姜黄素通过miR-182-TLR4途径抑制缺氧诱导的小胶质细胞炎症反应

目的 研究姜黄素对缺氧诱导的小胶质细胞炎症反应的抑制作用及机制.方法 采用CCK8法检测姜黄素对BV2小胶质细胞的作用浓度.利用转染试剂Lipofectamine 2000进行小胶质细胞的miR-182 inhibitor转染,转染后24h通过氧糖剥夺处理模拟缺血缺氧环境诱导BV-2小胶质细胞活化建立炎症模型,缺氧诱导...     

miR-7基因敲减对LPS诱导巨噬细胞炎症反应的影响

观察miR-7基因敲减(knockdown, KD)对LPS诱导的巨噬细胞炎症反应的影响,并初步探讨其机制。分别用0、50、100、200 ng/mL LPS刺激野生型(wild type, WT)小鼠骨髓来源巨噬细胞12 h,经实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR, Real-time PCR)检测发现,随着LPS刺激浓度的增加,巨噬细胞中miR-7的表达水平逐渐升高,且在100 ng/mL LPS浓度刺激下miR-7表达最显著(P0.01)。用100 ng/mL LPS处理miR-7 KD小鼠和WT小鼠骨髓来源巨噬细胞12 h,镜检观察到巨噬细胞形态均由圆形变为长梭形,并伸出长长的伪足。应用流式细胞术检测巨噬细胞表面CD80和CD86分子的表达情况,结果显示,LPS作用后,miR-7 KD小鼠骨髓来源巨噬细胞表面CD80和CD86的比例较WT小鼠显著上调(P0.05)。Real-time PCR和ELISA结果显示,miR-7 KD小鼠巨噬细胞在LPS刺激后,炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-ɑ的表达显著增加(P0.05)。Western blotting检测结果显示,LPS刺激后,与对照组相比,miR-7 KD小鼠巨噬细胞中NF-κB p65和p-NF-κB p65的蛋白水平显著升高(P0.01)。以上数据显示,miR-7基因KD可显著增强LPS诱导的巨噬细胞炎症反应,可能与NF-κB信号通路的传递增强有关,提示miR-7在巨噬细胞炎症过程中发挥重要的调控作用。     

牙髓干细胞外泌体来源的miR-150对牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导内皮细胞损伤的影响

目的 探讨牙髓干细胞（DPSC）外泌体来源的miR-150对牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Pg-LPS）诱导的内皮细胞损伤的影响。方法 培养DPSC,转染miR-150模拟物后分离并鉴定外泌体。培养内皮细胞HUVEC,分为Blank组、Pg-LPS组、NC exosome组、miR-NC exosome组和miR-150 exosome组。qRT-PCR检测外泌体和各组HUVEC细胞中miR-150表达水平;ELISA检测各组HUVEC细胞中炎症因子IL-6和IL-8水平;CCK-8和流式细胞术检测各组HUVEC细胞增殖、凋亡;划痕愈合实验和Transwell实验检测各组HUVEC细胞迁移、侵袭。结果 成功从DPSC细胞中分离出外泌体,并诱导miR-150表达上调（P<0.05）;Pg-LPS诱导后,HUVEC细胞中miR-150水平降低,IL-6和IL-8水平增高,细胞活力降低,凋亡率增高,划痕愈合率和侵袭细胞数量降低（P<0.05）;添加DPSC外泌体和外泌体来源的miR-150可在一定程度上减少Pg-LPS对HUVEC细胞的影响,且后者的效果要优于前者（P<0.05）。...     

绿原酸调控miR-124/STAT3轴减轻ox-LDL诱导的血管内皮细胞炎症损伤

目的：探讨绿原酸（CGA）通过调节miR-124/信号转导和转录活化因子3(STAT3)轴对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）炎症损伤的影响。方法：体外培养HUVECs细胞，分为对照组、ox-LDL组、ox-LDL+CGA 25、50、100μmol/L组、ox-LDL+CGA 100μmol/L+NC inhibitor组、ox-LDL+CGA 100μmol/L+miR-124 inhibitor组，ox-LDL浓度均为150μg/ml。RT-qPCR检测细胞中miR-124、STAT3 mRNA水平；CCK-8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡率；ELISA检测细胞培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6水平；Western blot检测细胞中STAT3、CyclinD1、Bax、Caspase-3蛋白表达水平；双荧光素酶报告基因实验验证miR-124与STAT3的靶向关系。结果：与对照组相比，ox-LDL组HUVECs凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、STAT3 mRNA及蛋白表达水平显著升...     

人牙龈成纤维细胞在可降解膜支架上的附着生长及穿透性研究

目的 对体外培养的人牙龈成纤维细胞在两种可降解膜支架上的附着性与穿透性进行评价。为进一步构建组织工程化人工牙龈以修复牙龈缺损及纠正牙龈萎缩提供必要的实验依据；方法 可吸收性支架采用GC膜和Gorg密度播种在两种支架膜上进行培养；定期分别用LDH试剂盒测定附着在支架上的细胞数，在光学显微镜下计数膜下透过的细胞数并求出细胞透过率；结果 人牙龈成纤维细胞在GC膜支架上比在Gore-resolut支架上具有较高的附着率和穿透率（有统计学显意义）；结论 GC膜状支架具有良好的生物相容性和细胞亲和性。其结构。孔径和降解速率有助于人龈成纤维细胞的三维附着生长，适宜进一步作为体内构建组织工程化人工牙龈的支架材料。     

人源α-烯醇化酶B细胞表位鉴定及其与牙龈卟啉单胞菌烯醇化酶的交叉反应预测

目的:预测鉴定人源α-烯醇化酶蛋白的B细胞抗原表位,探讨人源α-烯醇化酶与牙龈卟啉单胞菌烯醇化酶之间的交叉反应性。方法:以人源α-烯醇化酶蛋白序列为基础,综合应用多个软件预测B细胞线性表位;再以人源α-烯醇化酶的蛋白晶体结构为基础,采用4个生物信息学软件综合预测B细胞构象表位;利用原核表达系统对人源α-烯醇化酶蛋白进行表达、亲和层析法进行,纯化抗原免疫BALB/c小鼠,化学合成预测的线性表位片段检测抗体反应,确定人源α-烯醇化酶蛋白B细胞表位。利用Clustal X进行蛋白质序列比对和Swiss-Model进行同源模建,研究人源α-烯醇化酶和牙龈卟啉单胞菌烯醇化酶的交叉反应性。结果:人源α-烯醇化酶线性B细胞表位优势区域为9-25aa,28-43aa,70-85aa,163-178aa,229-244aa,280-295aa;构象性B细胞表位优势区域为:1-4/24-30/77-86/124aa,9-16/51-59aa,250-254/262-268/271-274aa;合成的线性表位片段中9-25aa免疫应答反应最强烈,其次是70-85aa,再次为28-43aa,163-178aa,229-244aa,280-295aa;牙龈卟啉单胞菌烯醇化酶和人源α-烯醇化酶氨基酸序列同源性高达50.11%,两者在线性B细胞表位优势区域的9-24aa和32-42aa序列高度相似;空间构象比对结果显示牙龈卟啉单胞菌烯醇化酶和人源α-烯醇化酶之间的RMSD值为1.055,且两者在3个构象性B细胞表位优势区域的空间构象高度相似,推测二者可能在上述区域发生交叉反应。结论:预测并鉴定了人源α-烯醇化酶蛋白的B细胞抗原表位,比较其与牙龈卟啉单胞菌的烯醇化酶可能发生交叉反应的位点,为研究人源α-烯醇化酶蛋白的自身抗原性和类风湿性关节炎发病机制提供了理论基础。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导THP-1细胞分泌IL-1β、TNF-α、IL-6能力及其相关Toll样受体的差异性

目的 探讨牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)脂多糖(LPS)诱导人单核-巨噬样细胞THP-1分泌IL-1β、TNF-α、IL-6能力及相关Toll样受体(TLR)的差异. 方法 采用酚水法提取Pg ATCC33277株脂多糖(Pg-LPS),并用红外光谱法和鲎试验进行鉴定.采用ELISA试剂盒定量检测Pg-LPS作用的THP-1细胞分泌IL-1β、TNF-α和IL-6水平.采用TLR2或TLR4单克隆抗体阻断试验联合ELISA检测,了解Pg-LPS结合靶细胞上Toll样受体的类型.实验中采用大肠杆菌0111:B4株脂多糖(E-LPS)作为对照. 结果 1μg/ml Pg-LPS作用THP-1细胞,分别于0.5、6和6 h检测分泌IL-1β、TNF-α和IL-6的水平明显升高(P0.05).TLR2或TLR4单抗均可有效阻断Pg-LPS作用的THP-1细胞分泌IL-1B或IL-6(P<0.05),但仅,ILR2单抗显示了阻断TNF-α分泌的作用(P<0.05).E-LPS诱导THP-1细胞分泌上述3种细胞因子的活性仅可被TLR4单抗所阻断(P<0.05). 结论 Pg-LPS诱导THP-1细胞分泌IL-1β、TNF-α和IL-6活性略高于E-LPS,TLR2而非TLR4是Pg-LPS介导靶细胞分泌上述细胞因子的主要受体.     

人牙龈成纤维细胞原代培养及冻存和复苏

背景：牙龈成纤维细胞是牙龈固有结缔组织层中主要的细胞,在许多生理和病理过程中起着重要作用。 目的：对人牙龈成纤维细胞进行原代培养、鉴定、冻存及复苏。 方法：采用组织块培养法培养人牙龈成纤维细胞,并进行形态学和免疫学鉴定。对人牙龈成纤维细胞进行冻存与复苏,倒置显微镜下观察细胞形态变化。 结果与结论：人牙龈成纤维细胞原代培养成功率为86.7%,细胞呈梭形或纺锤形。免疫组织化学鉴定抗波性蛋白抗体染色阳性,抗角蛋白抗体染色阴性,为中胚层来源的成纤维细胞。牙龈成纤维细胞冻存与复苏成功,细胞经2次传代后生物学性状与原代相似。提示采用组织块培养法培养原代人牙龈成纤维细胞及冻存与复苏方法可行。     

珠子参总皂苷上调miR-216a抑制人巨细胞病毒感染人胚肺成纤维细胞损伤

目的 探讨珠子参总皂苷对人巨细胞病毒（HCMV）感染人胚肺成纤维细胞（MRC-5）炎症反应、凋亡的影响及其对miR-216a的调控作用。 方法 采用HCMV感染MRC-5细胞建立病毒感染模型,不同浓度（100 μg/mL、200 μg/mL、400 μg/mL）的珠子参总皂苷处理细胞,分别将miR-NC、miR-216a mimics转染至HCMV感染的MRC-5细胞,分别将anti-miR-NC、anti-miR-216a转染至HCMV感染的MRC-5细胞后加入珠子参总皂苷处理细胞;采用ELISA法检测TNF-α、IL-6水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,qRT-PCR法检测miR-216a表达量。 结果 珠子参总皂苷可降低HCMV感染的MRC-5细胞凋亡率及TNF-α、IL-6的水平（P<0.05）,而miR-216a的表达水平升高（P<0.05）;转染miR-216a mimics可降低凋亡率及TNF-α、IL-6的水平（P<0.05）;转染anti-miR-216a可降低珠子参总皂苷对HCMV感染的MRC-5细胞炎症反应及凋亡的作用。 结论 珠子参总皂苷可通过上调miR-216a的表达而抑制炎症反应及细胞凋亡从而减轻HCMV感染的MRC-5细胞损伤。     

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌对人脐静脉内皮细胞分泌相关蛋白及细胞因子的影响

背景:牙龈卟啉单胞菌感染是近年发现与动脉粥样硬化等多种疾病发生有关的危险因素,但不同fimA基因型的牙龈卟啉单胞菌致病能力不同,积极探明牙龈卟啉单胞菌高危菌株对于完善动脉粥样硬化诊疗机制具有重要作用。目的:探讨不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌对人脐静脉内皮细胞分泌单核细胞趋化蛋白1、白细胞介素6、内皮素1/一氧化氮的影响。方法:厌氧条件下对Ⅳ、Ⅱ、ⅠfimA基因型牙龈卟啉单胞菌进行培养,应用感染复数值为100感染人脐静脉内皮细胞,同时设阳性对照组为牙龈卟啉单胞菌脂多糖刺激人脐静脉内皮细胞、阴性对照组人脐静脉内皮细胞仅加细胞培养液培养。采用酶联免疫吸附法检测各组培养2,6,24 h后人脐静脉内皮细胞培养上清液中单核细胞趋化蛋白1、白细胞介素6、内皮素1/一氧化氮水平。结果与结论:除阴性对照组外,其他4组人脐静脉内皮细胞培养上清液中白细胞介素6、内皮素1/一氧化氮、单核细胞趋化蛋白1水平逐渐增高,且ⅣfimA基因型刺激组白细胞介素6、内皮素1/一氧化氮水平高于Ⅱ、ⅠfimA基因型刺激组及阳性对照组、阴性对照组(P <0.05);ⅡfimA基因型刺激组单核细胞趋化蛋白1水平高于Ⅳ、Ⅰf...     

FGF7通过上调SOD2抑制心肌成纤维细胞中纤维化相关基因的表达

目的:研究成纤维细胞生长因子7(FGF7)调控心肌纤维化相关基因表达的作用机制.方法:利用mRNA表达谱芯片检测心衰患者心肌组织与健康对照心肌组织以及重组FGF7腺病毒感染小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)和正常对照mCFs中差异表达的基因.血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导mCFs建立心肌纤维化的细胞模型.流式细胞术检测过表达...     

miR-153通过靶向SORBS2促进LPS诱导的心肌H9C2细胞损伤

目的:研究微小RNA-153(miR-153)对脂多糖(LPS)诱导的胚胎大鼠心肌H9C2细胞的炎症因子、细胞活力及凋亡的影响,并探讨其机制。方法:运用LPS建立H9C2细胞损伤模型;将细胞分为anti-miR-Con组(转染anti-miR-Con)、anti-miR-153组(转染anti-miR-153)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-SORBS2组(转染pcDNA-SORBS2)、anti-miR-153+si-Con组(共转染anti-miR-153和si-Con)和anti-miR-153+si-SORBS2组(共转染anti-miR-153和si-SORBS2),转染后用LPS处理。RT-qPCR法检测细胞中miR-153和SORBS2 mRNA的表达;MTT法检测细胞活力;Western blot检测细胞中SORBS2的蛋白表达;ELISA实验检测细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的含量;流式细胞术检测细胞凋亡;双萤光素酶报告基因实验验证miR-153与SORBS2的靶向关系。结果:成功构建LPS诱导的H9C2细胞损伤模型;与对照...     

miR-323通过FGF9调控缺氧诱导的心肌H9C2细胞凋亡

目的:探讨微小RNA-323(miR-323)对缺氧诱导大鼠心肌H9C2细胞凋亡的影响及其机制。方法:建立缺氧损伤的H9C2细胞模型,在H9C2细胞转染anti-miR-323、pcDNA-FGF9和si-FGF9,并缺氧处理48 h。采用qPCR检测miR-323的表达, Western blot检测成纤维细胞生长因子9(FGF9)、cleaved caspase-3、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p-JNK的蛋白水平,MTT比色法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡。生物学信息预测miR-323的靶基因并用双萤光素酶报告基因进一步验证。结果:缺氧明显降低H9C2细胞12 h、24 h和48 h的细胞活力(P<0.05),显著提高细胞凋亡率和cleaved caspase-3的蛋白水平(P<0.05),效应均呈时间依赖性。缺氧处理的H9C2细胞中miR-323和p-JNK水平上调,FGF9蛋白表达下调(P<0.05)。下调miR-323表达或过表达FGF9显著提高缺氧处理的H9C2细胞活力,降低细胞凋亡率和cleaved caspase-3蛋白的水平(P<...     

蕨麻多糖通过调控miR-421表达对LPS诱导的心肌细胞炎症反应及凋亡的影响北大核心CSCD

目的:探讨蕨麻多糖(PAP)对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞炎症反应及凋亡的影响及其可能作用机制。方法:采用LPS诱导大鼠心肌细胞H9C2建立细胞损伤模型,用浓度为0.05、0.1、0.2 mg/ml蕨麻多糖处理细胞,anti-miR-NC、antimiR-421分别转染至心肌细胞后用LPS处理细胞,miR-NC、miR-421 mimics分别转染至心肌细胞后用蕨麻多糖与LPS共同处理细胞;ELISA法检测细胞培养液中TNF-α、IL-6的水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;qRT-PCR法检测miR-421的表达量。结果:蕨麻多糖呈浓度依赖性降低LPS诱导的心肌细胞培养液中TNF-α、IL-6的水平(P<0.05),并可降低细胞凋亡率(P<0.05),还可降低miR-421的表达量(P<0.05);转染anti-miR-421后LPS诱导的心肌细胞培养液中TNF-α、IL-6的水平降低(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05);转染miR-421 mimics能够逆转蕨麻多糖对LPS诱导的心肌细胞炎症反应及凋亡的作用。结论:蕨麻多糖可通过抑制miR-421的表达抑制心肌细胞炎症反应及细胞凋亡,进而减轻LPS诱导的心肌细胞损伤。     

沙利度胺抑制TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞系转分化为肌成纤维细胞

目的 研究沙利度胺(THD)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-F)向肌成纤维细胞(MF)转分化和对已分化MF的作用。方法 体外培养HFL-F,以TGF-β1(5μg/L)诱导HFL-F向MF转分化,通过碱水解法测定羟脯氨酸含量(Hyp),免疫印迹法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,半定量RT-PCR测定α-SMA mRNA和Ⅲ型胶原(COL Ⅲ)mRNA,观察THD(50μg/L)对HFL-F向MF转分化的过程及已分化MF的影响。结果 TGF-β1诱导HFL-F 96h,诱导分化同时加入THD可抑制Hyp含量增高和COL Ⅲ mRNA表达上调(p均<0.05),可抑制α-SMA蛋白表达增加,但对于α-SMA mRNA表达没有影响。TGF-β1诱导HFL-F 96h后再加入THD可抑制COL Ⅲ mRNA的表达(p<0.05),但对Hyp含量、α-SMA蛋白表达量和α-SMA mRNA表达无明显影响。结论 TGF-β1可诱导HFL-F向MF转分化,THD可抑制这一过程中α-SMA蛋白与胶原合成。对TGF-β1诱导下已分化的MF,THD可抑制其COL Ⅲ mRNA的表达。     

成纤维细胞在炎症反应中具有“岗哨细胞”的作用

长期以来人们认为成纤维细胞的作用只是维持组织结构和参与损伤修复,是一种比较惰性的细胞。但近年来的研究令人惊喜地发现;成纤维细胞与淋巴细胞相似,也是具有异质性和组织特异性的细胞群,而且也能被细菌产物、损伤组织释放的产物及促炎细胞因子等激活。激活的成纤维细胞可出现新的功能,如产生细胞因子和暂时性地合成并分泌趋化因子,招引调动白细胞杀灭细菌,启动炎症反应等,因此被称为“岗哨细胞”（ｓｅｎｔｉｎｅｌ ｃｅｌｌｓ）。此外,成纤维细胞还能产生前列腺素,调节免疫细胞活性及控制细胞外基质的合成。由于许多组织中都…     

circRNA001131通过结合miR-25-3p抑制心肌成纤维细胞中纤维化相关基因的表达

目的:研究环形RNA(circRNA)001131对大鼠心肌成纤维细胞(CFs)纤维化表型的影响及分子机制。方法:采用Masson三色染色法对腹主动脉缩窄(AAC)手术诱导的心肌重构大鼠心肌进行胶原纤维的染色观察。利用芯片检测AAC手术诱导的大鼠心肌中circRNA表达谱的变化。RT-qPCR检测AAC大鼠心肌及血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)诱导的大鼠CFs中circRNA001131的表达。利用放线菌素D和RNase R实验检测circRNA001131的稳定性。利用重组circRNA001131腺病毒(rAd-circRNA001131)感染大鼠CFs,检测CFs中纤维化相关基因Ⅰ型胶原α1链(Col1a1)、Ⅲ型胶原α1链(Col3a1)和肌动蛋白α2(Acta2)的mRNA和蛋白表达。双萤光素酶报告基因实验验证circRNA001131与miR-25-3p的结合作用。结果:RT-qPCR结果证实,circRNA001131在AAC手术诱导的大鼠心肌和Ang-Ⅱ处理的大鼠CFs中表达增强。放线菌素D和RNase R实验结果显示,circRNA001131与其宿主基因--第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(Pten)mRNA相比,降解水平明显降低。过表达circRNA001131可显著抑制大鼠CFs中纤维化相关基因Col1a1和Col3a1的表达。双萤光素酶报告基因实验证实circRNA001131与miR-25-3p间存在结合作用,miR-25-3p可以减弱circRNA001131对大鼠CFs中纤维化相关基因表达的抑制作用。结论:circRNA001131在心肌纤维化中表达增强,并通过结合miR-25-3p发挥抑制心肌纤维化的作用。     

LPS诱导的内毒素血症小鼠及重症联合免疫缺陷小鼠模型炎症反应的比较

目的:比较脂多糖(LPS)诱导的内毒素血症BALB/c小鼠及重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠炎症反应的差异。方法:建立LPS诱导的BALB/c小鼠和SCID小鼠内毒素血症模型,观察小鼠的存活率。分别于诱导前、诱导后3h、6h、12h,取小鼠的血清及诱导后12h小鼠的肝脏、肺脏,用全自动生化分析仪检测两种小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)水平;HE染色评价肝脏、肺脏的炎症病理改变;用流式细胞术微球阵列法检测两种小鼠血清TNF-α、IFN-γ、IL-6及MCP-1的水平。结果:(1)LPS诱导内毒素血症后,SCID小鼠于12～24h均死亡(8/8),BALB/c小鼠仅1只死亡(1/8)。(2)LPS诱导后12h,BALB/c小鼠及SCID小鼠血清ALT、AST、BUN的水平均明显升高(P<0.05),SCID小鼠前两项均高于BALB/c小鼠(P<0.05),但BUN两种小鼠无显著差异。(3)肺脏,肝脏炎症盲法的病理评分,SCID小鼠均高于BALB/c小鼠(P<0.05)。(4)SCID小鼠和BALB/c小鼠LPS诱导后3h、6h、12h,血清TNF-α,IFN-γ的水平,诱导后12h,IL-6,MCP-1的水平均显著升高(P<0.05),SCID小鼠明显高于BALB/c小鼠(P<0.05)。结论:LPS刺激SCID小鼠后,可分泌过量的炎性细胞因子,导致更严重的内毒素血症和脏器损伤,是造成小鼠死亡的重要原因。结果提示,缺乏适应性免疫应答细胞调控的情况下,异常增强的固有免疫应答,可能是危及机体生命的重症全身炎症反应综合征发生的重要原因。     

4种烤瓷冠基底合金浸提液影响人牙龈成纤维细胞中Bcl-2和Bax的表达

背景：研究显示,纯钛材料对人牙龈成纤维细胞的影响不明显,而镍铬合金、含钛镍铬合金明显影响了细胞的炎性表达。 目的：比较4种烤瓷冠基底合金对人牙龈成纤维细胞中Bcl-2和Bax表达的影响。 方法：用组织块法分离培养人牙龈成纤维细胞,实验组分别用4种烤瓷冠基底合金浸提液加入人牙龈成纤维细胞培养液中,空白对照组用含体积分数10%小牛血清的DMEM培养液,Western-blot法检测人牙龈成纤维细胞中Bcl-2和Bax表达的改变。 结果与结论：金合金组对Bcl-2和Bax表达的影响接近空白对照组,纯钛组和钴铬合金组对Bcl-2和Bax表达的影响较小,镍铬合金组对Bcl-2和Bax表达的影响最大,与其他各组相比差异有显著性意义(P < 0.05)。提示镍铬合金可通过影响Bcl-2与Bax的表达水平,抑制人牙龈成纤维细胞的增殖,促进细胞凋亡。关键词：烤瓷冠基底合金;人牙龈成纤维细胞;Bcl-2;Bax;钛 缩略语注释：HGFs：human gingival fibroblasts,人牙龈成纤维细胞 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.16.022     

二甲双胍抑制UVA诱导的人皮肤成纤维细胞的光老化效应

目的研究二甲双胍(MF)对长波紫外线(UVA)诱导的人皮肤成纤维细胞(HSF)光老化效应的抑制作用及相关机制。方法体外培养人皮肤成纤维细胞,分为对照组(control)、UVA组、UVA+MF组。以CCK-8法检测细胞增殖;对各组细胞进行细胞衰老β-半乳糖苷酶染色;以荧光探针DCF-DA染色流式细胞仪检测细胞内ROS水平;real-time PCR检测衰老相关基因MMP1、MMP3的mRNA相对表达量;Western blot检测蛋白MMP1、MMP3、SOD1和SOD2的表达。结果 0.01 mmol/L二甲双胍对HSF增殖无显著影响,0.1和1 mmol/L二甲双胍则显著抑制HSF的细胞增殖(P0.05)。与对照组相比,UVA组β-半乳糖苷酶染色阳性率显著增高(P0.01);ROS水平显著升高(P0.05);MMP1和MMP3 mRNA相对表达量显著增加(P0.01);MMP1和MMP3蛋白表达量显著增多(P0.01);SOD1、SOD2蛋白表达显著减少(P0.01)。与UVA组相比,UVA+MF组β-半乳糖苷酶染色阳性率显著降低(P0.05);ROS水平显著下降(P0.05);MMP1和MMP3的mRNA相对表达量显著降低(P0.05);蛋白MMP1和MMP3表达量显著降低(P0.05);蛋白SOD1表达显著增加(P0.01);SOD2表达量增加。结论二甲双胍可通过抑制细胞内ROS水平和相关基质金属蛋白酶的表达,提高细胞抗氧化能力,从而抑制UVA诱导的皮肤成纤维细胞的光老化效应。