NLRP3炎症小体及其下游分子在幽门螺杆菌感染小鼠的表达

目的 研究NLRP3炎症小体信号通路相关分子在幽门螺杆菌(H.pylori)感染C57BL/6小鼠胃组织和血清中的表达情况,初步探讨NLRP3炎症小体信号通路在H.pylori致病中的作用.方法 将C57BL/6小鼠分为H.pylori感染组和PBS对照组,于感染后不同时间点处死小鼠,RT-PCR检测小鼠胃组织中NLRP3炎症小体和下游信号通路分子mRNA表达,Western blot法检测小鼠胃组织中caspase-1蛋白表达,ELISA测定小鼠血清中IL-1β、IL-18和IL-33含量.结果 与对照组相比,H.pylori感染组小鼠胃黏膜均呈慢性炎症改变,且随时间延长,炎症程度逐渐加重.NLRP3炎症小体信号通路相关分子mRNA及caspase-1蛋白表达水平显著升高,血清中IL-1β、IL-18、IL-33的含量均显著增高.结论 H.pyori感染可以激活NLRP3炎症小体信号通路.     

幽门螺杆菌空泡毒素VacA促进胃上皮细胞NLRP3炎性小体激活

目的探究H. pylori空泡毒素VacA对胃上皮细胞NLRP3炎性小体激活的影响。方法采用WT H. pylori26695和△VacA H. pylori26695感染AGS细胞,Western blotting、q RT-PCR、ELISA检测NLRP3、Pro-Caspase-1、Caspase-1、pro-IL-1β和IL-1β的表达。siRNA-NC、siRNA-NLRP3转染AGS后,分别用PBS、WT H. pylori26695和△VacA H. pylori26695刺激,qRT-PCR和细胞因子ELISA检测试剂盒分别检测pro-IL-1β的mRNA表达水平和IL-1β的蛋白表达水平。收集慢性胃炎患者标本,鉴别出H. pylori阳性患者的VacA基因型(s1m1型和s1m2型),通过q RT-PCR检测NLRP3、caspase-1、pro-IL-1β的mRNA表达水平及采用细胞因子ELISA试剂盒检测IL-1β蛋白表达水平。C57BL/6小鼠腹腔注射DMSO或者DMSO+Mcc950,H. pylori菌液灌胃,qRT-PCR和ELISA检测胃组织IL-1β的表达。结果 H.pylori感染AGS细胞,与对照组相比,WT H. pylori26695组IL-1β的mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P0.01);△VacA H. pylori26695组与WT H. pylori26695组相比,IL-1β的m RNA和蛋白表达水平均明显下降(P0.01)。与siRNA-NC组相比,采用WT H. pylori26695和△VacA H. pylori 26695刺激转染siRNA-NLRP3的AGS细胞pro-IL-1β的m RNA水平和IL-1β蛋白表达水平均明显下调(P0.01)。H. pylori阳性患者较阴性患者NLRP3、Caspase-1和IL-1β的mRNA表达水平明显升高(P0.01);与VacA s1m2型患者相比,VacA s1m1型患者NLRP3、Caspase-1和IL-1β的mRNA表达水平显著升高(P0.01),同时IL-1β成熟分泌增加。H. pylori慢性胃炎小鼠动物模型中,与对照组相比,Mcc950组中在WT H. pylori26695和△VacA H. pylori26695灌胃后,pro-IL-1β的mRNA水平和IL-1β蛋白水平表达均明显下调(P0.01)。结论H. pylori空泡毒素VacA能够激活胃上皮细胞NLRP3炎性小体,促进IL-1β的成熟分泌。     

右美托咪定通过调控TXNIP/NLRP3炎症小体途径减轻脂多糖诱导的小鼠肠道屏障损伤

目的:探讨右美托咪定(DEX)调控硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体途径减轻脂多糖(LPS)诱导的小鼠肠道屏障损伤的机制。方法:实验小鼠分为对照组、模型组、DEX组、DEX+pcDNA3.1组和DEX+TXNIP组,每组12只。除对照组外,其余各组小鼠腹腔注射15mg/kg LPS,对照组小鼠腹腔注射等体积生理盐水。在LPS诱导肠道屏障损伤前30 min,DEX组小鼠腹腔注射30μg/kg DEX,DEX+pcDNA3.1组和DEX+TXNIP组在DEX组基础上分别皮下注射5 nmol pcDNA3.1空载体及5 nmol pcDNA3.1-TXNIP过表达载体,对照组和模型组小鼠则皮下注射等体积生理盐水。收集小鼠血清及肠道组织样本,采用ELISA检测血清中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,苏木精-伊红(HE)染色观察肠道组织形态,采用相应试剂盒检测肠道组织中氧化应激指标丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)水平,采用RT-qPCR和Western blot分别检测肠道组织中TXNIP、NLRP3、caspase-1和IL-1β的mRNA和蛋白水平。结果:模型组肠道组织完整性被破坏,出现明显的细胞脱落现象,炎症浸润明显,病理评分升高(P0.05);DEX组和DEX+pcDNA3.1组肠道组织完整,但出现明显的炎症浸润现象,与模型组相比病理评分降低(P0.05);DEX+TXNIP组肠道完整性被破坏,出现细胞脱落现象,炎症浸润明显,与DEX+pcDNA3.1组相比病理评分升高(P0.05)。与对照组相比,模型组血清中IL-1β和TNF-α水平升高,肠道组织中MDA含量、ROS水平及TXNIP、NLRP3、caspase-1和IL-1β的mRNA和蛋白水平升高(P0.05),肠道组织中SOD和GSH活性降低(P0.05);与模型组相比,DEX组和DEX+pcDNA3.1组血清中IL-1β和TNF-α水平降低,肠道组织中MDA含量、ROS水平及TXNIP、NLRP3、caspase-1和IL-1β的mRNA和蛋白水平降低(P0.05),肠道组织中SOD和GSH活性升高(P0.05);分别与DEX组和DEX+pcDNA3.1组相比,DEX+TXNIP组血清中IL-1β和TNF-α水平升高,肠道组织中MDA含量、ROS水平及TXNIP、NLRP3、caspase-1和IL-1β的mRNA和蛋白水平升高(P0.05),肠道组织中SOD和GSH活性降低(P0.05)。结论:DEX通过抑制TXNIP/NLRP3炎症小体途径减轻LPS诱导的小鼠肠道屏障损伤。     

IL-27在小鼠结肠炎中的作用及对NLRP3炎性小体的影响

目的:观察白细胞介素27(IL-27)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎小鼠结肠组织学及NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体的影响。方法:将48只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(自由进食饮水)、DSS模型组(饮用3%DSS溶液)、低剂量IL-27组和高剂量IL-27组(在饮用DSS溶液的基础上分别腹腔注射500ng和1μg IL-27)。12 d后行疾病活动指数(DAI)及组织损伤指数(HI)评分评估炎症程度,取结肠组织行免疫组化、Western blot及qPCR检测,取血清行ELISA检测IL-1β和IL-18水平。结果:与对照组相比,模型组的DAI评分和HI评分提示小鼠的结肠炎症明显增强(P0.05),NLRP3和IL-1β的mRNA表达水平增高,NLRP3和cleaved caspase-1的蛋白水平增高,血清中IL-1β和IL-18的含量增加;与模型组相比,高剂量IL-27组的DAI评分和HI评分提示小鼠的结肠炎症明显减轻(P0.05),NLRP3和IL-1β的mRNA表达水平下降,NLRP3和cleaved caspase-1的蛋白水平降低,血清中IL-1β中和IL-18的含量也减少;与模型组比较,低剂量IL-27组除了血清中IL-1β和IL-18含量减少外,上述各项指标的差异无统计学显著性。结论:IL-27可减轻DSS结肠炎模型小鼠的炎症程度并且可抑制NLRP3炎性小体的表达和激活。     

TRIM31 过表达改善脂多糖诱导下神经细胞的炎症损伤

目的:探讨E3泛素连接酶31(TRIM31)对LPS诱导PC12细胞炎症性损伤的保护作用和机制。方法:用不同浓度LPS处理PC12细胞24 h,MTT法检测细胞增殖活性,Western blot检测LPS最佳浓度处理后PC12细胞TRIM蛋白表达水平。将TRIM31过表达质粒(pcDNA3.1-TRIM31)及其阴性对照质粒(pcDNA3.1-NC)转染至PC12细胞,qRT-PCR和Western blot检测细胞TRIM31 mRNA和蛋白表达水平。PC12细胞分为对照组(Control)、LPS组、LPS+NC组和LPS+TRIM31组,分组干预后,ELISA检测细胞上清IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-18含量,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫荧光检测NLRP3蛋白表达,qRT-PCR检测NLRP3、caspase-1 mRNA表达,Western blot检测NLRP3、caspase-1、Cleaved-caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:LPS剂量增加,PC12细胞增殖活性逐渐降低(P0.05),LPS处理可降低PC12细胞TRIM31蛋白表达水平(P0.01),TRIM31过表达,PC12细胞TRIM31 mRNA和蛋白表达水平显著提高(P0.05)。与Control组相比,LPS组细胞上清中IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-18含量、细胞凋亡率及细胞Cleaved-caspase-3和Bax蛋白水平显著提高(P0.05),Bcl-2和TRIM31蛋白水平显著降低(P0.05),NLRP3蛋白荧光强度及NLRP3、caspase-1 mRNA和蛋白表达水平显著提高(P0.05);与LPS组相比,LPS+TRIM31组细胞上清中IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-18含量、细胞凋亡率及细胞Cleaved-caspase-3和Bax蛋白水平显著降低(P0.05),Bcl-2蛋白水平显著提高(P0.05),NLRP3荧光强度及NLRP3、caspase-1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论:过表达TRIM31能通过抑制NLRP3炎症小体活化,改善LPS诱导的PC12细胞炎症损伤。     

熊果酸对肝纤维化大鼠NOX2/ROS/NLRP3炎性小体活化的影响

目的观察熊果酸(UA)对肝纤维化模型大鼠肝内胶原沉积的改善作用及其对NADPH氧化酶2(NOX2)/活性氧簇(ROS)/NLRP3炎性小体活化的影响。方法将大鼠随机分为对照组、CCl4模型组及UA治疗组。用CCl4诱导构建SD大鼠肝纤维化模型,一半用作UA治疗组。用试剂盒检测血清ALT含量;HE染色观察肝脏病理;天狼星红染色观察肝内胶原沉积;RT-q PCR法检测Nox2、Nlrp3、caspase1及IL-1βmRNA表达量;Western blot及免疫组化检测肝脏中NOX2、NLRP3、casepase-1 p45、caspase-1 p10及IL-1β蛋白表达;DCFH-DA荧光探针法检测肝脏组织内ROS水平。结果与对照组相比,CCl4模型组血清ALT水平升高(P0.05),Ishak's肝纤维化评分明显上升,胶原沉积明显增多(P0.05),Nox2、Nlrp3、Caspase1及IL-1βmRNA的表达水平明显上升(P0.05);NOX2、NLRP3、caspase-1 p10及IL-1β蛋白的表达均出现明显增加,肝组织内ROS含量增加(P0.05);与CCl4模型组相比,UA治疗组血清ALT含量下降(P0.05),肝脏Ishak's肝纤维化评分及胶原沉积减少(P0.05),Nox2、Nlrp3、caspase1及IL-1βmRNA的表达水平明显下降(P0.05),NOX2、NLRP3、caspase-1 p10及IL-1β蛋白表达明显下降,肝脏组织内ROS水平显著改善(P0.05)。结论 UA减轻肝脏炎性反应并减少肝内胶原沉积,其机制可能与其抑制肝纤维化大鼠肝内NOX2/ROS/NLRP3炎性小体活化及IL-1β的释放减少有关。     

SO_2衍生物通过NLRP3炎症小体促进气道上皮细胞炎症发生

目的:观察二氧化硫(SO_2)衍生物亚硫酸钠和亚硫酸氢钠对支气管上皮细胞NLRP3炎症小体活化的影响。方法:使用不同浓度的SO_2衍生物作用于支气管上皮细胞16HBE,通过流式细胞术检测细胞内活性氧簇(ROS)的生成,Western blot检测细胞内NLRP3和caspase-1 p20蛋白水平,ELISA检测细胞上清中白细胞介素1β(IL-1β)的分泌水平,结合细胞毒性实验(MTT)确定2 mmol/L为SO_2衍生物的实验浓度。采用RNA干扰技术沉默16HEB细胞NLRP3基因及ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理16HBE细胞,通过流式细胞术检测细胞内ROS, Western blot和ELISA分别检测NLRP3和caspase-1 p20蛋白表达及IL-1β分泌水平。结果:与对照组比较, 2 mmol/L和4 mmol/L SO_2衍生物组细胞内ROS水平、 NLRP3和caspase-1 p20蛋白表达及细胞上清液中IL-1β水平明显升高(P0.05)。与2 mmol/L SO_2衍生物组比较,NLRP3 siRNA组细胞内的NLRP3和caspase-1 p20蛋白水平明显降低(P0.05),且细胞上清液中IL-1β的浓度明显下降(P0.05),ROS无明显变化;NAC组NLRP3和caspase-1 p20蛋白水平及IL-1β浓度均明显下降(P0.05)。结论:SO_2衍生物激活支气管上皮细胞NLRP3炎症小体,促进IL-1β生成。     

大黄素可通过抑制NLRP3炎性小体活化减轻哮喘小鼠的炎症反应

目的探讨大黄素对哮喘小鼠炎症反应及对肺组织中NOD样受体蛋白结构域相关蛋白3(NODlike receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)、凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)和胱冬肽-1(caspase-1)表达的影响。方法 36只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组、哮喘组和大黄素组。以卵蛋白为致敏原制备哮喘小鼠模型。收集肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数和分类计数,ELISA方法检测BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)与白介素-4(IL-4)水平。HE染色观察小鼠肺组织病理学改变。Western-blot检测各组小鼠肺组织中NLRP3、ASC和caspase-1的表达。结果大黄素能减少BALF中炎性细胞总数和嗜酸性粒细胞,降低BALF中TNF-α、IL-1β与IL-4含量,减轻肺组织炎性反应。Western-blot结果显示,哮喘组小鼠肺组织NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达显著高于对照组(P0.01);与哮喘组比较,大黄素组小鼠肺组织NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达显著降低(P0.01)。结论大黄素可通过抑制NLRP3炎性小体活化减轻哮喘小鼠的炎症反应。     

全氟辛烷磺酸通过NLRP3炎症小体诱导幼年期大鼠肺损伤及格列本脲干预的研究

目的:探讨含NLRP3家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)炎症小体参与全氟辛烷磺酸(PFOS)诱导幼年期大鼠肺损伤的可能机制。方法:28只21日龄SD大鼠随机分为对照(C)组、PFOS(P)组、格列本脲(G)组和格列本脲+PFOS(GP)组。将实验动物根据不同分组建立PFOS暴露模型和格列本脲保护模型,留取肺标本进行HE染色,ELISA法检测肺组织中髓过氧化物酶(MPO)含量以及支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18含量,高效液相色谱法(HPLC)检测血清中PFOS浓度,Western blot法检测肺组织中NLRP3、caspase-1和含CARD凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的蛋白水平。结果:肺组织病理切片HE染色结果显示,与C组相比,P组的气管及肺泡间质可见明显炎症浸润;格列本脲可使炎症反应显著减轻。ELISA结果显示,P组肺组织中MPO含量较C组显著升高(P<0.05),P组BALF中的IL-1β和IL-18含量较C组也明显升高(P<0.05);GP组肺组织MPD含量及BALF中IL-1β和IL-18含量均较P组降低(P<0.05)。Western blot结果显示,P组的NLRP3、caspase-1及ASC蛋白表达量较对照组均显著升高(P<0.01);格列本脲可使NLRP3、caspase-1及ASC蛋白表达水平降低(P<0.05)。免疫组化结果提示,P组的NLRP3蛋白表达水平较其余3组均显著升高(P<0.01)。结论:PFOS暴露可能通过激活NLRP3炎症小体,继而引发炎症反应,释放IL-1β等炎症因子导致大鼠肺损伤。格列本脲可以通过特异性抑制NLRP3炎症小体的组装,抑制炎症反应,减轻PFOS诱导的肺损伤。     

丹皮酚对β-1,3-葡聚糖诱导的小鼠巨噬细胞Dectin-1 / NLRP3 信号通路抑制作用研究

目的:研究丹皮酚对β-1,3-葡聚糖诱导的巨噬细胞上Dectin-1/NLRP3信号通路的影响。方法:培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,并分成空白对照组、β-1,3-葡聚糖诱导模型组、昆布多糖组和丹皮酚组,β-1,3-葡聚糖诱导巨噬细胞24 h建立ALD炎症模型。通过MTT法检测细胞活性,通过倒置显微镜观察各组形态学变化,通过Western blot检测小鼠RAW264.7巨噬细胞Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1蛋白的表达,通过RT-qPCR检测小鼠RAW264.7巨噬细胞Dectin-1、NLRP3、caspase-1 mRNA的表达,通过ELISA检测各组培养液中IL-1β、IL-18的分泌水平。结果:MTT结果表明,与空白对照组相比,β-1,3-葡聚糖诱导模型组抑制细胞增殖活性减弱。与β-1,3-葡聚糖诱导模型组相比,丹皮酚干预后细胞增殖活性增强。形态学观察发现,空白对照组细胞体积小,形态圆润。β-1,3-葡聚糖诱导后细胞体积变大,分化严重,形态狭长。丹皮酚干预后细胞分化减轻,细胞形态近似圆形。Western blot、RT-qPCR和ELISA结果表明,与空白对照组相比,β-1,3-葡聚糖能显著升高巨噬细胞中Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1的蛋白表达水平和Dectin-1、NLRP3、caspase-1 mRNA表达水平以及细胞上清液IL-1β、IL-18的分泌水平。而与β-1,3-葡聚糖诱导模型组相比,经丹皮酚干预后可明显降低巨噬细胞中Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1的蛋白表达水平和Dectin-1、NLRP3、caspase-1 mRNA表达水平以及细胞上清液IL-1β、IL-18的分泌水平。结论:本研究结果表明丹皮酚可能通过抑制β-1,3-葡聚糖诱导的Dectin-1/NLRP3信号通路上Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1的过表达从而有效降低终末炎症因子IL-1β及IL-18的释放,进而有效抑制β-1,3-葡聚糖诱导的ALD炎症反应。     

柚皮素减轻重症急性胰腺炎小鼠心肌损伤

目的探讨小鼠重症急性胰腺炎(SAP)相关性心肌损害的发生机制和柚皮素的保护作用。方法将小鼠随机分为:对照组(control组)、模型组(SAP组)和柚皮素干预组(Nar组),每组12只。应用L-精氨酸(8%,4 mg/kg,p H=7. 0,间隔1h腹腔注射2次)制备小鼠SAP模型,Nar(200 mg/kg)溶于0. 5%CMC-Na中制备混悬液,在首次注射L-精氨酸后0、24和48 h腹腔注射。试剂盒检测血浆c Tn I、CK-MB及LDH浓度。实时荧光定量PCR和Western blot检测心脏组织NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1βmRNA及蛋白表达。结果与对照组比较,SAP组小鼠胰腺组织水肿、腺泡细胞坏死、大量炎性反应细胞浸润。心肌细胞肿胀、部分细胞崩解、心肌纤维结构消失,并有较多炎性反应细胞浸润。血浆CK-MB、LDH及c Tn I水平明显升高(P0. 05),心肌NLRP3、caspase-1、ASC及IL-1βmRNA和蛋白表达显著增高(P0. 05)。柚皮素干预可以降低SAP小鼠血浆淀粉酶和脂肪酶水平、减轻胰腺组织损伤和心肌组织损伤,降低血浆CK-MB、LDH及CTn I水平(P0. 01),下调心肌组织NLRP3、caspase-1、ASC及IL-1βmRNA (P0. 01)和蛋白表达(P0. 05)。结论柚皮素可能通过抑制心脏中NLRP3炎性小体激活保护SAP相关的心肌损伤。     

NO抑制体外IFN-γ刺激成肌细胞/肌管NLRP3炎性小体活化

目的观察一氧化氮供体硝普钠(SNP)、一氧化氮合酶抑制剂(L-NAME)对体外炎性培养(IFN-γ刺激)成肌细胞/肌管NLRP3炎症小体活化的影响。方法利用IFN-γ刺激小鼠C2C12成肌细胞/肌管,q PCR和Western blot分析炎性小体(ASC、NLRP3、caspase-1)的形成及活化、ELISA检测细胞培养上清IL-1β的分泌。进一步利用L-NAME和SNP处理IFN-γ诱导的C2C12细胞/肌管,分析炎性小体的形成、活化及IL-1β的分泌。结果 IFN-γ刺激培养后,成肌细胞/肌管中NLRP3、ASC和mature-caspase-1表达水平上调(P0.01)。较之未刺激的细胞,IFN-γ诱导会显著上调成肌细胞/肌管培养基中的IL-1β浓度(P0.01)。SNP处理后6 h,分化肌管(IFN-γ刺激48 h)内炎性小体(ASC、NLRP3、caspase-1)mRNA和蛋白水平较单纯刺激细胞显著下调(P0.01),L-NAME则上调ASC、NLRP3、caspase-1表达水平(P0.05)。与上述结果一致,SNP和L-NAME处理同时分别下调或上调培养基中IL-1β浓度(P0.05)。结论在炎性条件下,成肌细胞/肌管具备合成并活化NLRP3炎性小体的能力。NO对炎性小体的形成及活化有一定的抑制作用。     

黄连解毒汤调控NLRP3 炎症小体改善动脉粥样硬化的机制研究

目的:探讨黄连解毒汤对小鼠动脉粥样硬化(AS)模型NLRP3炎症小体的调控作用。方法:将ApoE~(-/-)小鼠随机分成空白组、模型组、治疗大剂量组(20 g/kg)、中剂量组(10 g/kg)、小剂量组(5 g/kg)和阳性组(20 mg/kg吡格列酮),每组6只。除空白组外,其他各组均构建AS模型,造模后连续给药6周,检测血清TC、TG、LDL-C、HDL-C含量;HE染色观察主动脉形态学变化;油红O染色评估AS斑块的形态和大小;免疫组织化学技术检测主动脉中NLRP3的含量;ELISA检测血清中TNF-α、IL-18和IL-1β的表达;RT-qPCR检测主动脉组织中IL-1β、Caspase-1、NLRP3、TNF-αmRNA的表达。结果:与模型组比较,用药组小鼠体重明显下降(P0.05);黄连解毒汤小剂量组和中剂量组主动脉斑块面积显著减少(P0.05);各剂量组小鼠血清LDL-C、TC、TG和TNF-α、IL-18、IL-1β水平均降低(P0.05);中剂量组HDL-C含量上调(P0.05);黄连解毒汤中、大剂量干预后,小鼠主动脉组织中IL-1β、Caspase-1、NLRP3、TNF-αmRNA表达明显下降(P0.05)。结论:黄连解毒汤可通过调控NLRP3炎症小体的表达,降低小鼠AS模型炎症因子水平,从而发挥抗AS作用。     

虾青素通过抑制活性氧簇/NLRP3炎症小体减轻对比剂引起的大鼠急性肾损伤

目的:研究虾青素(AST)减轻大鼠对比剂急性肾损伤(CI-AKI)的作用并探讨其潜在机制。方法:SD雄性大鼠随机分为5组:空白对照(control)组、虾青素对照(AST)组、模型(CM)组、虾青素治疗(AST+CM)组和N-乙酰半胱氨酸治疗(NAC+CM)组,每组8只。建立大鼠CI-AKI模型72 h后收集血清和肾脏组织,检测大鼠血清肌酐(SCr)水平和血尿素氮(BUN)水平;HE染色观察肾组织病理改变;TUNEL染色检测肾小管上皮细胞凋亡水平;冰冻切片活性氧簇(ROS)染色观察肾组织ROS的生成;免疫组化和Western blot观察核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、含胱天蛋白酶募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的表达。结果:与control组相比,AST组大鼠的SCr和BUN水平、肾小管上皮细胞凋亡水平、ROS生成及NLRP3、ASC、caspsae-1、IL-1β和IL-18表达水平的差异无统计学显著性(P0.05),而CM组大鼠的SCr和BUN水平、肾小管上皮细胞凋亡水平、ROS生成及NLRP3、ASC、caspsae-1、IL-1β和IL-18表达均显著升高(P0.05)。与CM组相比,AST+CM组和NAC+CM组大鼠的SCr和BUN水平、肾小管上皮细胞凋亡水平、ROS生成及NLRP3、ASC、caspsae-1、IL-1β和IL-18表达均显著降低(P0.05)。结论:虾青素通过抑制肾脏组织ROS的产生,抑制NLRP3炎症小体-IL-1β/IL-18的激活,从而减轻CI-AKI。     

慢性间歇性低氧激活NLRP1炎性小体引起小鼠肝损伤

目的 探讨慢性间歇性低氧(CIH)是否能激活含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白1(NLRP1)炎性小体引起肝损伤。方法 将C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、 CIH组。CIH组小鼠放入CIH仓进行造模(每天8 h,连续4周)。造模后,采用HE染色观察肝组织细胞形态、试剂盒检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,二氢乙啶(DHE)标记检测肝组织活性氧(ROS)的水平,免疫组织化学染色法检测小鼠肝组织NLRP1、含胱天蛋白酶激活和募集结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和胱天蛋白酶1(caspase-1)的表达和定位,Western blot法检测小鼠肝组织中NLRP1、 ASC、 caspase-1、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的蛋白表达,ELISA检测小鼠血清IL-1β、 TNF-α水平。结果与对照组相比,CIH组肝细胞病变明显,细胞出现破裂、坏死、炎症细胞聚集,ALT、 AST、 ROS、 IL-1β和TNF-α水平显著升高;NLRP1、 ASC、caspase-1、IL-1β和TNF-α的蛋白表达升高。结...     

X线辐照激活NLRP3炎性体引起损伤肺组织细胞焦亡(pyroptosis)北大核心CSCD

目的建立放射性肺损伤模型,研究胱天蛋白酶1(caspase-1)依赖的程序性细胞死亡即细胞焦亡(pyroptosis)在放射性肺炎发病机制中的作用。方法 BALB/c小鼠胸腔15 Gy X线辐照5 d,处死小鼠。HE染色观察肺组织形态变化,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测辐照后肺组织细胞凋亡情况,Western blot法检测肺组织γ组蛋白2AX(γ-H2AX)、抗原KI-67(ki67)、含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)、caspase-1和含CARD结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC/TMS-1)的表达情况,实时荧光定量PCR检测肺组织白细胞介素6(IL-6)、IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)、caspase-1、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18的m RNA水平,采用免疫组织化学染色检测肺组织NLRP3、caspase-1和TMS1的表达情况,使用caspase-1活性检测试剂盒检测caspase-1活性;ELISA检测血清IL-1β和IL-18水平。结果辐照后小鼠肺泡壁毛细血管扩张充血,炎性细胞浸润,肺泡壁增厚;肺组织细胞TUNEL染色阳性指数升高,γ-H2AX和ki67的表达增强,提示细胞DNA遭到破坏且细胞增殖活性降低;肺组织细胞中IL-6、IL-8、TNF-α和MCP-1 m RNA水平增加;血清IL-1β和IL-18水平增加,肺组织NLRP3、caspase-1、ASC/TMS-1表达水平增加,caspase-1活性增强。结论辐照后,激活小鼠肺组织NLRP3炎性体诱导肺组织的细胞发生pyroptosis。     

金丝桃苷抑制肺炎支原体肺炎模型小鼠的损伤

目的:探讨金丝桃苷对肺炎支原体肺炎(MPP)小鼠的保护作用及其调控机制。方法:选取BALB/c小鼠40只,随机分为对照组、模型组、金丝桃苷低剂量(12.5 mg/kg)组和金丝桃苷高剂量(50 mg/kg)组。以肺炎支原体国际标准株(MPFH)滴鼻造模,第2天开始治疗,治疗3 d后进行后续实验。HE染色检测肺组织病理改变;全自动生化分析仪检测血清中C-反应蛋白(CRP)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)和心肌型肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,检测肺组织中活性氧簇(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)水平;ELISA和Western blot方法分别检测血清和肺组织中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-18和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;RT-q PCR和Western blot方法检测NLRP3、ASC和caspase-1的mRNA和蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠的肺组织中出现炎症反应、肺泡间质增宽等病理变化;CRP、ALT、AST、LDH和CK-MB水平显著上调(P0.05);ROS水平显著上升,而SOD和GSH水平显著下降(P0.05);IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α水平显著上调(P0.05);NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达也显著升高(P0.05)。与模型组相比,金丝桃苷组中的上述症状明显减轻,且高剂量比低剂量组的缓解效果更明显。结论:金丝桃苷能够抑制MPP小鼠的损伤,这可能与其抑制氧化应激和NLRP3炎性体的激活有关。     

小白菊内酯通过抑制NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路减轻哮喘幼年大鼠气道炎症

目的 探讨小白菊内酯（PTL）减轻哮喘幼年大鼠气道炎症的作用机制是否与Nod样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)/白介素（IL）-1β信号通路有关。方法 SD幼年大鼠随机分为对照组、卵清蛋白（OVA）组、PTL（低、中、高）剂量组（1、2、4 mg/kg PTL）和PTL+NLRP3激动剂组（4 mg/kg PTL和100 mg/kg尼日利亚菌素钠盐）。OVA致敏与激发构建哮喘模型。测定幼年大鼠气道反应性，分类计数支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎性细胞，检测血清、BALF中IL-1β、IL-18水平，观察肺组织病理学改变，检测肺组织中NLRP3、caspase-1、IL-1βmRNA或蛋白表达。结果 与对照组比较，OVA组幼年大鼠气道阻力，BALF中白细胞总数、巨噬细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞数量，血清、BALF中IL-1β、IL-18水平，肺组织炎症评分及肺组织中NLRP3、caspase-1、IL-1β mRNA和蛋白表达升高（P<0.05）;PTL（低、中、高）剂量组可呈剂量依赖性缓解上述改变；而NLRP3激动剂可减弱PT...     

亚麻木酚素通过抑制TXNIP和激活NLRP3炎症小体减轻慢性间歇性低氧小鼠肾脏炎症损伤

目的:探讨亚麻木酚素/开环异落叶松脂素二葡萄糖苷(SDG)对慢性间歇性低氧(CIH)小鼠肾脏炎症损伤的改善作用及潜在机制。方法:将SPF及雄性C57BL/6N小鼠分为正常组、CIH组和SDG治疗组。记录小鼠体重变化;HE染色观察肾脏组织形态;生化检测血清肌酐和血尿素氮的含量;羟胺法和硫代巴比妥酸比色法测定肾脏组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量;免疫组织化学检测硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)的蛋白表达情况;ELISA法测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-1β等促炎因子的含量;Western blot检测TXNIP、NLRP3炎症小体相关蛋白[NLRP3、含CARD的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和caspase-1]、IL-1β和IL-18的蛋白表达情况。结果:3组小鼠的体重和肾脏指数无显著差异(P0.05)。HE染色显示,CIH组肾小球形态不规则,肾小管上皮细胞肿胀,胞浆模糊,出现轻微的水泡变性,经SDG治疗后有所改善。与正常组相比,CIH组小鼠血清肌酐及炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的含量显著升高(P0.05),免疫组织化学染色显示,CIH组肾小管上皮细胞胞浆内NLRP3和TXNIP的表达显著升高(P0.05),SDG治疗后均显著下降(P0.05)。与正常组相比,CIH组肾脏组织的SOD活性降低,MDA含量增多(P0.05),TXNIP、NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β和IL-18的蛋白水平上调,且经过SDG治疗后均显著下降(P0.05)。结论:亚麻木酚素可减轻CIH小鼠的肾脏炎症损伤,其机制可能与抑制氧化应激和NLRP3炎症小体的激活有关。     

空肠弯曲菌血红素氧化酶ChuZ促进巨噬细胞NLRP3炎性小体激活

目的探究空肠弯曲菌血红素氧化酶ChuZ对巨噬细胞炎性小体激活的影响。方法分离野生型C57BL/6小鼠骨髓细胞,诱导分化为骨髓来源的巨噬细胞(bone marrow-derived macrophage,BMM),分别用WT C.jejuni、△ChuZ C.jejuni以及对照刺激BMM 6 h,q RT-PCR和ELISA检测各组IL-1β的表达,q RT-PCR和Western blot检测各组NLRP3、ASC、caspase-1的表达。分离野生型C57BL/6和NLRP3-/-小鼠骨髓细胞,诱导分化为WT BMM、NLRP3-/-BMM,分别用WT C.jejuni和△ChuZ C.jejuni刺激BMM 6 h,ELISA检测各组IL-1β的表达。分离野生型C57BL/6小鼠骨髓细胞,诱导分化为BMM,分别用WT C.jejuni、△ChuZ C.jejuni刺激BMM、BMM+MCC950(NLRP3炎性小体抑制剂)6 h,ELISA检测各组IL-1β的表达。结果与对照组相比,WT C.jejuni、△ChuZ C.jejuni均能显著促进BMM IL-1β、NLRP3、procaspase-1、caspase-1的表达(P0.01);△ChuZ C.jejuni组与WT C.jejuni组相比,IL-1β、NLRP3、procaspase-1、caspase-1的表达显著降低(P0.01)。与WT BMM组相比,WT C.jejuni、△ChuZ C.jejuni分别刺激NLRP3-/-BMM后,IL-1β表达均显著降低(P0.01)。同时,与control组相比,WT C.jejuni、△ChuZ C.jejuni刺激+MCC950组后,IL-1β表达均也显著降低(P0.01)。结论空肠弯曲菌血红素氧化酶ChuZ与巨噬细胞中NLRP3/ASC/caspase-1炎性小体的激活程度相关,并促进巨噬细胞中IL-1β的表达,参与了空肠弯曲菌对宿主的炎性作用。