BRCA2基因在免疫杀伤肺癌细胞中的作用及机制研究

目的：研究BRCA2基因对免疫细胞杀伤肺癌的作用及分子机制。方法：siRNA敲减肺癌细胞中的BRCA2基因,qPCR及Western blot技术检测BRCA2表达;MTT及CCK-8法检测细胞生长;将外周血单核细胞与肺癌细胞共培养,酶标法检测GFP荧光强度,评估肺癌细胞杀伤效率。结果：BRCA2基因在肺癌细胞A549与H1299中表达,与肺上皮细胞BEAS-2B相比差异无统计学意义（P>0.05）;当细胞A549与H1299中BRCA2基因被成功敲减后,细胞增殖率与对照组相比显著升高;外周血单核细胞对A549与H1299细胞的杀伤效率与对照组相比显著增强,ATM、RAD51、RAD50分子表达与对照组相比显著减少,而P53蛋白表达是对照组的7.2倍。结论：敲减BRCA2基因后,外周血单个核细胞对肺癌细胞的杀伤更强,干预BRCA2与单核细胞有协同抑制肺癌效应,并且调控ATM信号通路分子表达。     

hsa＿circ＿001988抑制A549细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡影响NSCLC发生发展

目的：本研究探究hsa＿circ＿001988在肺癌发生发展中的作用以及机制。方法：利用circbase生信系统，选取hsa＿circ＿001988作为研究对象；原位杂交FISH和qRT-PCR检测hsa＿circ＿001988在肺癌组织和细胞系中的表达；Transwell、细胞划痕、CCK-8及TUNEL细胞凋亡检测hsa＿circ＿001988过表达和基因敲减对A549、NCI-H460细胞侵袭、迁移、增殖及凋亡的影响；检测皮下瘤体体积和重量；PCNA免疫组化实验检测hsa＿circ＿001988过表达和基因敲减对体内细胞增殖的调控。结果：hsa＿circ＿001988在肺癌组织和各细胞系中呈低表达；hsa＿circ＿001988抑制A549细胞侵袭、迁移、增殖及促进凋亡，circ＿001988敲减后则促进NCI-H460细胞侵袭、迁移、增殖及抑制凋亡；hsa＿circ＿001988抑制皮下瘤体生长及抑制体内细胞增殖，hsa＿circ＿001988敲减后则促进肿瘤生长及细胞增殖。结论：hsa＿circ＿001988可能通过调控肺癌细胞生物学功能从而参与NSCLC发生发展过程。     

miR-125a-5p靶向LIMK1逆转非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂的耐药性

目的:探讨微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)对非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂耐药性的影响及其作用机制。方法:RT-qPCR检测非小细胞肺癌组织及其细胞株A549和A549/DDP中miR-125a-5p和LIM激酶1(LIMK1)的表达;在A549/DDP细胞中上调或下调miR-125a-5p或LIMK1表达,分别采用MTT法、流式细胞术和Western blot检测细胞活力、凋亡率及耐药相关蛋白表达;TargetScan在线预测、萤光素酶报告基因实验验证miR-125a-5p和LIMK1的靶向关系;共表达miR-125a-5p和LIMK1,检测细胞活力、凋亡率及耐药相关蛋白表达。结果:在非小细胞肺癌组织及其细胞株中,miR-125a-5p表达下调,LIMK1表达上调(P0.05);萤光素酶报告基因实验表明miR-125a-5p可负向调控LIMK1表达。过表达miR-125a-5p或敲减LIMK1表达使A549/DDP细胞的活力下降,细胞凋亡率增加,顺铂的IC_(50)减小,耐药相关蛋白表达下调(P0.05)。过表达LIMK1则使miR-125a-5p对A549/DDP细胞活力和耐药相关蛋白表达的抑制作用减弱。结论:miR-125a-5p能通过抑制LIMK1基因表达,下调耐药相关蛋白表达,从而逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性。     

lncRNA-PCAT6通过调控miR-185/SIX1轴对肺癌A549细胞上皮间质转化及化疗敏感性的影响北大核心CSCD

目的:探讨长链非编码RNA-PCAT6(lncRNA-PCAT6)对肺癌A549细胞上皮间质转化(EMT)和化疗敏感性的影响,以及对微小RNA-185(miR-185)/SIX1轴的调控作用。方法:取A549细胞,分为空白组、lncRNA-PCAT6低表达腺病毒(PCAT6-Si)组、不含lncRNA-PCAT6-Si的空病毒载体(eGFP-Si-1)组、miR-185低表达腺病毒(miR-185-Si)组、不含miR-185-Si的空病毒载体(eGFP-Si-2)组、PCAT6-Si与miR-185-Si共转染(PCAT6-Si+miR-185-Si)组。RT-qPCR法检测lncRNA-PCAT6、miR-185表达;Transwell法测定细胞侵袭、迁移能力;免疫荧光检测EMT标志物N-cadherin阳性表达;Western blot法测定SIX1、EMT标志蛋白E-cadherin、Vimentin及N-cadherin表达。取A549细胞系及其顺铂耐药细胞株A549/DDP,RT-qPCR及Western blot法检测lncRNA-PCAT6、miR-185表达。取A549/DDP转染PCAT6-Si与miR-185-Si,并分为A549组、A549/DDP组、PCAT6-Si组、miR-185-Si组、PCAT6-Si+miR-185-Si、eGFP-Si-1组、eGFP-Si-2组;RT-qPCR检测lncRNA-PCAT6、miR-185表达;CCK-8法检测各组细胞半数抑制浓度(IC50)及耐药指数(RI);Western blot法检测SIX1、耐药相关蛋白P-gp表达;裸鼠荷瘤试验验证PCAT6对A549/DDP细胞化疗敏感性的作用。双荧光素酶试验验证PCAT6与miR-185之间的靶向关系。结果:与A549细胞相比,A549/DDP细胞IC50及RI、lncRNA-PCAT6、SIX1及P-gp表达升高(P<0.05),miR-185表达降低(P<0.05)。敲低A549细胞中lncRNA-PCAT6表达后,miR-185表达升高,SIX1蛋白表达降低,细胞侵袭、迁移能力及EMT进程降低,IC50及RI降低、肿瘤体积减小,且各指标变化差异显著(P<0.05)。敲低miR-185可逆转lncRNA-PCAT6的上述作用。双荧光素酶报告试验证实lncRNAPCAT6与miR-185之间有靶向负调控作用。结论:肺癌A549细胞中lncRNA-PCAT6低表达可靶向上调miR-185,下调SIX1,抑制EMT进程,增强对DDP化疗的敏感性。     

安罗替尼通过调控miR-16-5p/PD-1轴抑制人非小细胞肺癌细胞系增殖并促进凋亡

目的 探讨安罗替尼对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法 将非小细胞肺癌细胞系A549和H1299分别采用安罗替尼、miR-16-5p激动剂和/或PD-1过表达载体进行处理。CCK-8实验和EDU实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-16-5p相对表达量;Western blot检测程序性细胞死亡-1蛋白(PD-1)的表达。双荧光素酶报告实验确定miR-16-5p和PD-1的靶向关系。用A549细胞构建裸鼠成瘤模型,检测安罗替尼对体内肿瘤生长的影响。结果 安罗替尼在A549和H1299细胞中以剂量依赖的方式显著增加miR-16-5p表达,同时降低PD-1表达,并且抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-16-5p过表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-16-5p能靶向PD-1,且负调控PD-1表达。siRNA下调PD-1表达后明显抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡(P<0.05)。过表达PD-1则可逆转安罗替尼介导的miR-16-5p对A549和H1299细胞的促增殖和抗凋亡作用(P<0.05...     

红景天苷负向调控TACC2表达抑制NSCLC细胞增殖及上皮间充质转化

目的 探讨红景天苷(SAL)对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系增殖、凋亡以及上皮间充质转化(EMT)的影响,并明确其作用的分子机制。方法 收集22例肺癌患者的癌组织及癌旁组织;并体外培养肺癌细胞系(A549、H358、H1299、H1650);RT-qPCR分别检测肺癌组织以及肺癌细胞系中转化酸性卷曲螺旋蛋白2(TACC2)的表达。不同浓度SAL处理细胞(A549、H1299)后,流式细胞测量术、CCK-8法分别检测细胞凋亡、增殖;Western blot检测细胞(A549、H1299)内E-cadherin、N-cadherin、TACC2表达以及p38磷酸化水平。转染pcDNA3.0-TACC2质粒后,检测过表达TACC2对细胞增殖、凋亡水平以及EMT的影响。结果 肺癌组织中TACC2的相对表达量显著高于癌旁组织,肺癌细胞系TACC2表达水平显著高于人胚肺成纤维细胞系(HFL-1)(P<0.05)。不同浓度SAL处理后,细胞增殖水平显著降低,凋亡率显著上升(P<0.05)。SAL能够显著降低A549以及H1299细胞内TACC2的表达水平,细胞内E-cadherin表...     

miR-7-5p靶向丝氨酸/苏氨酸激酶11调控非小细胞肺癌细胞A549的凋亡

目的探讨miR-7-5p是否靶向丝氨酸/苏氨酸激酶11(LKB1)调控非小细胞肺癌细胞A549的凋亡。方法通过TargetScanHuman分析miR-7-5p与LKB1的匹配情况,然后通过荧光素酶报告系统检测miR-7-5p是否靶向LBK1;miR-7-5p mimics过表达或者miR-7-5p inhibitor敲低miR-7-5p的情况下,通过免疫印迹检测凋亡相关蛋白质Cleaved-caspase3和Bax的表达量,AMPK的总蛋白和是p-AMPK的表达量;通过Annexin-V染色检测非小细胞肺癌细胞A549的细胞凋亡水平。结果 miR-7-5p靶向LKB1的3′UTR;过表达miR-7-5p后,LKB1的表达量下降(P0.05),凋亡相关蛋白质Cleaved-caspase3和Bax的表达量上升(P0.05),p-AMPK的表达量减少(P0.05),非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平上升(P0.05),但是此种效应能被AMPK的抑制剂BML-275抑制;敲低miR-7-5p后,LKB1的表达量下降(P0.05),凋亡相关蛋白质Cleaved-caspase3和Bax的表达量下降(P0.05),p-AMPK的表达量上升(P0.05),非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平下降(P0.05)。结论 miR-7-5p通过靶向LKB1的3′UTR通过AMPK通路促进非小细胞肺癌细胞A549的细胞凋亡。     

Twist促进乳腺癌细胞BT-549乳腺细胞小球形成及其迁移

目的探讨Twist基因功能缺失对乳腺肿瘤干细胞样细胞富集及其迁移的影响。方法采用shRNA干扰技术构建Twist基因敲减的BT-549乳腺癌细胞株(BT-549-sh Twist细胞株)和阴性对照细胞株BT-549-sh Vec;采用实时荧光定量PCR和Western blot法验证干扰效率;长程无血清悬浮培养方法富集具有干细胞特性的乳腺癌细胞小球(mammosphere);TranswellTM法检测乳腺癌细胞小球的迁移能力。结果采用shRNA干扰技术成功构建Twist基因敲减的BT-549乳腺癌细胞株BT-549-sh Twist细胞株;BT-549-sh Twist细胞株的mammosphere富集能力和迁移能力减弱。结论 Twist促进BT-549乳腺癌乳腺细胞小球形成及其迁移。     

miRNA-210对肺癌细胞株A549增殖及凋亡的作用

目的探讨miRNA-210是否通过调控STAT3表达来影响肺癌细胞株A549增殖及凋亡。方法选用肺癌细胞株A549,通过干扰慢病毒敲低miRNA-210表达水平,RT-PCR检测miRNA-210、STAT3基因表达水平,Western blot检测STAT3蛋白水平,CCK-8检测A549细胞增殖水平。结果肺癌A549细胞中miRNA-210、STAT3表达上调(P0.01);敲低miRNA-210后,STAT3表达水平明显降低(P0.01),Bax与Bcl-2比值明显升高(P0.01),而A549细胞增殖被显著抑制(P0.01)。结论 miRNA-210可能通过调控STAT3表达从而影响肺癌细胞A549增殖和凋亡。     

miR-140-3p通过靶向PD-L1抑制非小细胞肺癌A549细胞的活力、迁移和侵袭

目的:探究微小RNA-140-3p(mi R-140-3p)对程序性细胞死亡配体1(PD-L1)的靶向关系以及对非小细胞肺癌A549细胞的活力、迁移和侵袭的影响。方法:使用RT-qPCR检测HLF-1、A549和H1299不同细胞株中mi R-140-3p的表达水平,选择差异最显著的A549细胞用作后续研究对象; Target Scan软件预测和双萤光素酶报告基因实验验证mi R-140-3p和PD-L1之间的靶向关系; RT-qPCR和Western blot检测转染mi R-140-3p模拟物和抑制剂对PD-L1表达水平的影响; MTT法检测mi R-140-3p和PD-L1对A549细胞活力的影响; Transwell实验检测mi R-140-3p和PD-L1对A549细胞迁移和侵袭的影响。结果:mi R-140-3p在人肺癌A549和H1299细胞的表达中显著下调(P 0. 05); mi R-140-3p高表达能够使PD-L1表达下调,对A549细胞的活力、迁移和侵袭具有抑制作用;转染pc DNA3. 0-PD-L1能够阻断mi R-140-3p对A549细胞活力、迁移和侵袭的抑制作用。结论:mi R-140-3p可通过靶向负调控PD-L1抑制A549细胞的活力、迁移和侵袭。     

miR-1254靶向GLTSCR2调控非小细胞肺癌增殖和活力

目的探讨miR-1254、GLTSCR2与非小细胞肺癌凋亡和增殖活力的关系。方法检测非小细胞肺癌和正常肺细胞中miR-1254与GLTSCR2的表达;运用TargetScan在线分析miR-1254与GLTSCR2的相关性;利用luciferase assay检测miR-1254是否靶向调控GLTSCR2;转染miR-1254 mimics或miR-1254 inhibitor进非小细胞肺癌A549细胞,通过Western blot检测GLTSCR2的表达量和非小细胞肺癌A549细胞凋亡标志蛋白表达情况;通过CCK-8试验检测不同条件下A549细胞的增殖活力。结果非小细胞肺癌A549的miR-1254相对表达量最高(P <0.05); GLTSCR2在非小细胞肺癌A549和H1299表达量最低(P<0.05);miR-1254靶向GLTSCR2的3'UTR的193-200区域;miR-1254过表达时,GLTSCR2的表达量下降(P<0.05),细胞凋亡相关蛋白BAK的表达量明显下降(P<0.05),而BCL-2的表达量明显上升(P<0.05),并且CASPASE9/CLEAVED-CAS9的比例明显上升(P<0.05),细胞增殖活力明显上升(P<0.05);敲低miR-1254后,GLTSCR2的表达量明显上升(P<0.05),细胞凋亡相关蛋白BAK的表达量明显上升(P<0.05),而BCL-2的表达量明显下降(P <0. 05),并且CASPASE9/CLEAVED-CAS9的比例明显下降(P <0.05),细胞增殖活力明显下降(P<0.05)。结论 miR-1254能通过降低GLTSCR2的表达来降低非小细胞肺癌细胞凋亡以及提高非小细胞肺癌A549的增殖和活力。     

罂粟碱通过HMGB1/NLRP3炎症小体影响非小细胞肺癌A549和H460细胞生物学行为的作用机制

目的 探讨罂粟碱对非小细胞肺癌A549和H460细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响,并初步探讨其分子机制.方法 利用罂粟碱处理非小细胞肺癌A549和H460细胞,CCK-8细胞增殖检测试剂盒和平板克隆实验分析罂粟碱对A549和H460细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测罂粟碱对A549和H460细胞凋亡的影响,Transwe...     

过表达整合素连接激酶肺癌A549细胞的建立及生物学活性

目的:建立稳定过表达整合素连接激酶(ILK)的肺癌A549细胞模型,探讨ILK过表达对肺癌A549细胞生物学活性的影响。方法:以RT-PCR法扩增人ILK基因,构建pEGFP-ILK重组质粒。经酶切及测序鉴定后,将pEGFP-ILK质粒用脂质体转染肺癌A549细胞,G418压力筛选出稳定转染细胞克隆并扩大培养(A549/pEGFP-ILK组),设pEGFP-C1空质粒转染A549细胞(A549/pEGFP-C1组)及空白A549细胞对照组。用荧光显微镜观察EGFP-ILK融合蛋白的表达及细胞内定位,RT-PCR法检测各组细胞中ILK mRNA的转录水平,Western blot法检测各组细胞中ILK蛋白表达水平,MTT比色法检测各组细胞的增殖活力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况,HE染色观察细胞形态变化。结果:酶切及测序证实,pEGFP-ILK重组质粒构建成功。该质粒转染A549细胞、并经G418压力筛选后,获得了表达绿色荧光蛋白的稳定转染株,ILK基因表达产物主要定位于细胞质内。与对照组相比,A549/pEGFP-ILK细胞ILK的mRNA及蛋白表达水平明显升高,其过表达率分别为218.18%和245.45%(P<0.05);过表达ILK的A549细胞增殖活力显著增强(P<0.05);凋亡水平被显著抑制(P<0.05);过表达ILK的A549细胞的核分裂相增多。结论:成功建立过表达ILK肺癌细胞模型,ILK过表达可促进癌细胞增殖、抗凋亡及核分裂相增多。     

敲减抗增殖蛋白2促进非小细胞肺癌细胞系A549凋亡

目的 探讨抑制抗增殖蛋白2(PHB2)表达对非小细胞肺癌细胞系A549凋亡的影响及机制。方法 慢病毒感染非小细胞肺癌细胞系A549,建立敲减PHB2的稳转细胞株，用动力相关蛋白1(DRP1)抑制剂Mdivi-1处理敲减PHB2的A549细胞。Western blot检测PHB2、p-DRP1(Ser616)和DRP1蛋白表达水平；TUNEL染色和annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡；MitoTracker染色评估线粒体分裂情况；用相应试剂盒检测线粒体含量、柠檬酸合酶活性和细胞色素c含量。结果 与shCtrl组相比，shPHB2组A549细胞凋亡率增加(P<0.05),DRP1介导的线粒体分裂增加(P<0.05),ATP含量减少(P<0.05),柠檬酸合酶活性降低(P<0.05),线粒体内细胞色素c减少(P<0.05)。与shPHB2组相比，shPHB2+Mdivi-1组A549细胞凋亡率减少(P<0.05),DRP1介导的线粒体分裂减少(P<0.05),ATP含量增加(P<0.05),柠檬酸合酶活性增加(P<0.05)...     

FRMD8抑制肺癌细胞的增殖与迁移

目的 探讨FERM domain-containing protein 8（FRMD8）在肺癌发生发展中的作用。 方法 用Western blotting检测肺癌组织及相应癌旁正常组织中FRMD8的表达情况;敲低FRMD8后平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,MTT法检测细胞增殖情况;过表达FRMD8后流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测过表达FRMD8后某些细凋亡相关蛋白表达变化;过表达及敲低FRMD8后Transwell细胞迁移实验检测对A549细胞迁移能力的影响。 结果 1. 与正常组织相比,肺癌组织中FRMD8表达下调（P＜0.05）; 2. FRMD8敲低,细胞克隆形成能力及增殖速度提高; 3. FRMD8可诱导细胞凋亡,并影响细胞凋亡相关基因的表达或活化： FRMD8过表达可下调Caspase-3、8和bax表达,而p53、激活型Caspase-3、8以及bcl-2 的表达上调; 4. FRMD8过表达抑制细胞迁移能力（P＜0.01）,而敲低FRMD8则促进细胞迁移（P＜0.001）。 结论 FRMD8可抑制肺癌的发生发展,并具有肿瘤抑制子的功能。     

miR-105靶向负调控KIFC1抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力

目的:研究微小RNA-105(miR-105)对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法:运用RT-qPCR法检测非小细胞肺癌组织及癌旁组织和细胞中miR-105和驱动蛋白家族成员C1(KIFC1) mRNA的表达;用Western blot检测非小细胞肺癌组织及癌旁正常组织和细胞中KIFC1蛋白的表达。将细胞分为miR-105组(转染miR-105 mimics)、miR-NC组(转染mimics阴性对照序列)、inhibitor-NC组(转染inhibitor阴性对照序列)、inhibitor-miR-105组(转染miR-105 inhibitor)、si-NC组(转染阴性对照siRNA)、si-KIFC1组(转染KIFC1 siRNA)、miR-105+vector组(miR-105 mimics和pcDNA 3.1共转染)和miR-105+KIFC1组(miR-105 mimics和pcDNA 3.1-KIFC1共转染),均以脂质体法转染至非小细胞肺癌H460细胞;MTT法检测各组细胞活力;Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭能力;双萤光素酶报告基因检测实验检测各组细胞萤光素酶相对活性。结果:与癌旁组织相比,非小细胞肺癌组织中的miR-105表达显著降低,KIFC1的表达显著升高(P0.05);与人正常胚肺成纤维细胞MRC-5相比,H460细胞中的miR-105表达显著降低,KIFC1的表达显著升高(P0.05);miR-105可降低野生型KIFC1的H460细胞萤光素酶相对活性,且负向调控KIFC1的蛋白表达。过表达miR-105或敲减KIFC1表达均可显著抑制H460细胞的增殖、迁移和侵袭能力,且过表达KIFC1可逆转miR-105对细胞活力、迁移和侵袭能力的抑制作用。结论:miR-105可抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制与靶向负调控KIFC1的表达有关。     

Thy-1表达水平对肺腺癌细胞A549迁移性及部分相关基因表达的影响

目的 验证Thy-1(CD90)基因与肺癌细胞迁移潜能的关系,并探讨其作用机制. 方法 利用真核表达载体pcDNA3.0构建包含Thy-1基因全长序列的重组表达质粒载体,转染A549细胞,G418筛选获得稳定克隆,采用RT-PCR及免疫荧光技术检测重组质粒转染后细胞内Thy-1 mRNA及蛋白表达水平的改变;通过体外Transwell迁移实验研究外源性Thy-1对A549细胞迁移能力的影响. 结果 构建了pcDNA3.0-Thy-1真核细胞表达载体;成功建立了稳定表达外源性人Thy-1蛋白的肺癌A549细胞株.Trenswell实验提示,表达外源性Thy-1蛋白的A549细胞较对照组细胞体外迁移能力下降(P<0.0001);基因芯片结果提示,Thy-1基因在肺癌细胞中表达后,影响了25个细胞迁移相关基因的表达,在检测基因表达差异时,RT-PCR与基因芯片能够得到基本一致的结果. 结论 Thy-1基因的过表达能降低肺癌细胞系A549细胞的迁移能力,并改变A549细胞多个细胞迁移相关基因的表达,提示Thy-1在肺癌组织的表达状态可能影响肺癌的转移性.     

Maspin在非小细胞肺癌A549细胞生物学行为中的作用

目的:探讨乳腺丝氨酸蛋白酶抑制物(maspin)对于非小细胞肺癌细胞生物学有何影响及其作用机制。方法:PCR扩增人类maspin编码区全长,并构建maspin过表达载体,转染A549细胞。药物筛选出稳定高表达maspin蛋白的细胞株,并通过real-time PCR和Western blot鉴定。通过x Celligence系统实时动态观测转染后A549细胞的生长、迁移和侵袭情况。利用Western blot和real-time PCR的方法对此细胞生物学变化的相关基因进行分析,探讨相应的作用机制。结果:成功构建过表达Maspin的载体MSCV-maspin,并获得稳定高表达maspin的A549细胞株(A549-maspin)。A549-control细胞和A549-maspin细胞生长曲线无差异,但是迁移和侵袭曲线有显著差异。在A549-maspin细胞中integrinβ1的表达水平低于A549-control细胞。结论:Maspin对于A549细胞的生长无影响,但是抑制了A549细胞的迁移和侵袭能力,并且此抑制作用与integrinβ1相关。     

miRNA let-7a1真核表达载体的构建及对肺癌细胞增殖的影响

目的： 构建miRNA let-7a1真核表达载体,研究其在肺癌A549细胞株的表达及对A549细胞增殖的影响。方法：以人肺癌细胞A549的总RNA为模板,RT-PCR扩增miRNA pre-let-7a1基因序列, 将miRNA pre-let-7a1基因克隆到真核表达载体pSilencerTM4.1-CMV neo中,构建成pSilencerTM 4.1-let-7a1重组体。将pSilencerTM 4.1-let-7a1表达载体瞬时转染肺癌A549细胞,RT-PCR法检测miRNA let-7a1在转录水平的表达。根据miRBase Targets数据库,查hsa-let-7a1靶序列,构建 let-7a1靶序列-报道基因融合质粒pMIR-report-let-7a1T,与pSilencerTM 4.1-let-7a1表达载体共转染A549细胞,通过荧光素酶活性检测pSilencerTM 4.1-let-7a1质粒对其靶序列的作用。MTT法检测pSilencerTM 4.1-let-7a1转染A549细胞后,对细胞增殖的影响。结果：pSilencerTM 4.1-let-7a1真核表达栽体和let-7a1靶序列-报道基因融合质粒经酶切及测序鉴定正确。pSilencerTM 4.1-let-7a1转染 A549细胞后,经RT-PCR证明能有效表达miRNA let-7a1。 pSilencerTM 4.1-let-7a1 质粒和pMIR-report-let-7a1T质粒共转染A549细胞后,通过报告基因检测,相对荧光素酶活性明显降低,表明pSilencerTM 4.1-let-7a1转染A549细胞后,可表达let-7a1并具有生物学活性。MTT检测结果显示：pSilencerTM 4.1-let-7a1 转染后的A549活细胞数目明显减少。结论：成功构建了真核表达载体pSilencerTM 4.1-let-7a1,转染肺腺癌A549细胞后能有效表达,miRNA let-7a1基因过表达抑制A549细胞的增殖。     

PLCE1通过调控p53抑制肺腺癌A549细胞凋亡

目的:探讨磷脂酶Cε1(PLCE1)抑制肺腺癌A549细胞凋亡的作用机制。方法:选用人肺腺癌细胞株A549作为研究对象。采用real-time PCR和Western blotting法分别检测PLCE1抑制剂U-73122处理前、后肺腺癌细胞株A549中PLCE1和p53 mRNA和蛋白水平的表达;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:肺腺癌细胞株A549高表达PLCE1,低表达p53;抑制PLCE1表达后A549细胞中p53表达上调,细胞凋亡明显增加。结论:PLCE1通过抑制肺腺癌A549细胞株中p53的表达,从而抑制A549细胞凋亡。