ClC-3在神经病理性痛大鼠脊髓背角及背根神经节的表达及其参与痛行为调控的研究

目的:观察电压门控性氯通道(voltage-gated chloride channel,ClC)3型在腓总神经结扎神经病理性痛模型大鼠脊髓背角(spinal dorsal horn,SDH)和背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)内的表达变化及阻断氯离子通道后痛行为的改变。方法:应用免疫组织化学染色法、蛋白印迹法以及痛行为检测观察ClC-3在神经病理性痛大鼠SDH和DRG的变化和作用。结果:在正常大鼠,ClC-3主要位于DRG神经元胞膜;在SDH,ClC-3阳性纤维主要位于Ⅰ层。在腓总神经结扎大鼠,1周内结扎侧背角Ⅰ层及DRG的ClC-3表达增加,2～4周表达逐渐减少,在DRG也观察到相同的现象。给予氯离子通道阻断剂后,腓总神经结扎大鼠的痛阈下降。结论:ClC-3在神经病理性痛早期表达上调,随病程发展逐渐下降;阻断ClC-3可使大鼠痛阈下降。     

急性肺损伤大鼠肺组织骨桥蛋白表达及骨桥蛋白对TNF-α、IL-10表达的影响

目的:观察脂多糖(LPS)所致急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织骨桥蛋白(OPN)的表达及OPN对ALI大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNFα-)、白细胞介素10(IL-10)表达的影响。方法:将56只SD大鼠按随机数字表分为对照组8只、ALI组和干预组各24只,ALI组和干预组再分为2、4、8小时各8只。对照组经尾静脉注射生理盐水1 ml,ALI组和干预组经尾静脉注入LPS液1ml(含LPS 6 mg/kg),5分钟后干预组再尾静脉注入抗骨桥蛋白抗体(1∶32)0.5 ml,而对照组和ALI组注射生理盐水0.5 ml。检测各组大鼠动脉血氧分压(PaO2)、肺湿/干重比(W/D);比较肺组织病理学改变和肺损伤评分;采用免疫印迹法(Western blot)检测肺组织匀浆OPN表达,酶联免疫吸附(ELISA)法测定大鼠TNFα-、IL-10的变化。结果:①ALI组2、4、8小时PaO2均较对照组明显降低(P<0.01);干预组PaO2较ALI组同时间点明显升高(P<0.05)。②肺W/D、肺损伤评分:ALI组2、4、8小时均较对照组明显升高(P<0.01),而干预组在相同时间点较ALI组降低(P<0.05)。③ALI组2、4、8小时血清IL-10较对照组明显升高(P<0.01);干预组血清IL-10较ALI组同时间点明显升高(P<0.05)。ALI组各时间点血清TNFα-及TNFα-/IL-10比值均较对照组明显升高(P<0.01);而干预组较ALI组同时间点显著降低(P<0.01)。④ALI组2、4、8小时大鼠肺组织匀浆OPN蛋白较对照组明显升高(P<0.01);干预组与ALI组同时间点比较无显著差异(P>0.05)。结论:LPS致ALI大鼠肺组织OPN表达增加,OPN可加重LPS致大鼠ALI,其机制可能与OPN上调TNFα-及下调IL-10表达有关。     

慢性心力衰竭大鼠模型TNF-α、IFN-γ、IL-4和IL-10的表达

目的：检测慢性心力衰竭病程肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factorα,TNF-α）、干扰素-γ（inter-feron-γ,IFN-γ）、白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）和白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）水平的动态变化,以期探讨慢性心力衰竭过程免疫系统状况变化。方法：采用纯种Wistar大鼠作为实验动物,分为正常对照组、假手术组和模型组,每个亚组均10只。采用腹主动脉结扎方法制作慢性心力衰竭模型。术后每两周行超声心动图、血液动力学检测,并取静脉血放射免疫分析进行TNF-α、IFN-γ、IL-4和IL-10的检测。结果：腹主动脉结扎后3月内是心功能代偿期,6月时是心功能失代偿期。在心力衰竭进程中,TNF-α和IFN-γ先降低后升高,IL-4和IL-10水平先升高后降低。结论：心力衰竭的不同进程,免疫机制发生变化,心功能代偿期以体液免疫为主,心功能失代偿期以细胞免疫为主。     

IL-12对小鼠哮喘模型气道炎症及TNF-α和IL-10水平的影响

支气管哮喘(简称哮喘)是由多种细胞和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病[1],被世界卫生组织列为疾病中四大难症之一[2],在世界范围内广泛流行。已成为美国18岁以下人群住院的第3位原因,     

糖皮质激素受体激动剂地塞米松对大鼠血清促炎因子IL-6、TNF-α表达及神经病理性疼痛的影响

目的:探索坐骨神经分支选择性损伤诱导的早期神经病理性疼痛(SNI)模型中给予糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)激动剂对痛行为及促炎因子IL-6、TNF-α分泌的影响。方法:成年雄性SD大鼠随机均分为四组:Sham+Vehicle(生理盐水组),SNI+Vehicle组,SNI+DEX(GR激动剂地塞米松)组,SNI+RU(GR抑制剂米非司酮)组。Von Frey纤维丝检测各组大鼠缩足阈值(paw withdrawal threshold,PWT)的变化;Western Blot和免疫荧光染色检测各组脊髓中GR的表达水平;Elisa检测血清IL-6和TNF-α表达变化。结果:与SNI+Vehicle组比较,SNI+DEX组大鼠PWT阈值和脊髓GR的表达增高(P<0.05),血清IL-6和TNF-α浓度降低(P<0.05);SNI+RU组大鼠PWT阈值和脊髓GR表达降低(P<0.05),血清IL-6和TNF-α浓度升高(P<0.05)。结论:GR在脊髓水平能够通过下调促炎因子IL-6和TNF-α的表达缓解SNI诱导的早期神经病理性疼痛。     

COPD患者治疗前后血清IL-10、IL-18和TNF-α检测的临床意义

目的：探讨了慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者治疗前后血清IL-10、IL-18和TNF-α水平的变化及意义。方法：应用放射免疫分析和酶免法对31例COPD患者进行了治疗前后血清IL-10、IL-18和TNF-α检测,并与35名正常健康人作比较。结果：COPD患者在治疗前血清IL-10、IL-18和TNF-α水平非常显著地高于正常人组（P〈0.01）,综合治疗后2周,与正常人组比较仍有显著性差异（P〈0.05）。结论：血清IL-10、IL-18和TNF-α可能以不同的方式参与了COPD的发病,其检测对于了解病情、指导治疗具有重要的临床价值。     

青藤碱和甲氨蝶呤对降植烷诱导的关节炎大鼠血清IL-10和TNF-α的影响

目的:探讨青藤碱和甲氨蝶呤对降植烷诱导的关节炎大鼠(pristane induced arthritis,PIA)血清白细胞介素-10(interleuk in-10,IL-10)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-,αTNF-α)的影响。方法:将40只Lew is大鼠随机平均分为5组,即正常组、模型组、青藤碱组、MTX组、青藤碱 MTX组,除正常组大鼠,在其它大鼠尾根部位皮内注射0.2m l/只剂量的降植烷以建立PIA模型,同时口服青藤碱(120mg.kg-1.d-1)和/或MTX(3.8mg.kg-1.w-1)共8w。正常对照组大鼠皮内注射等量的生理盐水并口服生理盐水(10mg/kg/w)。给药8w后采血,用放射免疫分析检测血清IL-10和TNF-α的水平。结果:MTX组大鼠血清IL-10(及TNF-α)水平均明显低于模型组大鼠(P<0.05);模型组大鼠血清TNF-α含量明显高于正常对照组和含MTX治疗组(P<0.05),与单用青藤碱治疗组比较无显著性差异。结论:甲氨蝶呤可能对PIA大鼠血清IL-10和TNF-α均有明显抑制作用。     

地奥司明对肾缺血/再灌注大鼠血清和肾组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10水平的影响

目的:观察地奥司明(DOSM)对肾缺血/再灌注(I/R)大鼠血清和肾组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10水平的影响,并探讨其对肾脏的保护机制。方法:180只SD大鼠随机分成3组:假手术组(sham)、肾缺血/再灌注模型组(I/R)和地奥司明+肾缺血/再灌注模型组(DOSM+I/R)。采用ELISA方法测定血清和肾脏组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10的水平,同时检测血肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平。结果:在1 h、3 h、6 h、12 h、24 h和48 h不同时点的血清和肾组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10水平在I/R和DOSM+I/R组均显著高于sham组(P<0.01或P<0.05),且在I/R和DOSM+I/R组TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8随病程进展而升高,在I/R组IL-10水平随病程进展降低,而在DOSM+I/R组IL-10水平随病程进展而升高,TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平在I/R组显著高于DOSM+I/R组(P<0.05或P<0.01,除血清TNF-α1 h组外),而IL-10水平在DOMS+I/R组显著高于I/R组(P<0.01或P<0.05)。血Cr和BUN水平在DOSM+I/R组显著低于I/R组(P<0.05或P<0.01)。结论:DOSM可减少肾I/R病理过程中促炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的产生,促进抗炎细胞因子IL-10的产生,有助于减轻I/R时炎性细胞因子瀑布样级联反应,发挥抗炎作用,从而减轻缺血再灌注损伤,保护肾功能。     

无镁诱导培养大鼠海马神经元癫痫放电模型电压门控性钠通道Na_v1.1和钙调蛋白的异常表达

目的利用无镁细胞外液诱导原代培养大鼠海马神经元癫痫放电模型来检测电压门控性钠通道Nav1.1和钙调蛋白的表达与定位。方法采用新生24h内Wistar大鼠,取海马进行神经元原代培养。体外培养至10d,无镁细胞外液处理(实验组)或正常细胞外液(对照组)处理神经元3h后,一部分细胞应用全细胞膜片钳技术记录神经元的放电情况并应用免疫印迹法检测电压门控性钠通道Nav1.1和钙调蛋白的蛋白表达;另一部分细胞用正常培养液继续培养12h后分别通过免疫印迹法和免疫荧光双标法检测Nav1.1和钙调蛋白的蛋白表达与共定位。结果无镁细胞外液处理3h后的神经元存在自发的"癫痫样"放电,而与正常细胞外液处理组相比,Nav1.1和钙调蛋白表达不变;无镁处理3h正常培养液再继续培养12h后,与正常细胞外液处理组相比,神经元Nav1.1表达上调,而钙调蛋白表达不变。另外,与正常细胞外液处理组相比,Nav1.1和钙调蛋白共定位的阳性细胞数增加。结论 Nav1.1和钙调蛋白的表达与定位变化可能与无镁诱导体外培养大鼠海马神经元自发异常放电的基础病理机制相关。     

大豆皂甙对糖尿病大鼠血清及心肌组织IL-6和TNF-α表达的影响

目的:监测大豆皂甙对糖尿病大鼠血清及心肌组织IL-6和TNF-α表达的影响,探讨大豆皂甙对糖尿病大鼠心肌组织的保护机制.方法:以Wistar雄性大鼠为研究对象,将实验动物分为三组即对照组、糖尿病模型组(DM)和大豆皂甙给药组(SS),三组动物分别每日给予柠檬酸缓冲液、生理盐水、大豆皂甙(SS,10 mg/Kg)灌胃3个月,采用ELISA酶联免疫法检测血清及心肌组织IL-6和TNF-α的蛋白含量;采用流式细胞免疫学法检测心肌组织IL-6和TNF-α的百分率;采用HE染色检测心肌组织的病理改变;采用免疫组织化学法检测心肌组织IL-6和TNF-α的阳性表达强度.结果:与对照组相比较,ELISA和流式细胞免疫学检测均显示,糖尿病模型组血清及心肌组织IL-6和TNF-α的水平显著升高有统计学意义(P＜0.01);大豆皂甙给药组血清及心肌组织IL-6和TNF-α的水平略升高但无统计学意义(P＞0.01);免疫组化染色糖尿病模型组心肌组织IL-6和TNF-α的阳性强度明显高于大豆皂甙给药组和对照组有显著差异(P＜0.01).HE染色显示糖尿病模型组大鼠心肌排列紊乱、心肌间有大量炎细胞浸润.结论:大豆皂甙可减轻糖尿病大鼠心肌组织中炎症细胞因子IL-6和TNF-α的表达,从而起到保护心肌的作用.     

氯胺酮鞘内给药对神经病理性痛大鼠脊髓背角小胶质细胞活化、TNF-α和IL-1β产生的影响

目的:探究鞘内注射氯胺酮(ketamine,KTM)对坐骨神经结扎(CCI)神经病理性疼痛大鼠模型行为、脊髓背角肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素1β(IL-1β)以及小胶质细胞标记蛋白OX42表达的影响。方法:(1)建立CCI模型大鼠,鞘内注射KTM或MI(米诺四环素)进行干预,测定大鼠机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。(2)运用ELISA法检测TNF-α和IL-1β表达水平。(3)使用Western Blot法检测OX42的表达情况。结果:(1)KTM组和MI组大鼠MWT和TWL值较CCI组显著升高;KTM组大鼠MWT和TWL值高于CCI组(P0.05)。(2)KTM组和MI组TNF-α和IL-1β表达水平低于CCI组(P0.05);其中KTM组TNF-α和IL-1β表达水平显著高于MI组(P0.05)。(3)KTM组和MI组OX42表达水平显著低于CCI组;KTM组OX42表达水平高于MI组(P0.05)。结论:鞘内KTM可以抑制脊髓背角小胶质细胞激活,减少TNF-α和IL-1β表达,显著改善坐骨神经结扎引起的神经病理性疼痛。     

脂肪源性干细胞移植对糖尿病周围神经病大鼠坐骨神经TNF-α和MBP表达的影响

目的研究脂肪源性干细胞(ADSC)移植对糖尿病周围神经病(DPN)大鼠坐骨神经中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和髓磷脂碱性蛋白(MBP)表达的影响。方法大鼠随机分为正常组、模型组和ADSC组。链脲佐菌素腹腔注射制备实验DPN大鼠模型,ADSC组尾静脉注射ADSC细胞悬液,造模后14 d检测各组血糖及坐骨神经传导速度,实时荧光定量PCR检测坐骨神经TNF-α和MBP mRNA表达。结果与正常组比较,模型组和ADSC组血糖显著增高,神经传导速度显著降低,坐骨神经TNF-α和MBP mRNA表达显著上调。与模型组比较,ADSC组神经传导速度显著增高,坐骨神经TNF-α和MBP mRNA表达显著下降。结论脂肪源性干细胞下调糖尿病周围神经病坐骨神经TNF-α和MBP mRNA表达。     

丹参注射液治疗对膝骨性关节炎模型兔关节软骨中TNF-α、IL-6、MMP-3表达的影响

目的 研究丹参注射液治疗膝骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型兔关节软骨中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-6、基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)的表达情况,探讨丹参注射液治疗膝骨性关节炎的分子机制。方法 选用40只健康白兔,随机分成四组,即假手术组、KOA模型(KOA)组、KOA+透明质酸钠(sodium hyaluronate,SH)组、KOA+丹参组。假手术组只作切口,不切断半月板,其余组均采用切断兔右膝关节半月板的方式,建立一个兔关节失稳的实验动物模型。KOA组给予0.9%生理盐水(0.7 mL/d),KOA+SH组给予兔关节内注射SH(0.4 mL/d),KOA+丹参组给予丹参注射液(0.7 mL/d),均连续注射5周。采用矿场实验验证兔失稳模型建立是否对兔的运动能力产生影响,并采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和Western blot法分别检测兔膝关节软骨中TNF-α、IL-6、MMP-3的mRNA含量和蛋白表达量。酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测兔膝关节液中TNF-α、IL-6、MMP-3的含量。结果 在KOA模型建立之前,各实验组动物均无明显的运动能力差异,模型建立之后,KOA组兔子运动的距离明显低于假手术组[(150±5)比(580±9),t=60.610,P<0.05],而KOA+丹参组与KOA组相比,家兔移动的距离明显增加,差异具有统计学意义[(438±27)比(150±5),t=16.730,P<0.05]。KOA组兔关节液中TNF-α、IL-6和MMP-3含量明显高于假手术组[(22.62±2.18)mg/mL比(11.74±2.09)mg/mL,(4.01±0.14)mg/mL比(1.76±0.11)mg/mL,(0.57±0.05)mg/mL比(0.27±0.03)mg/mL,t值分别为4.413、17.620、6.495,P值均<0.05];KOA+丹参组兔关节液中TNF-α、IL-6、MMP-3含量较KOA组明显降低,差异具有统计学意义[(15.01±2.37)mg/mL比(22.62±2.18)mg/mL,(2.47±0.19)mg/mL比(4.01±0.14)mg/mL,(0.40±0.02)mg/mL比(0.57±0.05)mg/mL,t值分别为3.725、8.803、9.185,P值均<0.05]。在兔膝关节软骨的mRNA的检测中,KOA组TNF-α、IL-6、MMP-3的含量较假手术组明显升高[(1.90±0.02)比(1.00±0.15),(1.70±0.02)比(1.00±0.07),(1.60±0.20)比(1.00±0.13),t值分别为11.050、24.250、14.850,P值均<0.05];KOA+丹参组中TNF-α、IL-6、MMP-3的含量较KOA组相比明显降低,差异具有统计学意义[(1.09±0.05)比(1.90±0.02),(1.13±0.09)比(1.70±0.02),(1.04±0.08)比(1.60±0.20),t值分别为32.190、8.822、5.868,P值均<0.05)。在兔膝软骨的蛋白检测中,KOA组TNF-α、IL-6、MMP-3的蛋白表达量较假手术组明显升高,差异具有统计学意义(t值分别为65.280、12.320、22.280,P值均<0.05);KOA+丹参组中TNF-α、IL-6、MMP-3的蛋白含量较KOA组明显降低,差异具有统计学意义(t值分别为26.150、9.053、24.670,P值均<0.05)。结论 丹参注射液可以明显改善KOA组兔的运动能力,同时也降低了TNF-α、IL-6、MMP-3的水平,因此丹参注射液治疗膝骨性关节炎可能是抑制了骨基质蛋白酶的释放,抑制关节软骨的降解,对关节软骨的退行性病变起到控制作用,最终改善膝骨性关节炎的症状。     

青藤碱抑制NLRP3和下游致炎因子表达改善佐剂性关节炎大鼠关节炎症状

目的 探讨青藤碱对佐剂性关节炎(AA)大鼠的抗炎作用及含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(NLRP3)的变化。方法 Wistar大鼠随机分为对照组、 AA模型组、(100、 200、 400)mg/kg青藤碱组和100 mg/kg雷公藤组,每组10只。除对照组外,其余均采用Freund完全佐剂建立AA模型。建模后12 d,对照组和模型组给予等量生理盐水,其余各组分别灌胃给予相应药物,每天1次,连续16 d。通过多发性关节炎和关节肿胀度评价AA大鼠关节情况,Western blot法检测滑膜组织NLRP3蛋白水平,免疫组织化学染色法检测滑膜组织NLRP3表达和分布;ELISA检测大鼠血清白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果 与对照组比较,模型组多发性关节炎明显,关节肿胀度增加,青藤碱各治疗组和雷公藤组大鼠多发性关节炎和关节肿胀度明显降低;青藤碱各治疗组滑膜组织NLRP3蛋白表达减弱,血清中IL-1β、 IL-6、 TNF-α水平显著下降。结论 青藤碱通过抑制NLRP3和下游致炎因子表达改善AA大鼠关节炎症。