栝楼桂枝汤对氧糖剥夺诱导的HT22细胞损伤保护作用机制研究

目的研究栝楼桂枝汤(GLGZD)对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)诱导的小鼠海马HT22神经细胞损伤的保护作用机制。方法将HT22细胞分为正常组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。正常组在完全培养基,37℃、5%CO₂恒温培养箱中培养;模型组经OGD/R诱导损伤,完全培养基培养24 h后,将完全培养基更换无糖EBSS培养基后,置于1%O₂、5%CO₂、94%N₂低氧培养工作站培养90 min,再将无糖EBSS培养基更换为完全培养基,放置于37℃、5%CO₂恒温培养箱复氧培养24 h,复氧复糖;低、中、高剂量组在经OGD/R诱导损伤,复氧复糖过程中分别于完全培养基中加入50、100、200μg/mL GLGZD药液。CCK-8法检测各组细胞生长活力,根据细胞生长活力百分比,筛选GLGZD最佳干预浓度为200μg/m L。后续将HT22细胞分为正常组、模型组、GLGZD组,正常组和模型组细胞处理同前,GLGZD组在经OGD/R诱导损伤,复氧复糖过程中于完全培养基中加入200μg/...     

天麻蛋白对OGD/R诱导的HT22细胞损伤的保护作用及机制研究

目的 研究天麻蛋白对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导的HT22细胞损伤的保护作用及机制。方法 将体外HT22细胞常规培养,生长至对数生长期后铺板并随机分为对照组、OGD/R组、依达拉奉组、天麻蛋白组。以连二亚硫酸钠(Na₂S₂O₄)10 mmol·L^-1合并无糖DMEM培养基造成氧糖剥夺培养2 h,继而恢复为无血清高糖DMEM培养2 h进行复糖复氧处理,以建立体外OGD/R模型。依达拉奉和天麻蛋白为自氧糖剥夺前24 h开始即加入相应药物终浓度,持续至复糖复氧结束。采用MTT法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)法测定LDH泄露率,试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性,丙二醛(MDA)含量及活性氧(ROS)水平,流式细胞技术Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡,Western blot检测OGD/R诱导损伤的HT22细胞内Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3、p-AMPK、AMPK、Nrf2、Nrf2入核、HIF-1 α、V...     

巴利森苷A对氧糖剥夺/复糖复氧损伤的HT22细胞的保护作用

目的：探讨巴利森苷A(PA)对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤的HT22细胞的保护作用。方法：将HT22细胞随机分为6组，分别是空白组(Control组)、OGD/R组、依达拉奉(EDA)组、PA低剂量组(40μmol·L^-1)、PA中剂量组(80μmol·L^-1)、PA高剂量组(160μmol·L^-1)。以连二亚硫酸钠(Na₂S₂O₄)10 mmol·L^-1合并无糖DMEM培养基造成氧糖剥夺培养2 h,然后恢复为无血清高糖DMEM培养2 h作复糖复氧处理，以建立体外OGD/R模型。EDA和PA组自氧糖剥夺前24 h即加入相应药物的浓度，一直持续到复糖复氧结束。采用MTT比色法检测细胞存活率；乳酸脱氢酶(LDH)法测定细胞损伤率；采用试剂盒法检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、丙二醛(MDA)含量及细胞内的活性氧(ROS)水平；Western blot法检测各组细胞缺氧诱导因子通路相关蛋白HIF-...     

通窍活血汤含药脑脊液调控ASK1/MKK4/JNK信号通路对OGD/R损伤HT22细胞的保护作用北大核心CSCD

该文探讨通窍活血汤含药脑脊液(TQHXD-CSF)对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤小鼠海马神经元(HT22)细胞的保护作用及其作用机制是否与调控ASK1/MKK4/JNK信号通路有关.将HT22细胞随机分为5组,分别为空白脑脊液组(control组)、OGD/R组、TQHXD-CSF组、凋亡抑制剂组(Z-VAD-FMK,20μmol·L^(-1))、TQHXD-CSF+凋亡抑制剂组.除control组外,其余各组细胞在氧糖剥夺6 h后迅速复糖复氧12 h进行OGD/R造模并分组给药.CCK8法检测HT22细胞活力,LDH试剂盒检测乳酸脱氢酶释放量,倒置显微镜观察HT22细胞形态.Western blot检测Bax、Bcl-2和caspase-3的蛋白表达情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Bax、Bcl-2和caspase-3的mRNA水平.再将HT22细胞随机分为6组,分别为control组、OGD/R组、si-NC组、si-ASK1组、TQHXD-CSF组、TQHXD-CSF+si-ASK1组.CCK8法检测细胞活力,细胞动态分析仪动态监测细胞增殖,Hoechst染色和流式细胞术检测HT22细胞凋亡情况,Western blot检测MKK4、p-MKK4、JNK、p-JNK、c-Jun、p-c-Jun、Cyt C、Bax、Bcl-2和caspase-3的蛋白表达情况.结果显示,与OGD/R组相比,TQHXD-CSF可以显著提高细胞存活率,改善细胞形态,降低Bax/Bcl-2、caspase-3蛋白和mRNA的表达量.当沉默ASK1后,与OGD/R组相比,TQHXD-CSF组细胞存活率显著提升,降低细胞荧光强度,降低细胞凋亡率,p-MKK4、p-JNK、p-c-Jun、Cyt C、Bax/Bcl-2和caspase-3的蛋白表达量减少,但其效果不及TQHXD-CSF+si-ASK1组.综上,TQHXD-CSF可抑制OGD/R损伤的HT22细胞ASK1/MKK4/JNK通路介导的细胞凋亡,对缺血再灌注神经元细胞损伤具有保护作用.     

罗布麻提取物对神经元缺氧复氧损伤的保护作用

目的研究罗布麻提取物（Apocynum venetumL.Extract,AVLE）对神经元缺氧复氧损伤的保护作用。方法将培养7天的新生SD大鼠皮层神经元细胞随机分为空白对照组、模型组和AVLE低、中、高浓度组。除空白对照组外,其余各组制作原代培养皮层神经元氧糖剥夺（OGD）再复氧模型,AVLE各浓度干预组分别加入浓度为50μg/ml、500μg/ml、5 000μg/ml的AVLE;分别观察各组OGD复氧后的0h、3h、6h、12h、24h、48h和72h等时间点细胞形态学、细胞毒作用、细胞线粒体活性、细胞凋亡率及凋亡相关蛋白表达量的变化情况。结果与模型组比较,AVLE能明显减少神经元LDH的释放,提高线粒体活性,对OGD神经元的保护呈一定的浓度与时间依赖关系。AVLE能显著抑制OGD神经元的凋亡,有效抑制Bax蛋白的表达,上调bcl-2的表达。结论 AVLE对OGD诱导的神经元损伤有一定的神经保护作用,可能成为新颖有效的防治急性缺血性卒中的神经保护药物之一。     

毛蕊异黄酮苷和芍药苷联用对氧糖剥夺再灌注HT22细胞PI3K/AKT信号通路的影响

目的观察并探讨毛蕊异黄酮苷和芍药苷联用对氧糖剥夺再灌注诱导的HT22细胞氧化应激损伤的作用及其机制。方法建立HT22细胞氧糖剥夺再灌注损伤模型,将HT22细胞分为正常对照组、模型组、给药组、尼莫地平组,应用CCK-8法检测细胞存活率,测定毛蕊异黄酮苷和芍药苷联用对HT22细胞活力的影响,检测细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量,并采用Western Blot法检测PI3K、AKT蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,氧糖剥夺再灌注处理组的HT22细胞存活率明显降低(P<0.01),LDH活性及MDA的含量升高(P<0.05,P<0.01),SOD活力降低(P<0.01),PI3K、AKT蛋白表达明显下降(均P<0.01);与模型组相比,给药组能明显提高氧糖剥夺再灌注损伤后HT22细胞的存活率(P<0.01),降低LDH、MDA的含量(P<0.05,P<0.05),SOD活力提高(P<0.01),PI3K、AKT蛋白表达升高(均P<0.01)。结论毛蕊异黄酮苷和芍药苷联用对氧糖剥夺再灌注诱导的HT22细胞氧化应激损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能通过调节PI3K/AKT信号通路实现。     

刺五加提取物对人神经细胞SH-SY5Y氧糖剥夺再灌注损伤的保护作用研究＊

目的 研究一种刺五加提取物对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y氧糖剥夺再灌注（Oxygen and Glucose Deprivation/Reperfusion，OGD/R）后损伤的影响。方法 体外培养SH-SY5Y细胞，并分成空白对照组（Natural Control，NC）、氧糖剥夺再灌注模型组（OGD/R）、阳性对照组（80 μM 依达拉奉Edaravone+ OGD/R）、刺五加提取物中剂量组（500 μg·mL^-1+ OGD/R）、刺五加提取物高剂量组（1000 μg·mL^-1+ OGD/R）。其中，NC组给予DMEM/F12培养基培养，模型组给予氧糖剥夺6 h、复氧复糖再培养12 h处理。各组采用MTT法检测细胞活力，流式细胞术检测凋亡水平，多功能酶标仪及荧光显微镜检测活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛含量（MDA）。结果 与模型组相比，刺五加提取物能显著降低OGD/R引起的SH-SY5Y细胞凋亡；降低活性氧及丙二醛水平，提高超氧化物歧化酶活力，提高胞内ATP水平。结论 刺五加提取物可通过抑制氧化应激、保护线粒体功能和抑制细胞凋亡来减轻SH-SY5Y细胞氧糖剥夺后再灌注损伤的作用。     

川芎嗪与黄芪甲苷配伍对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制

摘要：目的：研究川芎嗪与黄芪甲苷及不同浓度配伍对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）氧化损伤模型的保护作用及机制。方法：建立H2O2诱导损伤模型,将细胞分为十七组,空白对照组、过氧化氢(0.2mmol/L)模型组,川芎嗪（40,80,160μg/mL）剂量组、黄芪甲苷（10,20,40μg/mL）剂量组及两两配伍组,MTT法检测不同浓度川芎嗪、黄芪甲苷及其配伍对氧化损伤人脐静脉内皮细胞的增值影响,筛选出最佳配伍比例;检测最佳配伍组MDA含量和SOD活性,Annexin V- FITC/PI 染色荧光显微镜观察细胞凋亡率, Western Blot 检测 p- Akt 和Akt 蛋白的表达 ,RT-PCR检测AKt mRNA的表达。结果： 与模型组相比,川芎嗪与黄芪甲苷不同浓度配伍组均能提高细胞存活率,且川芎嗪（80μg/mL）剂量组 黄芪甲苷（40μg/mL）剂量组具有极显著差异(P<0.001);川芎嗪、黄芪甲苷配伍组降低细胞MDA含量(P<0.001),提高细胞SOD活力(P<0.001)。同时,川芎嗪、黄芪甲苷配伍组能降低细胞凋亡率（P<0.01）,上调 p-Akt/Akt蛋白（P<0.01）,上调Akt基因mRNA的表达（P<0.001）。结论：川芎嗪（80μg/mL） 黄芪甲苷（40μg/mL）对 H2O2诱导的 HUVECs氧化损伤有保护作用,能缓解氧化应激诱导的 HUVECs 凋亡,其机制与 PI3K/Akt 信号通路有关     

注射用丹参多酚酸通过调节Akt/mTOR通路介导的自噬对氧糖剥夺/再灌注Neuro-2a细胞凋亡的影响

目的 研究注射用丹参多酚酸（SalvianolateLyophilizedInjection,SLI）对氧糖剥夺/再灌注（oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R）损伤小鼠脑神经瘤细胞株Neuro-2a的保护作用及机制。方法 体外培养Neuro-2a细胞,建立OGD/R损伤模型,给予SLI(10、25、50μg/mL)以及自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）干预,检测SLI对OGD/R损伤Neuro-2a细胞存活率、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）漏出量及细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)的释放;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;采用Western blotting法检测凋亡及自噬相关蛋白的表达情况。结果 与OGD/R组比较,SLI显著提高OGD 4 h/R 24 h Neuro-2a细胞存活率（P<0.05、0.01）,降低LDH漏出量（P<0.05、0.01）,抑制细胞凋亡和细胞内Cyt-C释放（P<0.05、0.01）,调节活化的半胱氨酸天...     

苦碟子注射液对氧糖剥夺/复氧损伤大鼠C6胶质细胞IκBα/NF-κB蛋白的调节作用

目的研究苦碟子注射液对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤大鼠C6胶质细胞的保护作用及对IκBα/NF-κB蛋白活化的影响。方法将C6胶质细胞分为空白对照组、OGD/R模型组、苦碟子注射液组,采用OGD/R方法建立C6胶质细胞损伤模型。MTT法确定氧糖剥夺/复氧时间和苦碟子注射液的最佳有效浓度;LDH漏出率检测细胞死亡率;Western Blot法检测p-IκBα/IκBα、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达。结果 C6胶质细胞OGD/R时间为OGD24h/R6h,苦碟子注射液最佳浓度为1.25%。OGD/R损伤后,细胞IκBα和NF-κB的表达上调及磷酸化蛋白增加;苦碟子注射液能够显著降低细胞死亡率,降低细胞p-IκBα和p-NF-κB蛋白高表达。结论 OGD/R损伤C6胶质细胞,促进了IκBα/NF-κB磷酸化,苦碟子注射液可抑制C6胶质细胞中IκBα/NF-κB磷酸化活化,降低细胞死亡率,对胶质细胞起到保护作用。     

体外培养海马神经元糖氧剥夺损伤模型的建立及川芎嗪对其胞内钙离子的影响

目的研究川芎嗪对体外培养海马神经元糖氧剥夺损伤细胞内钙离子[Ca^2＋]i的影响。方法建立体外培养海马神经元糖氧剥夺（OGD）模型,应用激光共聚焦显微技术检测不同剂量川芎嗪对OGD状态下海马神经元内Ca^2＋的影响。结果成功建立海马神经元OGD模型,经检测模型组[Ca^2＋]i高于空白对照组（P〈0．05）;阳性药组和川芎嗪大、中剂量组[Ca^2＋]i均低于模型组（P〈0．05）。结论海马神经元OGD存在钙超载,川芎嗪具有钙拮抗作用,对脑组织有保护作用。     

异甘草素对氧糖剥夺/复糖复氧损伤SH-SY5Y细胞的保护作用

目的研究异甘草素对氧糖剥夺/复糖复氧损伤SH-SY5Y细胞的保护作用。方法细胞SH-SY5Y建立OGD/R损伤细胞模型。NC Nrf2-siRNA、siRNA-Nrf2质粒转染SH-SY5Y细胞,并培养48 h,20μmol/L异甘草素预处理2 h后构建OGD/R损伤,24 h后继续加入20μmol/L异甘草素再培养24 h。OGD/R损伤48 h后,测定细胞活力,LDH水平,caspase-3、caspase活性,ROS、MDA、SOD、GSH水平;RT-PCR检测Bcl-2、Bax、NQO1、HO-1 mRNA表达;Western blot检测HO-1蛋白表达。结果 OGD/R诱导SH-SY5Y细胞活力降低,caspase-3、caspase活性升高,ROS、MDA水平升高,SOD、GSH-Px水平降低,Bcl-2、NQO1、HO-1 mRNA及HO-1蛋白表达降低,Bax mRNA表达增高(P<0.01);经异甘草素干预后,OGD/R SY5Y细胞活力升高,caspase-3、caspase活性降低,ROS、MDA水平降低,SOD、GSH水平及Bcl-2、NQO1、HO-1...     

三七总皂苷对氧糖剥夺损伤的小鼠星形胶质细胞谷氨酸摄取的影响

目的：探讨三七总皂苷对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的星形胶质细胞谷氨酸摄取能力的影响。方法：体外培养ICR小鼠大脑皮层星形胶质细胞，分为正常组、模型组(OGD 6 h/R 24 h)和三七总皂苷组(OGD 6 h/R 24 h+20μg·mL^-1)。免疫细胞荧光染色鉴定GFAP标记星形胶质细胞；采用CCK-8法检测星形胶质细胞活力，同时检测细胞外液LDH的释放；采用生化法检测细胞Na⁺-K⁺-ATPase活性、细胞谷氨酸摄取率；Western Blot法和RT-PCR法检测细胞GLT-1、GS mRNA表达及蛋白水平变化。结果：经特异性蛋白GFAP鉴定，细胞呈阳性表达。OGD/R损伤后，星形胶质细胞活力降低，LDH释放增多(P<0.01)。细胞对谷氨酸的摄取率明显降低(P<0.01),Na⁺-K⁺-ATPase活性降低，同时GLT-1和GS mRNA表达和蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。三七总皂苷干预后，细胞活力明显增强(P<0.05),LDH...     

银杏叶提取物对氧糖剥夺诱导的体外培养大鼠星形胶质细胞损伤的影响

目的应用体外培养的大鼠脑皮层星形胶质细胞,观察银杏叶提取物（EGb761）对氧糖剥夺再复氧导致细胞损伤的影响,并探讨其作用机制。方法以连二亚硫酸钠和无糖DMEM液造成化学性氧糖剥夺（OGD）模型模拟体内脑缺血再灌注损伤。利用WST-1法检测细胞活性、细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）检测细胞损伤程度、GFAP染色及Hoechst 33258染色观察细胞形态变化和凋亡,免疫蛋白印迹法测定bcl-2、bax、cas-pase-3蛋白的表达。结果 OGD处理90 min再复氧24 h能使细胞存活率明显下降,LDH漏出量增高,细胞形态损伤性改变、凋亡细胞增多,并能下调bcl-2/bax比值和上调caspase-3表达。而给予EGb761可逆转上述变化,减轻细胞损伤。结论 EGb761对OGD/R诱导的星形胶质细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与调整bcl-2/bax比值、抑制caspase-3激活对抗细胞凋亡有关。     

黄芩苷通过上调miR-190表达缓解缺氧缺糖对神经细胞损伤的研究

目的探讨黄芩苷对缺氧缺糖(oxygen-glucosedeprivation,OGD)诱导的神经元细胞增殖、凋亡、炎症、氧化应激的影响及其对miR-190的调控作用。方法采用OGD处理小鼠海马神经元HT22细胞建立细胞损伤模型,使用不同剂量(10、30mg/L)的黄芩苷处理HT22细胞,分别将miR-NC、miR-190mimics转染至HT22细胞后进行OGD处理(OGD+miR-NC组、OGD+miR-190组);分别将anti-miR-NC、anti-miR-190转染至HT22细胞后使用黄芩苷处理24h,随后进行OGD处理(OGD+黄芩苷+anti-miR-NC组、OGD+黄芩苷+anti-miR-190组);采用MTT法检测细胞增殖情况;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用ELISA法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平;采用2,4-二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性;采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(su...     

苦碟子注射液对氧糖剥夺损伤的C6胶质细胞凋亡与自噬调节作用

目的:研究苦碟子注射液对氧糖剥夺损伤C6胶质细胞凋亡与自噬的调节作用,明确其对氧糖剥夺损伤胶质细胞的保护作用。方法:采用氧糖剥夺/复氧(OGD/R)的方法建立C6胶质细胞损伤模型,按随机数字表法分为空白对照组、氧糖剥夺/复氧模型组、苦碟子注射液组、自噬抑制剂(3-MA)组4组,Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫荧光染色法观察活化caspase-3表达,western blotting法检测LC3Ⅱ蛋白表达。结果:氧糖剥夺/复氧损伤后LC3Ⅱ蛋白表达增加,细胞凋亡率升高,苦碟子注射液能够显著降低C6胶质细胞凋亡率,增加LC3Ⅱ蛋白高表达。结论:苦碟子注射液能够降低C6胶质细胞凋亡率,进一步激活细胞自噬而发挥保护作用。     

丹参-葛根提取物对氧糖剥夺/复氧损伤人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的保护作用

目的：基于氧化应激和凋亡探究丹参-葛根提取物对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤SH-SY5Y细胞的保护作用。方法：采用水提法制备不同配伍比例丹参-葛根提取物,体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞并建立OGD/R损伤模型,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法筛选最佳配伍比例提取物用于后续实验。将SH-SY5Y细胞分为空白组、OGD/R组和丹参-葛根(SP)提取物低、中、高剂量组(10、30、100 mg·L^-1),除空白组外,其余各组细胞在氧糖剥夺4 h后迅速复氧12 h进行OGD/R造模。采用CCK-8法检测细胞存活率,显微条件下观察细胞形态,分光光度计法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量,2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法(DCFH-DA)检测细胞活性氧(ROS)水平,JC-1法检测线粒体膜电位,Hoechst 33342染色法观察细胞核形态,流式细胞术结合异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染检测细胞凋亡。结果：丹参-葛根2∶1配伍时SH-SY5Y细胞的...     

壮通饮抑制NADPH氧化酶2对糖氧剥夺诱导星形胶质细胞损伤的保护作用

目的：探讨壮通饮对星形胶质细胞糖氧剥夺（OGD）损伤的保护作用,并从NADPH氧化酶2(NOX2）抑制途径探讨其保护作用发挥的机制。方法：原代培养星形胶质细胞,制成糖氧剥夺损伤模型,分为对照组、糖氧剥夺组、糖氧剥夺+壮通饮组（浓度20mg·L-~1,40mg·L-~1,80mg·L-~1）,糖氧剥夺+夹竹桃麻素组（浓度0.05mg·L~(-1)、0.25mg·L~(-1)、0.5mg·mL~(-1)）。免疫荧光观察细胞纯度,CCK-8试剂盒测定细胞活力,Western Blot检测NOX2蛋白表达。结果：糖氧剥夺诱导星形胶质细胞损伤后复氧8h和24h,壮通饮（40mg·L~(-1)、80mg·L~(-1)和80mg·L~(-1)）分别能提高星形胶质细胞活力。Western Blot显示壮通饮（20mg·L~(-1)、40mg·L~(-1)、80mg·L~(-1)）和夹竹桃麻素（0.25mg·L~(-1)、0.5mg·mL~(-1)）均能抑制糖氧剥夺/再灌注后NOX2活性。结论：壮通饮可以抑制NOX2的活性,保护糖氧剥夺诱导的星形胶质细胞损伤。     

通窍活血汤含药脑脊液对OGD/R损伤大鼠BMECs的保护作用

目的:探讨通窍活血汤含药脑脊液对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的保护作用及潜在机制。方法:通过酶消化法提取原代BMECs,并将细胞随机分为6组,分别为正常组,OGD/R组,通窍活血汤(TQHXT)组(20%),尼莫地平(NMDP)组(10μmol·L~(-1)),卡博替尼(BMS)组(1μmol·L~(-1))和合用药组。除正常组外,其余各组细胞在氧糖剥夺2 h后迅速复糖复氧24 h进行OGD/R造模并分组给药。采用细胞免疫荧光染色法鉴定BMECs,观察OGD/R损伤大鼠BMECs的形态学和超微结构改变并检测细胞跨膜电阻(TEER)值变化。用试剂盒检测细胞内一氧化氮(NO)水平、乳酸脱氢酶(LDH)活性、活性氧(ROS)荧光强度和组织型纤溶酶原激活因子(tPA)含量。采用流式细胞术检测细胞内钙离子浓度及细胞凋亡,观察血管新生标记因子CD34的表达,用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中紧密连接蛋白(ZO-1),血管内皮生长因子(VEGF),黏着斑激酶(FAK)和桩蛋白(Paxillin)蛋白的表达情况。结果:与正常组比较,OGD/R组细胞皱缩、变圆,细胞TEER值和细胞中ZO-1蛋白表达显著降低,细胞中NO,LDH及ROS水平显著升高,tPA含量显著降低,细胞中钙离子浓度和细胞凋亡显著增加,细胞中CD34有所表达,VEGF,FAK和Paxillin蛋白表达显著升高(P0. 01);与OGD/R组比较,TQHXT组细胞损伤明显改善,细胞TEER值和细胞中ZO-1蛋白表达显著升高,细胞中NO,LDH及ROS含量显著降低,tPA含量显著升高,细胞中钙离子浓度和细胞凋亡显著减少,细胞中CD34表达增加,VEGF,FAK和Paxillin蛋白表达显著升高(P0. 05,P0. 01)。结论:通窍活血汤含药脑脊液对OGD/R损伤大鼠BMECs具有保护作用,该保护作用可能是通过VEGF/VEGF受体2(R2)/FAK/Paxillin信号通路促进血管生成来发挥作用。     

心脑舒通胶囊对氧糖剥夺/复氧星形胶质细胞神经营养因子分泌的影响及对神经元的保护作用

[目的]探讨心脑舒通胶囊对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)处理的星形胶质细胞(C8-D1A)神经生长因子分泌的影响,以及研究心脑舒通药物处理的OGD/R胶质细胞条件培养液对神经元细胞(Neuro-2A)的保护作用。[方法] CCK-8检测心脑舒通对正常培养和OGD/R胶质细胞活力的影响;酶联免疫吸附(ELISA)法检测心脑舒通对OGD/R胶质细胞的脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质源性神经营养因子(GDNF)、睫状神经营养因子(CNTF)释放的影响;CCK-8检测心脑舒通处理的胶质细胞条件培养液对OGD/R神经元细胞活力的影响。[结果] 1)心脑舒通对正常培养的胶质细胞活力无显著影响,但可以提高OGD/R后胶质细胞的增殖活力。2)0.1μg/mL心脑舒通可以显著提高OGD/R胶质细胞BDNF的释放。3)0.1μg/mL心脑舒通药物处理的胶质细胞条件培养液可提高OGD/R神经元的存活能力。[结论]心脑舒通对OGD/R损伤后的胶质细胞有一定保护作用,其处理后的胶质细胞条件培养液对神经元有一定的保护作用。