甲氟喹对胶质瘤细胞的放射增敏作用

目的:研究甲氟喹对胶质瘤细胞的放射增敏作用,并对其机制进行初步探索。方法:取指数生长期的胶质瘤U251细胞,采用CCK-8检测法研究甲氟喹作用后U251细胞的存活率;细胞克隆形成实验评估甲氟喹对U251细胞的放射增敏效果;流式细胞技术检测甲氟喹联合X射线作用后U251细胞的活性氧水平和细胞凋亡率,探索联合作用下U251细胞的死亡机制。结果:甲氟喹对胶质瘤细胞具有良好的放射增敏效果,其对U251细胞的最大放射增敏比为1.64。X射线联合甲氟喹作用于U251细胞后,细胞的凋亡水平增加,活性氧水平增加,活性氧抑制剂谷胱甘肽能抑制X射线联合甲氟喹作用诱导的U251细胞凋亡。结论:甲氟喹对U251细胞有放射增敏作用,其作用机制可能为通过增加细胞活性氧水平、诱导细胞凋亡导致放射敏感性增加。     

咖啡因对体外培养U251人胶质瘤细胞的影响

目的观察咖啡因对体外培养U251神经胶质瘤细胞存活及凋亡的影响。方法采用MTT和Annexin V/PI流式细胞法观察不同浓度和作用时间的咖啡因对U251神经胶质瘤细胞的影响。结果 (1)咖啡因在体外可以抑制U251人胶质瘤细胞的存活;(2)咖啡因在体外使U251细胞早期凋亡发生的时间较晚,且在1~10 mmol/L浓度范围内,出现浓度依赖性瘤细胞早期凋亡增加,大于10 mmol/L时,瘤细胞迅速出现大量坏死。结论实验初步证明了咖啡因在体外可以抑制U251人胶质瘤细胞的增殖活性并在一定浓度范围内(1~10 mmol/L)可促使其凋亡,为进一步的动物实验及新药开发提供实验依据。     

榄香烯诱导晶状体上皮细胞凋亡及其细胞和分子机制

目的：探讨天然药物单体榄香烯 (Ele) 诱导晶状体上皮细胞 (LEC) 凋亡及其细胞和分子机制。 方法: 通过透射电子显微镜观察Ele对体外培养的牛LEC超微结构的影响；采用流式细胞术观察Ele对LEC的DNA含量及线粒体跨膜电位（ΔΨm）的影响。 结果: 透射电镜下可观察到Ele组LEC呈现核染色质凝集、固缩、边集、核碎裂等典型的细胞凋亡形态学改变。Ele组LEC细胞核的DNA含量显著低于空白对照组，随药物作用时间延长而更低（P<0.01）；Ele组细胞质线粒体ΔΨm低于空白对照组，且在药物作用早期即已明显低于空白对照组（P<0.01）。 结论: ① Ele能显著诱导晶状体上皮细胞凋亡。② Ele通过使LEC细胞核DNA含量下降，诱导细胞凋亡。③ Ele使细胞质内线粒体ΔΨm下降，使细胞进入不可逆性凋亡的过程。线粒体ΔΨm下降是Ele 诱导LEC凋亡的早期事件。④ Ele诱导LEC凋亡是通过细胞核和细胞质两种途径。⑤ Ele诱导LEC凋亡的作用可能是其减轻晶状体后囊混浊发生和发展、防治后发性白内障的细胞和分子生物学机制。     

榄香烯诱导晶状体上皮细胞凋亡及其机制

目的 :探讨天然药物单体榄香烯 (Elemene,Ele)诱导晶状体上皮细胞 (lensepithelialcell,LEC)凋亡及其机制。方法 :通过透射电子显微镜观察Ele对LEC超微结构的影响 ;采用流式细胞术 (flowcytometry ,FCM)研究Ele对LEC的DNA含量及线粒体跨膜电位 (mitochondrialtransmembranepotential,ΔΨm)的影响。结果 :透射电镜下可观察到Ele组LEC呈现核染色质凝集、固缩、边集、核碎裂等典型的细胞凋亡形态学改变。Ele组LEC细胞核的DNA含量随药物作用时间的延长而下降 ,与空白对照组有显著差异 (P <0 0 1) ;细胞质线粒体ΔΨm在药物作用早…     

免疫凋亡素e23sFv-Fdt-RC6对HER2阳性胶质瘤细胞U251的杀伤作用

目的:探讨靶向活性caspase-6融合蛋白对HER2阳性胶质瘤细胞系U251的促凋亡作用.方法:利用白喉毒素furin酶识别序列(Fdt)连接抗HER2单链抗体基因e23sFv和重构型caspase-6(RC6)基因,连接入pCMV载体,构建重组基因的真核表达载体pCMV-e23sFv-Fdt-RC6.脂质体转染HER2阳性胶质瘤U251细胞系,Western blot检测目的蛋白的表达.流式细胞术(FCM)检测转染后U251细胞的凋亡率,MTT法检测目的基因转染后对U251细胞增殖的影响.结果:双酶切及基因测序证实,pCMV-e23sFv-Fdt-RC6载体被成功构建.Western blot检测到转染表达载体48 h后的U251细胞中有活性caspase-6的表达.FCM检测到实验组细胞凋亡率比对照组显著增高.MTT实验观察到转染载体pCMV-e23sFv-Fdt-Rc6的U251细胞的增殖被明显抑制.结论:e23sFv-Fdt-RC6融合蛋白对HER2阳性胶质瘤细胞系U251有明显的促凋亡作用.     

榄香烯对人癌细胞增殖的抑制作用

应用MTT法检测42例癌症患者肿瘤细胞对抗癌药榄香烯的敏感性,并与其他7种化疗药物加以比较。结果表明在一定剂量范围内榄香烯对正常细胞无明显影响但有20例（占47.6％）肿瘤细胞对榄香烯敏感;不同肿瘤对该药的敏感性差异较大,同一类型肿瘤的不同个体敏感性也不相同。     

表皮生长因子受体沉默联合尼美舒利对胶质瘤细胞U251作用及机制

目的:研究尼美舒利(NIM)与表皮生长因子(EGF)受体沉默联合应用对胶质瘤U251细胞作用及机制.方法:不同浓度的尼美舒利(0、25、50、100、200、400μmol/L)与靶向EGF受体的小分子RNA(siRNA-EGFR)联合应用培养U251胶质瘤细胞,ELISA试剂盒检测培养上清中血管内皮生长因子(VEGF)水平,MTT法检测细胞的增殖并计算抑制率,免疫印迹检测细胞增殖、凋亡和血管形成调控相关蛋白,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡.结果:siRNA-EGFR浓度小于2μg/ml联合NIM(25～400 μmol/L)处理U251细胞,其生长抑制率与NIM的浓度依赖性增高,流式检测阻滞U251细胞于G2/M期及诱导细胞凋亡,蛋白分析表明,当沉默U251细胞EGF受体时,Bax蛋白表达随尼美舒利浓度增加表达上调,而bcl-2、细胞增殖核抗原(PCNA)和促血管生成素-2(ANG-2)蛋白表达明显下调,促血管生成素-1(ANG1)表达变化不明显;siRNA-EGFR与25 μumol/L的尼美舒利处理U251胶质瘤细胞12 h后,流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰,并且随尼美舒利处理时间的延长,凋亡峰增加,随处理尼美舒利剂量的增加而呈现增加趋势,各组间差异具有统计学意义.结论:当siRNA-EGFR浓度为2μg/ml以下和作用时间在48 h之前,EGF受体沉默联合尼美舒利能发挥协同作用,其机制可能与Bax蛋白表达上调和bcl-2、PCNA、VEGF、ANG-2蛋白表达明显下调有关.     

Notch1对神经胶质瘤U251细胞干性及化疗药物敏感性的调节

目的:探讨Notch1对人胶质瘤U251细胞干性和药物敏感性的影响。方法:用高表达Notch1胞内段(Notch1 intracellular domain,NICD1)和Notch1-shRNA慢病毒表达载体感染体外培养的人胶质瘤U251细胞,Western blot和免疫荧光染色法鉴定高表达NICD和Notch1沉默细胞。通过流式细胞术检测分析CD133+细胞的比例、免疫荧光染色法检测nestin和GFAP的表达情况、检测肿瘤细胞球的形成率和SCID小鼠体内种植致瘤情况,分析Notch1对细胞干性的调节。并采用MTT法检测各组细胞对化疗药物替尼泊苷(VM-26)和卡莫司汀(BCNU)的敏感性。结果:NICD表达增加的瘤细胞干性表型增强,如CD133+细胞的比例增加、nestin表达增强而GFAP表达减弱、肿瘤细胞球的形成率和SCID小鼠种植致瘤率增加,并伴有对VM-26和BCNU的敏感性降低。而Notch1基因表达下调的瘤细胞干性表型受到明显抑制,而对VM-26和BCNU的敏感性增高。结论:Notch1高表达可增加人胶质瘤U251细胞的干性,减弱U251细胞对化疗药物的敏感性。     

2-甲氧雌二醇对人肺癌细胞的放射增敏作用

目的:探讨2-甲氧雌二醇(2-ME)对肺癌细胞A549和GLC-82的放射增敏作用及其对细胞周期的影响,并从分子角度初步探讨2-ME可能的增敏机制。方法:将体外培养的人肺癌细胞A549和GLC-82分为实验组和对照组,其中实验组加入不同浓度的2-ME,对照组不含2-ME。通过MTT法定量检测2-ME对2株细胞增殖的抑制作用,集落形成实验测定2-ME对这2株细胞的放射增敏作用,流式细胞术检测细胞周期分布的变化,通过免疫沉淀法检测细胞周期素依赖性蛋白激酶2(CDK2)活性的改变。结果:分别以2-ME对人肺癌细胞GLC-82和A549的最小有效浓度(0.15625×10-6mol/L和1.25×10-6mol/L)作为放射增敏浓度,均可增加细胞对X线的敏感性,2株细胞存活曲线均见2-ME增敏组比单纯照射组整体下移,D0、Dq值均降低,增敏比:GLC-82细胞为1.98;A549细胞为2.06。细胞周期的检测表明2-ME使细胞周期阻滞于G2/M期,并呈剂量依赖性。2-ME作用后2株细胞CDK2活性均无明显改变。结论:2-ME可通过对细胞周期的调节增加非小细胞肺癌(NSCLC)细胞GLC-82和A549对射线的敏感性。     

下调环指蛋白2的表达促进U87脑胶质瘤细胞凋亡并增强其放射敏感性

目的在U87脑胶质瘤细胞中下调环指蛋白2(RNF2)的表达,观察对U87细胞生长及放射敏感性的影响。方法用含有针对RNF2基因小发夹RNA(shRNA)的表达载体转染U87细胞,利用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法分别在mRNA及蛋白水平验证RNF2的表达下调,用MTT法检测细胞增殖,用annexin V-FITC/PI标记结合流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期情况;经X射线照射后,用流式细胞术检测对照细胞和RNF2表达下调细胞的凋亡情况。结果 2条针对RNF2的shRNA均可有效抑制U87细胞中RNF2的表达。RNF2表达下调后,U87细胞的增殖受到显著抑制,S期细胞明显减少(shRNA-NC:27.31±1.35;shRNF2-1:16.72±2.90;shRNF2-3:10.35±1.33),G1期细胞显著增加(shRNA-NC:56.13±1.80;shRNF2-1:76.32±3.11;shRNF2-3:80.45±2.83),同时出现细胞凋亡。经X线照射后,RNF2下调的细胞凋亡率明显增加(shRNA-NC:20.88±0.64;shRNF2-1:39.69±0.57;shRNF2-3:47.82±0.45)。结论下调RNF2表达可明显抑制细胞生长,并增强U87细胞对放射的敏感性。     

眼镜蛇毒组分抑制人神经胶质瘤U251细胞增殖及其机制研究

目的: 探讨眼镜蛇毒组分对人神经胶质瘤U251细胞增殖抑制作用及其机制。方法: 采用MTT法比较各种蛇毒组分对U251细胞增殖的抑制效果并筛选出高效组分,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,激光共聚焦显微镜和电子显微镜观察蛇毒组分作用U251细胞后的形态学变化。结果: 11种眼镜蛇毒组分对体外培养的神经胶质瘤细胞U251均有不同程度的生长抑制作用,其中组分KD II-3对肿瘤细f胞的抑制作用呈现剂量和时间依赖性。不同浓度(1、3.75、7.5、15 mg/L)KD II-3作用细胞24 h后,其凋亡率分别为13.3%、17.7%、20.0%、22.4%,且可见到"亚G₁期"峰。KD II-3还将U251的细胞周期阻滞在G₀/G₁期。7.5 mg/L KD Ⅱ-3作用U251细胞24h后激光共聚焦显微镜观察显示细胞膜皱缩,染色质浓缩、碎裂,透射电镜观察显示细胞核固缩,染色质凝聚。结论: 眼镜蛇毒组分KD II-3可抑制神经胶质瘤细胞U251的增殖,促进细胞凋亡。     

notch1基因对人胶质瘤U251细胞增殖和周期的影响

目的：探讨notch1基因对人胶质瘤U251细胞增殖和周期的影响。方法: 体外构建notch1-shRNA和pNL-NICD/EGFP慢病毒表达载体,采用RT-PCR和Western blotting方法行notch1沉默和高表达notch1胞内段的效果检测,MTT法和PI单染流式细胞术分析notch1对细胞增殖和细胞周期的影响。结果：notch1-shRNA慢病毒表达载体能有效下调notch1表达,而pNL-NICD/EGFP慢病毒表达载体能有效增加NICD的表达。notch1基因表达下调的细胞其细胞增殖能力受到明显抑制(P<0.01),并引起细胞G1期阻滞(P<0.01), S期减少(P<0.01);在NICD表达增加的细胞其增殖能力明显增强(P<0.01),且引起细胞G1期减少(P<0.05),S期增加(P<0.01)。结论: notch1基因与人胶质瘤U251细胞的增殖能力和周期密切相关,有望成为治疗胶质瘤的靶点。     

二氯醋酸钠提高胶质母细胞瘤U251细胞的放疗敏感性

目的:探讨二氯醋酸钠(sodium dichloroacetate acid,DCA)预处理对胶质母细胞瘤U251细胞的放疗敏感性的影响,并研究其可能机制。方法:将U251细胞随机分4个实验组:空白对照(control)组、DCA组、高能X射线照射未经DCA预处理组(IR组)和高能X射线照射经DCA预处理组(DIR组)。用MTT法检测细胞的存活率,DHE染色检测细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot检测细胞内Bcl-2的表达变化,流式细胞术检测凋亡细胞百分比。结果:DCA组和control组相比细胞存活率无明显改变,IR组和DIR组较control组细胞存活率明显降低(P0.05),并且DIR组细胞存活率较IR组明显降低(P0.05);DIR组ROS阳性细胞百分数较IR组明显升高(P0.05);DIR组细胞内Bcl-2表达水平较IR组明显降低(P0.05)。DIR组凋亡细胞百分比较IR组明显升高(P0.05)。结论:DCA预处理提高了U251细胞对放疗的敏感性,取得了更好的抗肿瘤作用,具体机制可能与提高细胞内ROS含量从而降低Bcl-2蛋白的表达有关。     

GDC-0032抑制U251胶质瘤细胞活力并诱导DNA损伤

目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂GDC-0032对人胶质瘤U251细胞活力、细胞周期和DNA损伤的影响。方法:GDC-0032处理U251细胞,MTT实验检测细胞活力;流式细胞术分析GDC-0032对细胞周期的影响;Western blot检测细胞内蛋白表达的变化;免疫荧光检测组蛋白γ-H2AX在细胞内的表达与分布。结果:GDC-0032剂量依赖性地抑制U251细胞活力;U251细胞经GDC-0032作用后,处于G1期的细胞数量明显增多,同时p27的表达水平增加,而细胞分裂周期蛋白2(Cdc2)的表达则受到抑制;在GDC-0032作用的细胞中,γ-H2AX焦点的生成和表达水平明显升高;另外,GDC-0032上调胶质瘤细胞中丝裂原活化蛋白激酶家族成员细胞外信号调节激酶(ERK)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化水平,而survivin的表达则受到抑制。结论:GDC-0032能够通过抑制细胞活力和阻滞细胞于G1期而抑制U251细胞的增殖,并且诱导胶质瘤细胞发生DNA损伤;GDC-0032的抑癌活性与其调控ERK和JNK的活性及下调survivin的表达相关。     

丹参酮ⅡA对U251胶质瘤细胞的增殖抑制和原癌基因表达的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA对人胶质瘤细胞株U251的增殖抑制作用及其作用机理。方法:应用MTT比色法检测不同浓度丹参酮ⅡA对U251细胞的增殖抑制,应用流式细胞仪观察丹参酮ⅡA对U251细胞周期的影响,应用RT-PCR观察相关基因C-myc表达的变化。结果:丹参酮ⅡA对U251细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性,当浓度为0.10 g·L^-1时,对U251细胞增殖的抑制率达到(53.7±6.0)%。流式细胞仪分析显示,用0.10 g·L^-1丹参酮ⅡA培养3 d,细胞周期中G₀/G₁期所占比例增高,S期占细胞周期的比例降低。RT-PCR结果显示,随着丹参酮ⅡA作用剂量的增加,c-myc基因的表达被明显抑制。结论:丹参酮ⅡA对人胶质瘤细胞系U251的增殖具有明显的抑制作用,并对原癌基因c-myc的表达具有抑制作用。     

非磷脂脂质体介导反义c-myc基因质粒转染对人脑胶质瘤细胞U251的影响

目的 确定非磷脂脂质体（non-phospholipid liposome,NPL) 介导反义c-myc基因转染人脑胶质瘤（glioma) 的作用。方法 以金属离子诱导表达人反义c-myc基因的质粒pHMTASCMH DNA与NPL结合转染人脑恶性脑质瘤细胞U251，转染6h后加入200μmol/L ZnCl2作实验组，不加ZnCl2转染细胞和单用NPL为对照组。在实验的第24、48、72和96h分别测定细胞还原四甲基偶氮唑盐（MTT）的光吸收值。将实验第24小时或72小时的细胞分别进行annexin-V-FLUOS或TUNEL染色；细胞裂解后做ELISA检测c-myc基因表达产物含量的变化。结果 显微镜下观察转染48h实验组瘤细胞开始出现多角型细胞，细胞胞浆内产生空泡；MTT实验结果发现其细胞活性下降；annexin-V-FLUOS染色与TUNEL实验显示细胞出现明显的程序性细胞死亡特征；c-myc基因表达产物下降。结论 非磷脂脂质体介导反义c-myc基因转染脑胶质瘤细胞可特异性地抑制c-myc基因表达，抑制瘤细胞生长，细胞活性下降，乃至出现程序性细胞死亡。     

过表达TAP1上调人胶质瘤细胞株U251 HLA-I的表达

 目的：探讨抗原提呈相关转运蛋白1（TAP1）过表达对人胶质瘤细胞株U251人类白细胞抗原I(HLA-I)表达的影响。方法：培养 U251细胞,构建慢病毒载体并转染U251细胞,获得稳定高表达TAP1的细胞株并设立转染空载体对照组,分别收集U251细胞组、空载体对照组和TAP1基因转染细胞组细胞的蛋白和RNA,行real-time PCR 和Western blotting分析过表达的TAP1对U251细胞HLA-I表达的影响,并用流式细胞术分析U251细胞HLA-I表面呈现的变化。结果：成功建立TAP1高表达U251细胞株,TAP1 mRNA和蛋白分别升高（8.73±1.07）倍和（11.71±0.83）倍。高表达的TAP1促进U251细胞HLA-A、HLA-B、HLA-C（重链）和β2微球蛋白（轻链） mRNA表达上调,分别升高（3.51±0.36）倍、（4.78±0.85）倍、（2.94±0.28）倍和（3.23±0.24）倍, HLA-I蛋白表达升高（3.14±0.53）倍,同时U251细胞HLA-I的表面呈现明显增多,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论：过表达TAP1能促进U251细胞HLA-I表达及其在细胞表面呈现的提高。     

汉防己甲素对人鼻咽癌细胞株的放射增敏作用及其机制

 目的：探讨汉防己甲素（Tet）对人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2的放射增敏作用及其机制。方法：MTT法检测细胞增殖抑制作用,克隆形成实验比较细胞放射敏感性,流式细胞术检测细胞周期分布。结果：Tet对CNE1和CNE2细胞的最大非细胞毒性剂量分别为1.5 μmol/L和1.8 μmol/L,该浓度的Tet联合放射线照射与单纯放射线照射相比,在培养至第4~6 d能明显抑制细胞增殖（P<0.01）。CNE1和CNE2细胞单纯放射线照射组平均致死剂量（Do）分别为(1.26±0.02) Gy和(2.27±0.04) Gy,Tet联合放射线照射组Do分别为(0.73±0.05) Gy和(1.61±0.08) Gy,放射增敏比分别为1.73和1.40（P<0.05）。单纯放射线照射组CNE1和CNE2细胞周期分布以G₂期为主,分别为(42.62±2.07)%和(34.82±2.74)%,Tet联合放射线照射组CNE1和CNE2 G₂期比例分别为(17.02±1.87)%和(19.64±4.82)%（P<0.01）。结论：Tet能增加人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2对放射线照射的敏感性,机制可能与去除放射线照射诱导的G₂期阻滞有关。     

The effect of elemene on lung adenocarcinoma A549 cell radiosensitivity and elucidation of its mechanism

OBJECTIVE:

To investigate the effect of elemene on the radiosensitivity of A549 cells and its possible molecular mechanism.

METHODS:

Apoptosis of A549 cells was detected by flow cytometry and fluorescence microscopy. The effect of double-strand break (DSB) damage repair in A549 cells was evaluated using the neutral comet assay. Protein expression levels were detected using western blotting, and the correlation between protein levels was analyzed.

RESULTS:

Elemene exhibited a radiosensitizing effect on A549 cells. The level of apoptosis induced by elemene combined with radiation was significantly greater (p<0.01) than that elicited by either radiation or elemene alone. Following radiation and subsequent repair for 24 h, the tail intensity of A549 cells treated with a combination of elemene and radiation was greater than that of cells treated with either elemene or radiation alone (p<0.01). This result indicates that elemene inhibits cellular DSB repair. Both elemene combined with radiation and radiation alone decreased the protein expression of DNA-PKcs and Bcl-2 compared to elemene alone (p<0.01), while p53 protein expression was increased (p<0.01). A negative correlation was observed between DNA-PKcs and p53 expression (r=-0.569, p=0.040), while a positive correlation was found between DNA-PKcs and Bcl-2 expression (r=0.755, p=0.012).

CONCLUSIONS:

Elemene exhibits a radiosensitizing effect on A549 cells, and its underlying molecular mechanism of action may be related to the downregulation of DNA-PKcs gene expression.