西洋参茎叶总皂苷通过抑制内质网应激减轻毒胡萝卜素诱导的心肌细胞凋亡

 目的:研究西洋参茎叶总皂苷 (PQS) 减轻毒胡萝卜素(TG) 诱导的心肌细胞凋亡的分子机制。方法:原代培养的心肌细胞分为：control组、TG组、PQS (40 mg/L、80 mg/L及160 mg/L)+TG组、牛磺酸 (40 mmol/L)+TG组、蛋白激酶R样内质网激酶 (PERK)敲低+TG组及随机双链RNA转染对照 (mock)+TG组。通过向培养液中加入1 μmol/L TG作用24 h诱导离体培养的乳大鼠心肌细胞凋亡。以RNAi方法敲低心肌细胞PERK基因。CCK-8法和流式细胞术检测细胞活性及凋亡率,Western blotting方法检测内质网应激(ERS)标志分子葡萄糖调节蛋白78 (GRP 78)、钙网蛋白 (CRT)、PERK、p-PERK、真核起始因子2α (eIF2α)、p- eIF2α、活化转录因子4 (ATF4)、C/EBP同源蛋白 (CHOP) 及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:与对照组比较,TG孵育明显诱导细胞凋亡,降低细胞活力,上调PERK和eIF2α磷酸化以及GRP78、CRT、ATF4、CHOP及促凋亡蛋白Bax表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达 (P<0.05);与TG组比较,PQS 160 mg/L及敲低PERK均可显著降低细胞凋亡率,升高细胞活力 (P<0.05);3种不同浓度的PQS可呈剂量依赖性降低Bax蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达 (P<0.05),敲低PERK基因及PQS (160 mg/L) 预处理均可降低ERS分子GRP78、CRT、ATF4及CHOP表达,降低PERK及eIF2α的磷酸化水平 (P<0.05)。结论: PQS 160 mg/L 减轻ERS诱导剂TG诱导的心肌细胞凋亡,PQS预处理可以模拟PERK敲低减轻TG致心肌细胞凋亡的效应,提示PERK-eIF2α-ATF4-CHOP途径参与PQS减轻ERS相关凋亡的作用。     

白杨素对离体培养致炎大鼠软骨细胞凋亡及内质网应激GRP78/PERK/CHOP通路的影响

目的：观察白杨素（CHR）对大鼠软骨细胞凋亡的影响,并探究其可能分子机制。方法：提取大鼠软骨细胞,使用脂多糖（LPS）诱导体外骨关节炎模型,将细胞随机分为对照（control）组、LPS组及CHR处理组（处理浓度分别为1和5 mg/L）;采用CCK-8法测定不同条件下软骨细胞的活力;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;Hoechst 33342染色法观察凋亡细胞核变化;Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白及内质网应激相关蛋白[葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录激活因子6(ATF-6)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）、蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、p-PERK、真核起始因子2α(eIF2α)和p-eIF2α]的表达水平。结果：CHR浓度为1和5 mg/L时可显著提高LPS致炎软骨细胞的活力（P<0.05）,逆转细胞凋亡情况,上调Bcl-2的蛋白表达（P<0.05）,抑制Bax、cleaved caspase-3、caspase-9、GRP78、ATF-6和CHOP的蛋白表达（P<0.05）,降低p-PERK/PERK和p-eIF2α/e...     

沉默FSTL1减少衣霉素诱导软骨细胞内质网应激及细胞凋亡

目的探讨沉默卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)对衣霉素诱导软骨细胞内质网应激(ERS)及细胞凋亡的影响。方法取兔膝关节软骨,收集并培养软骨细胞,将细胞分为对照组、衣霉素组、衣霉素+siRNA-FSTL1组和衣霉素+siRNA-NC组;MTT法检测细胞增殖;流式细胞计量术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR检测细胞中FSTL1、Bcl-2和Bax mRNA含量;Western blot检测细胞中PERK、p-PERK、GRP78、ATF4、CHOP、Cal、e IF2α和p-e IF2α蛋白表达。结果与衣霉素组和衣霉素+siRNA-NC组相比,衣霉素+siRNA-FSTL1组细胞增殖能力显著提高(P0.05),细胞凋亡率降低(P0.05);细胞中FSTL1和Bax mRNA相对表达量均降低,而Bcl-2 mRNA相对表达量均升高(P0.05);细胞中PERK和e IF2α蛋白相对表达量均升高,而p-PERK、GRP78、ATF4、CHOP、Cal和p-e IF2α蛋白相对表达量均降低(P0.05)。结论特异性沉默软骨细胞中FSTL1可有效减少ERS及细胞凋亡,其机制可能与抑制PERK信号通路有关。     

异丙酚对脑缺血再灌注损伤大鼠内质网应激的影响及作用机制

目的 探讨异丙酚对脑缺血再灌注(I/R)损伤大鼠的神经保护作用及机制。方法 30只SD雄性大鼠随机分为假手术组(Sham)、缺血再灌注组(I/R)及异丙酚组，每组10只。采用Zea Longa评分评估神经功能损伤；HE染色观察大鼠大脑缺血区形态结构；流式细胞仪与TUNEL检测海马神经元凋亡率；免疫荧光检测葡萄糖调控蛋白78 (GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)表达；Western blot检测脑组织内质网应激相应蛋白p-PERK、p-EIF-2a、ATF4和CHOP的表达。结果 与Sham组相比，I/R组大鼠神经功能评分明显升高、海马神经元凋亡率显著升高、p-PERK、p-eIF2α、ATF4和CHOP蛋白表达明显上调；给予异丙酚治疗后，神经功能缺损评分、海马神经元凋亡率均显著降低，p-PERK和p-eIF2α、ATF4和CHOP蛋白的表达降低。结论 异丙酚通过抑制p-PERK-p-elF2α-ATF4-CHOP通路和内质网应激保护脑缺血再灌注损伤大鼠的脑神经。     

SIRT1调控内质网应激在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的作用研究

目的探讨Sirtuin 1(SIRT1)调控内质网应激在蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤中的作用。方法采用颈内动脉穿刺的方法构建小鼠SAH模型。Western Blot和实时荧光定量PCR检测SAH后0、3、6、12、24、48、72 h SIRT1的蛋白和mRNA的表达水平, 给予SIRT1抑制剂sirtinol或SIRT1小干扰RNA(siRNA)后Western Blot检测SIRT1和内质网应激相关标志物葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)/PERK、磷酸化真核细胞翻译起始因子2α(p-eIF2α)/eIF2α和C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达水平及SAH后24 h检测SAH评分、神经功能评分、脑含水量和血脑屏障完整性。结果与其他时间点相比, 在24 h时, SIRT1蛋白和mRNA的表达最高, 其差异有统计学意义(均P<0.001)。抑制SIRT1表达后内质网应激相关的蛋白GRP78、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α和CHOP表达量增加, 加剧出血量和脑含水量、破坏血脑屏障完整性, 显著降低神经功能评分...     

PERK通路参与了缺氧心肌细胞的内质网应激及凋亡

目的:观察缺氧对原代培养的Wistar乳鼠心肌细胞的损伤,探讨内质网应激在缺氧心肌损伤发生发展过程中起的作用及PERK通路是否参与其信号转导过程。方法:将原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为正常对照组和缺氧1h、4h、8h、12h、24h组,通过测定细胞ATP含量反映细胞活力;高内涵分析细胞成像系统检测多参数凋亡;采用免疫细胞化学和蛋白印迹方法检测以内质网为靶点的分子伴侣(GRP78和钙网蛋白)的表达,PERK通路(PERK和eIF2α)的磷酸化水平,以及其下游分子(ATF4和CHOP)在缺氧不同时点蛋白的表达变化特征。采用PERK通路激活型药物salubrinal处理原代培养的Wistar乳鼠心肌细胞,观察药物是否对缺氧损伤的心肌细胞有保护作用。结果:缺氧引起心肌细胞凋亡,缺氧早期(约1h)钙网蛋白和GPR78的表达上调;缺氧中期(4h)p-PERK、p-eIF2α和ATF4的表达上调;缺氧后期(12h)CHOP的表达上调。Salubrinal对缺氧心肌有保护作用。结论:在培养的心肌细胞中,缺氧可激发内质网应激。在缺氧早期激活PERK通路保护机体对抗缺氧损伤,后期激活细胞凋亡通路。     

乔松素对内质网应激所致内皮细胞凋亡的抑制作用及机制

目的:探讨乔松素对内质网应激(ERS)诱导剂衣霉素(TM)所致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的抑制作用及其机制。方法:体外培养HUVECs,分别给予6. 25、12. 5和25 mg/L乔松素预处理1 h,再加入TM(10mg/L)继续培养24 h。分别采用MTT法和Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞活力和细胞凋亡情况;采用试剂盒测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,并采用Hoechst 33342/PI双染法检测细胞膜损伤情况;采用Western blot法检测ERS标志分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和ERS凋亡途径关键蛋白C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达情况,以及蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)和真核翻译起始因子2α(eIF2α)的磷酸化水平;免疫荧光细胞化学法检测活化转录因子6(ATF6)的核转位情况。结果:乔松素(12. 5和25 mg/L)预处理显著抑制TM所诱导的细胞活力降低、LDH漏出、PI阳性细胞率和凋亡率增加(P0. 05或P0. 01)。TM显著上调GRP78和CHOP的蛋白表达水平,且促进其上游调控蛋白PERK和e IF2α磷酸化及ATF6核转位,而乔松素显著拮抗TM所致的上述变化,并呈剂量依赖性(P0. 05或P0. 01)。结论:乔松素可减轻ERS诱导的HUVECs凋亡,其机制可能与抑制ATF6/PERK-CHOP信号通路的活化有关。     

内质网应激在吸烟COPD模型小鼠膈肌细胞凋亡中的作用及机制研究北大核心CSCD

目的:研究内质网应激(ERS)在吸烟慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型小鼠膈肌细胞凋亡中的作用及机制。方法:野生型雄性C57BL/6小鼠分为对照组、COPD模型组、激动剂组、拮抗剂组,Perk基因敲除小鼠分为PERK-KO组、PERKKO+模型组,采用被动吸烟法复制COPD模型,给予ERS激动剂毒胡萝卜素或拮抗剂4-苯基丁酸干预,检测0.3 s用力呼气容积与用力肺活量比(FEV_(0.3)/FVC)、最高峰值流速(PEF)、血清及支气管肺泡灌流液(BALF)中IL-1β及IL-6含量、肺组织病理改变、膈肌中细胞凋亡率及蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、肌醇酶1α(IRE1α)、活化转录因子6(ATF6)、p-eIF2α、ATF4、C/EBP同源蛋白(CHOP)、Caspase-12表达水平。结果:与对照组相比,模型组FEV_(0.3)/FVC、PEF降低,肺组织出现病理改变,膈肌中细胞凋亡率及PERK、p-eIF2α、CHOP、Caspase-12表达水平提高(P<0.05);与模型组相比,激动剂组膈肌中细胞凋亡率及PERK、peIF2α、CHOP、Caspase-12表达水平提高(P<0.05),拮抗剂组膈肌中细胞凋亡率及PERK、p-eIF2α、CHOP、Caspase-12表达水平降低(P<0.05);敲除PERK后,与模型组相比,PERK-KO+模型组膈肌中细胞凋亡率及eIF2α、CHOP、Caspase-12表达水平降低。结论:吸烟COPD模型小鼠膈肌细胞凋亡过度激活,ERS的PERK通路激活与膈肌细胞凋亡有关。     

呋塞米对脑出血模型大鼠PERK/eIF2α/CHOP通路及继发性脑损伤的影响

目的探讨呋塞米(FUR)对脑出血(ICH)大鼠RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶(PERK)/真核起始因子2α(eIF2α)/转录因子CCAAT增强子结合蛋白的同源蛋白(CHOP)通路及继发性脑损伤的影响。方法将大鼠分为假手术组、模型组(脑定位注射Ⅳ型胶原酶,建立ICH模型)、FUR低剂量组(FUR-L)、FUR中剂量组(FUR-M)、FUR高剂量组(FUR-H)、神经节苷脂组,每组18只。药物处理后,检测神经功能,对其进行Longa评分;测量大脑含水量;用Evans蓝外渗实验检测血脑屏障损伤;用HE染色检测海马神经元损伤;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-6(IL-6)水平;用免疫印迹法检测大鼠脑组织PERK/eIF2α/CHOP通路相关蛋白p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、CHOP表达。结果相比假手术组,模型组大鼠海马神经元变性坏死,皱缩变小,数目明显减少,呈现严重病理损伤,Longa评分、Evans蓝渗出量、大脑含水量、血清IFN-γ及IL-6水平、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、CHOP表达水平明显升高...     

SET7/9介导的内质网应激对砷致肝细胞凋亡的影响

目的:通过研究SET7/9(SET domain containing 7/9)对内质网应激(ERS)的蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)信号通路的影响,探讨其在砷致肝细胞凋亡机制中的作用。方法:把人肝细胞LO2分为对照组、砷染毒模型组、阴性转染组和SET7/9 siRNA转染组。流式细胞术检测各组细胞凋亡的变化;Western blot方法观察各组LO2细胞SET7/9、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、PERK和p-PERK表达水平的变化。结果:抑制SET7/9表达可降低砷染毒LO2细胞的凋亡率(P 0.05)。砷染毒可以使LO2细胞SET7/9表达水平升高,上调LO2细胞GRP78和p-PERK的蛋白水平(P 0.05)。砷染毒LO2细胞经SET7/9 siRNA转染后可下调其GRP78和p-PERK的蛋白水平。结论:砷可以通过上调SET7/9激活了ERS的PERK信号通路,从而导致肝细胞凋亡。     

内质网应激途径在百草枯诱导人肺Ⅱ型上皮样细胞A549凋亡过程中作用

目的探讨百草枯(Paraquat,PQ)诱导人肺Ⅱ型上皮样细胞A549凋亡过程中内质网应激途径的发生机制。方法体外培养A549细胞,以PQ为处理因素,建立PQ诱导A549细胞发生ERS的模型:对照组(等量PBS)、PQ250μM组、PQ500μM组、PQ750μM组、PQ1000μM组。处理24h后利用MTT法测定细胞生存率,应用光学倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态学变化,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡比例,在筛选出的凋亡率最高的PQ500μM组中,采用分光光度法测定Caspase-3的活化程度,并提取总蛋白,采用Western blotting试验方法检测内质网应激(ERS)通路相关蛋白GRP78、PERK、p-PERK、ATF6、c-ATF6、IRE1α、pIRE1α和CHOP的表达变化。结果 PQ处理细胞24h后,随PQ浓度增高,A549细胞生存率逐渐下降,细胞形态发生显著变化。在PQ(500μM)组,细胞凋亡率达到最高,Caspase-3活性显著增加,GRP78和CHOP蛋白表达量随诱导A549细胞时间延长显著增加,p-PERK,c-ATF6和p-IRE1α的表达量在6h时显著增加。结论 PQ可以通过激活内质网应激途径引发人肺Ⅱ型上皮样细胞A549凋亡。     

FABP4沉默通过调节PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路对妊娠糖尿病大鼠内质网应激和胰岛素抵抗的影响

目的：探讨脂肪酸结合蛋白4(FABP4)沉默通过调节蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）/真核细胞启动因子2α(eIF2α)/转录因子4(ATF4)/C/EBP同源蛋白（CHOP）信号通路对妊娠糖尿病（GDM）大鼠内质网应激（ERS）和胰岛素抵抗（IR）的影响。方法：腹腔注射链脲佐菌素（STZ）建立GDM大鼠模型。通过尾静脉注射FABP4 siRNA质粒（si-FABP4）、阴性对照质粒（NC）和PERK激活剂（CCT020312）,将大鼠随机分为Normal组、GDM组、GDM+NC组、GDM+si-FABP4组、GDM+si-FABP4+CCT020312组。检测胰腺组织中FABP4含量、血脂水平、炎症标志物水平和氧化应激标志物水平,检测胰腺组织中PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路相关蛋白表达。HTR-8/SVneo细胞分为5组：对照（Control）组、高糖（HG）组、HG+NC组、HG+siFABP4组、HG+si-FABP4+CCT020312组,24 h后检测细胞中FABP4及PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路相关蛋白表达。结果：与Normal组相...     

内质网应激在创伤致大鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的:探讨内质网应激(ERS)在创伤致大鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法:应用Noble-Collip创伤仪构建机械创伤SD大鼠模型,并将大鼠随机分为伪创伤组(n=6),创伤组(创伤后0 h、3 h、6 h、12 h和24 h各时点n=6)和创伤+ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)组(n=6)。用试剂盒检测大鼠心肌组织凋亡蛋白caspase-3活性;用Western blot检测大鼠心肌组织caspase-3的活化水平,ERS标志分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录激活因子6(ATF6)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)和需肌醇酶1α(IRE1α)的表达或磷酸化水平,以及ERS相关凋亡分子C/EBP同源蛋白(CHOP)和caspase-12的表达或活化水平。结果:与伪创伤组相比,创伤组大鼠心肌组织caspase-3活性增强,cleaved caspase-3、GRP78、ATF6、磷酸化PERK、磷酸化IRE1α、CHOP和cleaved caspase-12蛋白水平均显著升高(P0. 05或P0. 01);而给予创伤大鼠4-PBA处理后,caspase-3活性及CHOP、cleaved caspase-12和cleaved caspase-3蛋白水平均显著降低(P0. 05)。结论:创伤所致大鼠心肌细胞凋亡可能是由于激活ERS凋亡途径引起的。     

4-苯基丁酸对创伤后应激障碍大鼠认知能力的影响

目的:观察4-苯基丁酸(4-PBA)对创伤后应激障碍(PTSD)大鼠海马神经元内质网应激(ERS)与凋亡的影响,探讨4-PBA改善PTSD大鼠认知能力的机制。方法:36只成年SD大鼠随机分为正常组、PTSD组和4-PBA+PTSD组,每组12只。PTSD组采用单次延长应激(SPS)构建PTSD大鼠模型,4-PBA+PTSD组从造模次日开始每天于固定时间腹腔注射4-PBA(40 mg/kg),连续给药7 d。Morris水迷宫实验检测各组大鼠的学习记忆能力; Western Blot实验检测各组大鼠海马葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)-真核翻译起始因子2α(e IF2α)-活化转录因子4(ATF4)信号通路相关蛋白表达的变化。结果:在Morris水迷宫实验中,与对照组比较,PTSD组大鼠学习记忆能力明显减退(P 0.01);与PTSD组比较,4-PBA+PTSD组大鼠学习记忆功能明显改善(P 0.01)。Western Blot实验结果显示,与对照组比较,PTSD组大鼠GRP78、CHOP的表达明显增加(P 0.01),Bcl-2的表达显著减少(P 0.01),PERK、e IF2α、p-eIF2α表达显著增加(P 0.05),与PTSD组比较,4-PBA+PTSD组大鼠GRP78、CHOP的表达明显减少(P 0.01),Bcl-2的表达显著增加(P 0.05),PERK、e IF2α、p-eIF2α表达显著减少(P 0.05)。结论:4-PBA能够通过激活PERK-eIF2α-ATF4信号通路抑制PTSD大鼠海马神经元的ERS和凋亡,进而改善PTSD大鼠的认知能力。     

MR-1通过抑制PERK/Nrf2途径减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡

 目的:研究肌原纤维形成调节因子1 (MR-1)是否通过抑制蛋白激酶R样内质网激酶 (PERK)/核因子E2相关因子2（Nrf2）途径减轻缺氧/复氧 (H/R)诱导的心肌细胞凋亡。方法:在原代培养的乳大鼠心肌细胞H/R模型上,采用Annexin V/PI双标法检测心肌细胞的凋亡率;以Western blotting检测葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、磷酸化PERK、Nrf2、活化转录因子4 (ATF4)、C/EBP同源蛋白 (CHOP)、Bcl-2和Bax的蛋白水平,研究过表达或敲低对于H/R致心肌细胞凋亡的影响及其与PERK/Nrf2途径活化的关系。结果:H/R引起心肌细胞凋亡;过表达MR-1减轻H/R引起的细胞凋亡 (P<0.01),下调CHOP表达 (P<0.05),引起Bcl-2/Bax值升高 (P<0.01),并抑制H/R诱导的PERK磷酸化、Nrf2核转位和ATF4表达 (P<0.01)。敲低MR-1加重H/R引起的细胞凋亡 (P<0.01)、CHOP表达上调 (P<0.05)和Bcl-2/Bax值下降 (P<0.01),并加重H/R诱导的PERK磷酸化 (P<0.05)、Nrf2核转位和ATF4表达 (P<0.01)。结论:MR-1通过抑制PERK/Nrf2途径而减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡。     

PERK介导的内质网应激参与血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大的机制

目的: 研究蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)介导的内质网应激(ERS)反应在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大中的作用。方法: 在AngⅡ诱导原代培养的乳大鼠心肌细胞肥大模型上,采用[³H]-亮氨酸掺入、心肌细胞表面积测定等评估心肌细胞肥大程度;以实时定量PCR、RT-PCR和Western blotting检测ERS标志性分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、钙网蛋白(CRT)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核细胞翻译起始因子2α(eIF2α)和C/EBP同源蛋白(CHOP)mRNA和蛋白表达变化。结果: 与正常对照组比较,AngⅡ组CRT mRNA和蛋白表达分别高146.4%和125.3%(P<0.05),GRP78 mRNA和蛋白的表达分别高84.0%和77.6% (P<0.05),PERK mRNA和蛋白表达分别高165.4%和132.1%(P<0.05),eIF2α mRNA和蛋白表达分别高110.9%和46.5%(P<0.05),CHOP mRNA和蛋白表达分别高117.7%和63.3%(P<0.05)。结论: PERK介导的内质网应激反应参与了AngⅡ诱导的心肌细胞肥大。     

IL-1β诱导内质网应激增加人软骨细胞凋亡

目的分析炎性因子(IL-1β与TNF-α)对内质网应激(ERS)的影响以及与骨关节软骨细胞凋亡的关系,探讨相关分子机制。方法收集正常与OA患者骨关节软骨组织各20例,RT-PCR法检测软骨组织中炎性因子IL-1β、TNF-α及ERS相关因子GRP78、CHOP的mRNA水平。Western blot法检测体外培养软骨细胞中GRP78、CHOP、ATF4和caspase-3表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果与对照组相比,OA患者骨关节软骨组织中IL-1β、TNF-α与GRP78、CHOP的mRNA表达水平均显著上调(P0.01),IL-1β与GRP78、CHOP的高表达呈显著正相关(P0.05)。体外实验表明,IL-1β(2 ng/L)作用下,软骨细胞GRP78、CHOP、ATF4表达水平及细胞凋亡水平较对照组均显著增高(P0.01);TNF-α作用下,GRP78、caspase-3表达水平及细胞凋亡水平较对照组显著上调(P0.01)。结论 2 ng/L及更高浓度的IL-1β可激活ATF4-CHOP介导的ERS反应而诱导软骨细胞凋亡。     

利拉鲁肽联合吡格列酮对糖尿病肾病大鼠肾组织细胞凋亡的影响及机制

目的 探究利拉鲁肽联合吡格列酮对糖尿病肾病大鼠肾组织细胞内质网应激及细胞凋亡的作用及机制。方法 50只SPF级SD大鼠随机分为对照组（Control组）、糖尿病肾病组（DN组）、利拉鲁肽组（Liraglutide组）、吡格列酮组（Pioglitazone组）和利拉鲁肽联合吡格列酮组（Liraglutide+Pioglitazone组）,每组10只;全自动生化分析仪检测大鼠24h尿蛋白及血清BUN和SCr水平;HE染色观察大鼠肾组织病理学改变;TUNEL检测大鼠肾组织细胞凋亡水平;Western blot检测大鼠肾组织细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2、内质网应激相关蛋白GRP78、ATF6、CHOP、p-PERK和p-EIF2α及NRF2/HO-1信号通路相关蛋白NRF2和HO-1表达水平。结果 利拉鲁肽联合吡格列酮降低糖尿病肾病大鼠24h尿蛋白及血清BUN和SCr水平,改善大鼠肾组织病理学损伤,降低肾组织细胞凋亡水平,降低肾组织Bax、GRP78、ATF6和CHOP蛋白表达水平及PERK和EIF2α蛋白磷酸化水平,增加Bcl-2、NRF2和HO-1蛋白表达水平。结论 利拉鲁肽联合吡格...     

内质网应激诱导的自噬对肝细胞凋亡的影响

目的:观察二硫苏糖醇(DTT)诱导人正常肝细胞LO2发生内质网应激的过程中自噬相关指标表达的变化及其对细胞凋亡的影响。方法:采用2.0 mmol/L DTT处理LO2细胞0、6、12和24 h,诱导细胞发生内质网应激;real-time PCR及Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、自噬相关基因12(Atg12)、自噬相关基因5(Atg5)和微管相关蛋白1轻链3(LC3) mRNA及蛋白水平的变化;流式细胞术检测细胞凋亡情况;透射电镜观察自噬小体的产生情况。采用400 nmol/L的雷帕霉素预处理LO2细胞1 h,再给予2.0 mmol/L的DTT处理24 h,观察雷帕霉素预处理对细胞凋亡的影响。结果:2.0 mmol/L DTT处理LO2细胞6、12和24 h后,细胞中GRP78、PERK、ATF4、CHOP、Atg12、Atg5和LC3的mRNA及蛋白水平较0 h组显著上调(P 0.05);同时LC3Ⅱ/LC3Ⅰ也较0 h组显著增高(P 0.05);透射电镜检测发现,DTT处理6、12和24 h后,细胞中均可见自噬小体的产生;流式细胞术检测发现,DTT处理细胞6、12和24 h后,细胞凋亡较0 h组显著增加;而经自噬诱导剂雷帕霉素预处理后,DTT诱导的细胞凋亡显著下降(P0.05)。结论:内质网应激可诱导自噬的发生,而雷帕霉素预处理可在一定程度上减轻内质网应激诱导的LO2细胞凋亡。     

津力达联合通心络减轻高糖环境下肾脏微血管内皮细胞内质网凋亡

目的:观察津力达联合通心络对高糖环境下肾脏微血管内皮细胞内质网凋亡途径的影响,探讨其减轻肾脏微血管内皮细胞损伤的作用机制。方法:将体外培养的肾脏微血管内皮细胞分为正常对照组、高糖组、通心络组、津力达组和通心络+津力达组。干预24 h后,CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率和活性氧簇(ROS)水平。Western blot检测蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、磷酸化PERK(p-PERK)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、caspase-12和Bcl-2的蛋白水平。结果:与正常对照组比较,高糖环境下肾脏微血管内皮细胞活力降低,细胞凋亡率增加,ROS生成增多,PERK、p-PERK、GRP78、CHOP和caspase-12的蛋白水平升高,而Bcl-2的蛋白水平下降(P0.05)。与高糖组比较,通心络、津力达和通心络+津力达均能不同程度地增强高糖环境下肾脏微血管内皮细胞活力,减少细胞凋亡和ROS生成,抑制PERK、p-PERK、GRP78、CHOP和caspase-12蛋白的水平,提高Bcl-2蛋白的水平(P0.05)。与津力达组和通心络组比较,通心络+津力达组各指标的差异均有统计学意义(P0.05)。结论:津力达和通心络均能够减轻高糖环境下肾脏微血管内皮细胞损伤,其机制与减轻内质网应激介导的凋亡途径有关;两者联合应用能够协同增强肾脏微血管内皮细胞保护作用。