精液冷冻前优化处理方式对精子冷冻复苏效果的影响

目的:探讨精液冷冻前优化处理方式对不同精子活力的精子冷冻复苏效果的影响。方法:选取符合条件的标本50份,每份标本等分4份,以原液作为对照(A组),分别采用三种不同方式[洗涤法(B组)、上游法(C组)和密度梯度离心法(D组)]进行处理,再行精子冷冻复苏。比较不同精子活力标本在不同优化方法处理后的精子冷冻复苏率。结果:精子冷冻复苏率由高至低排序为A组C组D组B组。B组和D组精子冷冻复苏率均显著低于A组(P0.05),C组与A组比较差异无统计学意义(P0.05)。低活力(前向运动精子PR≤32%)标本中,各处理方式精子冷冻复苏率比较差异无统计学意义(P0.05)。正常活力(前向运动精子PR32%)标本中,B组精子冷冻复苏率显著低于其余三组(P0.05),A组、C组、D组三组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:精液冷冻前优化处理方式对精子冷冻复苏率有影响,实际工作中,应根据精液的质量选择合适的精液冷冻前优化处理方式。     

两种冷冻保护剂对人精子冷冻复苏后活动能力的影响

目的探讨两种不同的精子冷冻保护剂TYB和HSPM对人精子复苏后前向运动百分率(a+b)%的影响。方法 25例禁欲2～7 d的健康男性精液同时采用两种冷冻保护剂进行冷冻,比较复苏后精子的前向运动百分率。结果冷冻前精子的前向运动百分率平均为(58.4±6.2)%,TYB和HSPM冷冻保护后复苏精子的前向运动百分率平均分别为(45.2±5.2)%和(42.5±4.6)%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TYB和HSPM对冷冻后复苏精子的前向运动无影响。     

两种冷冻保护剂对精子冷冻保护的效果比较

精液冷冻保护剂可以为三类,即单纯甘油型、甘油复合型以及无甘油型,其中甘油复合型由于效果较好,得到广泛应用.甘油复合型中根据其复合成分的不同,还可分为不同类型,如含有Tes-Tris、卵黄等的冷冻保护剂(TYB),含有卵黄、柠檬酸盐的冷冻保护剂(egg yolk-citrate medium, ECM),另外如含有人血清白蛋白(HSA)及HEPES的冷冻保护剂(human sperm preservation medium, HSPM).此前有学者[1]研究表明,ECM对精子冷冻的保护效果略差于HSPM.由于我们沿用的是自制ECM型的冷冻保护剂,因此,我们拟通过比较本所自制的ECM与商品化的HSPM,来探讨这两种冷冻保护剂的对精子的保护效果.已有研究[2]证实,精子的活动率和活力与精子的生育力明显相关,所以我们采用的比较参数是应用两种冷冻保护液后,其冻融精子活动率、活力及复苏率的变化.     

冷冻对人类精子的影响

自1949年发现甘油对冷冻精子的特殊保护作用后,有关精子冷冻技术的研究得到了长足的发展,我国也从2001年12月验收通过两家人类精子库始,人类精液冷冻技术逐步得到科学而规范地确立,并在辅助生殖方面得到了广泛的应用。但这项技术还远未完善,由于冷冻液的不同或配比的差异及操作中的误差,各家的冷冻保存效果也不尽相同,表面上看精子活率不同,实则对精子产生了各种不同程度的损害,影响了精子活力、精卵识别及授精能力,甚者对遗传物质产生了一定的损害。以下将从不同的角度综述冷冻对人精子的影响。     

精液优化处理前后精子畸形率的变化及其对人工授精结局的影响

目的：比较精子畸形率在精液优化处理前后的变化及对IUI妊娠结局的影响。方法：选择进行IUI助孕患者精液优化处理前后采用Diff-Quik染色法检测精子畸形率,分析精子形态在优化处理前后的变化及其与IUI临床妊娠率的关系。结果：132个IUI治疗周期中精子畸形率高于正常值的有95个周期,精液优化处理前后平均正常形态精子率（2.69±1.75）％ vs （3.62±2.50）％,平均精子畸形指数（SDI）1.32±0.15 vs 1.31±0.19,平均畸形精子指数（TZI）1.36±0.15 vs 1.36±0.19;精液优化处理后正常形态精子比率明显高于精液优化处理前（P＜0.05）,精子畸形指数及畸形精子指数优化处理前后比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。精液优化处理后正常形态精子率（normal morphology sperm rate,NMSR）仍未达标的72个治疗周期中,IUI临床妊娠12例,临床妊娠率16.67％;处理后精子正常形态率达标的60个治疗周期中,IUI临床妊娠7例,临床妊娠率11.67％,两组差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：密度梯度离心法处理精液后可以显著降低精子畸形率,但密度梯度离心处理后精子畸形率的高低与IUI妊娠结局无明显相关性。     

三种不同配比的保护剂对人类精子冷冻复苏后活动能力的比较

目的 比较添加葡萄糖与添加不同浓度蔗糖的冷冻保护剂对人精子冷冻复苏后的活动能力的影响。方法 将47份志愿者的标本分别采用三种不同的保护剂冷冻，比较精子复苏后的活动力。结果 冷冻前：前向活动精子百分率、总活动率分别为（60．4±6．4）％、（67．3±6．0）％；采用添加葡萄糖的冷冻保护剂冷冻复苏后的前向活动精子百分率、总活动率分别为（41．6±9．8）％、（50．7±10．2）％；采用添加0．1M蔗糖的冷冻保护剂冷冻复苏后的前向活动精子百分率、总活动率分别为（39．9％±8．0）％、（49．8±8．4）％；采用添加0．2M蔗糖的冷冻保护剂冷冻复苏后的前向活动精子百分率，总活动率分别为（29．7±7．7）％、（39．5±7．4）％。冷冻前后精子的前向活动百分率和总活动率差异有显著性，添加葡萄糖保护剂与0．1M蔗糖的保护剂相比差异无显著性但两者与添加0．2M蔗糖的保护剂比较差异有显著性。结论 冷冻对精子的活动力损伤明显；添加蔗糖作为精子的冷冻保护剂是可行的，较低浓度的蔗糖较高浓度的效果好。     

供精者冷冻精液参数对精子宫颈黏液穿透功能的影响

目的：通过检测冷冻精液相关参数,探讨影响精子宫颈黏液穿透功能的相关因素。方法选取41例准入合格的志愿供精者冷冻精液标本,按冷冻精子宫颈黏液穿透功能结果好、中、差不同分3组,对每组复苏后的供精者冷冻精液标本进行精液参数综合评估,包括精液常规、精子形态、精子的存活率（伊红Y染色）、精子膜功能、精子DNA完整性、精子顶体酶活性、酶活力指数等。采用方差分析以及3组之间两两比较进行统计分析。结果供精者冷冻精液解冻后前向运动精子百分率、精子膜结构与功能完整性在3组之间差异有统计学意义（P＜0.05）。3组之间精子DNA完整性和精子顶体酶活性差异无统计学意义（P＞0.05）。结论供精者冷冻精液解冻后前向运动精子百分率、精子膜结构与功能完整性是影响精子宫颈黏液穿透功能的主要因素。精子DNA完整性和精子顶体酶活性对精子宫颈黏液穿透功能并不构成影响。     

两种冷冻保护剂对精子冷冻保护的效果比较

精液冷冻保护剂可以为三类，即单纯甘油型、甘油复合型以及无甘油型，其中甘油复合型由于效果较好，得到广泛应用。甘油复合型中根据其复合成分的不同，还可分为不同类型，如含有Tes-Tris、卵黄等的冷冻保护剂(TYB)，含有卵黄、柠檬酸盐的冷冻保护剂(egg yolk-citrate medium，ECM)，     

小鼠精子冷冻的研究

目的：探索、建立一套小鼠精子冷冻方法。方法：通过CPS和RS318两种冷冻液对比试验；进行不同解冻法试验；对B6DF1、CD-1、DBA、C57BL／6四种品系小鼠精子分别进行快速冷冻和缓速冷冻，将解冻精子、鲜精与卵母细胞进行体外受精，并进行体外培养、胚胎移植，通过受精率和受孕率对冷冻方法进行筛选。结果：两种冷冻液试验、不同解冻法试验的受精率差异均无显著性。B6DF1、CD-1、C57BL-6品系小鼠快速冷冻精子解冻后与卵母细胞的体外受精率(35％、34％、17％)显著低于鲜精(60％、59％、34％)、缓速冷冻精子的受精率(62％、58％、30％)，此三种品系小鼠快速、缓速冷冻精子体外受精试验的受孕率均显著低于鲜精试验的受孕率。结论：缓速冷冻法是小鼠精子冷冻的适宜方法，干解冻法和稀释法处理冷冻液可简单有效地解冻精子。     

人精子冷冻前后穿卵试验的对比研究

对12名健康生育男性精液冷冻前后精子穿透去透明带金黄地鼠卵试验(SPA)变化进行了对比研究。献精者精子密度为124±38.8×10~6/ml,冷冻前精子活动率为75.6％±9.0％,冷冻后精子活动率为62.9％±11.9％,冷冻后精子活动率较冷冻前明显下降(t=4.18,P<0.01)。SPA值冷冻前为36.9％±11.8％,冷冻后为26.7％±9.7％,冷冻后SPA值较冷冻前显著降低(t=9.09,P<0.01)。冷冻后SPA值下降与精子活动率的降低无相关性(r=0.062,P>0.05)。     

乙酰左旋肉碱对人精子冷冻过程中氧化损伤的作用

目的:比较添加乙酰左旋肉碱的冷冻保护剂对人精子的冻存效果。方法:将30例患者的精液标本(15例正常精子与15例弱精子)液化,并PureSperm梯度离心处理后分为8组,分别为对照组(A1/A2组,仅冷冻保护剂),B1/B2组(2.5mmol/L乙酰左旋肉碱),C1/C2组(7.5mmol/L乙酰左旋肉碱),D1/D2组(15mmol/L乙酰左旋肉碱),液氮中冷冻2周,比较冻融前后各组精子存活率、活力、DNA完整性和活性氧(ROS)水平。结果:无论是正常精子组或弱精子组,精子解冻后的活力、存活率、DNA完整性较冷冻前下降,ROS水平升高。A1/A2组与B1/B2组精子解冻后的活力、存活率、DNA完整性和ROS水平比较无差异。C1/C2组和D1/D2组精子解冻后的活力、存活率、DNA完整性和ROS水平较A组明显升高,但C1/C2组和D1/D2组各项指标相比无差异。结论:玻璃化冻存对精子存在损伤,含7.5mmol/L乙酰左旋肉碱的冷冻保护剂可以提高人类精液的冻存效果。     

磷酸二酯酶抑制剂己酮可可碱对人精子受精力的影响

为进一步证明己酮可可碱(pentoxifylline,PF)对精子受精力的影响,对29例临床送检标本进行精液常规分析及体外受精实验.结果:6例精液常规及受精率均低于正常;14例精液常规正常, 但受精率低;9例精液常规及受精率均正常.所有标本均提取上游精子, 其中部分经体外获能后用作对照,部分用1mg/ml PF,37℃, 孵育0.5小时后再行体外获能.获能精子与去透明带金黄地鼠卵行异种体外受精,然后观察受精率,受精指数,及每个卵表面附着的精子平均数,结果提示PF对精液常规正常但受精力低下的精液标本有明显增强精子受精力的作用,这类患者精子经PF体外处理可能提高人工助孕技术的成功率.     

纤连蛋白抗血清对人精子受精能力的影响

采用体外异种穿卵试验的方法，研究纤连蛋白抗血清对人精子受精能力的影响，统计不同浓度的纤连蛋白抗血清作用下的穿卵率变化。结果发现：低浓度的纤连蛋白抗血清能使人精子穿透去透明带金黄地鼠卵的穿卵率有所提高；高浓度的纤连蛋白抗血清则对人精子的穿卵率无影响。     

The Effect of Fibronectin on the Fertilization Capacity of Human Spermatozoa

Fibronectin (Fn) is a major molecular glycoprotein that is known to play an important role in many systems involved in cell-to-cell interation and cell-to-matrix adhesion. We initially studied the effect of Fn on the fertilization capacity of human spermatozoa with a penetration test in vitro. Following co-incubation of Fn in a heterologous system (human spermatozoa and zona-free golden hamster oocytes ), we have noted a significant decrease in the rate of sperm penetration into oolemma at 2.8 μg Fn/ml,and a complete inhibition of fertilization at 15 μg Fn/ml. Besides, we noted a specific increase in the penetration rate during the co incubation of anti-Fn-serum in a heterologous system. These results suggest that extrinsic Fn binds with the Fn-receptor in the oolemma, thereby, competitively inhibiting fertilization.     

17β-雌二醇对人精子功能非基因组调节效应的机制研究

目的 分析17β-雌二醇非基因组效应的可能机制.方法 精子经各不同信号转导途径抑制剂处理后,再用10-6 mol/L非透膜性偶联牛血清白蛋白雌二醇(E2-BSA)处理精子,采用流式细胞术检测精子胞内钙离子浓度的变化;采用Western blot检测信号蛋白的激活情况,探讨雌激素对人精子功能的非基因组调节效应的机制.结果 用腺苷酸环化酶特异性抑制剂SQ22536、磷脂酶C(PLC)特异性抑制剂U73122和酪氨酸蛋白激酶特异性抑制剂Genistein处理精子后均明显抑制E2-BSA引起的精子胞内钙离子浓度的升高(P<0.05).用Western blot 方法检测到精子经10-6 mol/L E2-BSA处理后,PLC和蛋白激酶C(PKC)均被激活,并且传统雌激素胞浆受体阻断剂tamoxifen不能抑制PLC的激活.结论 17β-雌二醇可能通过腺苷酸环化酶、PLC或酪氨酸蛋白激酶信号转导途径实现对人精子功能调节的非基因组效应.     

Localization of Ureaplasma Urealyticum on Human Spermatozoa

Semen specimens were collected from 20 normal fertile men and 20 unexplained infertile men with U reaplasma urealyticum (U.U.) in semen. Spermatozoa of both groups were examined by immunogold technique and immunofluorescence test. A number of gold particles of the U. U. adhered to the sperm surface of infertile men were observed. Strong specific fluorescence was noticed on the sperm surface of infertile men, mostly on the midpiece and/ or postacrosomal region. A significant increase of sperm morphological abnormality, especially the swollen midpiece, the coiled tail, and head-tail angalation sperms was observed in infertile group. The sperm motility in infertile group is dramatically lower than that infertile group, It is hypothesized that teratospermia, poor motility and interference with sperm-ovum interaction might be the possible mechanisms for male infertility caused by Ureaplasma urealyticum.     

Effect of Spermatozoa Apoptosis on the Clinical Outcomes with Human in vitro Fertilization

Objective To analyze the effect of spermatozoa apoptosis on the clinical outcomes during in vitro Fertilization (IVF-ET). Methods A prospective analysis was carried out, 519 infertile couples were divided into 3 groups according to the clinical outcomes with IVF, including pregnancy and birth (liveborn group), pregnancy but abortion (miscarriage group), failure to pregnancy (failure group). Spermatozoa collected from 519 male partners were processed through density gradient centrifugation (DGC) and swim-up and the apoptosis of the spermatozoa, in ejaculated / processed semen, were evaluated using flow cytometry by determining the levels of disruption of mitochondrial membrane potential (d-MMP) and activation of caspase-3 (CP3). Results For ejaculated semen, apoptosis was significantly different among 3 groups individually, the result was as follows: liveborn group < failure group < miscarriage group (P<0.05). For processed semen, miscarriage had the highest apoptosis level (P<0.05), and there was no significant difference between liveborn group and failure group (P>0.05). Compared with the d-MMP, the activation of CP3, either in ejaculated or processed semen, showed more powerful predictive value for miscarriage other than liveborn and failure. The cutoff value of CP3 in ejaculated semen was 42.0%, with sensitivity: 0.931, specificity: 0.804. Conclusion The level of apoptosis of spermatozoa played a strongly impact on the clinical outcomes with IVF and the activation of CP3 in ejaculated semen possessed a high predictive value for miscarriage.     

雌激素对正常人精子受精能力的影响及其机制初探

目的 研究雌激素物质17β-雌二醇(E2)对正常生育男性体外受精能力的影响,并初步探讨其可能的机制.方法 精子悬液中分别加入不同浓度的E2及非透膜性交联物雌二醇一牛血清白蛋白(E2-BSA),获能4h后行体外受精,观察卵子受精率(FR)和受精指数(FI)的变化;进一步去除培养液中钙离子(Ca2+),再次观察无钙环境下E2对人精子FR和n的影响.结果 一定浓度的E2(1μmol/L、10μmol/L)可显著提高人精子的FR和FI(P＜0.05),较低和较高浓度的E2(0.1μmol/L、100μmol/L)则对人精子FR和FI无显著影响(P＞0.05);另外,非透膜性大分子物质E2-BSA(2mg/L)也可明显提高人精子的FR和FI(P＜0.05).去除获能液中的Ca2+后,E2对人精子FR和FI无显著影响(P＞0.05).结论 培养液中加入一定浓度的E2可提高人精子的体外受精率,其作用机制可能是通过与精子膜上的雌激素受体或雌激素结合位点相互作用后促进胞外Ca2+内流而实现的.     

夫精宫腔内人工授精患者心理状况对妊娠率的影响

目的分析在心理状况对夫精宫腔内人工授精患者妊娠率的效果。方法在驻马店市中心医院2018年6月—2018年12月间治疗夫精宫腔内人工授精患者中选取100例,并严格按照就诊顺序分为对照组和观察组,每组各50例患者。其中对照组采用常规护理方法,观察组采用心理护理,观察对比两组患者妊娠率、双胎发生率和生化率情况以及护理前后焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS)评分。结果护理前两组患者SAS、SDS评分差异无统计学意义(P>0.05),护理后对照组SAS、SDS评分均高于观察组,且对照组妊娠率为12.00%,双胎发生率为0.00%,生化率为16.00%;观察组妊娠率为34.00%,双胎发生率为47.06%,生化率为4.00%。对照组妊娠率和双胎发生率低于观察组,生化率高于观察组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论予以夫精宫腔内人工授精患者心理护理效果显著,可有效提高患者妊娠率和双胎发生率,降低生化情况,改善其心理状况,值得推广。     

人类畸形精子与常染色体异常

目的：探讨精子形态与精子常染色体异常的关系,为胞质内精子显微注射（ICSI）时的精子选择原则提供实验依据。方法：应用荧光原位杂交（FISH）技术对1例罕见的大头多尾畸形精子进行了13和21号染色体整倍体检查。结果：发现精子13和21号染色体的非整倍体率远高于同类研究,分别达51．59％和65．15％;多体的组成比相近,且与多尾有大致的平行关系;21和性染色体有较13号更高的非整倍体率。结论：尽管体细胞染色体正常,畸形精子仍可伴有严重的染色体数目异常。提示与形态学改变有一定的相关性。