趋化因子CXCL12及其配体CXCR4、CXCR7对HER2阳性乳腺癌细胞生物学功能的影响北大核心CSCD

目的:探究趋化因子CXCL12及其配体CXCR4、CXCR7对HER2阳性乳腺癌细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的影响。方法:体外培养HER2阳性乳腺癌细胞BT474,应用siRNA转染技术单独或联合沉默CXCR4、CXCR7,RT-PCR与Western blot检测转染效率;应用CXCL12刺激上述转染细胞,并将其分为5组,A组:正常培养的BT474细胞;B组:CXCL12处理的BT474细胞;C组:CXCL12处理的转染si-CXCR4细胞;D组:CXCL12处理的转染si-CXCR7细胞;E组:CXCL12处理的联合转染si-CXCR4与si-CXCR7细胞;应用CCK-8、流式细胞术、划痕实验、侵袭实验及Western blot分别检测沉默CXCR4和(或)CXCR7对CXCL12诱导的乳腺癌细胞增殖、细胞周期进展、迁移、侵袭和EMT行为的影响。结果:转染siRNA能显著降低BT474细胞中CXCR4和(或)CXCR7的mRNA和蛋白表达水平(P<0.01);单独或联合沉默CXCR4与CXCR7均能明显抑制CXCL12对乳腺癌细胞增殖、细胞周期进展、迁移、侵袭行为的促进作用(P<0.05或P<0.01),并以联合沉默CXCR4与CXCR7时效果最为显著(P<0.01),与单独沉默CXCR7相比,沉默CXCR4更能抑制CXCL12对乳腺癌EMT的促进(P<0.05)。结论:沉默CXCR4或CXCR7表达均能抑制CXCL12对HER2阳性乳腺癌细胞增殖、细胞周期进展、迁移、侵袭的促进功能,但CXCL12主要通过与CXCR4相互作用来促进乳腺癌的EMT行为,而同时抑制CXCR4或CXCR7能更有效地抑制CXCL12的上述功能。     

siRNA干扰CXCR7表达对人膀胱癌RT4细胞增殖的影响

目的探讨靶向抑制CXCR7基因表达对人膀胱癌RT4细胞增殖的影响,初步分析其作用机制。方法采用小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)干扰技术沉默人膀胱癌RT4细胞中CXCR7基因的表达,分别采用qRT-PCR和Western blot检测siRNA的靶向沉默效果。通过CCK-8增殖实验研究CXCR7抑制对RT4细胞增殖的影响。通过Western blot检测RT4中Akt通路关键因子Akt、p-Akt、Bad及pBad的表达,初步探讨CXCR7抑制调控RT4细胞增殖的分子机制。结果 qRT-PCR和Western blot检测结果显示,转染CXCR7 siRNA质粒可显著抑制RT4细胞中CXCR7mRNA和蛋白表达。CXCR7干扰组细胞生长速度被显著抑制(P0.05),CXCR7干扰组细胞中pAkt及pBad表达水平较对照组显著减少(P0.05)。结论 siRNA干扰靶向抑制CXCR7表达抑制RT4细胞的增殖,可能与其抑制Akt信号通路有关。     

膜联蛋白A5低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨膜联蛋白A5(ANXA5)低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响。方法将细胞分为干扰组、阴性对照组、转染试剂对照组和空白对照组,采用脂质体转染法将siRNA转染干扰组HeLa细胞,在转染72h后采用RT-PCR和Western blotting检测各组ANXA5的表达以鉴定抑制效率;细胞划痕实验检测各组HeLa细胞的迁移能力;Transwell实验检测各组HeLa细胞的侵袭能力;RT-PCR和Western blotting分别检测ANXA5低表达对E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶(MMP)-9 mRNA及蛋白表达的影响。结果干扰组ANXA5蛋白及mRNA的表达均明显低于阴性对照组(P0.05);其表达均被显著抑制,干扰组细胞的迁移及侵袭能力比阴性对照组明显增强(P0.05),E-cadherin mRNA及蛋白的表达显著低于阴性对照组(P0.05);干扰组MMP-9mRNA及蛋白的表达均显著高于阴性对照组(P0.05)。结论靶向ANXA5的siRNA可有效抑制ANXA5的表达,且ANXA5低表达可能通过影响E-cadherin和MMP-9的表达来促进HeLa细胞的迁移和侵袭能力。     

miR-105靶向负调控KIFC1抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力

目的:研究微小RNA-105(miR-105)对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法:运用RT-qPCR法检测非小细胞肺癌组织及癌旁组织和细胞中miR-105和驱动蛋白家族成员C1(KIFC1) mRNA的表达;用Western blot检测非小细胞肺癌组织及癌旁正常组织和细胞中KIFC1蛋白的表达。将细胞分为miR-105组(转染miR-105 mimics)、miR-NC组(转染mimics阴性对照序列)、inhibitor-NC组(转染inhibitor阴性对照序列)、inhibitor-miR-105组(转染miR-105 inhibitor)、si-NC组(转染阴性对照siRNA)、si-KIFC1组(转染KIFC1 siRNA)、miR-105+vector组(miR-105 mimics和pcDNA 3.1共转染)和miR-105+KIFC1组(miR-105 mimics和pcDNA 3.1-KIFC1共转染),均以脂质体法转染至非小细胞肺癌H460细胞;MTT法检测各组细胞活力;Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭能力;双萤光素酶报告基因检测实验检测各组细胞萤光素酶相对活性。结果:与癌旁组织相比,非小细胞肺癌组织中的miR-105表达显著降低,KIFC1的表达显著升高(P0.05);与人正常胚肺成纤维细胞MRC-5相比,H460细胞中的miR-105表达显著降低,KIFC1的表达显著升高(P0.05);miR-105可降低野生型KIFC1的H460细胞萤光素酶相对活性,且负向调控KIFC1的蛋白表达。过表达miR-105或敲减KIFC1表达均可显著抑制H460细胞的增殖、迁移和侵袭能力,且过表达KIFC1可逆转miR-105对细胞活力、迁移和侵袭能力的抑制作用。结论:miR-105可抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制与靶向负调控KIFC1的表达有关。     

利用RNA干扰抑制CXCR4基因表达对乳腺癌细胞转移和侵袭能力的影响

目的探讨抑制趋化因子受体CXCR4基因对乳腺癌细胞转移和侵袭能力的影响。方法将人乳腺癌细胞株MDA-MB-231分为未干扰组、CXCR4干扰组、β-actin干扰组和空白载体干扰组。设计并合成了针对CXCR4基因的发夹式siRNA模板,体外合成siRNA表达框架(siRNA expression cassettes,SECs),经脂质体转染CXCR4干扰组细胞,采用Western blot免疫印迹法和逆转录聚合酶链反应检测各组的抑制效果,用Biocoat Matrigel侵袭能力检测仪检测MDA-MB-231细胞的转移侵袭能力。结果SECs在mRNA水平和蛋白水平均明显抑制CXCR4基因的表达。CXCR4表达被抑制后,癌细胞侵袭能力受到明显抑制,与未干扰组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论SECs可以高效特异地抑制人乳腺癌细胞中CX-CR4基因的表达。CXCR4基因高表达与乳腺癌细胞的转移密切相关,抑制细胞中CXCR4的表达可以抑制乳腺癌细胞转移和侵袭能力。图2参13。     

丙泊酚对乳腺癌MCF-7细胞CXCR4/CXCR7表达和体外迁移的影响

目的:探讨丙泊酚对人乳腺癌MCF-7细胞CXC趋化因子受体(CXCR)4/CXCR7的表达及其对MCF-7细胞体外迁移能力的影响。方法:人乳腺癌MCF-7细胞随机分为对照组、脂肪乳组、丙泊酚3 mg/L组和丙泊酚8 mg/L组。用划痕实验和Transwell小室趋化实验测定细胞的迁移能力;采用RT-qPCR法测MCF-7细胞CXCR4/CXCR7的mRNA表达水平;采用Western blot法测定MCF-7细胞CXCR4/CXCR7的蛋白表达水平;用MTT检测细胞的活力。结果:与对照组比较,3.8 mg/L丙泊酚组24 h划痕愈合率降低(P0.05),趋化指数降低(P0.05);Western blot结果显示3.8 mg/L丙泊酚组的CXCR4/CXCR7蛋白表达水平降低(P0.05),但mRNA表达水平与对照组比较差异无统计学显著性;此外,MTT实验显示各组细胞活力的差异无统计学显著性。结论:丙泊酚可抑制CXCR4/CXCR7蛋白表达水平,降低体外培养的乳腺癌MCF-7细胞的迁移能力。     

MicroRNA-155 通过调节CXCR4 / PI3K / AKT 途径影响滋养细胞的侵袭与迁移

目的:以人绒毛膜滋养层细胞系JEG-3 细胞为研究对象,结合该细胞侵袭和迁移能力的变化情况,研究转染miR-155 mimics 和miR-155 inhibitor 之后CXCR4 的表达变化及其对下游PI3K/ AKT 信号通路的影响作用,从而探讨miR-155参与子痫前期发生发展的分子机制。方法:设计miR-155mimics 和miR-155 inhibitor,对JEG-3 进行转染,通过Transwell 侵袭实验、划痕实验,观察转染后细胞的侵袭和迁移能力的变化;利用Real-time PCR 检测CXCR4 mRNA 的表达;利用Western blot检测CXCR4 及下游p鄄AKT 蛋白的表达水平。结果:Real-time PCR 结果显示,miR-155 mimics 转染组CXCR4 mRNA 相对表达量(0.589依0.096)明显低于空白对照组(1.503依0.090)和阴性对照组(1.146依0.153),差异有统计学意义(P<0.05);miR-155 inhibitor 转染组CXCR4 mRNA 相对表达量(1.739依0.083)与两组对照组相比差异也有统计学意义(P<0.05)。Western blot 结果显示miR-155 mimics 转染组CXCR4 蛋白和下游p-AKT 蛋白表达水平均明显降低,而miR-155 inhibitor 转染组CXCR4 和p-AKT 蛋白水平则升高,与空白对照组和阴性对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。Transwell 侵袭实验结果显示,与空白对照组(63郾46依2郾37)和阴性对照组(49.29依5.81)侵袭细胞数相比,miR-155 mimics 转染组侵袭细胞数(22.89依9.42)明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);同时,miR-155 inhibitor 转染组侵袭细胞数(81.50依11.25)明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验结果显示,转染miR-155 mimics 后,JEG-3 细胞相对迁移距离(0.159依0.058)低于空白对照组(1.080依0.045)和阴性对照组(0.823依0.201),差异有统计学意义(P<0.05);而miR-155 inhibitor 转染组,JEG-3 细胞相对迁移距离(1.640依0.078)明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-155 可能通过抑制CXCR4 的表达进而抑制其下游PI3K/AKT 信号通路的活化,从而影响滋养细胞的侵袭及迁移能力,最终导致子痫前期的发生发展。     

沉默TREM-2对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞迁移和侵袭的影响

 目的: 应用RNA干扰(RNAi)技术沉默类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)髓样细胞触发受体2(TREM-2)的表达,探讨TREM-2基因沉默对RA-FLS迁移和侵袭能力的影响及其相关机制。方法: 向RA-FLS转染特异性的TREM-2 siRNA,利用RT-PCR法和Western blot法检测沉默效果;CCK-8法检测各组细胞生长情况;Transwell小室测定细胞的迁移和侵袭能力;ELISA法检测细胞MMP-2和MMP-9的分泌水平;Western blot法分析沉默TREM-2基因对细胞PI3K/AKT通路的影响。结果: TREM-2 siRNA能显著降低RA-FLS中TREM2 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。沉默TREM-2基因后,各时点各组细胞的活力未见明显差异;特异性干扰组RA-FLS的迁移细胞数目与空白组和control siRNA组相比明显增多(P<0.05);TREM-2 siRNA组侵袭细胞数目相比空白组和control siRNA组明显增多(P<0.05);TREM-2 siRNA干扰后RA-FLS分泌的MMP-2显著增加(P<0.05)而MMP-9未见明显变化;特异性转染后的RA-FLS相对于对照组PI3K/AKT的磷酸化水平显著增强(P<0.05)。结论: TREM-2可能通过调节PI3K/AKT通路的活化对RA-FLS的迁移和侵袭能力发挥着重要作用。     

延龄草总皂苷通过促进人β防御素2(HBD-2)的表达抑制HuH-7细胞侵袭和迁移

目的探讨延龄草总皂苷调控人β防御素2(HBD-2)对HuH-7细胞侵袭和迁移的影响和机制。方法采用(0.5、 1.0、 2.0、 4.0)mg/L延龄草总皂苷处理HuH-7细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖, Transwell~(TM)小室测定细胞侵袭和迁移能力, Western blot法检测细胞中HBD-2、基质金属蛋白酶2(MMP2)、 MMP9的蛋白水平。将HBD-2小干扰RNA(siRNA)转染至HuH-7细胞中,用延龄草总皂苷处理,实时定量PCR和Western blot法验证干扰效果, Transwell~(TM)法分别检测细胞侵袭和迁移能力。结果除0.5 mg/L延龄草总皂苷对HuH-7细胞增殖无影响外,其他各剂量延龄草总皂苷均可抑制HuH-7细胞增殖。(0.5、 1.0)mg/L的延龄草总皂苷处理均可下调细胞MMP2、 MMP9蛋白水平、增加HBD-2蛋白水平并抑制细胞侵袭和迁移。HBD-2 siRNA转染可明显降低HuH-7细胞HBD-2水平。下调HBD-2提高延龄草总皂苷处理的HuH-7细胞侵袭和迁移能力并增加细胞MMP2、 MMP9蛋白水平。结论延龄草总皂苷通过促进HBD-2表达抑制HuH-7细胞侵袭和迁移。     

siRNA沉默染色质解旋酶DNA结合蛋白1对卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的:探究siRNA沉默染色质解旋酶DNA结合蛋白1(CHD1L)对卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移及相关分子如核因子κB(NF-κB)、基质金属蛋白酶(MMP)的影响。方法:将si-CHD1L、si-NC质粒转染至卵巢癌HO-8910PM细胞,命名为si-CHD1L组、si-NC组,以未经转染细胞作为对照组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞CHD1L mRNA表达; CCK-8法检测细胞增殖抑制情况;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室系统检测细胞迁移、侵袭能力;蛋白免疫印迹(WB)检测NF-κB、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果:与对照组、si-NC组比较,si-CHD1L组细胞CHD1L mRNA表达降低(P0.05),细胞增殖抑制率升高,细胞迁移能力降低,迁移、侵袭数量降低(P0.05)。与对照组、si-NC组相比,si-CHD1L组NF-κB、MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(P0.05)。结论:siRNA沉默CHD1L能够抑制卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移,并能抑制NF-κB、MMP蛋白的表达,为卵巢癌的靶向治疗提供一定的理论依据。     

靶向沉默IL-6对乳腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的:观察白细胞介素6(IL-6)与人乳腺癌MCF-7细胞生长、侵袭和迁移的关系及其作用机制。方法:合成IL-6小干扰RNA(si RNA),并转染至MCF-7细胞中。实验分为空白对照组、阴性对照组和IL-6 si RNA组。通过MTT实验观察沉默IL-6基因表达对细胞活力的影响,Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力的变化,采用q PCR和Western blot法检测转染后IL-6表达水平的变化,同时采用Western blot法观察上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白、信号转导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白水平。结果:与对照组相比,转染IL-6 si RNA的MCF-7细胞中IL-6的表达量显著下降(P 0. 05)。沉默IL-6表达显著抑制MCF-7细胞的活力(P 0. 05),并降低其侵袭和迁移能力(P 0. 05),显著抑制N-cadherin和vimentin的表达(P 0. 05),细胞中STAT3无明显变化,p-STAT3、MMP-2和MMP-9的蛋白水平显著降低(P 0. 05)。结论:沉默IL-6表达可能通过抑制EMT,并降低STAT3的磷酸化水平进而抑制MMP-2和MMP-9的分泌,从而减弱乳腺癌MCF-7细胞的活力,并降低其侵袭和迁移能力。     

CXCR4 siRNA通过抑制STAT3信号通路抑制肺癌细胞活力

目的:初步探索CXC趋化因子受体4(CXCR4)与人肺癌NCI-H292细胞活力和凋亡的关系及其作用机制。方法:采用RNA干扰技术沉默肺癌细胞中CXCR4基因的表达,将CXCR4小干扰RNA(siRNA-CXCR4)转染至NCI-H292细胞中,分为空白对照组(未转染的细胞)、阴性对照组(转染无关序列RNA)和siRNA-CXCR4组(转染siRNA-CXCR4),使用信号转导子及转录激活子3(STAT3)抑制剂NSC 74859作用于已转染肺癌细胞48 h,观察细胞的活力、凋亡及磷酸化STAT3(p-STAT3)水平的变化,用CCK-8实验检测干扰CXCR4基因表达对细胞活力的影响,流式细胞术检测细胞的凋亡率,采用Western blot检测CXCR4、STAT3、p-STAT3、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、cleaved caspase-3和多聚ADP-核糖聚合酶1(PARP-1)的蛋白水平。结果:Western blot检测结果显示siRNACXCR4组细胞中CXCR4蛋白的表达量显著低于对照组(P0.05)。干扰CXCR4表达显著抑制细胞的活力(P0.05),促进其凋亡(P0.05),显著增加cleaved caspase-3和PARP1的蛋白水平。siRNA-CXCR4组细胞中STAT3、p-STAT3和cyclin D1的蛋白水平显著降低(P0.05);加入STAT3抑制剂后细胞中p-STAT3蛋白水平和细胞活力显著低于siRNA-CXCR4组(P0.05),凋亡率显著增加(P0.05)。结论:CXCR4通过调控STAT3信号通路介导下游靶基因的表达,参与肺癌细胞的生长、凋亡。这一结果为肺癌的治疗提供了新的治疗靶点。     

过表达或抑制肿瘤相关巨噬细胞B7-H1 基因对卵巢癌增殖侵袭的机制研究

目的:探讨过表达或抑制肿瘤相关巨噬细胞(TAM)B7-H1 基因对卵巢癌增殖侵袭的影响及机制。方法:在体外刺激人单核THP-1 细胞成为巨噬细胞,并诱导为TAM,通过腺病毒载体系统过表达(Ad-B7-H1)或抑制(Ad-siB7-H1)TAM中的B7-H1 基因,通过Western blot 检测转染后的TAM 中的B7-H1 表达;单独培养(Alone 组)与过表达(siB7-H1-TAM 组)或抑制(B7-H1-TAM 组)B7-H1 基因的TAM 共培养后, CCK8 法检测CAOV3 细胞的活力。Transwell 小室检测细胞的迁移能力;Western blot 检测Ki67、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、磷酸化的蛋白酪氨酸激酶2(p-JAK2)、磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)。结果:Ad-siB7-H1 组B7-H1 的表达显著低于对照组,Ad-B7-H1 组B7-H1 的表达显著高于对照组(P<0.05);与单独培养组比较,TAM 组细胞活力、细胞侵袭能力及Ki67、MMP-2、MMP-9、p-JAK2 和p-STAT3 的蛋白表达均显著升高(P<0.05),与RFP-TAM 组比较,siB7-H1-TAM 组的细胞活力、细胞侵袭能力及Ki67、MMP-2、MMP-9、p-JAK2 和p-STAT3 的蛋白表达均显著降低,B7-H1-TAM 组的细胞活力、细胞侵袭能力及Ki67、MMP-2、MMP-9、p-JAK2 和p-STAT3 的蛋白表达均显著升高(P<0.05)。结论:抑制肿瘤相关巨噬细胞B7-H1 基因可抑制卵巢癌细胞活力及侵袭能力,下调JAK2/ STAT3 信号通路,过表达B7-H1 基因反之。     

姜黄素通过下调nectin-4抑制肺癌PC-9细胞的迁移和侵袭

目的:探讨姜黄素对肺癌PC-9细胞迁移和侵袭的抑制作用及其与nectin-4表达的关系。方法:用MTT、划痕修复和Transwell小室实验检测姜黄素对肺癌PC-9细胞活力、迁移和侵袭能力的影响;用Western blot技术检测姜黄素对nectin-4表达及AKT通路的影响;经siRNA干扰nectin-4后观察姜黄素对PC-9细胞活力、迁移、侵袭及AKT通路的影响。结果:姜黄素能抑制PC-9细胞活力,10、20μmol/L姜黄素组与对照组相比,划痕修复率降低,穿膜细胞数目显著下降。姜黄素作用肺癌PC-9细胞24 h后,nectin-4表达下调。转染siNectin-4 48 h和72 h后,siNectin-4组比对照组的细胞活力显著降低(P0.01),划痕修复率及穿膜细胞数目显著下降(P0.01)。姜黄素与siNectin-4均抑制了PC-9细胞AKT通路的激活。姜黄素与siNectin-4联用时细胞活力降低(P0.01),划痕修复率、细胞侵袭能力及AKT磷酸化水平下降。结论:在肺癌PC-9细胞中,姜黄素通过下调nectin-4表达、调控下游AKT通路来抑制细胞迁移和侵袭。     

Prdx4蛋白表达改变对HeLa细胞迁移和侵袭的影响

 目的: 观察过氧化物还原酶4(peroxiredoxin 4,Prdx4)蛋白表达的改变对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响。方法: 采用脂质体瞬时转染法将表达质粒pcDNA3.0-HA-Prdx4转染HeLa细胞;LV-Prdx4 RNAi重组病毒感染HeLa细胞,构建Prdx4 shRNA HeLa细胞系沉默Prdx4的表达;用蛋白质印迹法证实Prdx4蛋白表达水平的变化;应用划痕愈合实验和Transwell迁移及侵袭实验分别检测细胞迁移及侵袭能力的变化。结果: pcDNA3.0-HA-Prdx4质粒转染组HeLa细胞的Prdx4蛋白表达水平明显上调(P<0.05),而Prdx4 shRNA HeLa稳定干扰细胞系Prdx4表达水平明显下调(P<0.05)。Prdx4过表达组HeLa细胞的迁移和侵袭能力明显增强,与空白对照组及空载体转染组比较,差异显著(P<0.01)。Prdx4表达干扰组HeLa细胞的迁移和侵袭能力明显受到抑制,与空白对照组及阴性对照组比较,差异显著(P<0.01)。结论: 上调Prdx4蛋白表达水平可促进HeLa细胞的迁移和侵袭,在宫颈癌的发生和发展过程中可能起重要作用;下调Prdx4蛋白表达水平可以明显抑制HeLa细胞的迁移和侵袭能力,Prdx4有可能成为临床治疗宫颈癌的一个潜在靶点。     

RNA干扰UBQLN1基因表达对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及机制研究

目的：观察抑制泛素1（UBQLN1）基因表达对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响。方法： Western blot检测UBQLN1在乳腺癌T47D、BT549、MDA-MB-231、MCF7细胞中相对于正常乳腺上皮细胞MCF-10A的蛋白表达;用Lipofectamine^TM2000将干扰UBQLN1表达的siRNA（UBQLN1-siRNA）转染MDA-MB-231细胞,同时转染阴性对照组（NC组）,并设置空白对照组,收集转染48 h的细胞Western blot检测其UBQLN1的蛋白表达;CCK8法检测UBQLN1-siRNA转染24 h、48 h和72 h的细胞活力;流式细胞仪及Transwell小室分别检测UBQLN1-siRNA转染48 h的细胞凋亡率及侵袭能力;Western blot检测促凋亡蛋白p53和抑凋亡蛋白Survivin、侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）及STAT3和磷酸化的信号转导与转录因子3(p STAT3)的蛋白表达。结果：与MCF-10A细胞比较,UBQLN1在T47D、BT549、MDA-MB-231、MCF7乳腺癌细胞中的表达均显著升高（P<0.01）;与NC组比较,UBQLN1-siRNA组UBQLN1的蛋白表达显著降低,24 h、48 h和72 h的细胞活力均显著降低,细胞凋亡率显著升高,细胞侵袭能力显著降低,Survivin、MMP-2、MMP-9和p-STAT3的蛋白表达均显著降低,p53蛋白表达显著升高（P<0.01）,三组间STAT3的蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论：抑制乳腺癌细胞中UBQLN1基因表达可降低乳腺癌细胞活力和侵袭能力,并诱导细胞凋亡和下调STAT3信号通路。     

抑制lncRNA LINC01503通过靶向调控miR-335-5p对肺癌细胞活力、迁移和侵袭的影响及其机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC01503对肺癌细胞活力、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:将人肺癌H1299细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-LINC01503组(转染si-LINC01503)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-LINC01503组(转染pcDNA-LINC01503)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-335-5p组(转染miR-335-5p mimics)、si-LINC01503+anti-miR-NC组(共转染si-LINC01503和anti-miR-NC)、si-LINC01503+anti-miR-335-5p组(共转染si-LINC01503和anti-miR-335-5p)、miR-NC+WT-LINC01503组(共转染miR-NC和WT-LINC01503)、miR-NC+MUT-LINC01503组(共转染miR-NC和MUT-LINC01503)、miR-335-5p+WT-LINC01503组(共转染miR-335-5p和WT-LINC01503)和miR-335-5p+MUT-LINC...     

eEF2K沉默联合丹参酮ⅡA磺酸钠协同抑制人肺腺癌细胞系A549增殖

目的探讨真核延伸因子2激酶(eEF2K)基因转染及丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)对肺腺癌细胞系A549增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法预实验筛选STS最佳作用浓度。将A549细胞分为siRNA-NC组(转染siRNA-NC)、siRNA-eEF2K组(转染siRNA-eEF2K)、siRNA-NC+STS组(转染siRNA-NC+10μg/mL STS)和siRNA-eEF2K+STS组(转染siRNA-eEF2K+10μg/mL STS)。CCK-8法、克隆形成实验、Transwell小室法、划痕实验和流式细胞测量术检测细胞存活率、克隆形成率、穿膜细胞数、迁移率和凋亡率;免疫印迹法(Western blot)检测蛋白激酶B(AKT)、磷酸化(p)-AKT、Ki67、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白表达。结果与siRNA-NC组比较,siRNA-eEF2K组、siRNA-NC+STS组和siRNA-eEF2K+STS组细胞存活率、克隆形成率、穿膜细胞数、迁移率和p-AKT、Ki67、MMP-2、Bcl-2蛋白均明显降低,细胞凋亡率明显升高(P<...     

miRNA-126对肺癌A549细胞的增殖、迁移、侵袭及EGFR/AKT/mTOR信号通路的影响

 目的: 探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-126对肺癌A549细胞功能的影响及相关的作用机制。方法: 利用脂质体试剂Lipofectamine 2000将miRNA-126转染入肺癌A549细胞中,采用real-time PCR法检测转染后各组细胞中miRNA-126的表达;MTT法检测细胞活力;台盼蓝拒染实验检测细胞存活数目;细胞集落培养实验观察转染后细胞集落形成;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;Western blot法检测EGFR/AKT/mTOR通路中各蛋白水平的变化。结果: Real-time PCR结果显示,转染miRNA-126组细胞中的miRNA-126表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01),而阴性对照组与空白对照组无显著变化;A549细胞转染miRNA-126模拟物后,细胞增殖和集落形成能力均呈明显下降(P<0.01);肺癌细胞的迁移和侵袭能力也受到明显抑制(P<0.01);Western blot结果显示,转染miRNA-126组细胞中EGFR/AKT/mTOR通路相关蛋白p-EGFR、p-AKT和p-mTOR的水平均有明显降低(P<0.01)。结论: miRNA-126可以显著降低肺癌A549细胞中p-EGFR、p-AKT和p-mTOR的蛋白水平,进而可能抑制其细胞增殖和迁移侵袭能力。