虫草素增强顺铂诱导的食管癌细胞系Eca109凋亡

目的研究虫草素与顺铂联合用药对食管癌细胞Eca109凋亡的影响及其作用机制。方法将食管癌细胞Eca109分为对照组、不同浓度虫草素处理组、不同浓度顺铂处理组和虫草素(70μg/m L)与顺铂(0.8μg/m L)联合处理组。MTS法检测Eca109细胞增殖;Hoechst 33258染色法及流式细胞术检测Eca109细胞凋亡;Western blot法检测细胞核内NF-κB P65及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平;ELISA法检测细胞核内NF-κB P65与DNA的结合活性。结果虫草素与顺铂联合应用使顺铂对Eca109细胞的抑制率由29.30%增加至70.41%(P0.05),增强了顺铂对Eca109的敏感性;与顺铂单独用药相比,联合用药能够显著增加顺铂诱导的细胞凋亡(P0.05);与对照组相比顺铂能够增加细胞核内NF-κB P65的活性,而虫草素却能抑制NF-κB P65的活性,联合用药后NF-κB P65的活性下调;与虫草素和顺铂单独用药相比,联合用药组能够使抗凋亡蛋白Bcl-2的表达显著降低(P0.05),而促凋亡蛋白Bax表达则显著增高(P0.05)。结论虫草素可能通过抑制NF-κB途径,调节下游信号分子Bcl-2和Bax的表达,增强顺铂对Eca109的凋亡诱导效应。     

蒙花苷通过调控IKK/NF-κB信号通路抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭

目的:探究蒙花苷(LIN)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨可能的分子机制。方法:用不同浓度(5、 10、 20、 40、 80和160μmol/L)的LIN处理MCF-7、MDA-MB-231和MCF-10A细胞24 h后,CCK-8法和集落形成实验检测细胞的增殖能力,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blot检测Snail、E-cadherin、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκB激酶α/β(p-IKKα/β)和磷酸化p65(p-p65)的蛋白水平。结果:LIN可剂量依赖性地抑制MDA-MB-231细胞活力(P0.05),IC_(50)为55.89μmol/L;20μmol/L LIN作用24 h后,MDA-MB-231细胞集落形成率显著降低(P0.05);与对照组相比,5μmol/L和10μmol/L LIN作用24 h后,MDA-MB-231细胞迁移率和侵袭率显著降低(P0.05),Snail和MMP-9的蛋白水平下调(P0.05),E-cadherin的蛋白水平上调(P0.05),IKKα/β和p65蛋白的磷酸化水平降低,IκBα的蛋白水平上调(P0.05);同时,IKK-16(IKKα/β抑制剂)和PDTC(NF-κB抑制剂)也可下调MDA-MB-231细胞中Snail和MMP-9的蛋白水平(P0.05),并上调E-cadherin的蛋白水平(P0.05)。结论:LIN可能通过抑制IKK/NF-κB信号通路活化而下调Snail和MMP-9蛋白水平并上调E-cadherin蛋白水平,最终导致MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力降低。     

核因子κB p65反义寡核苷酸对大鼠肝星状细胞增殖和I型胶原表达的影响

目的 探讨核因子κB(NF-κB)p65反义寡核苷酸(ASOND)对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖和I型胶原表达的影响.方法 Ⅳ型胶原酶消化密度梯度离心法分离培养大鼠HSC;脂质体介导的不同浓度的NF-κB p65 ASOND(0.001、0.01、0.1和1μmol/L)进入HSC;台盼蓝染色排斥法检测NF-κBp65 ASOND对HSC的毒性实验并检测各组乳酸脱氢酶(LDH)活性;MTT法测定NF-κB p65 ASOND对1mg/LTNF-α刺激后HSC增殖影响;RT-PCR法和ELISA法检测不同浓度NF-κB p65 ASOND对1mg/LTNF-α刺激后HSC I型胶原表达的影响.结果 转染NF-κB p65 ASODN后,HSC细胞NF-κB蛋白的表达下降,不同浓度(0.001、0.01、0.1和1 μmol/L)的NF-κB p65 ASOND对于体外培养HSC的存活率和LDH无明显影响(P>0.05),0.01～μmol/L的NF-κB p65 ASOND抑制HSC的增殖,lmg/L TNF-α刺激HSC的I型胶原蛋白和mRNA的表达,且随浓度的增加作用增强(P<0.05).结论 NF-κB p65 ASOND可通过抑制NF-κB活性减少HSC活化增殖及Ⅰ型胶原生成,从而减少细胞外基质的产生.     

白桦脂醇对Aβ25-35诱导的小胶质细胞炎症反应的保护作用

目的探讨白桦脂醇对Aβ_(25-35)诱导的小胶质细胞炎症反应的保护作用。方法 MTT法预实验证实10μmol/L Aβ_(25-35)的浓度对细胞活力无影响,但是影响炎症因子分泌,遂以10μmol/L Aβ_(25-35)作用于BV2细胞,实验随机分为对照组、模型组、白桦脂醇5、10和20μmol/L组,采用MTT法检测细胞的存活率、Western blotting检测NF-κB信号通路蛋白(NF-κB P65、IκBα、p-NF-κB P65、p-IκBα)表达水平及炎症诱导酶环氧合酶2(COX-2)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的水平,以及炎症因子白细胞介素1β(IL-1β),肿瘤坏死因子α(TNF-α)及IL-10水平。结果 Aβ_(25-35)浓度为10μmol/L时,对BV2细胞存活率无影响。白桦脂醇浓度在0～20μmol/L时低毒性、细胞活力无变化。白桦脂醇预处理组IκBα、NF-κB P65的蛋白表达水平升高,p-NF-κB P65和p-IκBα的蛋白表达水平显著降低,COX-2、iNOS的水平显著降低,促炎因子IL-1β、TNF-α的表达降低,而抑炎因子IL-10的表达升高。结论白桦脂醇对Aβ_(25-35)诱导的BV2细胞的炎症反应有抑制作用,通过NF-κB信号通路,抑制iNOS及COX-2蛋白表达,并抑制TNF-α和IL-1β水平,提高IL-10水平。     

ADAM33基因在过氧化氢诱导的支气管上皮细胞凋亡及氧化损伤中的作用研究

目的:探讨ADAM33基因对过氧化氢诱导的支气管上皮细胞活力、凋亡率、免疫因子表达及氧化损伤的影响及机制。方法:25、50、100、200、400μmol/L的H2O2处理人支气管上皮16HBE细胞2 h,CCK8法检测各浓度H_2O_2对16HBE细胞活力的影响。16HBE细胞分为对照组、NC组和H_2O_2+si-ADAM33组,CCK8检测各组细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率及ROS水平; Western blot检测ADAM33、VEGF、COX-2、NF-κB p65和IKKα的蛋白表达。结果:25μmol/L和50μmol/L的H_2O_2不影响16HBE细胞活力(P0. 05),而100～400μmol/L的H_2O_2可明显抑制16HBE细胞活力,与对照组比较差异具有统计学意义(P0. 05)。与NC组比较,H_2O_2组细胞活力显著降低,细胞凋亡率、ROS水平及VEGF、COX-2、NF-κB p65和IKKα的蛋白表达均显著升高(P0. 05),与H_2O_2组比较,H_2O_2+si-ADAM33组细胞活力显著升高,细胞凋亡率、ROS水平及VEGF、COX-2、NF-κB p65和IKKα的蛋白表达均显著降低(P0. 05)。结论:ADAM33基因表达抑制可降低由H_2O_2诱导的支气管上皮细胞凋亡、氧化损伤及免疫抑制,机制可能与下调NF-κB信号有关。     

ATP敏感性钾通道的开放通过抑制TLR4/NF-κB通路对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症

目的:探讨开放ATP敏感性钾通道(K_(ATP)通道)能否抑制Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路对抗高糖(HG)引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症。方法:应用Western blot测定TLR4和NF-κB p65的蛋白水平;应用ELISA法检测细胞培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定心肌细胞存活率;罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位(MMP);双氯荧光素染色荧光显微镜照相法测定细胞内活性氧簇(ROS)水平;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法检测凋亡细胞数量。结果:H9c2心肌细胞经HG(35 mmol/L葡萄糖)处理24 h,胞内TLR4和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)的蛋白水平明显增加,100μmol/L K_(ATP)通道开放剂二氮嗪(DZ)预处理30 min可抑制HG对TLR4和p-NF-κB p65蛋白水平的上调作用;此外,30μmol/L TAK-242(TLR4抑制剂)和HG共处理心肌细胞24 h也可减轻HG对p-NF-κB p65的上调作用。另一方面,100μmol/L DZ预处理有明确的心肌保护作用,可抑制HG引起的细胞毒性、炎症反应、线粒体损伤、氧化应激和细胞凋亡,使细胞存活率升高,并减少IL-1β和TNF-α分泌水平、MMP丢失、ROS生成及凋亡细胞数量;而30μmol/L TAK-242或100μmol/L PDTC(NF-κB抑制剂)共处理心肌细胞24 h也可发挥和DZ相类似的作用,能抑制HG引起的上述损伤和炎症反应。结论:开放K_(ATP)通道可通过抑制TLR4/NF-κB通路对抗HG引起的H9c2肌细胞损伤和炎症。     

过表达APMAP减轻阿霉素肾病肾小球足细胞损伤

目的 探讨脂肪细胞膜相关蛋白质(APMAP)过表达对阿霉素(ADR)肾病肾小球足细胞损伤的影响。方法 采用尾静脉注射ADR构建阿霉素肾病大鼠模型，免疫组化观察肾组织中APMAP、NF-κB p65蛋白表达情况。构建APMAP基因过表达的鼠源肾小球足细胞MPC-5细胞株，并以0.5μmol/L ADR体外诱导构建足细胞损伤模型，再联合NF-κB信号通路激活剂CU-T12-9进行处理。CCK-8检测细胞增殖活性；ELISA检测乳酸脱氢酶(LDH)活性；流式细胞术检测细胞凋亡率；Western blot检测NF-κB p65、p-NF-κB p65、TNF-α等蛋白表达。结果 APMAP在阿霉素肾病大鼠肾组织中低表达，而NF-κB p65高表达(P<0.05)。APMAP过表达可提高ADR暴露下MPC-5细胞增殖活性，降低LDH活性及细胞凋亡率，下调NF-κB p65、p-NF-κB p65、TNF-α等蛋白表达(P<0.05);联合CU-T12-9处理可显著抑制APMAP过表达对ADR暴露下MPC-5细胞损伤的改善作用。结论 过表达APMAP可抑制ADR诱导的肾小球足细胞损伤，...     

党参多糖调控miR-361-5p/TLR4/NF-κB通路对胃癌细胞AGS增殖、凋亡和炎症因子表达的影响

目的 探讨党参多糖对胃癌细胞AGS增殖、凋亡和炎症因子表达的影响和机制。方法 采用CCK-8实验、流式细胞术评估党参多糖（10、20、40μmol/L）对胃癌细胞AGS活力和凋亡的影响。RT-qPCR检测miR-361-5p表达;ELISA法检测肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6、IL-1β分泌。蛋白质免疫印记法检测TLR4和磷酸化核因子（NF）-κBp65(p-p65)和磷酸化NF-κB抑制蛋白-α(p-IκBα)蛋白的表达。将miR-361-5p模拟物、miR-361-5p抑制物分别转染AGS细胞,经40μmol/L党参多糖处理后,用上述方法检测AGS细胞活力、凋亡率、Toll样受体4(TLR4)、p-p65和p-IκBα蛋白表达以及TNF-α、IL-6、IL-1β分泌。结果 10、20、40μmol/L党参多糖显著降低AGS细胞活力（P<0.05）,增加细胞凋亡率（P<0.05）,抑制TNF-α、IL-6、IL-1β分泌（P<0.05）,并上调miR-361-5p表达水平（P<0.05）。40μmol/L党参多糖明显降低TLR4、p-p65...     

食管癌ECA109细胞中Survivin shRNA干扰对核因子κB表达的影响及调控机制

目的探讨Survivin作为基因表达调控因子,对核因子κB(NF-κB)基因的转录及蛋白水平活性的影响及与NF-κB的调控关系。方法采用Survivin短发夹RNA(shRNA)干扰技术,脂质体转染食管癌ECA109细胞,检测Survivin沉默效果,选择最佳转染浓度;半定量RT-PCR检测Survivin shRNA干扰后食管癌ECA109细胞中NF-κB及其通路的上游调控因子核因子κB抑制蛋白α(IKKα)、IKKβ表达变化;Western blotting方法检测NF-κB蛋白的表达变化;流式细胞术检测干扰之后食管癌ECA109细胞增殖、凋亡指数的变化。结果 Survivin shRNA干扰食管癌ECA109细胞后,Survivin mRNA和蛋白表达明显下调;NF-κB mRNA表达变化无明显差异,但其蛋白磷酸化水平降低,NF-κB上游因子IKKα、IKKβmRNA表达下调;食管癌ECA109细胞凋亡明显增加,G2期细胞比例增加,S期细胞减少,细胞周期受阻。结论 Survivin通过在转录水平影响IKKα、IKKβmRNA表达,调控NF-κB蛋白活化水平,提示Survivin在肿瘤信号调控网络中可作为一个新的基因表达调控因子。     

Sonic hedgehog信号通路与食管癌放射抗拒的相关性研究

目的:研究Sonic hedgehog(Shh)信号通路在食管癌放射抗拒中的作用及机制。方法:以人食管癌细胞Eca109为亲本株,通过X射线反复照射(累计照射剂量60 Gy)诱导形成放射抗拒细胞株Eca109R。分别采用集落形成实验检测细胞放射敏感性,CCK-8实验检测细胞活力的变化,来证实放射抗拒细胞株Eca109R的放射抗拒性。免疫荧光及Western blot检测Eca109R和亲本细胞Eca109内Gli1蛋白与Shh蛋白的表达。结果:集落形成实验显示2 Gy的X线照射后,Eca109和Eca109R细胞的存活分数(SF_2)分别为0.499±0.042和0.937±0.013;同时,CCK-8实验显示,Eca109R细胞的活力抑制率明显低于Eca109细胞(P0.05),证实Eca109R细胞有明显的放射抗拒性,诱导形成放射抗拒株成功。免疫荧光结果显示Eca109R细胞中Gli1表达明显高于Eca109细胞(P0.05)。Western blot实验结果显示Eca109R细胞中的Gli1与Shh蛋白表达明显高于Eca109细胞(P0.05)。结论:食管癌放射抗拒性的产生可能与Shh信号通路相关蛋白的过表达有关。     

TLR4-TRPC6在LPS致16HBE细胞内NF-κB P65表达和核转位的作用

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)和瞬时受体电位通道蛋白6(TRPC6)信号通路在细菌脂多糖(LPS)诱导气道上皮细胞16HBE内NF-κB P65表达和核转位的作用,为气道炎症的发生机制提供实验依据。方法:用LPS(1mg/L)作用16HBE细胞0、0.5、2、6、12和24 h后,分别使用RT-PCR和Western blot法检测核因子κB (nuclear factor-κB,NF-κB) P65的mRNA和蛋白表达情况,并用免疫细胞化学染色法检测NF-κB P65的核转位。用RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学染色法检测TLR4抑制剂CLI-095(5μmol/L)对LPS(1mg/L)诱导16HBE细胞NF-κB P65表达以及核转位的影响。用RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学染色法检测TRPC6激动剂Hyp9(10μmol/L)对LPS(1mg/L)诱导16HBE细胞内NF-κB P65表达以及核转位的影响。结果:LPS上调16HBE细胞NF-κB P65的mRNA和蛋白表达及核转位。TLR4抑制剂CLI-095抑制LPS诱导的16HBE细胞内NF-κB P65的mRNA和蛋白表达及核转位。TRPC6激动剂Hyp9加重LPS诱导的16HBE细胞内NF-κB P65的mRNA和蛋白表达及核转位。结论:LPS通过TLR4-TRPC6信号通路诱导16HBE细胞内NF-κB P65表达和核转位。     

β-胡萝卜素对脂多糖刺激巨噬细胞RAW264.7炎症因子的影响及其机制

目的:探讨β-胡萝卜素对脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞RAW264.7炎症因子的影响及其机制。方法:采用5μg/ml的LPS刺激巨噬细胞24 h后用不同浓度的β-胡萝卜素(20、40、80、160μmol/L)处理细胞3 h,MTT法测细胞活性,荧光定量PCR测炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA相对表达量,ELISA测炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌量,Western blot测NF-κB p65蛋白相对表达量。5μg/ml的LPS和不同浓度的NF-κB抑制剂PDTC(1、5、10μg/ml)共同处理巨噬细胞24 h,Western blot测NF-κB p65蛋白相对表达量,荧光定量PCR、ELISA测炎症因子的表达和分泌。比较LPS+PDTC组和LPS+PDTC+β-胡萝卜素组炎症因子和NF-κB p65蛋白相对表达的变化。结果:与LPS组相比,不同浓度的β-胡萝卜素对LPS刺激的巨噬细胞的细胞活性有提升作用,对炎症因子和NF-κB p65蛋白的表达有抑制作用;抑制NF-κB蛋白的表达可以抑制LPS刺激的巨噬细胞炎症因子的分泌;LPS+PDTC+β-胡萝卜素组对炎症因子的抑制作用比LPS+PDTC组明显,且差异显著(P0.05),但两组对NF-κB p65蛋白的表达不明显。结论:β-胡萝卜素可以通过抑制NF-κB通路中NF-κB p65蛋白的表达抑制LPS刺激的巨噬细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌,且此通路不是唯一相关的通路。     

土荆皮乙酸对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应及M1表型偏移的抑制作用

目的初步探讨土荆皮乙酸(PLAB)对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞抗炎作用及影响M1表型偏移的分子机制。方法 LPS诱导RAW264.7细胞建立体外炎症模型,给予0.5μmol/L PLAB和1μmol/L过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)阻滞剂GW9662处理。流式细胞术检测细胞周期变化,实时定量PCR检测PPARγ和M1型巨噬细胞标志物白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达,Western blot法检测核因子κB(NF-κB)信号通路相关信号分子水平。结果 PLAB能够明显降低LPS诱导RAW264.7细胞的IL-1β、TNF-α的mRNA水平,上调PPARγ的mRNA水平。下调NF-κB p65、p NF-κB p65、IKKα、IKKβ、p IKKα/β、IκBα、p IκBα的蛋白水平,使RAW264.7细胞阻滞在G0和G2期。GW9662可以抵抗PLAB的抗炎作用。结论 PLAB抑制LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应并抑制巨噬细胞向M1表型偏移,与影响细胞周期分布、调控NF-κB/PPARγ通路有关。     

蛋白酶体抑制剂依沙佐米对胰腺癌细胞凋亡及NF-κB通路的影响

目的:探讨蛋白酶抑制剂依沙佐米对胰腺癌细胞凋亡和NF-κB通路的影响。方法:培养人胰腺癌细胞系CFPAC-1和PANC-1,加入浓度为0、10、20、30和40 nmol/L的依沙佐米培养12、18、24和48 h,RT-qPCR检测细胞中NF-κB p65、IκB激酶(IκB kinase, IKK)、Bax和caspase-3的mRNA表达,Western blot检测细胞中凋亡相关因子NF-κB p65、IKK、Bax和caspase3的蛋白水平,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:CCK-8实验的检测结果显示,添加10～40 nmol/L依沙佐米均对PANC-1细胞和CFPAC-1细胞的活力具有抑制作用(P0.05),呈时间和剂量依赖性;细胞凋亡检测结果显示随着依沙佐米浓度的增加,PANC-1细胞和CFPAC-1细胞的凋亡率均显著增加(P0.05);与添加0 nmol/L抑制剂的对照细胞比较添加依沙佐米后PANC-1细胞和CFPAC-1细胞NF-κB p65和IKK的mRNA表达水平显著降低(P0.05);凋亡因子Bax和caspase-3的表达水平均显著升高(P0.05)。添加依沙佐米后PANC-1细胞和CFPAC-1细胞的NF-κB p65和IKK的蛋白水平均显著降低(P0.05),与mRNA检测结果一致;CFPAC-1细胞的凋亡因子Bax和caspase-3蛋白表达水平均显著升高(P0.05),PANC-1细胞的caspase-3蛋白表达水平显著升高,Bax蛋白在依沙佐米为10 nmol/L浓度时变化的差异无统计学显著性。结论:蛋白酶体抑制剂依沙佐米可能通过抑制NF-κB通路的激活抑制胰腺癌细胞的活力,促进细胞凋亡,且作用效果呈时间和剂量依赖性。     

青藤碱抑制肿瘤坏死因子α刺激引起的人脐静脉内皮细胞核因子κB p65的核移位

目的 研究青藤碱(SIN)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激引起的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)核因子(NF)κB p65的核移位的影响.方法 从新鲜脐带中分离并培养HUVEC,用TNF-α诱导NF-κB p65核移位及血管细胞黏附分子1(VCAM-1)表达.实验组加入不同浓度的SIN(0.25、05和1.0 mol/L)或地塞米松(Dex,1.0×10-6 mol/L)进行干预,收获细胞.提取细胞总核蛋白,用ELISA法检测核提取物中NF-κB p65水平;用实时定量PCR检测VCAM-1 mRNA 的表达.结果 所提取的核蛋白浓度在0.16 g/L至0.77 g/L之间.与TNF-α刺激组相比,SIN干预组(0.25 mol/L、050 mol/L 和1.0 mol/L)和Dex (1.0×10-6 mol/L)干预组核提取物中NF-κB p65水平下降,各干预组VCAM-1 mRNA相对表达量有不同程度下降(P<0.05).结论 不同浓度的SIN(0.25、0.5、1.0 mol/L)和Dex (1.0×10-6 mol/L)能抑制TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞的NF-κB p65核转移.     

大叶茜草素抑制大鼠CFSC-2G细胞活化和胶原合成

目的:观察大叶茜草素(mollugin)对大鼠肝星状细胞系CFSC-2G活化和胶原合成的影响并探讨其分子机制。方法:小剂量(10μmol/L)过氧化氢(H_2O_2)诱导CFSC-2G细胞30 min后,再加入不同浓度(0、20、40、60和120μmol/L)的mollugin处理。MTT法检测细胞活力,real-time PCR和Western blot法分别检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、核因子κB(NF-κB)p65、Bcl-2、Bcl-x L、Bax以及肝星状细胞活化标志物α-平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的mRNA和蛋白表达,并用Western blot法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的磷酸化水平。结果:低剂量H_2O_2可以诱导CFSC-2G细胞活化,mollugin明显促进p38 MAPK磷酸化,上调Nrf2和HO-1的mRNA和蛋白表达,下调NF-κB p65、Bcl-2和Bcl-x L的mRNA和蛋白表达,抑制H_2O_2诱导活化的CFSC-2G细胞活力和胶原合成(P0.05)。结论:Mollugin可能通过上调Nrf2和HO-1并下调NF-κB p65和Bcl-2表达,抑制CFSC-2G细胞活化和胶原合成。     

丙戊酸钠通过激活核因子κB(NF-κB)通路引起大鼠HAPI小胶质细胞炎症反应

目的研究丙戊酸钠(VPA)诱发HAPI小胶质细胞炎症反应的可能机制。方法体外培养大鼠HAPI小胶质细胞,分别给予(0、 0.25、 0.5、 1、 2.5、 5)mmol/L VPA处理24 h。显微镜观察各组细胞生长及形态变化,CCK-8法检测细胞存活率,ELISA检测各组细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。以2.5 mmol/L VPA作为最适浓度,Western blot法检测核因子κB抑制物(IκB)激酶α/β(IKKα/β)、磷酸化的IκB激酶(pIKKα/β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的蛋白表达,激光共聚焦显微镜技术观察NF-κB p65蛋白核转位情况。结果随着VPA浓度增高,HAPI细胞逐渐伸出丝状伪足,并最终激活形成阿米巴样形态,且HAPI细胞的存活率不断降低;当VPA的浓度增高至1 mmol/L后,小胶质HAPI细胞分泌的TNF-α明显高于正常对照组。2.5 mmol/L VPA处理的HAPI细胞NF-κB通路相关蛋白IKKα/β、 pIKKα/β、 TNF-α、 IL-1β表达明显增高,同时伴随HAPI细胞中NF-κB p65蛋白表达由胞质中高表达转为主要在细胞核内表达。结论高浓度VPA通过激活HAPI小胶质细胞NF-κB通路,引起炎症反应。     

羌活水提取物对肥大细胞活化的影响

目的:探讨羌活水提取物(EN)对肥大细胞活化的影响及其机制。方法:体外获取大鼠腹腔肥大细胞(RPMC),观察EN不同剂量对anti-DNP IgE诱导肥大细胞活化的影响,酶联法检测anti-DNP IgE介导的肥大细胞组胺释放,酶联免疫吸附测定法检测肥大细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)释放,免疫印迹检测丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)、核转录因子κB(NF-κB)p65蛋白的表达。结果:体外anti-DNP IgE明显促进RPMC组胺,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素6(IL-6)的释放,诱导Akt磷酸化和NF-κB p65活化,羌活水提取物高(200μg/L)、中(100μg/L)浓度明显抑制肥大细胞组胺,TNF-α和IL-6的释放,并抑制Akt磷酸化和NF-κB p65活化。结论:羌活水提取物通过调节Akt,NF-κB p65信号通路抑制肥大细胞介导的过敏性炎症。     

抑制HMGB1表达促进血管瘤内皮细胞凋亡的机制研究

目的:探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对血管瘤内皮细胞(HemECs)活力和凋亡的影响及机制。方法:分离培养人HemECs,将设计并合成的HMGB1小干扰RNA(HMGB1-siRNA)转染HemECs。CCK-8法检测各组细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)含量;Western blot检测HMGB1、NF-κB p65、p-IκBα、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和survivin的蛋白表达。结果:与空白对照组比较,转染HMGB1-siRNA的HemECs中HMGB1的蛋白表达显著降低(P0.05)。与NC组比较,转染HMGB1-siRNA的HemECs活力显著降低,凋亡率显著升高,ROS含量显著升高,NF-κB p65、p-IκBα、cyclin D1和survivin的蛋白表达均显著降低(P0.05);且与si-HMGB1组比较,HemECs中加入NF-κB信号通路抑制剂PDTC后,细胞活力抑制、凋亡率和ROS诱导及NF-κB p65、p-IκBα、cyclin D1和survivin的蛋白表达下调更明显(P0.05)。结论:抑制HMGB1表达可降低人HemECs活力和诱导凋亡,机制可能是通过提高ROS含量及下调NF-κB信号通路。     

沉默NF-κB/p65对TNF-α诱导的肺泡Ⅱ型上皮NOX1基因表达的影响

目的构建急性肺损伤肺泡Ⅱ型上皮A549细胞炎症模型,通过沉默NF-κB基因,观察NOX1基因表达水平及氧化应激指标变化,探讨NOX1基因与NF-κB/p65的相关性。方法运用RNA干扰技术沉默NF-κB/p65基因,以TNF-α(10 ng/ml)刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549),采用RT-PCR及Western blot检测NOX1基因表达水平,DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧水平,比色法检测细胞的总抗氧化能力、总谷胱甘肽、总超氧化物歧化酶活力和丙二醛的浓度。结果采用TNF-α刺激肺泡Ⅱ型上皮A549细胞可以分别在基因和蛋白水平上调NOX1基因表达;同时,增加细胞丙二醛和活性氧浓度,降低总抗氧化能力、总谷胱甘肽及超氧化物歧化酶浓度,氧化应激程度放大(P0.05)。预转染NF-κB/p65 siRNA,可下调NOX1基因的表达,减少细胞丙二醛、活性氧生成,提高总抗氧化能力、总谷胱甘肽及超氧化物歧化酶浓度,氧化应激程度降低(P0.05)。结论沉默NF-κB/p65基因,可有效下调TNF-α诱导A549细胞氧化应激程度及NOX1基因表达水平,提示NF-κB/p65可能参与调控TNF-α诱导的NOX1基因表达。