干扰LncRNA PVT1对LPS所致人支气管上皮细胞16HBE损伤的影响

目的探讨干扰LncRNA PVT1对脂多糖(LPS)所致人支气管上皮细胞16HBE炎症、氧化应激、凋亡的影响及其可能作用机制。方法采用LPS诱导16HBE细胞建立细胞损伤模型,将16HBE细胞分为对照组Control组、LPS组、LPS+si-NC组、LPS+si-PVT1组、LPS+si-PVT1+anti-miR-NC组、LPS+si-PVT1+anti-miR-1301-3p组;采用qRT-PCR检测PVT1、miR-1301-3p的表达量;采用ELISA法检测白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素13(IL-13)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;采用试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测PVT1与miR-1301-3p的靶向关系。结果与Control组比较,LPS组PVT1的表达水平升高(P<0.05),miR-1301-3p的表达水平降低(P<0.05),IL-6、IL-13、TNF-α的水平与MDA、LDH的含量及凋亡率升高(P<0.05),SOD的含量降...     

地佐辛通过上调miR-204-3p减轻LPS诱导的心肌细胞H9C2损伤北大核心CSCD

目的:探讨地佐辛对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞损伤的影响及可能机制。方法:体外培养心肌细胞H9C2,分为Con组、LPS组、不同剂量(4、8、16μmol/L)地佐辛组、16μmol/L地佐辛+anti-miR-NC组和16μmol/L地佐辛+anti-miR-204-3p组,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测CyclinD1、p21、Bcl-2和Bax蛋白表达,试剂盒检测细胞培养上清中LDH水平及细胞中MDA、SOD和GSH-Px水平,RT-qPCR检测细胞miR-204-3p表达。结果:与Con组比较,LPS组H9C2细胞OD值、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达、SOD和GSH-Px活性及miR-204-3p表达降低(P<0.05),细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达及MDA和LDH含量升高(P<0.05)。与LPS组比较,不同剂量(4、8、16μmol/L)地佐辛组H9C2细胞OD值、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达、SOD和GSH-Px活性及miR-204-3p表达升高(P<0.05),细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达及MDA和LDH含量降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。与16μmol/L地佐辛+anti-miR-NC组比较,16μmol/L地佐辛+anti-miR-204-3p组H9C2细胞OD值、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达、SOD和GSH-Px活性及miR-204-3p表达降低(P<0.05),细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达及MDA和LDH含量升高(P<0.05)。结论:地佐辛可能通过上调miR-204-3p表达促进LPS诱导的心肌细胞H9C2增殖,并抑制H9C2细胞凋亡和氧化应激,减轻LPS诱导的H9C2细胞损伤。     

黄芩素调控miR-378a-5p对脂多糖诱导的心肌细胞损伤和凋亡的影响北大核心CSCD

目的:探讨黄芩素对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞(H9C2)损伤和凋亡的影响,并分析其机制是否与调控miR-378a-5p表达有关。方法:将H9C2细胞分为对照组、LPS组、LPS+10μmol/L黄芩素组、LPS+20μmol/L黄芩素组、LPS+40μmol/L黄芩素组、LPS+20μmol/L黄芩素+miR-con组、LPS+20μmol/L黄芩素+miR-378a-5p组。细胞计数法、流式细胞术分析细胞活力和凋亡。试剂盒检测丙二醛(MDA)水平、乳酸盐脱氢酶(LDH)释放量、TNF-α和IL-6分泌量以及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。实时定量PCR分析miR-378a-5p表达量。结果:LPS处理显著降低H9C2细胞存活率、促进细胞凋亡,增加MDA水平、LDH释放量、TNF-α和IL-6分泌量、miR-378a-5p表达量,降低SOD和GSH-Px活性(P<0.05)。黄芩素显著提高LPS处理的H9C2细胞存活率,抑制细胞凋亡,降低MDA水平、LDH释放量、TNF-α和IL-6分泌量、miR-378a-5p表达量,并增加SOD和GSH-Px活性(P<0.05)。过表达miR-378a-5p显著减弱黄芩素对LPS处理的H9C2细胞存活率、凋亡、MDA水平、LDH释放量、TNF-α和IL-6分泌量以及SOD和GSH-Px活性的影响(P<0.05)。结论:黄芩素可减轻LPS诱导的心肌细胞损伤和凋亡,其机制可能与下调受损心肌细胞miR-378a-5p表达有关。     

下调miR-199a-5p抑制脂多糖诱导的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞系AECⅡ凋亡

目的探讨miR-199a-5p在慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清中的表达及其对脂多糖(LPS)诱导的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞系(AECⅡ)凋亡的影响和可能机制。方法选取2017年4月至2018年12月于湖南中医药大学第一附属医院就诊的45例COPD患者和同时期45名健康体检者。体外培养AECⅡ,分为对照组(control)、LPS组(100 ng/mL LPS)、anti-miR-199a-5p+LPS组(转染miR-199a-5p抑制剂后用100 ng/mL LPS培养)、anti-miR-NC+LPS组(转染miR-199a-5p抑制剂阴性对照序列)、anti-miR-199a-5p+si-FZD4+LPS组(同时转染miR-199a-5p抑制剂与FZD4小干扰RNA)和anti-miR-199a-5p+si-NC+LPS组(同时转染miR-199a-5p抑制剂与FZD4乱序无意义阴性序列)。RT-qPCR检测血清和细胞中miR-199a-5p和FZD4 mRNA表达,流式细胞计量术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中FZD4、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-199a-5p与FZD4靶向关系。结果与对照组比较,COPD患者血清中miR-199a-5p表达水平显著升高(P0.05),而FZD4 mRNA表达水平显著降低(P0.05)。与对照组比较,LPS组细胞中miR-199a-5p表达水平显著升高(P0.05),而FZD4 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05),细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。与anti-miR-NC+LPS组比较,anti-miR-199a-5p+LPS组细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平显著降低(P0.05),而Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05)。miR-199a-5p靶向调控FZD4,与anti-miR-199a-5p+si-NC+LPS组比较,anti-miR-199a-5p+si-FZD4+LPS组细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),而Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论 miR-199a-5p在COPD患者血清及LPS诱导的AECⅡ中表达升高,下调miR-199a-5p表达可能通过上调FZD4表达抑制LPS诱导的AECⅡ凋亡。     

沉默 HOXA11-AS 靶向 miR-766-3p 对 ox-LDL 诱导的血管内皮细胞损伤的影响

目的 探讨长链非编码 RNA (lncRNA) 同源异形盒基因 A11 反义 RNA (HOXA11-AS) 靶向微小 RNA-766-3p (miR-766-3p) 对氧化低密度脂蛋白 ( ox-LDL) 诱导的血管内皮细胞损伤的影响。 方法 以 100 μg / mL 的 ox-LDL 处理人脐静脉血管内皮细胞 (human umbilical vein endothelial cell, HUVEC) 24 h 建立 细胞损伤模型。 将 HUVEC 分为对照 (con) 组、 ox-LDL 组、 ox-LDL + si-NC 组、 ox-LDL + si-HOXA11-AS 组、 ox-LDL + miR-NC 组、 ox-LDL + miR-766-3p 组、 ox-LDL + si-HOXA11-AS + anti-miR-NC 组、 ox-LDL + si-HOXA11-AS + anti-miR-766-3p 组。 RT-qPCR 检测 HOXA11-AS 和 miR-766-3p 表达。 流式细胞术分析细胞凋亡。 试剂盒检测 LDH 释放量、 胞内 SOD 活性。 ELISA 法检测培养液中 TNF-α、 IL-1β 水平。 双荧光素酶报告实 验确定 HOXA11-AS 和 miR-766-3p 的靶向关系。 结果 与 con 组比较, ox-LDL 组 HUVEC 细胞凋亡率、 LDH 释放量、 HOXA11-AS 表达量以及培养液中 TNF-α、 IL-1β 水平显著升高 (P< 0. 05), SOD 活性、 miR-766-3p 表达量显著降低 (P< 0. 05)。 与 ox-LDL + si-NC 组比较, ox-LDL + si-HOXA11-AS 组 HUVEC 细胞凋亡率、 LDH 释放量以及培养液中 TNF-α、 IL-1β 水平显著降低 (P< 0. 05), SOD 活性显著升高 (P< 0. 05)。 与 ox-LDL + miR-NC 组比较, ox-LDL + miR-766-3p 组 HUVEC 细胞凋亡率、 LDH 释放量以及培养液中 TNF-α、 IL-1β 水平显著降低 (P< 0. 05), SOD 活性显著升高 (P< 0. 05)。 miR-766-3p 是 HOXA11-AS 的直接靶点。 与 ox-LDL + si-HOXA11-AS + anti-miR-NC 组比较, ox-LDL + si-HOXA11-AS + anti-miR-766-3p 组 HUVEC 细胞凋亡 率、 LDH 释放量以及培养液中 TNF-α、 IL-1β 水平显著升高 (P< 0. 05), SOD 活性显著降低 (P< 0. 05)。 结论 沉默 HOXA11-AS 通过靶向上调 miR-766-3p 表达能够抑制 ox-LDL 诱导的血管内皮细胞凋亡、 氧化应 激和炎性反应。     

CIRC＿0044235靶向miR-574-5p减轻IL-1β诱导的人软骨细胞损伤

目的 观察CIRC＿0044235是否靶向miR-574-5p影响白细胞介素(IL)-1β诱导的软骨细胞凋亡、氧化应激及炎性因子表达。方法 将细胞分为对照组、IL-1β组、分别转染pcDNA、pcDNA-CIRC＿0044235、anti-miR-NC、anti-miR-574-5p、pcDNA-CIRC＿0044235+miR-NC和pcDNA-CIRC＿0044235+miR-574-5p,干预IL-1β。RT-qPCR检测细胞中CIRC＿0044235和miR-574-5p表达。流式细胞测量术与Western blot分别检测细胞凋亡、相关蛋白Bcl-2与Bax的表达；比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)活力；ELISA检测IL-6和IL-10的水平。双荧光素酶报告实验检测CIRC＿0044235和miR-574-5p的靶向结合。结果 与对照组相比，IL-1β组软骨细胞中CIRC＿0044235表达量、Bcl-2蛋白表达量、SOD活力和IL-10含量降低(P<0.05),而miR-574-5p表达量、凋亡率、Bax蛋白表达量、LDH活力和IL-6含量升高...     

LINC00707靶向miR-374a-3p对LPS诱导的肺上皮细胞炎症因子释放和凋亡的影响北大核心CSCD

目的:研究长基因间非编码RNA 00707(LINC00707)靶向miR-374a-3p对脂多糖(LPS)诱导的肺上皮细胞炎症因子释放和凋亡的影响。方法:采用10μg/ml LPS处理肺上皮细胞BEAS-2B建立细胞损伤模型,并分为对照组(Con)、LPS组、LPS+si-NC组、LPS+si-LINC00707组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-374a-3p组、LPS+si-LINC00707+anti-miR-NC组、LPS+si-LINC00707+anti-miR-374a-3p组。RT-qPCR检测LINC00707和miR-374a-3p表达;ELISA试剂盒检测细胞培养液中IL-6和IL-1β水平;流式细胞仪检测BEAS-2B细胞凋亡率。双荧光素酶报告实验分析LINC00707和miR-374a-3p的靶向关系。结果:与Con组比较,LPS组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量、LINC00707表达显著升高(P<0.05),miR-374a-3p表达显著降低(P<0.05)。与LPS+si-NC组比较,LPS+si-LINC00707组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量显著降低(P<0.05)。与LPS+miR-NC组比较,LPS+miR-374a-3p组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量显著降低(P<0.05)。miR-374a-3p是LINC00707的靶基因,LINC00707负调控miR-374a-3p表达。与LPS+si-LINC00707+anti-miR-NC组比较,LPS+si-LINC00707+antimiR-374a-3p组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量显著升高(P<0.05)。结论:干扰LINC00707通过靶向上调miR-374a-3p抑制LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和炎症因子释放。     

依托咪酯上调miR-290-5p减轻LPS诱导的大鼠心肌细胞系H9C2损伤

目的探讨依托咪酯(Eto)对脂多糖(LPS)所致大鼠心肌细胞系H9C2损伤的保护机制。方法将H9C2细胞分为对照(Co)组、LPS组(1μg/mL的LPS处理6 h)、Eto+LPS组、miR-con+LPS组、miR-290-5p+LPS组、Eto+anti-miR-con+LPS组和Eto+anti-miR-290-5p+LPS组。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及流式细胞计量术分别检测细胞活力及细胞凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-290-5p的表达水平。酶连免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的含量。结果与对照组比较,LPS组H9C2细胞miR-290-5p表达降低(P0.05),细胞存活率降低(P0.05),凋亡率升高(P0.05),TNF-α和IL-6的含量升高(P0.05);与LPS组比较,Eto+LPS组H9C2细胞miR-290-5p表达升高(P0.05),细胞存活率升高(P0.05),凋亡率降低(P0.05),细胞培养液中TNF-α和IL-6的含量降低(P0.05);与miR-con+LPS组比较,miR-290-5p+LPS组H9C2细胞存活率升高(P0.05),凋亡率降低(P0.05),细胞培养液中TNF-α和IL-6的含量降低(P0.05);与Eto+anti-miR-con+LPS组比较,Eto+anti-miR-290-5p+LPS组H9C2细胞存活率降低(P0.05),凋亡率升高(P0.05),细胞培养液中TNF-α和IL-6的含量升高(P0.05)。结论依托咪酯上调miR-290-5p可减轻LPS诱导的心肌细胞凋亡及炎性反应。     

lncRNA PCGEM1通过靶向miR-155-5p抑制LPS诱导的气管平滑肌细胞增殖及炎症反应北大核心CSCD

目的研究lncRNA PCGEM1/miR-155-5p轴对LPS诱导的气管平滑肌细胞增殖和凋亡及炎症反应的影响。方法采用100μg/ml LPS刺激支气管平滑肌细胞BSMC 12 h以诱导细胞损伤。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞lncRNA PCGEM1和miR-155-5p表达水平;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞CyclinD1、Cleaved-caspase-3蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测lncRNA PCGEM1和miR-155-5p靶向关系。结果与NC组比较,LPS组细胞lncRNA PCGEM1表达水平显著降低,miR-155-5p表达水平显著升高(P<0.05)。与pcDNA+LPS组比较,pcDNA-lncRNA PCGEM1+LPS组lncRNA PCGEM1表达水平显著升高,吸光度值、CyclinD1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,TNF-α、IL-6、IL-33水平显著降低(P<0.05)。与anti-miR-NC+LPS组比较,antimiR-155-5p+LPS组miR-155-5p表达水平显著降低,吸光度值、CyclinD1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,TNF-α、IL-6、IL-33水平显著降低(P<0.05)。与miR-NC+pcDNA-lncRNA PCGEM1+LPS组比较,miR-155-5p+pcDNA-lncRNA PCGEM1+LPS组细胞miR-155-5p表达水平显著升高,吸光度值、CyclinD1蛋白表达显著升高,细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著降低,TNF-α、IL-6、IL-33水平显著升高(P<0.05)。结论lncRNA PCGEM1下调miR-155-5p降低LPS诱导的气管平滑肌细胞凋亡及炎症反应,抑制增殖。     

miR-30a-5p靶向SIRT1调控骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的研究

为研究miR-30a-5p对骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制,运用实时荧光RT-PCR检测人原代OA软骨细胞及正常软骨细胞中miR-30a-5p、沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ(silent information regulator 1, SIRT1)的表达。研究分为正常对照组(正常软骨细胞)、OA+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、OA+anti-miR-30a-5p组(转染anti-miR-30a-5p)、OA+pcDNA组(转染pcDNA)、OA+pcDNA-SIRT1组(转染pcDNA-SIRT1)、OA+anti-miR-30a-5p+si-NC组(anti-miR-30a-5p和si-NC共转染)、OA+anti-miR-30a-5p+si-SIRT1组(anti-miR-30a-5p和si-SIRT1共转染),用脂质体法进行细胞转染,Western blotting检测各组细胞中SIRT1的表达,MTT试验检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,双荧光素酶报告基因检测试验检测细胞的荧光活性。结果显示,与正常软骨细胞比较,OA软骨细胞中miR-30a-5p表达显著升高(P0.05),SIRT1表达显著降低(P0.05);抑制miR-30a-5p、过表达SIRT1均可促进OA软骨细胞增殖,抑制其凋亡。miR-30a-5p靶向SIRT1。敲减SIRT1表达可逆转抑制miR-30a-5p对OA软骨细胞的增殖促进和凋亡抑制作用。提示miR-30a-5p可促进OA软骨细胞增殖,抑制其凋亡,其机制可能与靶向SIRT1有关,这可为OA的靶向治疗提供依据。     

薄荷脑通过miR-1247-3p/PI3K/Akt通路影响LPS诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡和炎症反应的分子机制研究

目的：探讨薄荷脑对脂多糖（LPS）诱导的Ⅱ型肺泡上皮（AT-Ⅱ）细胞凋亡和炎症反应的影响及分子机制。方法：以5、10、15 mg/L的LPS处理AT-Ⅱ细胞，CCK-8法检测细胞活性；将AT-Ⅱ细胞随机分为对照（NC）组、15 mg/L LPS组、1、5、10μmol/L薄荷脑+15 mg/L LPS组、anti-miR-NC+15 mg/L LPS组、anti-miR-1247-3p+15 mg/L LPS组、miR-NC+10μmol/L薄荷脑+15 mg/L LPS组、miR-1247-3p+10μmol/L薄荷脑+15 mg/L LPS组；采用流式细胞术检测细胞凋亡；ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-1β水平；Western blot检测蛋白表达；RT-qPCR检测miR-1247-3p表达水平。结果：不同浓度LPS处理后AT-Ⅱ细胞活性降低（P<0.05）。LPS诱导的AT-Ⅱ细胞中Cleaved-caspase-3表达水平及细胞凋亡率升高，TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高，miR-1247-3p表达水平升高，p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平降低（P...     

丙泊酚减轻低氧诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系PC12炎性反应和细胞凋亡

目的 研究丙泊酚是否通过抑制miR-141-3p的表达，减轻低氧诱导的肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系PC12炎性反应和细胞凋亡的分子机制。方法 将PC12细胞分为对照组、低氧组、(5、10、20)μmol/L丙泊酚+低氧组、anti-miR-con+低氧组、anti-miR-141-3p+低氧组、miR-con+20μmol/L丙泊酚+低氧组、miR-141-3p+20μmol/L丙泊酚+低氧组。流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡；Western blot检测活化的含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved caspase-3)蛋白表达；相关试剂盒检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性；活性氧荧光探针DCFH-DA法测定活性氧(ROS)含量；ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6含量；RT-qPCR检测miR-141-3p表达。结果 与对照组比较，低氧组PC12细胞的凋亡率、cleaved caspase-3蛋白表达水平、MDA、ROS、TNF-α、IL-1β、IL-6含量和miR-141-3p表达量均升高，SOD活性减弱(P<...     

栀子多糖调控miR-141-3p对LPS诱导的心肌细胞炎症反应及凋亡的影响北大核心CSCD

目的:探讨栀子多糖对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞炎症反应、凋亡的影响及分子机制。方法:100 ng/ml LPS处理H9C2细胞作为LPS组,正常培养的细胞作为对照组,采用终浓度为2.5、5、10μmol/L的栀子多糖和100 ng/ml LPS共同培养的细胞作为栀子多糖低、中、高浓度组。将H9C2细胞分为LPS+Experiment-H+anti-miR-NC组、LPS+Experiment-H+anti-miR-141-3p组、LPS+Experiment-H+pcDNA3.1组、LPS+Experiment-H+pcDNA3.1-KLF6组。ELISA检测IL-1β、TNF-α水平;Western blot检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Krupple样转录因子6(KLF6)蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-141-3p表达;荧光素酶报告实验检测miR-141-3p和KLF6的靶向关系。结果:LPS诱导的心肌细胞中IL-1β、TNF-α水平、Bax表达、细胞凋亡率显著升高,miR-141-3p表达显著降低,KLF6表达显著升高(P<0.05)。栀子多糖处理后LPS诱导的心肌细胞中IL-1β、TNF-α水平、Bax表达、细胞凋亡率显著降低,miR-141-3p表达显著升高,KLF6表达显著降低(P<0.05)。抑制miR-141-3p表达和过表达KLF6逆转了栀子多糖对LPS作用的H9C2细胞凋亡和炎症因子的抑制作用。miR-141-3p可靶向调控KLF6表达。结论:栀子多糖可抑制LPS诱导的心肌细胞凋亡和炎症因子释放,对LPS诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,其机制可能与miR-141-3p和KLF6有关。     

circ_ 0061140 靶向 miR-6838-5p 促进非小细胞肺癌细胞的增殖、 阻滞细胞周期、 诱导细胞凋亡

目的 通过实验研究确认环状 RNA (circRNA) circ_ 0061140 是否能靶向 miR-6838-5p 调控非小 细胞肺癌细胞的增殖、 细胞周期和凋亡。 方法 采用逆转录-定量聚合酶链反应 (RT-qPCR) 检测 circ_ 0061140 和 miR-6838-5p 在非小细胞肺癌细胞中的表达情况。 将非小细胞肺癌 NCI-H1299 细胞分为 si-circ_ 0061140 组 (转染 si-circ_ 0061140; 低表达 circ_ 0061140)、 si-NC 组 (转染 si-NC; 阴性对照)、 NC 组 (未 转染; 空白对照)、 miR-6838-5p 组 (转染 miR-6838-5p 模拟物; 高表达 miR-6838-5p)、 miR-NC 组 (转染 miR-NC; 高表达 miR-6838-5p 的阴性对照)、 si-circ_ 0061140 + anti-miR-NC 组 (共转染 si-circ_ 0061140 与 anti-miR-NC)、 si-circ_ 0061140 + anti-miR-6838-5p 组 (共转染 si-circ_ 0061140 与 anti-miR-6838-5p)。 采用 Western 印迹检测细胞周期蛋白 D1 ( cyclinD1)、 活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3 ( cleaved caspase-3) 蛋白表达, MTT 法检测细胞增殖能力, 流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况。 双荧光素酶活性 检测 circ_ 0061140 和 miR-6838-5p 的靶向结合。 结果 非小细胞肺癌组织、 细胞 NCI-H1299、 NCI-H2170、 NCI-H1975 中的 circ_ 0061140 表达量均比癌旁组织或正常肺上皮细胞 BEAS-2B 高, miR-6838-5p 表达量比 癌旁组织或 BEAS-2B 细胞低 (P均 < 0. 05)。 si-circ_ 0061140 组或 miR-6838-5p 组 NCI-H1299 细胞的 CyclinD1 蛋白表达量、 增殖能力、 S 期细胞比例比 NC 组减少, Cleaved-caspase-3 蛋白表达量、 G0 / G1期细胞比 例、 凋亡率比 si-NC 组或 miR-NC 组增加 (P均 < 0. 05)。 circ_ 0061140 靶向调控 miR-6838-5p 的表达。 共转 染 si-circ_ 0061140、 anti-miR-6838-5p 可减弱转染 si-circ_ 0061140 对细胞生物学行为的作用。 结论 低表达 circ_ 0061140 通过靶向非小细胞肺癌细胞的 miR-6838-5p, 抑制细胞增殖、 阻滞 G0 / G1期细胞周期, 并加速 凋亡。     

lncRNA FGD5-AS1靶向miR-15a-5p调控LPS诱导的脓毒症细胞损伤

目的:探讨长链非编码RNA FGD5-AS1(lncRNA FGD5-AS1)对LPS诱导的脓毒症细胞损伤的影响及分子机制。方法:500 ng/ml脂多糖(LPS)诱导THP-1细胞损伤。THP-1细胞分为对照组、LPS组、pcDNA组、pcDNA-FGD5-AS1组、anti-miR-NC组、anti-miR-15a-5p组、pcDNA-FGD5-AS1+miR-NC组、pcDNA-FGD5-AS1+miR-15a-5p组。RT-qPCR检测lncRNA FGD5-AS1和miR-15a-5p表达;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测蛋白表达;ELISA检测IL-6、IL-1β、TNF-α水平。双荧光素酶报告实验检测lncRNA FGD5-AS1和miR-15a-5p的靶向关系。结果:与对照组相比,经LPS诱导的THP-1细胞中,lncRNA FGD5-AS1表达降低,miR-15a-5p表达升高(P<0.05)。过表达lncRNA FGD5-AS1和下调miR-15a-5p均能够显著降低细胞凋亡以及炎症细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α表达(P<...     

LINC01342靶向miR-367-3p调控OX-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡及细胞炎症反应的实验研究

目的 探究LINC01342靶向miR-367-3p调控氧化型低密度脂蛋白（OX-LDL）诱导的血管内皮细胞凋亡及细胞炎症反应的实验研究。方法 用MTT法检测OX-LDL细胞A值；采用100μg/mL OX-LDL处理HUVEC细胞，将细胞分为NC组（正常培养细胞）、OX-LDL组（OX-LDL处理细胞）、si-NC+OX-LDL组（转染si-NC，用OX-LDL处理细胞）、si-LINC01342+OX-LDL组（转染si-LINC01342，用OX-LDL处理细胞）、miR-NC+OX-LDL组（转染miR-NC，用OX-LDL处理细胞）、miR-367-3p+OX-LDL组（转染miR-367-3p，用OX-LDL处理细胞）、si-LINC01342+anti-miR-NC+OX-LDL组（共转染si-LINC01342和anti-miR-NC，用OX-LDL处理细胞）、si-LINC01342+anti-miR-367-3p+OX-LDL组（共转染si-LINC01342和anti-miR-367-3p，用OX-LDL处理细胞），qRT-PCR检测LINC01342和miR-3...     

miR-146a-5p 通过调控Notch2 表达对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌损伤的影响

目的:探究miR-146a-5p调控Notch2表达对心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤的影响及作用机制。方法:将大鼠分为Control组、MI/R组、MI/R+mimic mock组、MI/R+mimic组,构建MI/R大鼠模型并使用相应的慢病毒处理,检测各组大鼠心脏LVEDD、LVESD和心肌梗死面积,RT-PCR检测miR-146a-5p基因表达水平,ELISA检测肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、血清乳酸脱氢酶(LDH)、IL-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,TUNEL检测细胞凋亡,免疫组化检测Ki67阳性细胞率,试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平,Western blot检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Notch2、Hes1蛋白水平。将细胞分为Control组、OGD/R组、OGD/R+mimic mock组、OGD/R+mimic组、OGD/R+pc-Notch2组、OGD/R+mimic+pc-Notch2组,缺糖缺氧复糖复氧诱导心肌细胞损伤并转染对应的mimic,RT-PCR检测miR-146a-5p和Notch2基因表达水平,Western blot检测Notch2蛋白水平,MTT检测细胞活性、Hoechst检测细胞凋亡,试剂盒检测SOD和MDA水平,生物信息学及荧光素酶报告实验检测miR-146a-5p和Notch2的靶向关系。结果:在动物实验中,与Control组比较,MI/R组miR-146a-5p基因表达水平降低、LVEDD、LVESD水平升高,心肌梗死面积,CK-MB、CK、LDH水平升高,心肌细胞凋亡率升高,Ki67阳性细胞率升高,SOD、GSH-Px水平降低,MDA水平升高,IL-6、IL-1β、TNF-α水平升高,Bax、Notch2、Hes1蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低;与MI/R组比较,MI/R+mimic组miR-146a-5p基因表达水平升高、LVEDD、LVESD水平降低,心肌梗死面积、CK-MB、CK、LDH水平降低,心肌细胞凋亡率降低,Ki67阳性细胞率升高,SOD、GSH-Px水平升高,MDA水平降低,IL-6、IL-1β、TNF-α水平降低,Bax、Notch2、Hes1蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高。在细胞实验中,与Control组比较,OGD/R组miR-146a-5p基因表达水平降低,Notch2基因和蛋白表达水平升高,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,SOD水平降低,MDA水平升高;与OGD/R组比较,OGD/R+mimic组miR-146a-5p基因表达水平升高,Notch2基因和蛋白表达水平降低,细胞活力升高,细胞凋亡率降低,SOD水平升高,MDA水平降低,OGD/R+pc-Notch2组Notch2蛋白表达水平升高,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,SOD水平降低,MDA水平升高;与OGD/R+mimic组比较,OGD/R+mimic+pc-Notch2组Notch2蛋白水平升高,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,SOD水平降低,MDA水平升高;与OGD/R+pc-Notch2组比较,OGD/R+mimic+pc-Notch2组Notch2蛋白水平降低,细胞活力升高,细胞凋亡率降低,SOD水平升高,MDA水平降低。在荧光素酶报告实验中,与Notch2 wt组比较,Notch2 wt+miR-146a mimic组荧光素酶活性显著降低。结论:miR-146a-5p能够在大鼠心肌缺血再灌注中减轻心肌损伤,其作用机制与抑制Notch2基因的表达有关。     

miR-194靶向FoxA1基因对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤影响

目的探讨微小RNA(miR-194)靶向叉头盒蛋白A1(FoxA1)基因对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞损伤影响及其可能作用机制。方法正常培养的肺泡上皮细胞为NC组,LPS处理的肺泡上皮细胞为LPS组,分别或共同将miR-con、miR-194 mimic、si-con、si-FOXA1转染至肺泡上皮细胞后加入LPS处理。qRT-PCR与Western blot分别检测miR-194、FOXA1的mRNA及蛋白表达;MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;检测乳酸脱氢酶(LDH)活性;双荧光素酶报告实验检测miR-194与FOXA1的作用关系;Western blot检测Bax、Bcl-2的蛋白水平。结果与NC组相比,LPS组肺泡上皮细胞增殖率明显降低,凋亡率明显上升,Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,LDH活性增强;双荧光素酶报告实验验证FOXA1是miR-194的靶基因;miR-194过表达与抑制FOXA1表达后细胞增殖率明显上升,凋亡率明显下降,Bax蛋白表达下调,Bcl-2的蛋白表达上调,LDH活性降低,而共转染miR-194 mimic与pcDNA-FOXA1后可逆转miR-194对LPS诱导的肺泡上皮细胞增殖及凋亡的作用。结论miR-194可通过抑制FOXA1表达进而缓解LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤。     

长链非编码RNA HOTAIR 靶向miR-138 对脓毒症诱导的大鼠心肌炎症 反应和氧化应激的影响及作用机制研究

目的:探究同源盒基因转录反义RNA(HOTAIR)与miR-138对脓毒症诱导的大鼠心肌炎症反应和氧化应激的影响及作用机制。方法:将大鼠分为Control组、CLP组、siRNA+CLP组、si-HOTAIR+CLP组,构建大鼠CLP模型, PanoView b1500检测大鼠左心室收缩压(LVSP)和左心室舒张末压(LVEDP),RT-PCR检测HOTAIR和miR-138表达水平,HE染色检测心肌病理损伤,试剂盒检测血清炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、心肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平,Western blot检测NF-κB信号通路蛋白表达水平;将心肌细胞分为Control组、LPS组、siRNA+LPS组、si-HOTAIR+LPS组、si-HOTAIR+LPS+inhibitor组,RT-PCR检测HOTAIR和miR-138表达水平,荧光素酶报告检测HOTAIR与miR-138靶向关系, MTT检测细胞活性,Hoechst检测细胞凋亡,试剂盒检测MDA和SOD的水平,Western blot检测NF-κB信号通路蛋白表达水平。结果:在动物实验中,与Control组比较,CLP组LVSP、细胞活性、miR-138、SOD水平显著降低,LVEDP、病理性改变、细胞凋亡率、HOTAIR、cTnⅠ、CK-MB、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA及NF-κB通路蛋白表达水平显著升高;与CLP组比较,si-HOTAIR+CLP组LVSP、细胞活性、miR-138、SOD水平显著升高,LVEDP、病理性改变、细胞凋亡率、HOTAIR、cTnⅠ、CK-MB、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA及NF-κB通路蛋白表达水平显著降低。在细胞实验中,与Control组比较,LPS组细胞活性、miR-138、SOD水平显著降低,细胞凋亡率、HOTAIR、MDA、NF-κB通路蛋白表达水平显著升高;与LPS组比较,si-HOTAIR+LPS组细胞活性、miR-138、SOD水平显著升高,细胞凋亡率、HOTAIR、MDA、NF-κB通路蛋白显著降低;与si-HOTAIR+LPS组比较,si-HOTAIR+LPS+inhibitor组细胞活性、SOD水平降低,细胞凋亡率、MDA、NF-κB通路蛋白表达水平升高。在荧光素酶报告实验中,与HOTAIR wt组比较,HOTAIR wt+miR-138 mimic组荧光素酶活性显著降低。结论:HOTAIR可以通过沉默miR-138,促进脓毒症诱导的大鼠心肌炎症反应和氧化应激,其作用机制与NF-κB信号通路激活有关。     

抑制lncRNA LINC01503通过靶向调控miR-335-5p对肺癌细胞活力、迁移和侵袭的影响及其机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC01503对肺癌细胞活力、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:将人肺癌H1299细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-LINC01503组(转染si-LINC01503)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-LINC01503组(转染pcDNA-LINC01503)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-335-5p组(转染miR-335-5p mimics)、si-LINC01503+anti-miR-NC组(共转染si-LINC01503和anti-miR-NC)、si-LINC01503+anti-miR-335-5p组(共转染si-LINC01503和anti-miR-335-5p)、miR-NC+WT-LINC01503组(共转染miR-NC和WT-LINC01503)、miR-NC+MUT-LINC01503组(共转染miR-NC和MUT-LINC01503)、miR-335-5p+WT-LINC01503组(共转染miR-335-5p和WT-LINC01503)和miR-335-5p+MUT-LINC01503组(共转染miR-335-5p和MUT-LINC01503)。采用RT-qPCR检测miR-335-5p和LINC01503的表达水平;Western blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞活力;Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力的变化;双萤光素酶报告基因实验验证LINC01503与miR-335-5p的靶向关系。结果:与正常肺组织相比,肺癌组织中LINC01503表达水平显著升高,miR-335-5p表达水平显著降低(P<0.05);与Ⅰ/Ⅱ期阶段相比,Ⅲ/Ⅳ期肺癌组织中LINC01503表达水平显著升高,miR-335-5p表达水平显著降低(P<0.05);LINC01503高表达的患者短期生存率显著低于LINC01503低表达的患者(P<0.05)。与正常支气管上皮细胞系BEAS-2B相比,肺癌细胞系H1299、A549和SPC-A-1中miR-335-5p的表达水平显著降低,LINC01503的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-335-5p、抑制LINC01503表达均可抑制H1299细胞的活力、迁移和侵袭,抑制细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白的表达(P<0.05)。LINC01503靶向调控miR-335-5p的表达,干扰miR-335-5p表达能逆转抑制LINC01503表达对H1299细胞活力、迁移和侵袭的抑制作用。结论:抑制lncRNA LINC01503表达可抑制肺癌细胞的活力、迁移和侵袭,其机制可能与靶向调控miR-335-5p有关。