲灌胃组软骨组织中P-p38蛋白表达较骨关节炎模型组与p38抑制剂组明显降低(P < 0.05)；⑤结果表明，金骨莲可抑制骨关节炎模型兔软骨组织中凋亡相关蛋白和P-p38蛋白的表达，从而延缓关节软骨退变。 ORCID: 0000-0002-6664-8008(彭旭) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程     

丹皮酚对β-1,3-葡聚糖诱导的小鼠巨噬细胞Dectin-1 / NLRP3 信号通路抑制作用研究

目的:研究丹皮酚对β-1,3-葡聚糖诱导的巨噬细胞上Dectin-1/NLRP3信号通路的影响。方法:培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,并分成空白对照组、β-1,3-葡聚糖诱导模型组、昆布多糖组和丹皮酚组,β-1,3-葡聚糖诱导巨噬细胞24 h建立ALD炎症模型。通过MTT法检测细胞活性,通过倒置显微镜观察各组形态学变化,通过Western blot检测小鼠RAW264.7巨噬细胞Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1蛋白的表达,通过RT-qPCR检测小鼠RAW264.7巨噬细胞Dectin-1、NLRP3、caspase-1 mRNA的表达,通过ELISA检测各组培养液中IL-1β、IL-18的分泌水平。结果:MTT结果表明,与空白对照组相比,β-1,3-葡聚糖诱导模型组抑制细胞增殖活性减弱。与β-1,3-葡聚糖诱导模型组相比,丹皮酚干预后细胞增殖活性增强。形态学观察发现,空白对照组细胞体积小,形态圆润。β-1,3-葡聚糖诱导后细胞体积变大,分化严重,形态狭长。丹皮酚干预后细胞分化减轻,细胞形态近似圆形。Western blot、RT-qPCR和ELISA结果表明,与空白对照组相比,β-1,3-葡聚糖能显著升高巨噬细胞中Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1的蛋白表达水平和Dectin-1、NLRP3、caspase-1 mRNA表达水平以及细胞上清液IL-1β、IL-18的分泌水平。而与β-1,3-葡聚糖诱导模型组相比,经丹皮酚干预后可明显降低巨噬细胞中Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1的蛋白表达水平和Dectin-1、NLRP3、caspase-1 mRNA表达水平以及细胞上清液IL-1β、IL-18的分泌水平。结论:本研究结果表明丹皮酚可能通过抑制β-1,3-葡聚糖诱导的Dectin-1/NLRP3信号通路上Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1的过表达从而有效降低终末炎症因子IL-1β及IL-18的释放,进而有效抑制β-1,3-葡聚糖诱导的ALD炎症反应。     

熊果酸对肝纤维化大鼠NOX2/ROS/NLRP3炎性小体活化的影响

目的观察熊果酸(UA)对肝纤维化模型大鼠肝内胶原沉积的改善作用及其对NADPH氧化酶2(NOX2)/活性氧簇(ROS)/NLRP3炎性小体活化的影响。方法将大鼠随机分为对照组、CCl4模型组及UA治疗组。用CCl4诱导构建SD大鼠肝纤维化模型,一半用作UA治疗组。用试剂盒检测血清ALT含量;HE染色观察肝脏病理;天狼星红染色观察肝内胶原沉积;RT-q PCR法检测Nox2、Nlrp3、caspase1及IL-1βmRNA表达量;Western blot及免疫组化检测肝脏中NOX2、NLRP3、casepase-1 p45、caspase-1 p10及IL-1β蛋白表达;DCFH-DA荧光探针法检测肝脏组织内ROS水平。结果与对照组相比,CCl4模型组血清ALT水平升高(P0.05),Ishak's肝纤维化评分明显上升,胶原沉积明显增多(P0.05),Nox2、Nlrp3、Caspase1及IL-1βmRNA的表达水平明显上升(P0.05);NOX2、NLRP3、caspase-1 p10及IL-1β蛋白的表达均出现明显增加,肝组织内ROS含量增加(P0.05);与CCl4模型组相比,UA治疗组血清ALT含量下降(P0.05),肝脏Ishak's肝纤维化评分及胶原沉积减少(P0.05),Nox2、Nlrp3、caspase1及IL-1βmRNA的表达水平明显下降(P0.05),NOX2、NLRP3、caspase-1 p10及IL-1β蛋白表达明显下降,肝脏组织内ROS水平显著改善(P0.05)。结论 UA减轻肝脏炎性反应并减少肝内胶原沉积,其机制可能与其抑制肝纤维化大鼠肝内NOX2/ROS/NLRP3炎性小体活化及IL-1β的释放减少有关。     

黄芪多糖缓解急性脑缺血再灌注损伤的氧化应激反应和免疫功能紊乱

目的:探索黄芪多糖(AP)对急性脑缺血再灌注损伤的氧化应激反应和免疫功能紊乱的影响。方法:采用大脑中动脉线栓法建立缺血再灌注损伤模型。苏木素伊红(HE)染色分析组织病理学变化。Tunel染色检测病变组织细胞凋亡。试剂盒检测组织中氧化应激相关指标的含量; ELISA检测血清中炎症因子的含量。蛋白印迹检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、BAX、炎性复合体隐热蛋白(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、cl-caspase-1的表达。结果:模型组与对照组相比,脑缺血再灌注大鼠脑组织出现严重病变,细胞凋亡明显增加,同时Bcl-2表达显著下调,BAX表达显著上调;组织中SOD的活力明显下降,GSH的浓度显著降低,MDA的浓度显著上升;血液中IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-18的含量显著上升;脑组织中NLRP3、ASC、cl-caspase-1的表达显著下调(P0. 01)。加药组与模型组相比较,急性脑缺血再灌注大鼠脑组织病变减弱,细胞凋亡明显减少,Bcl-2蛋白水平显著上调,BAX蛋白水平显著下调;组织中SOD的活力和GSH的浓度显著上升,MDA的浓度显著下降;血液中IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-18的含量显著降低;脑组织中NLRP3、ASC、cl-caspase-1的表达显著下调(P0. 01);且随着黄芪多糖加药浓度的增加,效果越明显。结论:黄芪多糖通过影响细胞自噬和免疫相关蛋白的水平,缓解急性脑缺血再灌注损伤的氧化应激反应和免疫功能紊乱。     

NLRP3炎性小体促进脓毒症致急性肾损伤的机制研究

目的 探讨NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体在脓毒症致急性肾损伤中的作用及其可能的机制。方法 将40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、MCC950组和Ac-YVAD-CMK组,每组10只。采用盲肠结扎穿刺术建立脓毒症大鼠模型,MCC950组和Ac-YVAD-CMK组大鼠造模后分别腹腔注射MCC950 10 mg/kg和Ac-YVAD-CMK 5 mg/kg,对照组大鼠仅探查肓肠。ELISA法检测尿素氮、肌酐、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）、IL-1β、IL-18含量;Western blot检测肾损伤分子-1(KIM-1)、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC)、Caspase-1、消皮素D(GSDMD)和半乳糖结合蛋白Galectin-3表达;HE染色观察大鼠肾组织病理学变化;PAS染色观察大鼠肾小管损伤情况。结果 与对照组相比,模型组大鼠肾组织病理学评分、尿素氮、肌酐、NGAL、IL-1β、IL-18、糖原沉积水平及KIM-1、NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD和Galectin-3蛋白表达显著升高（P<0.05）。与...