微小RNA-23b-3p通过靶向TGFBR3促进人心房肌成纤维细胞纤维化相关基因表达

目的:探究微小RNA-23b-3p(mi R-23b-3p)对人心房肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达的作用及其可能作用靶基因。方法:分离并体外培养房颤患者心耳中原代心房肌成纤维细胞,并用细胞免疫荧光染色实验鉴定;双萤光素酶报告基因实验检测mi R-23b-3p与潜在靶基因转化生长因子β受体3(TGFBR3) 3'端非翻译区(3'-UTR)的结合作用; CCK-8、Ed U染色及Transwell实验检测细胞活力、增殖及迁移能力,RT-qPCR和Western blot法检测TGFBR3及纤维化相关基因的m RNA和蛋白表达。结果:在人心房肌成纤维细胞中过表达mi R-23b-3p不影响细胞的活力、增殖及迁移能力,但可显著增强细胞中纤维化相关基因COL1A1、COL3A1和ACTA2的表达(P 0. 05或P 0. 01)。双萤光素酶报告基因实验显示mi R-23b-3p与TGFBR3 3'-UTR有结合作用。RT-qPCR和Western blot结果证实mi R-23b-3p可在转录水平抑制TGFBR3表达。过表达mi R-23b-3p和沉默TGFBR3均能显著促进人心房肌成纤维细胞中Smad3激活和纤维化相关基因表达(P 0. 05或P 0. 01)。结论:TGFBR3是mi R-23b-3p的作用靶基因,并介导mi R-23b-3p促进心房肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达。     

lnc AL928768.3通过miR-92a-3p/ADAM10轴对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的:探讨lnc AL928768.3如何通过miR-92a-3p/解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)轴调控类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(SFs)增殖和凋亡。方法:qPCR检测RA患者滑膜组织lnc AL928768.3和miR-92a-3p表达。生物信息学手段和双荧光素酶报告基因实验分析lnc AL928768.3、miR-92a-3p与ADAM10的靶向关系,Western blot分析ADAM10表达。MTT检测MH7A细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。Western blot检测MH7A细胞增殖和凋亡相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)和活化的半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)表达。结果:lnc AL928768.3在RA患者滑膜组织中呈高表达,而miR-92a-3p呈低表达。生物信息学和双荧光素酶报告基因实验证实,lnc AL928768.3可靶向负调控miR-92a-3p表达,且ADAM10是miR-92a-3p的直接靶基因。抑制lnc AL928768.3表达或敲低ADAM10表达均可抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡;干扰miR-92a-3p能够逆转抑制lnc AL928768.3对MH7A细胞增殖抑制和凋亡的促进作用;过表达lnc AL928768.3或干扰miR-92a-3p表达能够逆转敲低ADAM10对MH7A细胞增殖抑制和凋亡的促进作用。结论:lnc AL928768.3在RA患者滑膜组织中表达上调,抑制lnc AL928768.3通过miR-92a-3p/ADAM10轴抑制MH7A细胞增殖并促进细胞凋亡。     

miR-323通过FGF9调控缺氧诱导的心肌H9C2细胞凋亡

目的:探讨微小RNA-323(miR-323)对缺氧诱导大鼠心肌H9C2细胞凋亡的影响及其机制。方法:建立缺氧损伤的H9C2细胞模型,在H9C2细胞转染anti-miR-323、pcDNA-FGF9和si-FGF9,并缺氧处理48 h。采用qPCR检测miR-323的表达, Western blot检测成纤维细胞生长因子9(FGF9)、cleaved caspase-3、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p-JNK的蛋白水平,MTT比色法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡。生物学信息预测miR-323的靶基因并用双萤光素酶报告基因进一步验证。结果:缺氧明显降低H9C2细胞12 h、24 h和48 h的细胞活力(P<0.05),显著提高细胞凋亡率和cleaved caspase-3的蛋白水平(P<0.05),效应均呈时间依赖性。缺氧处理的H9C2细胞中miR-323和p-JNK水平上调,FGF9蛋白表达下调(P<0.05)。下调miR-323表达或过表达FGF9显著提高缺氧处理的H9C2细胞活力,降低细胞凋亡率和cleaved caspase-3蛋白的水平(P<...     

TWEAK诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞合成MMP-3的实验研究

目的:通过观察TWEAK在不同浓度下对RA FLS诱导合成MMP-3的影响,探讨TWEAK参与类风湿关节炎(RA)关节骨及软骨破坏的相关机制,进而寻求治疗RA的新途径.方法:将rhTWEAK与成纤维样滑膜细胞(FLS)共培养,应用ELISA法检测细胞培养液中MMP-3水平;用反转录-聚合酶反应(RT-PCR)检测FLS中MMP-3 mRNA的表达水平.结果:TWEAK终浓度为50、100μg/L组诱导RA FLS合成MMP-3的水平明显高于对照组,具有显著的统计学意义(P＜0.05);TWEAK终浓度为100μg/L诱导RA FLS的MMP-3 mRNA表达水平为对照组的1.26倍,具有显著的统计学意义(P＜0.05);TNF-α和IL-1β对TWEAK诱导RA FLS合成MMP-3及MMP-3 mRNA表达具有协同作用,协同作用组MMP-3的水平及MMP-3mRNA表达水平明显高于单纯TWEAK组,具有显著的统计学意义(P＜0.05).结论:TWEAK通过诱导RA FLS合成MMP-3,直接参与RA的关节损伤,TNF-α和IL-1β在此过程中发挥协同作用.     

青藤碱对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞MyD88、TRAF-6表达的影响

目的:探讨青藤碱(Sinomenine,SIN)对TLR信号转导通路及髓样分化因子88(Myeloid differentiation factor88,My D88)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(Tumor necrosis factor receptor associated factor-6,TRAF-6)表达的影响,阐明SIN抑制类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(Fibroblast-like synoviocytes,FLS)增生导致RA软骨和软骨下骨破坏造成关节畸形的作用机制。方法:体外培养RA-FLS细胞,分为对照组与(0.125、0.25、0.5、1 mmol/L)SIN组,通过检测各组细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性,确定体外用药最佳药物浓度;CCK-8法检测0.5 mmol/L SIN组的细胞增殖率;荧光定量PCR法测定对照组与0.5 mmol/L SIN组My D88和TRAF-6基因表达;Western blot法检测对照组与0.5 mmol/L SIN组My D88和TRAF-6蛋白表达。结果:SIN各组ALP活性均低于对照组,其中以0.5 mmol/L SIN组的ALP活性为最低(P<0.01)。CCK-8法检测,0.5 mmol/L SIN组RA-FLS细胞增殖率明显低于对照组(P<0.01),SIN诱导第4天细胞增殖率最高,进入平台期,之后细胞的增殖率开始下降。荧光定量PCR和Western blot法检测,0.5 mmol/L SIN组的My D88和TRAF-6基因及蛋白表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:SIN通过对TLR信号转导通路的影响有效地抑制RA-FLS细胞内My D88和TRAF-6的表达,这可能是其治疗RA防止软骨和软骨下骨破坏造成关节畸形发生的重要分子机制之一。     

NR2F1-AS1靶向miR-212-3p/GSK-3β影响类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡

为探讨核受体亚族2F组成员1的反义RNA 1(nuclear receptor subfamily 2 group F member 1 antisense RNA 1,NR2F1-AS1)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)滑膜成纤维细胞(synovial fibroblast, SF)增殖和凋亡的影响及可能的机制,首先以正常SF为对照,采用qRT-PCR检测RA-SF中NR2F1-AS1和miR-212-3p表达,Western blotting检测糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)蛋白表达,然后转染NR2F1-AS1小干扰RNA、miR-212-3p模拟物、GSK-3β小干扰RNA或共转染NR2F1-AS1小干扰RNA与miR-212-3p抑制剂至RA-SF,用CCK-8法检测细胞增殖,FACS检测细胞凋亡,Western blotting检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和裂解的Caspase-3(cleaved-Caspase...     

CircSERPINE2靶向miR-23a-3p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制北大核心CSCD

目的：探讨CircSERPINE2对类风湿关节炎（RA）滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法：选取于武汉市第四医院就诊的44例RA患者和健康体检者的外周血,培养滑膜成纤维细胞（FLSs）和RA滑膜成纤维细胞（RA-FLSs）,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CircSERPINE2和miR-23a-3p表达水平;将RA-FLSs随机分为NC组、pcDNACircSERPINE2组、pcDNA组、anti-miR-23a-3p组、anti-miR-NC组、miR-23a-3p+pcDNA-CircSERPINE2组、miR-NC+pcDNA-CircSERPINE2组;CCK-8检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移数和侵袭数;双荧光素酶报告实验检测CircSERPINE2和miR-23a-3p的靶向关系。结果：RA患者外周血中CircSERPINE2表达水平低于健康体检者,而miR-23a-3p表达水平高于健康体检者（P<0.05）。与FLSs比较,RA-FLSs中CircSERPINE2表达水平降低,而miR-23a-3p表达水平升高（P<0.05）。过表达CircSERPINE2或抑制miR-23a-3p表达,细胞活性降低,迁移和侵袭细胞数减少（P<0.05）。CircSERPINE2靶向调控miR-23a-3p。miR-23a-3p过表达可逆转CircSERPINE2过表达对RA-FLSs的影响。结论：CircSERPINE2过表达可通过靶向调控miR-23a-3p抑制RA滑膜成纤维细胞的增殖、迁移和侵袭。     

TWEAK诱导成纤维样滑膜细胞合成MMP-9的研究

目的 通过探讨p38MAPK(mitogen-activated protein kinases)信号通路在肿瘤坏死因子样凋亡的微弱诱导剂(TWEAK)诱导风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)合成基质金属蛋白酶9(MMP-9)过程中的作用,寻求RA治疗的新靶点.方法 将rhTWEAK与FLS共培养,Western blot法检测FLS中p-p38MAPK和p65的表达;对经或未经SB203580预处理的FLS,应用ELISA法检测细胞培养液中MMP-9水平,RT-PCR法检测FLS中MMP-9 mRNA的表达水平.结果 100 ng/ml的TWEAK作用于RA FLS,能够使p38MAPK磷酸化,并使细胞核内p65蛋白表达增加;SB203580能够部分抑制TWEAK诱导RA FLS合成的MMP-9及MMP-9 mRNA的表达.结论 TWEAK诱导RA FLS合成IVlbtP-9过程中,p38MAPK信号通路处于激活状态,可诱导NF-κB表达.     

沉默PGRN基因对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的：探讨沉默颗粒蛋白前体（PGRN）基因对类风湿关节炎（RA）滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法：按照脂质体法将siRNA PGRN、siRNA NC转染至RA滑膜成纤维细胞MH7A,记为siRNA NC组、siRNA PGRN组,对照组（Control）未进行转染处理;将siRNA PGRN转染RA滑膜成纤维细胞MH7A后,加入丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路激活剂Anisomycin,记为siRNA PGRN+Anisomycin组。采用qRT-PCR检测各组细胞PGRN mRNA表达水平;噻唑蓝（MTT）、克隆形成实验检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测各组细胞凋亡变化;Western blot检测各组细胞PGRN、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原（PCNA）、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bax)蛋白、MAPK通路蛋白表达。结果：与Control组、siRNA NC组相比,siRNA PGRN组内PGRN mRNA及蛋白表达、克隆形成率、存活率明显降低,凋亡率明显升高,Cyclin D1、PCNA、Bcl-...     

LncRNA Gm15621通过调控miR-133a/SOCS2轴抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞炎症

目的探讨lncRNA Gm15621和miR-133a在类风湿关节炎滑膜组织中的表达及其与滑膜组织中成纤维样滑膜细胞炎症调控的关系。方法于2018年1月到2018年12月收集53例类风湿关节炎滑膜组织和20例正常滑膜组织,通过qPCR技术检测不同患者滑膜组织Gm15621和miR-133a的表达情况,免疫印迹法检测滑膜成纤维细胞SOCS2等蛋白的表达情况。结果类风湿关节炎患者滑膜组织Gm15461表达水平是正常滑膜组织的(43.06±2.48)%,miR-133a表达水平是正常组织的(2.94±0.13)倍;类风湿关节炎患者滑膜组织Gm15621表达水平与血清TNF-α(r=-0.441,P=0.001 1),IL-6(r=-0.442,P=0.0017)和IL-1β(r=-0.532,P<0.001)呈负相关,与滑膜组织中miR-133a(r=-0.629,P<0.001)表达呈负相关。荧光素酶报告基因显示:Gm15621和SOCS2都是miR-133a的靶基因,且miR-133a靶向抑制成纤维样滑膜细胞Gm15621和SOCS2,Gm15621抑制成纤维样滑膜细胞中miR-133a的表达。在体外,SOCS2敲低可以显著上调成纤维样滑膜细胞中TNF-α,IL-6和IL-1β的表达。结论类风湿关节炎患者滑膜组织中Gm15621低表达,miR-133a高表达,并且Gm15621通过抑制成纤维样滑膜细胞中miR-133a的表达促进SOCS2的表达,最终发挥抑制炎症因子表达的效果。     

Fractalkine对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响

目的明确fractalkine(CX3CL1)对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)增殖的影响。方法通过组织块法培养RA-FLS。分别用0、50、100ng/mL重组人fractalkine刺激RA-FLS24h,用四唑盐(MTT)法检测其吸光度值,比较各组间增殖率。结果 50ng/ml及100ng/ml fractalkine均可促进RA-FLS增殖(P=0.005,P=0.022)。结论 Fractalkine可促进RA-FLS的增殖,可部分解释RA-FLS自主增殖的特性。     

湖北枫杨总黄酮通过调控PI3K/AKT信号通路抑制成纤维细胞样滑膜细胞的迁移和侵袭

目的：观察湖北枫杨总黄酮（PHSTF）对人类风湿成纤维细胞样滑膜细胞（MH7A细胞）迁移和侵袭的抑制作用并初步探讨其可能作用机制。方法：将MH7A细胞分为分为对照组（不做任何处理）、低剂量（6.25 mg/L）PHSTF组、中剂量（12.5 mg/L）PHSTF组、高剂量（25 mg/L）PHSTF组、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）激动剂740Y-P(10μmol/L)组和740Y-P(10μmol/L)+高剂量（25 mg/L）PHSTF组。采用CCK-8法检测MH7A细胞活力;划痕实验和Transwell实验检测MH7A细胞的迁移和侵袭;Western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白水平。结果：与对照组相比,各剂量PHSTF组MH7A细胞活力显著降低（P<0.05）,划痕愈合面积显著减小（P<0.01）,迁移和侵袭至下室的细胞显著减少（P<0.01）,MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值显著降低（P<0.01）。与高剂量PHSTF组相比,PI...     

STF-31对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和凋亡影响的机制分析

目的 观察STF?31对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RAFLs)的增殖以及凋亡的作用并分析其机制。方法 应用2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L浓度的STF?31处理RAFLs,并设置一组不加STF?31的空白对照。分别于24 h、48 h以及72 h进行下述指标观察：以MTT法检测STF?31对RAFLs细胞的增殖抑制效果;通过倒置显微镜观察STF?31作用后的细胞形态学改变;以ATP试剂盒分析STF?31作用后的RAFLs细胞内ATP水平;通过JC?1得到给药后RAFLs内线粒体膜电位的变化;以流式细胞术双染法观察STF?31作用于RAFLs细胞48 h后产生的细胞凋亡比率;应用Western blot法检测STF?31作用在RAFLs后的凋亡相关蛋白Bax、Bcl?2以及p?Akt的表达。结果 STF?31随着浓度增加、时间延长,可以更好地抑制RAFLs细胞的增殖(P<0.05),作用RAFLs细胞24 h、48 h和72 h的IC₅₀分别为9.870、1.400和0.513μmol/L;镜下观察到STF?31作用在RAFLS细胞后,RAL...     

PTEN在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的表达及意义

目的:探讨第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)在人类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)中的表达水平及意义。方法:利用组织块法获得并体外培养人RA-FLS、骨关节炎(OA)-FLS及关节创伤-FLS;采用实时荧光定量PCR法检测各组FLS中PTEN mRNA表达水平的差异;采用Western blotting法检测各组FLS的PTEN蛋白表达水平以及Akt Thr308位点磷酸化水平的差异。结果:(1)RA-FLS中的PTEN mRNA表达水平显著低于OA-FLS及关节创伤-FLS(P0.01),而OA-FLS与关节创伤-FLS之间的PTEN mRNA表达水平无统计学差异。(2)RA-FLS的PTEN蛋白表达水平显著低于OA-FLS及关节创伤-FLS(P0.05),而OA-FLS与关节创伤-FLS之间的PTEN蛋白表达水平无统计学差异。(3)RA-FLS中的Akt蛋白Thr308位点磷酸化水平显著高于OA-FLS及关节创伤-FLS(P0.01),且OA-FLS中该位点的磷酸化水平显著低于关节创伤-FLS(P0.01)。(4)RA-FLS中的PTEN蛋白水平与Akt Thr308位点磷酸化水平呈显著负相关(P0.01)。结论:RAFLS中PTEN基因呈低水平表达,可能与Akt Thr308位点磷酸化水平异常增高相关。     

类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MICA及其受体NKG2D表达的初步研究

目的:探讨共育培养体系中RA患者滑膜成纤维细胞MICA mRNA及T淋巴细胞表面活化受体NKG2D mRNA表达的改变及其在RA免疫机制中的作用.方法:RA滑膜成纤维细胞与Jurkat T细胞株以相同浓度共育培养.MTT法测定共育培养后T淋巴细胞的扩增能力,实时荧光定量PCR方法测定T淋巴细胞NKG2D mRNA的表达水平及滑膜成纤维细胞MICA mRNA、TNF-α mRNA的表达水平,并分别与单纯培养组比较.结果:共育培养组与单纯培养组比较,第4天T淋巴细胞增殖率明显增加(P＜0.001),其NKG2D mRNA的表达水平明显升高;同时滑膜成纤维细胞MICA mRNA及TNF-α mRNA表达水平也升高.结论:共育培养的RA滑膜成纤维细胞和T淋巴细胞可能通过MICA-NKG2D结合激活T淋巴细胞,RA滑膜成纤维细胞分泌的TNF-α很可能在诱导T淋巴细胞NKG2D表达升高中发挥着重要作用.     

RICTOR对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活力的影响

 目的：通过siRNA介导的RNA干扰技术沉默类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）mTORC2的特异组成蛋白RICTOR的表达,观察其对细胞活力的影响。方法：组织块法培养RA-FLS。应用阳离子脂质体转染的方法,把化学合成的特异性RICTOR siRNA转染RA-FLS,并以转染非特异性siRNA作为阴性对照。利用荧光定量PCR法分析转染24 h后细胞RICTOR mRNA表达水平的变化;Western blotting法分析转染48和72 h后细胞RICTOR蛋白表达水平的变化;以噻唑蓝（MTT）比色法检测转染成纤维样滑膜细胞不同时间（24、48和72 h）RICTOR siRNA对细胞活力的影响。结果：荧光定量PCR结果显示特异性RICTOR siRNA转染组与对照组相比,细胞中RICTOR的mRNA表达水平显著下调,24 h干扰效率达78.3%±63.71%（P<0.01）。Western blotting结果显示与对照组相比,RICTOR siRNA转染组48 h和72 h后RICTOR蛋白表达水平明显降低,沉默效率分别为92.48%±6.14%和98.57%±1.40%（均P<0.01）。MTT结果显示,早期（24和48 h）RICTOR siRNA转染组与阴性对照组细胞存活率比较无显著差异;72 h后,RICTOR siRNA转染组与阴性对照相比,细胞活力明显降低,抑制率为90.14%±1.90%（P<0.01）。结论：转染特异性RICTOR siRNA可降低RA-FLS的活力,提示mTORC2可能与RA-FLS的生长有关。     

IL-22对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的作用

目的:探究白细胞介素(IL)-22对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLSs)功能的影响及机制。方法:组织块法培养RA-FLSs。将不同浓度(0、1、10、100μg/L)的重组人源性IL-22(rhIL-22)与RA-FLSs共培养24 h、48 h、72 h,CCK-8法检测细胞活力的改变;利用10μg/L的rhIL-22作用于RA-FLSs 24 h,流式细胞术检测细胞周期改变。rhIL-22和/或信号转导和转录因子3(STAT3)特异性抑制剂STA-21以不同浓度作用RA-FLSs 24h,Western blot法检测Bcl-2和p-STAT3蛋白水平的变化。结果:不同浓度的rhIL-22作用于RA-FLSs 24 h、48 h、72h后,RA-FLSs细胞活力明显增高,均显著高于对照组(P0.05)。rhIL-22刺激RA-FLSs后,S期和G_2/M期细胞明显增多,G_0/G_1期细胞减少。Western blot法检测结果提示rhIL-22可上调RA-FLSs中Bcl-2、p-STAT3的蛋白水平,而STA-21单用或联用rhIL-22均可抑制RA-FLSs中Bcl-2及p-STAT3的表达(P0.05)。结论:IL-22在RA-FLSs细胞活力和周期调节中起重要作用,且STAT3在IL-22促RA-FLSs细胞Bcl-2表达的过程中起关键作用,提示IL-22可能对RA-FLSs凋亡有一定的影响。     

miR-29a对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-29a对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)活力和凋亡的影响。方法分离培养健康人FLS(n-FLS)和RA患者FLS(RA-FLS);Western blot检测n-FLS和RA-FLS中标志物CHI3L1蛋白表达;将miR-29a mimics、si-NFAT5及miR-29a+NFAT5转染RA-FLSs,转染48 h后,RT-qPCR检测miR-29a和NFAT5 mRNA表达;MTT法及流式细胞计量术分别检测各组细胞活力和凋亡率;Western blot检测p38、p-p38、cleaved-caspase3蛋白表达;通过双荧光报告基因检测系统检测过表达或抑制miR-29a后NFAT5表达,验证miR-29a和NFAT5的靶向关系。结果与n-FLS比较,RA-FLS中CHI3L1蛋白表达明显升高(P<0.05);过表达miR-29a或抑制NFAT5后,RA-FLS细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,p-p38表达明显降低,cleaved-caspase3表达明显升高(P<0.05)。miR-29a与野生型NFAT5 3′UTR共转染组RA-F...     

miR-181b-5p通过靶向结合PAX9促进人急性髓细胞性白血病细胞增殖并诱导其凋亡

目的 探究miR-181b-5p通过靶向结合配对盒基因9(PAX9)对急性髓细胞性白血病(AML)细胞增殖和凋亡的影响。方法 分别用基因表达谱交互分析(GEPIA)数据库和肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析AML患者中PAX9的表达水平和预后的关系。在Kasumi-1细胞和AML5细胞中转染空载体(Vector组)或PAX9(PAX9组),CCK-8法检测细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Western blot法检测细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)和细胞周期蛋白B1(CCNB1)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、 Bcl2相关X蛋白(BAX)的表达。生物信息学分析预测PAX9靶作用的微小RNA(miRNA)、荧光素酶报告系统验证其靶向作用,实时定量PCR检测PAX9 mRNA水平,Western blot法检测PAX9蛋白表达。在Kasumi-1细胞和AML5细胞中转染miR-NC(miR-NC组)或miR-181b-5p(miR-181b-5p组),在miR-181b-5p组细胞中进一步转染PAX9(miR-181b-5p联合PAX9组),采用前述方法分别检测细...     

TRPC6在IL-1β诱导类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞增殖中的作用

目的:应用RNA干扰技术研究瞬时受体电位通道6(TRPC6)对IL-1β诱导的类风湿关节炎(RA)成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)增殖的影响。方法:RT-qPCR法检测RA和骨关节炎(OA)患者滑膜组织中TRPC6 mRNA的表达水平。组织块联合酶消化法培养RA-FLS。流式细胞术鉴定RA-FLS。将不同浓度(0、0.25、0.5、1、2、4、8、16μg/L)的重组人IL-1β与RA-FLS共培养36 h,CCK-8法检测细胞活力的改变;16μg/L的IL-1β作用RA-FLS不同时间(12、24、36、48、60、72 h),CCK-8法检测细胞活力的改变。特异性TRPC6-siRNA转染RA-FLS后,采用RT-qPCR和Western blotting检测沉默效率。在IL-1β存在和不存在的条件下,CCK-8法、Ed U标记法和流式细胞术检测TRPC6干扰组与对照组的细胞活力、Ed U阳性细胞比率和(G_2/M+S)期比率的差异。结果:RA患者滑膜组织中TRPC6的mRNA表达水平相对于OA患者明显增加(P0.05)。TRPC6-siRNA能显著降低RA-FLS中TRPC6 mRNA和蛋白的表达(P0.05)。IL-1β能诱导RA-FLS增殖(P0.05)。沉默TRPC6后,在IL-1β的诱导环境下,特异性干扰组RA-FLS的活力、Ed U阳性细胞比率和(G_2/M+S)期比率与空白组和对照组相比均明显降低(P0.05),而在不含IL-1β的条件下,干扰组与空白组和对照组相比差异均无统计学显著性。结论:TRPC6参与IL-1β诱导的RA-FLS增殖过程,沉默TRPC6能降低IL-1β诱导的RA-FLS增殖水平。