四君子颗粒对大鼠糖尿病前期的改善作用

目的探讨四君子颗粒对大鼠糖尿病前期的改善作用。方法采用高糖高脂饮食建立糖尿病前期大鼠模型,随机分为正常组、模型组、四君子颗粒高、低剂量组(10.50、5.25 g/kg),连续灌胃10周。分别于第2、4、6、8、10周末检测FBG、FINS、GHb水平并计算Homa-IR,第10周末采用TUNEL染色法检测胰岛细胞凋亡水平,Western blot法检测胰腺组织p-PERK、GRP78、ATF4、CHOP蛋白表达。结果糖尿病前期大鼠FBG、GHb、FINS水平及Homa-IR均升高(P<0.01),胰岛中凋亡细胞增多,胰腺组织p-PERK、GRP78、ATF4、CHOP蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。给予四君子颗粒后,血清FBG、GHb、FINS水平和Homa-IR降低(P<0.05,P<0.01),胰岛细胞凋亡减少,同时,胰腺组织p-PERK、GRP78、ATF4、CHOP蛋白表达下降(P<0.05,P<0.01)。结论四君子颗粒可明显改善大鼠糖尿病前期状态,其机制可能与减轻糖尿病前期大鼠胰岛素抵抗、抑制内质网应激诱导的胰岛细胞凋亡有关。     

鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致肝细胞损伤的保护作用研究

该研究旨在探讨鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致的肝细胞损伤的保护作用及机制。衣霉素诱导L02细胞建立内质网应激损伤模型;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致L02细胞损伤的存活率;Western blot法检测内质网应激信号通路蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核生物翻译起始因子2α(eIF2α)、转录因子激活蛋白4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、B细胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)、Bcl-2结合抗凋亡基因(Bax)的表达水平,同时检测加入内质网应激抑制剂(4-苯基丁酸)和shRNA沉默CHOP因子后上述表达情况;免疫荧光法检测L02细胞中GRP78、PERK、CHOP的表达水平。结果显示,鬼针草乙酸乙酯提取物显著提高内质网应激所致L02细胞损伤的存活率(P0.05或P0.01),并在一定范围内呈时间剂量依赖性。给药组的GRP78、PERK、eIF2α、ATF4、CHOP、Bax表达水平显著降低(P0.05或P0.01),Bcl-2表达水平显著升高(P0.01);加入内质网应激抑制剂和shRNA沉默CHOP因子后,GRP78、PERK、eIF2α、ATF4、CHOP、Bax表达水平显著降低(P0.01),Bcl-2表达水平显著升高(P0.01)。免疫荧光结果显示GRP78、PERK、CHOP表达情况与Western blot法检测结果一致。综上,鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致的L02细胞损伤具有显著保护作用,其机制可能与抑制内质网应激,下调PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路所介导的细胞凋亡有关。     

丹参酮ⅡA减轻棕榈酸诱导的心肌细胞凋亡及内质网应激

【目的】 探讨丹参酮ⅡA对棕榈酸诱导心肌细胞脂毒性损伤模型内质网应激凋亡的影响。【方法】 将对数期H9c2细胞分6组,即对照组,棕榈酸（400 μmol/L）组,丹参酮 ⅡA 20 μmol/L组和棕榈酸+丹参酮 ⅡA（5、10、20 μmol/L）组,另外引入棕榈酸+CCT020312组与棕榈酸+CCT020312+丹参酮ⅡA 20 μmol/L组考察通路激活状态。细胞计数试剂盒8（CCK-8）法测定H9c2细胞活力;流式细胞术测定细胞凋亡情况;实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测细胞内质网应激相关分子葡萄糖调控蛋白78（GRP78）、转录激活因子4（ATF4）和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测细胞 GRP78、ATF4、CHOP、Caspase-3、Caspase-9、Caspase-12、蛋白激酶 RNA 样内质网激酶（PERK）、磷酸化PERK（p-PERK）、真核生物翻译起始因子2α（eIF2α）、磷酸化eIF2α（p-eIF2α）的蛋白表达水平。【结果】与对照组比较,棕榈酸组细胞存活率显著降低（P < 0.01）,GRP78、ATF4、CHOP mRNA 和蛋白表达水平均显著升高（P <0.01）,H9c2 细胞的凋亡率升高,p-PERK/PERK 和 p-eIF2α/eIF2α 比例也显著增大（P < 0.01）,凋亡相关分子 Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12蛋白表达水平均显著升高（P < 0.01）。不同浓度丹参酮 ⅡA作用后,与棕榈酸组比较,棕榈酸+丹参酮 ⅡA（5、10、20 μmol/L）组细胞存活率显著升高（P < 0.01）,GRP78、ATF4、CHOP mRNA 和蛋白表达水平均显著降低（P < 0.01）,H9c2细胞的凋亡率降低,p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例也显著减小（P < 0.01）,Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12蛋白表达水平显著降低（P < 0.01）,均具有剂量依赖性,且棕榈酸+丹参酮 ⅡA 10 μmol/L组（P < 0.05）和棕榈酸+丹参酮 ⅡA 20 μmol/L 组（P < 0.05）变化显著。加入 PERK 通路激活剂 CCT020312 作用后,与棕榈酸组比较,棕榈酸+CCT020312组的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例,细胞凋亡率,GRP78、ATF4、CHOP 的mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P < 0.05）;再经过丹参酮ⅡA处理,与棕榈酸+CCT020312组比较,棕榈酸+CCT020312+丹参酮ⅡA组的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例,细胞凋亡率,GRP78、ATF4、CHOP 的mRNA和蛋白表达水平均显著回降（P < 0.05）。【结论】 丹参酮ⅡA可减轻心肌细胞脂毒性损伤,其机制与其通过抑制PERK信号通路活化来减轻棕榈酸诱导的心肌H9c2细胞凋亡,并且控制内质网应激反应有关。     

大黄素诱导人肾上皮HK-2细胞凋亡及内质网应激的介导作用

目的 研究大黄素诱导人肾小管上皮HK-2细胞凋亡的作用及其机制是否与内质网应激有关.方法 不同浓度大黄素处理HK-2细胞不同时间.MTT法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR (RT-PCR)检测葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、转录激活因子3(ATF3)和X盒结合蛋白1(XBP1)的基因表达,Western blotting 法检测caspase-3、GRP78、CHOP、真核生物启动因子2α (eIF2α)的蛋白表达.结果 大黄素以浓度相关方式降低HK-2细胞存活率,诱导caspase-3剪切.RT-PCR检测表明,大黄素能诱导内质网相关基因GRP78、CHOP、ATF3基因表达,Westernblottinh检测结果进一步证实大黄素能诱导GRP78、CHOP的蛋白表达.大黄素还明显诱导eIF2α磷酸化和XBP1 mRNA剪切.在大黄素给药之前给予内质网应激干扰药4-苯基丁酸和salubrinal,能增加HK-2细胞的存活率.结论 大黄素能诱导HK-2凋亡,内质网应激参与了大黄素诱导HK-2细胞凋亡的作用.     

蚯蚓活性组分对四氯化碳诱导小鼠内质网应激所致急性肝损伤的保护作用

该研究旨在探讨蚯蚓活性组分(EWAs)对四氯化碳(CCl_4)诱导小鼠内质网应激(ERS)所致急性肝损伤的保护作用。腹腔注射10%CCl_4制备内质网应激所致急性肝损伤模型;血清生化指标检测ALT,AST,SOD,GSH-PX酶活性及MDA含量变化;计算肝、脾指数;HE染色观察肝脏病理学变化;TUNEL法检测肝组织细胞凋亡情况;免疫组织化学法检测ERS标志性蛋白GRP78和CHOP表达情况;Western blot法检测ERS相关蛋白的表达水平。结果显示,与模型组小鼠相比,EWAs的高、中、低剂量组血清学各项指标均有显著改善(P0.05或P0.01),肝脏病变范围减小,且损伤程度明显减轻,小鼠肝脏指数和脾脏指数均有明显变化(P0.05或P0.01);各剂量给药组的肝组织细胞凋亡指数明显下降(P0.05或P0.01);肝组织中ERS相关蛋白GRP78和CHOP表达水平显著降低(P0.05或P0.01),各剂量给药组均能显著下调GRP78和CHOP以及CHOP上游信号通路PERK-eIF2α-ATF4的蛋白表达(P0.05或P0.01)。综上,EWAs对ERS所致的小鼠急性肝损伤具有显著保护作用,其机制可能通过抑制氧化应激和ERS,从而减轻肝脏损伤,并可下调ERS标志性凋亡蛋白CHOP表达,抑制细胞凋亡实现的。     

龙蛭汤对衣霉素诱导人脐静脉内皮细胞内GRP78和CHOP的影响

目的探讨龙蛭汤对衣霉素(TM)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内质网应激及其标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和特异性蛋白C增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达的影响。方法制备龙蛭汤含药血清,体外培养HUVEC细胞株,分为对照组(10%空白血清),TM组(10%空白血清+3μg/mL TM),TM+龙蛭汤组(10%含药血清+3μg/mL TM),龙蛭汤组(10%含药血清),继续培养6 h。使用CCK-8法比较各组细胞活力,细胞免疫荧光法和Western Blot比较各组GRP78和CHOP蛋白表达,RT-PCR法比较各组GRP78和CHOP mRNA表达。结果与对照组比较,TM组HUVEC细胞活力下降,GRP78、CHOP蛋白及mRNA表达增加(均P0.05);与TM组比较,TM+龙蛭汤组、龙蛭汤组HUVEC细胞活力升高,GRP78、CHOP蛋白及mRNA表达降低(均P0.05)。结论龙蛭汤可通过下调GRP78、CHOP表达,减轻细胞过度的内质网应激反应,提高HUVEC细胞活力。     

温阳通脉方经内质网应激相关通路对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用

目的:观察温阳通脉方含药血清是否在内质网应激相关通路对心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用,并探究体外培养时最佳给药剂量。方法:以20%含药血清处理,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测得CoCl_2烫最佳浓度和各组细胞存活率;比色法检测各组半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)酶活性和上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;Hoechst 33342荧光染色观察各组细胞凋亡形态变化;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Western Blot法检测各组内质网应激相关蛋白GRP78、Caspase12、CHOP表达以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达情况。结果:与空白对照组血清相比,模型组细胞活性明显降低,Caspase3酶活性和LDH活性明显升高,细胞凋亡数量明显增多,凋亡率明显升高, GRP78、Caspase12、CHOP和Bax表达明显增多,Bcl-2表达明显减少;与模型组相比,3.24、6.48、12.96g/kg组含药血清能够不同程度改善细胞活性,Caspase3酶活性和LDH活性明显减少,凋亡率不同程度降低,GRP78、Caspase12、CHOP和Bax表达明显减少,Bcl-2表达不同程度增多。结论:温阳通脉方能减轻缺氧/复氧后H9C2心肌细胞损伤,其机制可能与温阳通脉方抵抗内质网应激介导的细胞凋亡有关,其抗凋亡程度呈剂量依赖性,以温阳通脉方12.96g/kg组效果最佳。     

基于miR-584调控内质网应激途径安胃汤干预胃黏膜肠上皮化生作用机制研究

目的 探讨安胃汤基于miR-584调控内质网应激途径干预胃黏膜肠上皮化生细胞的作用机制。方法 运用鹅去氧胆酸诱导人胃黏膜GES-1细胞系构建胃黏膜肠上皮化生细胞模型;实验动物分为正常组、模型组、阴性对照组、安胃汤组,在此研究基础上设置miR 584 inhibitor组、miR 584 inhibitor NC组、miR 584 mimics组、miR 584 mimics NC组,分别进行瞬时转染后给予安胃汤含药血清干预。采用激光扫描共聚焦显微镜观察ER-Tracker Red变化,蛋白免疫印迹法检测内质网应激相关蛋白Caspase 12、GRP78、ATF6、PERK、CHOP表达情况和肠上皮化生相关蛋白CDX2、MUC2、KLF4、SOX2的表达。结果 安胃汤作用于胃黏膜肠上皮化生细胞,下调CDX2、MUC2、KLF4蛋白表达(P<0.01),上调SOX2表达(P<0.01),显著增强内质网相对荧光强度(P<0.01),显著上调肠上皮化生细胞中内质网应激相关蛋白Caspase 12、GRP78、ATF6、PERK、CHOP的表达(P<0.01);转染后给药...     

蚯蚓活性组分对内质网应激所致肝细胞凋亡的保护作用研究

该研究旨在探讨蚯蚓活性组分(EWAs)对衣霉素(tunicamycin,TM)诱导内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)所致肝细胞凋亡的保护作用。体外培养L-02细胞,采用CCK-8法检测细胞存活率,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,分别采用Western和q PCR法检测相关蛋白和mRNA的表达情况。研究发现,TM能够以时间和剂量依赖的方式降低L-02细胞的存活率,与正常组相比,模型组中L-02细胞的凋亡率和ERS相关因子GRP78,PERK,e LF2α,ATF4,CHOP,Bax的mRNA和蛋白水平均显著升高(P0.05,P0.01),Bcl-2的mRNA和蛋白水平均显著下降(P0.05,P0.01)。与模型组相比,不同浓度的EWAs处理后,L-02细胞的存活率显著增加,细胞凋亡显著减少,ERS相关因子GRP78,PERK,e LF2α,ATF4,CHOP,Bax的mRNA和蛋白表达水平显著下降(P0.05,P0.01),Bcl-2的mRNA和蛋白水平明显升高(P0.05,P0.01),且呈剂量依赖性。这些结果表明,EWAs对TM诱导L-02细胞ERS所致的肝细胞凋亡具有显著的保护作用,其机制可能与下调ERS相关因子GRP78,PERK,ATF4,e LF2α,CHOP,Bax的表达,减轻L-02细胞的ERS,上调Bcl-2的表达,促进受损细胞增殖有关。     

基于内质网应激探讨淫羊藿苷对TM4细胞损伤的保护作用

目的:基于内质网应激(ERS)探讨淫羊藿苷对D-半乳糖(D-Gal)诱导的小鼠睾丸支持细胞株TM4细胞损伤的保护作用。方法:将TM4细胞分为正常对照组、模型组及淫羊藿苷低(0.5μmol/L)、高(1.0μmol/L)浓度组。Western blot法检测TM4细胞紧密连接相关蛋白Occludin、Claudin-1及内质网应激相关蛋白GRP78、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、p-IRE1、XBP1、ATF6表达水平。结果:Western blot结果显示,与正常对照组比较,模型组细胞紧密连接相关蛋白Occludin、Claudin-1及内质网应激相关蛋白GRP78、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、p-IRE1、XBP1、ATF6表达显著降低(P0.01),给予淫羊藿苷干预后上述蛋白表达均显著升高(P0.05或P0.01)。结论:淫羊藿苷可减轻D-Gal诱导的TM4细胞损伤,其机制可能与上调内质网应激信号通路有关。     

楮实子提取物对衣霉素诱导的细胞ERS的改善作用及其分子机制

目的:探讨楮实子提取物对衣霉素诱导的细胞内质网应激(ERS)模型的影响及其分子机制。方法:楮实子含药血清干预衣霉素处理的PC12细胞制备内质网应激模型,造模后分为ERS模型组和楮实子高、中、低剂量组。运用CCK8法检测各组内质网应激模型PC12细胞存活率;流式细胞仪检测细胞的凋亡率及细胞周期;利用免疫印迹法检测GRP78及Caspase-12蛋白表达。结果:楮实子含药血清可提高经衣霉素处理后的PC12细胞存活率(P0.05),楮实子使衣霉素(Tu)诱导的内质网应激细胞的细胞周期中的G2期明显增加(6.9%19%),ERS模型组细胞凋亡率为8.36%,而楮实子高剂量组细胞凋亡率为4.51%,楮实子可下调凋亡相关蛋白GRP78、Caspase-12的表达,降低内质网应激反应。结论:楮实子可有效缓解衣霉素诱导的细胞毒性,增加细胞周期阻滞,其作用机制可能是通过细胞周期阻滞,在G2期对损伤的细胞进行修复,缓解内质网应激的进一步进展,进而抑制细胞凋亡。     

内质网应激凋亡途径对H9C2细胞缝隙连接蛋白43表达的影响及稳心颗粒的干预研究

目的：研究内质网应激凋亡途径对大鼠心肌H9C2细胞缝隙连接蛋白43（Cx43）表达的影响及稳心颗粒的干预作用。方法：体外培养H9C2细胞,分为对照组、模型组、salubrinal（Sal）组、稳心颗粒组;采用毒胡萝卜素（TG）诱导内质网应激凋亡模型,以经典凋亡抑制剂Sal抑制凋亡,采用CCK-8比色分析法筛选药物浓度及时间,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting法检测葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、C/EBP-同源蛋白（CHOP）、天冬氨酸胱氨酸特异性蛋白酶-12（Caspase-12）、Cx43的表达。结果：CCK-8结果提示,TG、Sal和稳心颗粒的最佳浓度分别为0.1、20 μmol·L-1和10 g·L-1,作用时间均为24 h。流式细胞仪检测结果显示,与对照组比较,其余3组的细胞凋亡率显著增加;与模型组比较,Sal组及稳心颗粒组的细胞凋亡率都明显下降。Western blotting结果中,与对照组比较,模型组细胞GRP78、CHOP及Caspase-12蛋白表达水平显著增高,而Cx43蛋白表达水平显著降低;与模型组比较,Sal组和稳心颗粒组细胞CHOP、Caspase-12蛋白表达水平显著降低,Cx43蛋白表达水平显著升高,Sal组细胞GRP78蛋白表达差异无统计学意义,稳心颗粒组GRP78蛋白表达水平显著升高。结论：TG诱导的内质网应激凋亡途径会影响Cx43的表达,稳心颗粒可以通过抑制内质网应激凋亡途径调节H9C2细胞Cx43的表达水平。     

基于内质网应激研究五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞凋亡的保护作用

基于内质网应激(ERS)研究五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞凋亡的保护作用。将16月龄SPF级SD雄性大鼠随机分为3组,自然衰老组(Ageing),五子衍宗方低剂量组(WZ,1 g·kg^-1)和五子衍宗方高剂量组(WZ,4 g·kg^-1),另购买2月龄SD雄性大鼠作为青年对照组(Adult),每组10只。给予普通饲料或含药饲料喂养4个月后,处死大鼠,取出睾丸组织备用。苏木素-伊红(HE)染色观察睾丸组织形态;Western blot法检测睾丸组织中内质网应激相关蛋白GRP78,p-PERK,p-eif2α,ATF4,p-IRE1,XBP1,ATF6及其介导的凋亡相关蛋白CHOP,caspase 12,p-JNK的表达水平。HE结果显示,五子衍宗方能明显改善自然衰老所致的睾丸组织形态变化。Western blot结果显示,与自然衰老组相比,五子衍宗方能显著升高自然衰老大鼠睾丸组织内质网应激相关蛋白GRP78,p-PERK,p-eif2α,ATF4,p-IRE1,XBP1,ATF6的表达水平;显著降低内质网应激介导的凋亡相关蛋白CHOP,caspase 12,p-JNK的表达水平。综上所述,五子衍宗方可通过调节内质网应激减轻自然衰老大鼠睾丸生殖细胞凋亡。     

内质网应激介导肿瘤细胞凋亡的研究进展

目的内质网应激是指内质网在某些生理或病理状态下内稳态失衡,致使内质网膜上的伴侣蛋白GRP78与内质网膜上3种跨膜信号蛋白(IRE1、PERK和ATF6)各自解离活化。活化后的感受器蛋白可以激活未折叠蛋白反应(UPR)起到保护作用,但长时间的内质网应激将导致凋亡蛋白CHOP,JNK和Caspase-12/4活化,促进细胞凋亡。文章就内质网应激促进肿瘤细胞凋亡的过程作一综述。     

参芪益心方抑制阿霉素诱导大鼠H9c2细胞凋亡的机制研究

目的?基于心肌细胞内质网应激观察参芪益心方对大鼠H9c2心肌细胞内Ca2+及半胱氨酸天冬氨酸酶（Caspase）-3、Caspase-12、葡萄糖调节蛋白-78（GRP78）、增强型蛋白同源蛋白（CHOP）、肌质网钙离子ATP酶（SERCa2a）蛋白和mRNA表达的影响。方法?SD大鼠制备参芪益心方含药血清。体外培养H9c2心肌细胞，用阿霉素诱导凋亡建立模型，将细胞分为模型组（8%空白血清）、高剂量组（8%含药血清）、中剂量组（4%含药血清+4%空白血清）、低剂量组（2%含药血清+6%空白血清）和卡托普利（1×10-5 mol/L）组，另设空白组（8%空白血清）。Real-time PCR及Western Blot分别检测Caspase-3、Caspase-12、GRP78、CHOP、SERCa2a mRNA及蛋白的表达，Fluo-3AM流式细胞仪检测H9c2细胞内Ca2+荧光强度。结果?与空白组比较，模型组Caspase-3、Caspase-12、GRP78、CHOP的蛋白、mRNA表达及Ca2+荧光强度增加，SERCa2a 蛋白及mRNA表达下降（均P<0.01）。与模型组比较，各干预组Caspase-3、Caspase-12、GRP78、CHOP蛋白及mRNA表达降低，Ca2+荧光强度降低，SERCa2a蛋白及mRNA表达增加（P<0.01）。与卡托普利组比较，中药高剂量组SERCa2a蛋白及mRNA表达升高，Ca2+荧光强度升高（P<0.01）。结论?参芪益心方可通过降低Ca2+浓度，下调Caspase-3、Caspase-12、GRP78、CHOP的表达，上调SERCa2a的表达，减轻内质网的过度应激，抑制心肌细胞凋亡。     

姜黄素调控STAT3诱导人肝癌BEL-7404细胞凋亡的内质网应激作用机制

目的探讨姜黄素通过抑制STAT3诱导人肝癌BEL-7404细胞凋亡的内质网应激作用机制。方法采用MTT法检测姜黄素对人肝癌BEL-7404细胞增殖的影响。流式细胞术检测细胞凋亡、CRISPR/Cas9技术敲除STAT3基因、Western blot技术检测STAT3、p-STAT3、内质网应激及凋亡相关蛋白的表达水平。结果姜黄素能够抑制人肝癌BEL-7404细胞的增殖,诱导细胞凋亡,上调GRP78、p-elF2α、p-JNK、CHOP、caspase4的表达,下调p-STAT3的表达。敲除STAT3后,细胞凋亡率上升,GRP78、CHOP表达同时上调。结论姜黄素可以通过抑制STAT3诱导人肝癌BEL-7404细胞发生凋亡,其作用机制与内质网应激相关。     

化瘀祛痰方含药血清通过ATF6/CHOP内质网应激途径抑制ox-LDL诱导的小鼠RAW 264.7巨噬细胞凋亡

目的:巨噬细胞凋亡在动脉粥样硬化的发生发展中起重要作用,尤其对动脉粥样硬化晚期斑块的稳定性起重要作用。因此,抑制晚期巨噬细胞的凋亡对AS晚期斑块的稳定性具有重要意义。研究从体外的角度探讨化瘀祛痰方含药血清对ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡的影响,并从ATF6/CHOP内质网应激途径探讨其抗凋亡的机制。方法:实验选取小鼠RAW 264.7巨噬细胞为研究对象,分为空白对照组,ox-LDL处理组、化瘀祛痰方低、中、高处理组,通过Hoechst 33342法检测RAW 264.7巨噬细胞凋亡情况;通过免疫荧光法检测ATF6激活情况;通过免疫印迹法检测ERS通路以及下游凋亡相关蛋白CHOP、bcl-2表达情况。结果:化瘀祛痰方可有效抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡,抑制ATF6的激活,下调CHOP蛋白表达,上调bcl-2蛋白表达,并且呈剂量依赖方式。结论:化瘀祛痰方可有效抑制ox-LDL诱导的RAW 264.7巨噬细胞凋亡,其机制可能与抑制ATF6/CHOP ERS通路激活有关。     

针刺血清调控内质网应激反应对无镁诱导培养大鼠海马神经元惊厥性损伤的保护作用

目的:观察针刺血清对无镁诱导惊厥样放电海马神经元凋亡数及内质网应激伴侣葡萄糖调节蛋白78(GRP 78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)和半胱氨酸蛋白酶蛋白-12(Caspase-12)表达的影响,探讨针刺血清对海马神经元惊厥性损伤的保护机制。方法:SD大鼠腹腔注射戊四唑诱发急性惊厥后分为针刺组及对照组。针刺组取"百会""大椎"针刺,每日1次,共7d。末次针刺后,针刺组大鼠取血清作为针刺血清,对照组取血清作为非针刺血清。以无镁诱导惊厥样放电的原代培养胎鼠海马神经元为模型,根据对培养10d海马神经元的不同处理分为正常细胞外液组(简称正常组)、无镁细胞外液组(简称无镁组)、针刺血清组和非针刺血清组。正常组将无血清培养液换成细胞外液培养3h后换液培养,其他各组用无镁细胞外液培养3h后换液培养。4组分别于换液培养2、12、48h3个时间点采用TUNEL法和Western blot法分别检测海马神经元凋亡情况及GRP 78、CHOP和Caspase-12蛋白表达情况。结果:正常组仅见少量凋亡海马神经元;无镁组3个时间点凋亡海马神经元数均较正常组明显增加(P0.01);针刺血清组3个时间点凋亡海马神经元数与无镁组比较明显减少(P0.05,P0.01),与非针刺血清组12、48h比较凋亡海马神经元数明显减少(P0.01)。与正常组比较,无镁组3个时间点海马神经元CHOP和Caspase-12蛋白表达均明显增强(P0.05,P0.01),2h时间点海马神经元GRP 78蛋白表达明显增强(P0.05);与无镁组比较,针刺血清组3个时间点神经元GRP 78蛋白表达均明显增强(P0.01,P0.05),12、48h时间点海马神经元CHOP蛋白表达明显减少(P0.05,P0.01),3个时间点神经元Caspase-12蛋白表达均显著减少(P0.05,P0.01);与非针刺血清组相比,针刺血清组2、12h时间点海马神经元GRP 78蛋白表达均明显增强(P0.01,P0.05),12、48h时间点海马神经元CHOP蛋白表达明显减少(P0.05),3个时间点海马神经元Caspase-12蛋白表达均明显减少(P0.01,P0.05)。结论:针刺血清能明显减少海马神经元凋亡数,上调GRP 78蛋白表达,下调CHOP和Caspase-12蛋白表达,发挥维持内质网稳定性的重要作用。